分子细胞遗传学技术在血液病中的应用

染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因，传统的细胞遗传学显带技术的染色体核型分析费时、费力，敏感性和特异性差，特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难。荧光原位杂交（FISH）、比较基因组杂交（CGH）和多色荧光原位杂交技术包括多重FISH（M—FISH）、光谱核型分析（SKY）等分予细胞遗传学技术克服了传统细胞遗传学缺陷，是对传统核型分析的有力补充。本文对上述分子细胞遗传学技术在血液病中的应用作一综述。     

光谱核型分析及其在血液系统肿瘤中的应用

染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因,传统的细胞遗传学显带核型分析费时、费力,特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难。经典的荧光原位杂交(FISH)技术采用特异探针检测已知的染色体异常更直观、灵敏和特异,但一次只能检测一个或几个候选位点,且仅能检测已知的染色体异常,不能像核型分析那样进行染色体异常的筛查。近年来,在FISH基础上发展出多色荧光原位杂交技术:光谱核型分析(spectralkaryotyping ,SKY)、多重FISH(M FISH)和彩色显带FISH(Rx FISH) ,一次成像可同时区分2 4条染色体,使得复杂染色体异常的筛查成…     

细胞遗传学与荧光原位杂交对急性髓性白血病染色体异常的研究

目的:比较常规细胞遗传学G显带与荧光原位杂交(FISH)对急性髓白血病染色体异常的研究。方法:所有患者初诊时均做常规G显带,根据G显带结果选用相关的特异性探针进行荧光原位杂交。结果:行G显带检测的142例患者中124例获得染色体核型,18例失败。1例正常核型和3例无可供分析的分裂相的患者FISH均检出异常克隆。FISH辨别出2例t(8;21)变异易位。结论:对于有足够可分析分裂相的患者,常规细胞遗传学G显带是检测白血病染色体异常核型的可靠工具。对可疑有变异易位或因染色体形态差难以辨认的核型,或因细胞分裂指数低而分裂相少或无分裂相的患者,FISH检测是重要的补充。     

分子诊断的有力武器——FISH

荧光原位杂交(Florescence In—Situ Hybridization，FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。FISH技术是用荧光基团标记特异性的DNA探针，再将标记了荧光信号的探针与待测样本进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数。最终通过荧光信号的颜色和数目的异常与否，达到诊断疾病的目的。利用荧光标记的DNA探针，可对染色体或基因异常的细胞和组织样本进行检测和诊断，从而为染色体疾病的诊断、恶性肿瘤的预前和预后提供准确的依据。由于FISH具有快速、准确的特点，因而在问世之初就备受关注。20世纪80年代末，Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域后，FISH就在临床及科研工作中得到了广泛的运用。20世纪分子生物学和细胞遗传学的发展，逐步揭示了人类各种疾病的分子机制，人类染色体草图的绘制更帮助我们了解了疾病产生与自身染色体或基因异常的关系。为了更好地治疗甚至根除疾病，就必须找到一种能在分子水平对疾病进行准确、快速诊断的工具，而传统的细胞遗传学检测手段并不能满足分子诊断的需要。例如，细胞遗传学传统的核型分析仅能检测染色体数目异常和大片断的缺失，对于基因水平或核苷酸水平的异常变化则无能为力，而且核型分析需要大量的中期细胞，这就需要对样本细胞进行长达7d以上的培养。一些需要及时进行诊断和治疗的患者无法忍受如此漫长的等待。例如，利用常规的核型分析进行产前诊断需要7～22d，而利用Vysis的Aneu Vysion产前FISH诊断试剂盒仅需9～19h。因此，快速准确的FISH检测成为许多疾病诊断的首选。     

一例伴有双ider(17q)的急性早幼粒细胞白血病的临床及实验研究

本研究报道一例伴有双ider(17q)特殊复杂核型异常急性早幼粒细胞白血病(APL)的临床和实验特征。对一例复发APL患者进行多参数流式细胞术免疫分型、传统细胞遗传学分析,并应用荧光原位杂交(FISH)和多重荧光原位杂交(M-FISH)两种技术进一步明确染色体异常。结果表明:该患者染色体核型分析提示为47,XY,1p-,15q ,ider(17q)×2;FISH检测同一细胞中出现5个PML-RARα融合信号;M-FISH进一步明确并证实上述结果。免疫表型检测显示高表达CD13和CD33,而CD34、HLA-DR及T、B淋巴细胞标志阴性。结论:双ider(17q)是APL中一种罕见的附加异常,联合应用FISH及M-FISH技术是确认复杂染色体异常的可靠手段。     

儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学特征分析

目的 分析儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞遗传学变化的特点.方法 以2009年1月至2011年11月确诊的90例初发ALL患儿为研究对象,采用染色体核型分析及荧光原位杂交(FISH)技术检测患者骨髓白血病细胞的细胞遗传学和分子生物学变化.结果 ①染色体核型分析:有分裂象者66例,其中异常者35例(53.0%);无分裂象者24例.②FISH检测:对31例染色体核型正常和24例无分裂象的患者进行FISH检测,异常者分别为7例(占22.6%)和14例(58.3%),其中无分裂象患者异常检出率与有分裂象者核型分析异常检出率差异无统计学意义(P=0.655);55例患儿中TEL-AML1融合基因阳性16例(29.1%),MLL重排3例(5.5%),bcr-abl融合基因阳性2例(3.6%).③90例患儿通过两种检则方法 共检出细胞遗传学异常56例(占62.2%).结论 儿童ALL易出现细胞遗传学改变;对于有足够分裂象的患者,常规染色体核型分析仍是可靠的方法,对分裂象质量低或无分裂象的儿童ALL患者,FISH检测异常克隆能提高细胞遗传学异常检出率.     

多重荧光原位杂交技术检测急性髓系白血病复杂核型异常的价值

目的探讨多重荧光原位杂交技术检测急性髓系白血病(AML)患者复杂核型异常的价值。方法联合应用常规细胞遗传学、间期荧光原位杂交技术和多重荧光原位杂交技术对14例伴有复杂核型异常的 AML 患者进行研究。结果 14例 AML 患者应用常规细胞遗传学技术共检出23种染色体的数量异常和56种染色体的结构异常。常规细胞遗传学技术检出的4种染色体增加和4种染色体丢失与多重荧光原位杂交技术分析结果一致,常规细胞遗传学技术检出的12种染色体丢失经多重荧光原位杂交技术证实为衍生染色体。常规细胞遗传学技术检出的26种衍生染色体和19种标记染色体的性质被多重荧光原位杂交进一步明确。它们中大多数是由染色体不平衡易位所致,包括2种尚未报道的复杂 t(8;21)易位:t(8;21),der(8)t(8;21)(8pter→8q22::21q22→21qter),der(21)t(8;21;8)(8qter→8q22::21p13→21q22::8q22→8qter)和 t(21;8;18;1),der(8)t(8;21)(8pter→8q22::21q22→21qter),der(21)t(21;8;18;1)(21p13→21q22?::8q22→8q24?::18??::1q??q??)。复杂核型异常几乎涉及所有染色体,但以17,7和5号染色体多见。结论 AML 的复杂核型异常单用常规细胞遗传学分析常难以阐明,而联合多重荧光原位杂交则可以更好的揭示其特征。因此对伴有复杂核型异常的 AML 患者,最好进一步采用多重荧光原位杂交技术进行分析。     

荧光原位杂交技术在儿童急性髓系白血病诊断中的作用

本研究探讨荧光原位杂交技术(FISH)在儿童急性髓系白血病(AML)临床诊断中的作用。对2005年4月至2010年4月于我院就诊的179例儿童AML的临床实验室检查资料进行回顾性分析,分析FISH法与染色体核型分析(CA)、聚合酶链反应(PCR)检测手段对融合基因检测结果的差异性和互补性。结果表明:FISH对细胞遗传学异常的检出率较高,27例AML-M3应用探针检测PML/RARα融合基因,22例为阳性;24例AML-M2b应用探针检测AML1/ETO融合基因,24例均为阳性;3例AML-M4Eo应用探针检测CBFβ/MYH11融合基因,3例均阳性。结论:FISH法检测儿童AML中融合基因阳性率较高,并且与常规染色体核型分析和PCR检测具有较好的一致性。FISH与传统的细胞遗传学和分子生物学技术相结合,能够使遗传学异常的检测更准确,在儿童AML的诊断和分型中具有值得推广的临床价值。     

荧光原位杂交技术检测5、7、8号染色体异常在骨髓增生异常综合征患者的应用

目的 应用荧光原位杂交技术(FISH)检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者的5、7、8号染色体,分析其改变的临床意义.方法 结合常规的细胞遗传学检查和FISH技术检测5、7、8号染色体.应用SPSS 11.5统计软件,对患者的遗传学异常及疾病的转归及预后进行分析.结果 30例患者常规遗传学检测与FISH检测结果如下:5号染色体异常为(6.7%)vs(16.7%);7号染色体异常为(6.7%)vs(16.7%);8号染色体异常为(16.7%)vs(30.0%).30例患者中存活13例,死亡15例,失访2例;其中9例转化为急性白血病.复杂核型及正常核型的缺失与患者的不良预后密切相关.结论 FISH技术能敏感地检测出小克隆异常,运用常规细胞遗传学技术结合多种探针进行分析,能对MDS患者的诊断、转归及预后进行更为准确的判断.     

53例多发性骨髓瘤细胞遗传学研究

为了探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)及部分分子细胞遗传学特点,应用常规R显带方法,对53例MM患者进行染色体核型分析,并对其中20例患者采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术进行分子细胞遗传学分析。结果显示:53例MM患者染色体异常检出率为32.1%,其中涉及3种及3种以上染色体异常的占82.4%,染色体众数从44到90条不等。染色体核型异常涉及所有24条染色体,其中涉及1q21扩增、13q14缺失,17p13缺失及14q32易位中至少1种染色体异常的占70.6%,同时发现t(11;16)(p11;p13)等一些不常见的结构异常;还有一些在急慢性白血病中经常见到的异常。FISH检测结果显示:12例染色体核型正常的MM患者中有3例FISH检测阳性;8例染色体核型异常的患者中有5例FISH检测阳性。结论:大部分MM患者染色体异常核型比较复杂,具有明显的异质性;FISH分析可提高异常的检出率,但有局限性;常规细胞遗传学检测与FISH技术相结合可提高染色体异常的识别能力,有助于进一步认识和掌握MM细胞遗传学的特点,为临床诊断及治疗MM提供帮助。     

急性T淋巴细胞白血病的分子遗传学研究进展

急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是以T淋巴细胞增殖为特征的恶性克隆性疾病.大约50%～70%的T-ALL患者可检出核型异常,细胞遗传学的改变已成为T-ALL最重要的诊断指标.近年来,随着荧光原位杂交(FISH)、微阵列-比较基因组杂交(array-CGH)以及cDNA芯片等细胞遗传学及分子生物学技术的广泛应用,人们认识到T-ALL患者的预后与染色体易位、缺失、基因突变等细胞和分子遗传学改变密切相关并取得一定进展.现将有关T-ALL分子遗传学的研究进展综述如下.     

原发性骨髓增生异常综合征伴8号染色体三体的预后意义

我们采用常规细胞遗传学分析和荧光原位杂交(FISH)技术,在435例成人原发性骨髓增生异常综合征(MDS)患者中发现71例伴8号染色体三体(+8)异常.我们对这部分具有+8异常的病例与正常核型、20q-、-7/7q-、复杂核型患者进行比较,探讨+8异常在MDS中的预后意义.     

M-FISH技术在复杂核型异常的急性白血病患者的诊断、预后分析中的应用

M-FISH,即multi-coclour FISH和multiplex FISH(M-FISH),是分子细胞遗传学方面在过去的10年里最具有发展意义的代表技术之一。这项技术从最初使人类23对染色体上24种特异的荧光色彩以供核型分析,到现在已经产生了许多复杂的变化,也开始被各种不同专业的领域范围所应用。在白血病细胞遗传学上,M-FISH已被应用于下列染色体异常患者的检查:①可疑有未被发现的微小的染色体易位;②具有复杂异常核型的染色体异位(普通方法很难获得完全的染色体核型)。最终的检查结果对白血病患者的诊断、治疗及预后分析具有很大的指导作用。本文就M-FISH的技术原理和常用的探针、M-FISH在急性白血病的诊断、疗效评价及预后分析中的应用进行了综述。     

多重荧光原位杂交检测慢性淋巴细胞白血病复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交（M-FISH）技术检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）复杂核型异常（CCA）的价值。方法应用M—FISH技术对6例常规细胞遗传学（CE）显示CCA的CLL进行研究。结果M-FISH检测仅有1例检出了CFA克隆；1例检出非复杂核型的异常克隆及1个CCA细胞；1例检出3个不同的染色体变异细胞。其余3例M—FISH未检出异常核型分裂象。6例CLL的核型分析中共发现平衡易位10种；非平衡易位9种，其中der（14）t（16；14；9）是既往文献未报道的易位。结论对伴有（CCA的CLL以M—FISH技术可以发现和纠正CC漏检及误检的染色体异常。单个细胞核型异常在CLL中多见，     

荧光原位杂交在慢性淋巴细胞白血病遗传学异常及预后中的应用

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）技术在慢性淋巴细胞白血病（CLL）染色体异常检测及预后判断中的应用.方法 采用荧光原位杂交技术组合探针检测14例CLL患者11,12,13及17号染色体异常情况,14例患者采用FC方案后,观察疗效并随访12～34个月.结果 采用FISH技术染色体异常检出率为64.2％;随访12～34个月,13（92.8％）例患者存活.结论 FISH在检测CLL染色体异常方面较为快速、准确和敏感,可提高染色体异常检出率,为CLL提供较为准确的分子细胞遗传学信息,指导临床与预后分析.     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测的临床意义

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测PML/RARα融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断中的应用价值。方法应用常规细胞遗传学分析28例APL患者的染色体核型,同时用FISH法检测PML/RARα融合基因。结果 28例初诊的APL患者254例常规核型分析检出t(15;17)(q22;q12);2例患者核型正常;另1例未检出t(15;17),核型分析结果为涉及15和17号染色体的复杂异常;FISH检测所有病例均存在PML/RARα融合基因。结论 FISH法行PML/RARα融合基因检测特异性和敏感性好,是诊断APL的可靠方法。     

应用荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病的基因组异常

目的 探讨应用组合荧光原位杂交(panel fluorescence in situ hybridization,panel FISH)技术对慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukaemia,CLL)基因组异常检测的价值.方法 分别应用序列探针D13S25(13q14.3)、RB1、p53、ATM(11q23)和着丝粒探针12号(CSP12)等5种荧光素标记的DNA探针,对17例CLL患者进行FISH检测,并和常规细胞遗传学检测结果进行比较.结果 17例CLL患者中,常规细胞遗传学检测出1例(1/17)有染色体异常,为49,XX,+3,+8,+18;组合FISH检测出10例(10/17)有染色体异常,包括D13S25缺失4例、ATM缺失2例、p53缺失1例、D13S25合并RB1同时缺失2例、多种异常1例.FISH检测的总检出率高于常规细胞遗传学检测.结论 组合FISH技术是检测CLL患者染色体基因组异常的有效手段,与常规细胞遗传学方法相结合则可明显提高CLL染色体异常的检出率.     

荧光原位杂交技术快速诊断胎儿常见染色体数目异常

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断中的应用价值。方法采集116名孕妇孕16~23周的羊水标本,应用荧光标记的21号染色体特殊位点探针(21q22,DSCR2)、13号染色体特殊位点探针(13q14,DLEU1)及18号染色体探针、X/Y染色体着丝粒探针(CEP)对未经培养的羊水间期细胞进行FISH检测;同步进行羊水细胞培养,行常规细胞遗传学染色体核型分析。结果 FISH与羊水细胞核型分析相符的染色体数目正常108例,数目异常6例,另各有1例染色体核型分析分别显示为平衡易位、臂内倒位异常,FISH结果显示正常。6例数目异常胎儿引产时抽脐血染色体检查结果与羊水产前诊断结果一致。结论 FISH技术用于快速诊断胎儿常见染色体数目异常,具有简便、快速、特异性强等优点,临床有较高的应用价值。     

荧光原位杂交和常规细胞遗传学在慢性粒细胞白血病研究中的应用

目的：应用荧光原位杂交（FISH）和染色体核型分析技术,探讨慢性粒细胞白血病（CML）细胞遗传学特点与临床预后的相关性。方法：采用骨髓细胞直接法和（或）短期培养法制备染色体标本,采用热变性姬姆萨显带技术（RHG）进行染色体核型分析。荧光染色体原位杂交技术检测40例CML患者的BCR／ABL融合基因。回顾分析282例CML的临床及细胞遗传学资料。结果：常规细胞遗传学（CC）分析表明,282例患者中268例Ph染色体阳性,占95．04％;14例Ph染色体阴性,占4．96％。其中250例Ph阳性细胞为100％,占90．32％。12例Ph阳性细胞为30％～99％,占4．48％,核型显示正常与Ph嵌合状态。6例核型为复杂变异异位,占2．24％。41倒除Ph染色体外,还出现额外染色体异常,占15．30％,分别为双Ph,＋8,＋22,-Y,i（17q）等,其中28例为加速或急变患者,占68．29％。应用FISH技术检测,BCR／ABL融合基因阳性34例（舍14例Ph染色体阴性中的8例）,占85％;BCR／ABL阴性6例,占15％。结论：在常规细胞遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高染色体异常的检出率及准确率。细胞遗传学对于CML的正确诊断、指导临床治疗、判断预后具有重要价值。     

多探针FISH技术在检测喀什地区维吾尔族急性白血病患者细胞遗传学异常中的应用

目的：探讨多探针FISH技术在检测喀什地区维吾尔族急性白血病患者细胞遗传学异常中的应用效果。方法临床纳入新疆喀什地区第一人民医院和广东省第二人民医院2013年1月至2015年12月期间收治的100例急性白血病细胞遗传学异常患者,收集患者的骨髓标本,均行预包被式多探针FISH技术与常规染色体核型分析技术检测,并进行对比分析;同时,对患者实施护理干预措施。结果100例急性白血病患者中,50例急性髓系白血病( AML)患者多探针FISH技术检测率60.0%明显高于常规染色体异常核型检测率28.0%,50例急性淋巴细胞白血病( ALL )患者多探针 FISH 技术检测率58.0%明显高于常规染色体异常核型检测率26.0%,差异均有统计学意义( P<0.05)。结论喀什地区维吾尔族急性白血病患者细胞遗传学异常采用多探针FISH技术检测,具有省时、高效且准确率高等优点,值得临床上作为诊断急性白血病的重要手段推广应用。