血管紧张素在培养乳鼠心肌细胞肥大发生中的作用

本实验观察到血管紧张素Ⅰ、Ⅱ(AngⅠ、AngⅡ)均可促进培养的乳鼠心肌细胞(MC)DNA、RNA和蛋白质的合成。并发现随着AngⅠ和AngⅡ作用时间的延长,对MC的RNA和蛋白质合成的促进作用也逐渐增强,而对其DNA合成的促进作用则有一定的时间界限。此外,还发现在AngⅠ和AngⅡ长期作用下可使MC体积增大。当AngⅠ和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂同时加入培养基,则无上述结果发生。这提示血管紧张素可能在心肌肥大的发生中起一定作用,而且AngⅠ是通过MC本身的ACE将其转化为AngⅡ后才起作用的。     

血管紧张素Ⅱ刺激肥大心肌细胞和心肌成纤维细胞核酸蛋白质…

本实验用压力和容量超负荷性分离的肥大心肌细胞及培养的心肌成纤维细胞，就血管紧张素Ⅱ可提高正常和两种肥大ＭＣ的＾３Ｈ－ＴｄＲ和＾３Ｈ－Ｐｒｏ掺入率的影响了对比研究。     

PPAR-α参与血管紧张素Ⅳ诱导大鼠心肌细胞肥大

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)在血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法用乳鼠心肌细胞,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度AngⅣ对心肌细胞的作用,并观察PPAR-α激动剂非诺贝特(FF)和阻断剂MK886对AngⅣ作用的影响;用Real-time PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白水平的表达。结果 AngⅣ浓度依赖地(0.01、0.1及1 nmol/L)诱导心肌细胞肥大;使PPAR-αmRNA和蛋白表达明显降低,分别为55.7±9.6和3.3±0.3(P<0.01);FF明显抑制AngⅣ1 nmol/L诱导的心肌细胞肥大(P<0.01),上调PPAR-αmRNA和蛋白表达,分别增加至151.7±10.5和6.7±0.7(P<0.01)。MK886可完全取消FF的上述作用(P<0.05)。结论 AngⅣ所致心肌肥大与PPAR-α信号通路受损有关。     

丙戊酸抑制血管紧张素Ⅱ致大鼠心肌细胞肥大

目的 探讨丙戊酸在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致心肌细胞肥大过程中的抑制作用。方法 常规方法培养大鼠原代心肌细胞,分为3组：对照组、肥大组、丙戊酸组。利用AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大模型,并给予丙戊酸进行干预。反转录聚合酶链反应观察β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达;相差显微镜和电镜观察心肌细胞的表面积和超微结构变化;免疫组织化学法检测c-fos蛋白的表达。结果 原代心肌细胞在AngⅡ作用下表面积增加,超微结构发生改变;β-MHC mRNA和c-fos蛋白表达增加（P < 0.05）。给予丙戊酸干预后,上述变化显著缓解（P < 0.05）。结论 丙戊酸抑制AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,为临床上治疗心肌肥厚提供一条新的思路。     

核内miR-199b-5p通过上调CDK9表达促进心肌细胞肥大

目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制.方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平.通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布.原代分离培养C57BL/6乳小鼠心室肌细...     

Pyk2促进血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的探讨富含脯氨酸蛋白酪氨酸激酶(Pyk2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其机制。方法提取大鼠乳鼠原代心肌细胞,随机分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ剂量为100 nmol/L,将其加入心肌细胞培养皿中刺激24 h)、Pyk2抑制剂PF-431396组(PF-431396剂量为10μmol/L,在AngⅡ刺激前30 min加入心肌细胞培养皿中)以及PF-431396干预AngⅡ诱导组(AngⅡ剂量为100 nmol/L,PF-431396剂量为10μmol/L)。用细胞骨架蛋白(α-actinin)免疫荧光染色检测心肌细胞表面积大小;real-time PCR检测心肌细胞中肥大指标(ANP和β-MHC) mRNA表达;Western blot检测心肌细胞p-Pyk2、Pyk2以及p53的蛋白表达。结果在AngⅡ刺激下,心肌细胞表面积增大(P<0. 05)、肥大指标的mRNA水平升高(P<0. 05)、p-Pyk2和p53的蛋白水平增加(P<0. 05);而加入Pyk2抑制剂PF-431396后,心肌肥大指标明显改善,p-Pyk2和p53的蛋白表达降低(P<0. 05)。结论 Pyk2通过p53信号通路促进AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大。     

微小RNA-199a-5p通过靶向SIRT1促进心肌纤维化相关基因表达

目的:研究微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)对心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的调控作用及其可能作用的靶基因。方法:原代分离并体外培养成体C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;双萤光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与潜在靶基因沉默信息调节因子1(SIRT1)3’端非翻译区(3’-UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测SIRT1以及纤维化标志物胶原蛋白(Col)1a1、Col3a1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达。结果:在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌成纤维细胞中,Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达增强,miR-199a-5p表达上调。在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-5p可以增强Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。双萤光素酶报告基因实验显示miR-199a-5p与SIRT1 3’-UTR有结合作用。RT-q PCR和Western blot结果证实miR-199a-5p可在转录水平抑制SIRT1表达。过表达miR-199a-5p和沉默SIRT1均能一致性促进心肌成纤维细胞中Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。抑制AngⅡ诱导的小鼠心肌成纤维细胞中NF-κB激活,可显著降低miR-199a-5p表达。结论:SIRT1是miR-199a-5p的作用靶基因,并介导miR-199a-5p促进纤维化标志物Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。     

心肌肥大大鼠心肌尾加压素II受体的变化

目的:观察心肌浆膜上新发现的强缩血管活性肽尾加压素II(UII)的受体在压力超荷性心肌肥大中的变化及意义。方法:在腹主动脉缩窄复制的大鼠压力超荷性心肌肥大模型上,采用放射性配基结合技术,测定术后1d(早期组)和30d(晚期组)大鼠心肌浆膜上UII受体的结合位点。结果:早期组血压较正常对照组和假手术组分别高54%和43%(P＜0.01),心重/体重比值无明显差异,受体数目(Bmax)分别上调184%和159%(P＜0.01),亲和力下降(Kd值分别高224%和206%,P＜0.01)。晚期组血压较对照组和假手术组分别高85%和67%(P＜0.01),心重/体重比值分别高18%和22%(P＜0.05),受体数目分别下调35%和41%(P＜0.05),亲和力增强(Kd值分别低30%和33%,P＜0.05)。结论:压力负荷引起心肌浆膜UII受体先增加后减少的双相变化,其变化可能参与心肌肥大的发病过程。     

环状RNA调控心肌肥大的研究进展

心肌肥大是心对额外负荷、节律变化、房室重构和心功能异常的代偿性改变,但如果病因持续存在或未及时消除,最终将演变为慢性心力衰竭.环状RNA是真核细胞内一类高度保守的闭合环状非编码RNA,且具备保守性、广泛性、稳定性和组织特异性,在基因的表达调控中发挥重要作用.circRNA在心肌肥大中发挥重要调控作用,可通过海绵抑制mi...     

钙蛋白酶调节致心肌细胞肥大的信号转导

目的： 探讨钙敏感的calpain对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的致心肌细胞肥大的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路的调节。方法: 原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，AngⅡ刺激细胞Ca2+内流和（或）内贮细胞Ca2+释放， ［3H］-Leu掺入法反映心肌细胞蛋白合成速率，Fura-2/AM比率荧光成像分析细胞内钙信号变化，免疫印迹检测心肌细胞μ-calpain、m-calpain、CaN磷酸化及蛋白表达。结果: Ang Ⅱ呈浓度依赖性（10^-8-10^-5 mol·L^-1）促心肌细胞［Ca2+］i增加,各刺激组［Ca2+］i与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)。AngⅡ（10-7 mol·L^-1）剌激心肌细胞15 min后, μ-calpain的磷酸化明显增加，但其蛋白表达量无显著改变（P>0.05）, m-calpain蛋白表达及磷酸化量显著差异，CaN的蛋白表达量无显著改变，但其磷酸化增强, 环孢素A（CsA）抑制CaN的磷酸化。AngⅡ可使无血清培养新生大鼠心肌细胞［3H］-Leu掺入率随时间增加而增加，与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)，且在10^-8-10^-5 mol·L^-1范围内呈量效依赖关系。结论: AngⅡ剌激细胞外Ca2+跨膜内流和（或）内贮Ca2+的释放导致μ-calpain的激活，进一步激活钙敏感的CaN信号通路，在心肌肥厚的病理过程中起重要作用。     

过表达miR-130a-3p对心肌细胞肥大的缓解作用研究

本研究旨在探索miR-130a-3p对心肌细胞肥大的作用及其可能机制。通过胸主动脉缩窄法(TAC)构建压力超负荷所致心肌肥厚小鼠模型。使用去甲肾上腺素(NE)刺激SD乳鼠原代心肌细胞(NRCMs)及H9c2大鼠心肌细胞系,诱导这两种心肌细胞发生肥大表型转变。检测miR-130a-3p的表达变化,并进一步探索其对心肌细胞肥大是否有调控作用。结果表明,miR-130a-3p在肥厚心肌组织、肥大NRCMs及H9c2细胞中的表达均明显降低。给予miR-130a-3p mimics使其过表达后,H9c2细胞中肥大标志基因心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和肌球蛋白重链β(β-MHC)的表达较对照组(mimics N.C.+NE组)明显下调,且细胞面积明显减小。而给予miR-130a-3p inhibitor抑制其表达后,肥大心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC的表达进一步上升,且细胞面积进一步增加。Western blot检测发现,过表达miR-130a-3p后心肌细胞中磷酸化Akt和磷酸化mTOR的表达水平下调。以上结果提示,miR-130a-3p mimics可缓解心肌细胞肥大的程度;其inhibitor则可使心肌细胞肥大进一步加剧。过表达miR-130a-3p可能通过影响Akt通路来缓解H9c2心肌细胞肥大的程度。     

心脏糜酶活性改变在心肌肥厚患者心肌纤维化中的意义

目的： 观察心脏糜酶与心肌肥厚患者心肌组织胶原合成和心肌纤维化的关系。方法: 应用病理检查、放射免疫、计算机分析和逆转录-聚合酶链式反应等方法，检测心肌肥厚患者（心肌肥厚组）和正常人（对照组）心脏糜酶活性、心肌局部血管紧张素II（Ang II）水平、心肌胶原容积分数（CVF）、心肌血管周围胶原面积比（PVCA）及心肌组织I型和III型胶原mRNA表达。心脏糜酶活性和心肌局部Ang II水平与CVF及PVCA之间的关系采用相关分析。结果: 心肌肥厚组心脏糜酶活性为(0.27±0.06) kU/g蛋白，对照组为(0.12±0.06) kU/g蛋白，心肌肥厚组心脏糜酶活性明显高于对照组（P<0.01）。心肌肥厚组心肌组织匀浆液Ang II水平为(179.3±36.1) ng/g心肌组织，对照组心肌组织匀浆液Ang II水平为(103.2±13.6) ng/g心肌组织，心肌肥厚组心肌组织Ang II水平明显高于对照组（P<0.01）。心肌肥厚组CVF为39.5%±9.8%，对照组为20.9%±8.2%，心肌肥厚组明显高于对照组（P<0.01）；心肌肥厚组PVCA为1.98±1.05，对照组为0.41±0.12，心肌肥厚组也明显高于对照组（P<0.01）。心肌肥厚患者心肌组织I型胶原及III型胶原mRNA表达相对含量均明显高于正常人（均P<0.01）。心脏糜酶活性与CVF及PVCA呈明显正相关（相关系数分别为0.52和0.69，P<0.05和P<0.01）。心肌局部Ang II水平也与CVF及PVCA呈明显正相关（相关系数分别为0.49和0.58，均P<0.05）。结论: 心脏糜酶可增加胶原的合成，参与细胞外基质的形成和降解，促进心肌纤维化。     

伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响

目的 观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链（MHC）基因表达改变的影响.方法 以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞.采用放射性同位素[^3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子（ANF）以及α-MHC、β-MHC的表达.结果 AngⅡ处理使心肌细胞中[^3H]-Leu掺人增加（P＜0.05）,同时ANF mRNA的表达明显高于正常（P＜0.05）;α-MHC mRNA的表达显著低于正常（P＜0.05）,而β-MHC mRNA的表达显著高于正常（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值下降（P＜0.05）.当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[^3H]-Leu的掺入明显下降（P＜0.05）,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;心肌细胞中α-MHC的表达明显增高（P＜0.05）,而β-MHCmRNA的表达显著降低（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值上升（P＜0.05）.结论 伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换.     

Effect of hepatocyte growth factor and angiotensin II on rat cardiomyocyte hypertrophy

Angiotensin II (Ang II) plays an important role in cardiomyocyte hypertrophy. The combined effect of hepatocyte growth factor (HGF) and Ang II on cardiomyocytes is unknown. The present study was designed to determine the effect of HGF on cardiomyocyte hypertrophy and to explore the combined effect of HGF and Ang II on cardiomyocyte hypertrophy. Primary cardiomyocytes were isolated from neonatal rat hearts and cultured in vitro. Cells were treated with Ang II (1 µM) alone, HGF (10 ng/mL) alone, and Ang II (1 µM) plus HGF (10 ng/mL) for 24, 48, and 72 h. The amount of [³H]-leucine incorporation was then measured to evaluate protein synthesis. The mRNA levels of β-myosin heavy chain and atrial natriuretic factor were determined by real-time PCR to evaluate the presence of fetal phenotypes of gene expression. The cell size of cardiomyocytes was also studied. Ang II (1 µM) increased cardiomyocyte hypertrophy. Similar to Ang II, treatment with 1 µM HGF promoted cardiomyocyte hypertrophy. Moreover, the combination of 1 µM Ang II and 10 ng/mL HGF clearly induced a combined pro-hypertrophy effect on cardiomyocytes. The present study demonstrates for the first time a novel, combined effect of HGF and Ang II in promoting cardiomyocyte hypertrophy.     

Serum miR-125a-5p,miR-145 and miR-146a as diagnostic biomarkers in non-small cell lung cancer

Background: Lung cancer is becoming the leading cause of cancer-related deaths with high mortality worldwide and in China as well. Non-small-cell lung cancer (NSCLC) is the most common type of lung cancer accounting for approximately 85% of all cases. Over 70% of cases are at loco-regionally advanced stages or have distant metastasis at the time of presentation with subsequently poor prognosis. MiRNAs are stable molecules in blood and used as biomarkers for the early diagnosis of various malignancy. The purpose of this study was to evaluate whether circulating miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a could be used as biomarkers for the diagnosis of NSCLC through measuring their expression and assess their relationship with clinical pathological factors. Methods: Expression levels of serum miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a were detected in 70 pairs of NSCLC patients and healthy controls using quantitative real-time PCR analysis. Results: Serum miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a were overexpressed in NSCLC patients compared with healthy controls. Their values of the area under the receiver –operating characteristic curve (AUC-ROC) were 0.71, 0.84 and 0.78. Optimal sensitivity and specificity were 73.53% and 55.71%, 92.75% and 61.43%, 84.06% and 58.57%, respectively in differentiating NSCLC patients from healthy controls. Conclusions: These preliminary data suggest that serum miR-125a-5p, miR-145 and miR-146a may be useful noninvasive biomarkers for the clinical diagnosis of NSCLC.     

运动性心脏肥大：AT1受体、细胞自噬和miRNAs的调节

As a mechanical and exogenous stimulus, exercise training induces cardiac physiological hypertrophy, and the cardiac structure is changed slowly, steadily and coordinately. Simultaneously, energy metabolism and function of the cardiac muscle are also improved. These are positive adaptations in the heart when experiencing endurance exercise training. Recently, angiotensin Ⅱ type 1 (AT1) receptor, autophagy and miRNAs are all considered as important regulators to cardiac hypertrophy induced by exercise training at different molecular levels. Fully understanding the relations and the important role of AT1 receptor, autophagy and miRNAs in cardiac physiological hypertrophy will further enrich the signaling pathway of cardiac hypertrophy induced by exercise training.     

阿托伐他汀对AngⅡ诱导大鼠心肌肥大的抑制作用及对TLR4基因表达的影响

目的： 探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞（CM）肥大的抑制作用及对TLR4基因表达的影响，旨在探索他汀类药物对心肌肥大抑制作用的可能机制。方法: 采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CM，应用考马斯亮蓝法测定CM蛋白含量、RT-PCR分别检测心肌肌球蛋白重链β-MHC、AT₁受体和TLR4 mRNA表达。结果: ① AngⅡ可使CM蛋白含量及β-MHC mRNA表达明显增加，并能够上调AT₁ mRNA和TLR4 mRNA表达。② Ator呈浓度依赖性抑制由AngⅡ诱导的CM蛋白含量及β-MHC mRNA表达的增加。③ Ator呈浓度依赖性下调由AngⅡ诱导的肥大CM AT₁ mRNA和TLR4 mRNA表达。结论: 阿托伐他汀可部分抑制CM肥大的发生，下调AT₁ mRNA和TLR4 mRNA表达是其作用机制之一。     

下调miR-199a-5p对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响和机制研究

目的:探讨下调miR-199a-5p对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响和机制。方法:将心肌细胞H9C2分成Control组(常规培养的对照细胞)、DOX组(经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)、DOX+Anti-miR-NC组(转染inhibitor control,经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)和DOX+Anti-miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p inhibitor,经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)、DOX+Anti-miR-199a-5p+DKK1组(转染miR-199a-5p inhibitor,经含1μM阿霉素和20ng/ml的Wnt/β-catenin信号抑制剂DKK1的细胞培养液培养)。各组细胞处理24h以后,Realtime PCR测定miR-199a-5p表达,CCK-8测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定C-Caspase-3、β-catenin、c-Myc蛋白表达。结果:与Control组比较,DOX组细胞中miR-199a-5p水平升高,细胞增殖活性下降,细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低(P均<0.01)。与DOX+Anti-miR-NC组比较,DOX+Anti-miR-199a-5p组细胞中miR-199a-5p水平降低,细胞增殖活性升高,细胞凋亡水平和C-Caspase-3蛋白表达水平降低,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高(P均<0.01)。与DOX+Anti-miR-199a-5p组相比,DOX+Anti-miR-199a-5p+DKK1组心肌细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低(P均<0.01)。结论:下调miR-199a-5p通过激活Wnt/β-catenin信号抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。