阿托伐他汀对自发性高血压大鼠心肌组织PPARs表达的影响

目的： 探讨阿托伐他汀对自发性高血压大鼠心肌组织PPARs（peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs）表达的影响及其对心肌肥厚的逆转作用与可能机制。方法: 自发性高血压大鼠分为阿托伐他汀灌胃治疗组（SHR-A，30 mg·kg-1·d-1）及模型组（SHR），治疗8周，同周龄Wistar-Kyoto 鼠为正常血压对照组。治疗前及治疗后2、4、8周测量大鼠尾动脉血压。治疗后测血浆血脂水平，以心脏组织病理分析判断心肌肥厚，Western blotting 检测心肌组织PPARα、PPARγ的表达水平。结果: 经过8周治疗， SHR-A组及SHR组血压及血脂水平无明显差异（P＞0.05）。SHR-A组左室重量指数低于SHR组（P＜0.01）。在SHR-A组，PPARα及PPARγ表达高于SHR组（P＜0.01）。结论: 阿托伐他汀显著改善自发性高血压大鼠心肌组织PPARs表达，有效逆转左室肥厚，可能与其降压及降脂作用无关。     

PPARγ激动剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎钙激活中性蛋白酶表达的影响

目的： 探讨过氧化物体增殖剂激活的受体γ激动剂对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用, 以及对其脑组织中钙激活的中性蛋白酶（calpain）表达的影响。方法： 建立大鼠EAE动物模型，分别给予PPARγ激动剂罗格列酮和非甾体类抗炎药布洛芬预处理，通过各组间临床表现评分评价药物疗效，RT-PCR法检测calpain mRNA 的表达，Western blotting法检测calpain蛋白表达水平。结果: 罗格列酮和布洛芬治疗组大鼠的临床表现评分显著低于EAE模型组；3组间calpain mRNA表达水平无显著差异（P>0.05），但罗格列酮和布洛芬组calpain蛋白质的表达明显低于EAE模型组(P<0.05)。结论： PPARγ激动剂能够显著减轻EAE大鼠的临床症状，抑制calpain蛋白质的表达，表明PPARγ激动剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠具有脑保护作用。     

姜黄素对糖尿病大鼠心肌的保护作用*

 目的： 研究姜黄素对糖尿病大鼠心肌的保护作用及可能机制。方法: 雄性Wistar大鼠75只,随机抽取10只大鼠作为正常对照组,其余65只大鼠给予高糖高脂饮食喂养8周后腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg,给药72 h和7 d空腹血糖≥11.6 mmol/L为糖尿病模型成功大鼠。糖尿病大鼠随机分为糖尿病心肌病组、姜黄素小剂量治疗组和大剂量治疗组。测定心肌谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量,酶联免疫吸附试验检测血清心肌钙蛋白I（cTnI）的变化,Western blotting检测蛋白激酶C（PKC）蛋白表达。结果: 姜黄素治疗后可明显改善糖尿病所致的动物体重下降和空腹血糖升高,抑制心肌中MDA的产生并升高GSH-Px活性,减少血清中cTnI的释放,下调心肌组织PKC蛋白表达。结论: 姜黄素对大鼠糖尿病心肌病具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激有关。     

腺病毒介导的mPPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达

目的：观察腺病毒介导的mPPARγ1转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达。方法：构建表达小鼠PPARγ1基因的复制缺陷型腺病毒表达载体；将融合80%的ECV304细胞给予不同刺激量（1×104 U/L、5×104 U/L、1×105 U/L和2×105 U/L）的IFN-γ干预；将IFN-γ（1×105 U/L）预刺激并孵育 24 h 的ECV304细胞分成对照组（C）、PPARγ基因过度表达组(P)、PPARγ活化剂曲格列酮干预组(T)以及PPARγ基因过度表达和曲格列酮共刺激组(PT)进行干预，观察不同剂量IFN-γ对ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达的作用，以及PPARγ基因过度表达和/或活化对上述作用的影响。结果：正常ECV304细胞galectin-9基因表达弱。IFNγ孵育24 h后， ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达增加，且galectin-9表达与IFN-γ具有量效关系。PPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导galectin-9基因/蛋白表达，曲格列酮对上述作用无影响；PPARγ1基因转染和曲格列酮共刺激抑制IFN-γ诱导galectin-9基因/蛋白表达与单一PPARγ1基因转染效应相似。正常ECV304细胞PPARγ表达量低，而PPARγ基因过表达和活化不影响内源性PPARγ基因表达。结论：PPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因/蛋白表达可能是PPARγ基因发挥免疫调控作用的一个重要机制。     

PPAR γ-ACAT1途径在肺炎衣原体诱导巨噬细胞泡沫化中的作用

目的： 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ （PPAR γ）和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）在肺炎衣原体（C.pn）诱导巨噬细胞泡沫化中的作用。方法：给予C.pn （1×105-1×106IFU）感染 和/或PPAR γ的配体罗格列酮（1-20 μmol/L）孵育 THP-1源性巨噬细胞48h。运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用RT-PCR和Western blotting检测ACAT1、PPAR γ mRNA和蛋白表达。结果：高浓度的C.pn（5×105和1×106 IFU）感染使THP-1源性巨噬细胞内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加（>50%）。C.pn感染呈浓度依赖性上调ACAT1 mRNA和蛋白表达,并且浓度依赖性地下调PPAR γ mRNA和蛋白表达（P<0.05）。高浓度的罗格列酮（10、20 μmol/L）明显抑制C.pn诱导的细胞内脂质滴的增多和胆固醇酯含量的增加, 同时罗格列酮呈浓度依赖性抑制C.pn诱导的ACAT1 mRNA和蛋白表达的上调（P<0.05）。结论：C.pn 经PPAR γ途径上调ACAT1表达,进而诱导巨噬细胞泡沫化,这为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。     

PPARγ在不同周龄apoE-/-小鼠主动脉斑块表达及与斑块成份的相互关系

目的:研究PPARγ基因表达与ApoE-/-小鼠主动脉斑块成份的相互关系。方法:以20和40周龄ApoE-/-小鼠(n=10/组)为研究对象,相同基因背景和周龄C57BL/6 J小鼠设为对照。采用RT-PCR和免疫印迹技术检测各组小鼠主动脉PPARγ基因和蛋白表达变化;Movat 5色套染法和油红O染色检测ApoE-/-小鼠主动脉斑块成份;免疫组织化学技术检测斑块内PPARγ、SM-actin、MOMA-2抗原表达。结合免疫荧光技术分析PPARγ基因在主动脉斑块巨噬细胞、平滑肌细胞的表达及与脂质、弹性纤维、胶原和蛋白聚糖的相互关系。结果:20和40周龄C57BL/6 J小鼠主动脉壁有少量PPARγ表达,以20周龄组明显。ApoE-/-小鼠主动脉壁和斑块内PPARγ表达增多,以斑块内表达明显(P<0.05);与20周龄组比较,40周龄组表达最显著;且斑块脂质含量丰富;弹性纤维、胶原和蛋白聚糖含量减少,血管正性重塑明显;MOMA-2表达增加,SM-actin表达降低(P<0.05)。PPARγ在斑块内巨噬细胞、血管中膜平滑肌细胞和斑块内平滑肌细胞都有表达,但以脂质含量丰富处PPARγ表达最明显。结论:PPARγ在C57BL/6 J小鼠动脉壁表达随增龄而减少;在ApoE-/-小鼠主动脉壁和斑块内PPARγ表达随AS病变进程而增加。推测ApoE-/-小鼠主动脉斑块PPARγ表达上调可能是机体一种代偿行为和自我保护机制。     

胱硫醚-γ-裂解酶在三种微血管内皮细胞上的表达

目的鉴定微血管内皮细胞上是否表达生成硫化氢（H2s）的酶,为深入研究硫化氢的心血管作用提供新线索。方法原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞（CMEC）,设计相应引物后用RT—PCR的方法检测胱硫醚-1-裂解酶（CSE）和胱硫醚-β-成酶（CBS）基因转录情况,进一步用兔抗大鼠CSE和CBS多克隆抗体对CMEC进行蛋白水平的免疫荧光染色。此外对另两种微血管内皮细胞株RF／6A和bEnd．3也检测了H2S生成酶的表达。结果三种微血管内皮细胞都扩增出CSE基因的特异条带,而CBS基因都未扩增出相应产物。CMEC的免疫荧光染色显示CSE抗体染色为阳性,CBS抗体染色为阴性。结论首次发现了微血管内皮细胞上存在CSE的表达,提示内皮细胞可以通过生成硫化氢调节心血管活动。     

复方茯苓制剂对大鼠前脂肪细胞增殖分化以及过氧化物酶体增生物激活受体γ mRNA表达的影响

目的：研究中药复方茯苓制剂对培养大鼠前脂肪细胞增殖和分化的影响，并探讨其可能的作用机制。 方法： 原代培养大鼠前脂肪细胞，采用细胞计数、MTT方法测定细胞的增殖，油红O染色方法测定细胞分化，RT-PCR方法检测PPARγ基因表达的变化。 结果： 复方茯苓制剂能抑制原代培养大鼠前脂肪细胞的增殖和分化，并能抑制PPARγ基因表达。 结论： 复方茯苓制剂可能抑制原代培养大鼠前脂肪细胞的增殖，并能通过抑制PPARγ基因表达进而抑制其分化。     

糖尿病微血管病变患者血清CysC、RBP及尿NAG的变化与糖尿病肾病发展的关系

目的 探讨糖尿病肾微血管病变患者血清胱抑素C(cystatin C,CysC)、视黄醇结合蛋白(retinol binding protein,RBP)及尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl beta-D Glucosaminidase,NAG)的水平变化与糖尿病肾病病变程度的关系.方法 本研究选取30例2型糖尿病肾病患者(尿微量白蛋白＜ 14.29mg/L)作为A组、选取30例2型糖尿病肾病患者(尿微量白蛋白≥14.29mg/L)作为B组、30例2型糖尿病肾病引发尿毒症患者作为C组、30例体检正常研究对象作为D组,比较四组患者血清中CysC、RBP、NAG的差异.结果 A、B、C、D四组研究对象的CysC、RBP及尿NAG水平差异均具有统计学意义(P＜0.01);组间比较,A、B、C组CysC、RBP及尿NAG与D组比较均显著的高于D组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);A、B组患者的CysC、RBP及尿NAG与C组比较显著低于C组,差异具有统计学意义(P＜0.05);A组患者的CysC、RBP及尿NAG与B组比较显著低于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病肾病患者随着病变程度不断加重,CysC、RBP及尿NAG水平呈明显的上升趋势.     

PPARγ激动剂通过上调解偶联蛋白2抑制高糖介导的内皮细胞活性氧生成

目的:探讨过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)对高糖介导的血管内皮细胞活性氧(ROS)生成的影响及机制。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以高糖(33 mmol/L D-葡萄糖)培养基培养,并以低糖培养基(5.5 mmol/L D-葡萄糖)作为对照。分别利用超氧阴离子和一氧化氮(NO)的荧光探针观察PPARγ激动剂比格列酮对高糖环境下内皮细胞超氧阴离子和NO水平的影响,以Western blotting法观察解偶联蛋白2(UCP2)的表达。结果:PPARγ激动剂比格列酮可显著抑制高糖介导的ROS生成,并可防止高糖介导的内皮细胞NO水平的下降,而上述作用可被PPARγ的阻断剂GW9662所阻断。PPARγ激动剂可上调内皮细胞UCP2的表达,而通过genipin抑制UCP2可显著减弱PPARγ激动剂的作用。结论:激活PPARγ可显著抑制高糖介导的ROS的生成,而该作用可能与其上调UCP2的表达有关。     

番石榴叶总三萜对2型糖尿病大鼠的降血糖和血脂作用

目的: 探讨番石榴叶总三萜(TTPGL)对2型糖尿病大鼠血糖及血脂的影响。方法: 采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ, 35 mg·kg^-1)方法建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的糖尿病大鼠随机分为5组:糖尿病模型组,TTPGL低、中、高剂量组(60、120、240 mg·kg^-1),罗格列酮阳性对照组(3 mg·kg^-1)。另取12只正常大鼠设为正常对照组。给药组每天灌胃给药1次,连续给药6周;模型组和正常对照组则给予同体积的生理盐水灌胃。给药6周后,采用葡萄糖氧化酶法测定大鼠的空腹血糖(FBG);放射免疫法测定空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI);酶联免疫法测定大鼠的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、游离脂肪酸(FFA)和糖化血红蛋白(GHb);果糖胺法测定糖化血清蛋白(GSP);Western blotting检测脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况。结果: 与正常对照组相比,糖尿病模型组血脂、FBG以及GHb显著升高,FINS及ISI显著下降,脂肪细胞PPARγ蛋白表达水平降低。与模型组相比,TTPGL中、高剂量组大鼠的FBG和GSP显著降低,FINS以及ISI显著升高,脂肪组织PPARγ蛋白的表达水平升高(P<0.01或P<0.05);此外,TTPGL能显著降低糖尿病大鼠血脂水平,TG、TCH和FFA含量均明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论: TTPGL能显著降低2型糖尿病大鼠的血糖和血脂水平,明显改善糖尿病动物的糖脂代谢紊乱,升高血清胰岛素水平,提高胰岛素敏感指数;其抗糖尿病作用机制可能与其增加PPARγ蛋白的表达有关。     

阿托伐他汀通过抑制PKC的激活对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应

目的:探讨阿托伐他汀对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)产生氧化应激的影响及其作用机制。方法:体外培养HUVECs,以25 mmol/L葡萄糖干预,模拟糖尿病患者体内环境,通过流式细胞术和共聚焦显微镜检测细胞内的活性氧(ROS)水平,采用Lucigenin分析方法测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹杂交的方法检测 NADPH氧化酶亚基Nox4和Nox2/gp91^phox的表达水平,用免疫印迹杂交方法检测蛋白激酶C(PKC)蛋白的磷酸化水平。结果:(1)在高糖环境(终浓度为25 mmol/L)下,HUVECs内ROS生成显著增加,NADPH氧化酶的活性显著增强,NADPH 氧化酶Nox4和Nox2/gp91^phox亚基的mRNA和蛋白表达水平显著上调;(2)阿托伐他汀可显著抑制高糖诱导的ROS 生成、NADPH氧化酶活性的增强及NADPH 氧化酶Nox4和Nox2/gp91^phox亚基表达水平的增加幅度,且具有浓度依赖性;(3)PKC抑制剂(PKC inhibitor peptide, 20 μmol/L)可显著抑制高糖环境下ROS的生成、NADPH氧化酶活性的增强及NADPH 氧化酶Nox4和Nox2/gp91^phox亚基表达水平的增加幅度;(4)阿托伐他汀可抑制高糖诱导的PKC蛋白的磷酸化。结论:PKC的活化参与了高糖诱导的HUVECs产生的氧化应激反应。阿托伐他汀通过抑制PKC蛋白的活化对抗高糖诱导的内皮细胞产生的氧化应激反应。     

肥胖大鼠海马内TNF-α、胰岛素降解酶、PPARγ和Aβ的表达及其作用

目的: 检测肥胖大鼠海马内肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)和淀粉样β肽(amyloid β-peptide,Aβ)水平,探讨TNF-α对肥胖大鼠海马内IDE和Aβ的影响,观察TNF-α、Aβ与PPARγ的关系。方法: 建立肥胖(obesity, OB)大鼠模型;葡萄糖氧化酶法检测大鼠血糖水平,放射免疫法测血浆胰岛素水平;实时荧光定量PCR检测大鼠海马内TNF-α、淀粉样β蛋白前体 (amyloid β-protein precursor,APP)、PPARγ及IDE的mRNA水平;蛋白免疫印记技术及免疫组织化学染色法检测大鼠海马内TNF-α、Aβ₄₂(由APP降解产生)、PPARγ及IDE的蛋白表达。结果: OB组大鼠血糖较正常组无明显差别,胰岛素明显升高并存在胰岛素抵抗(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示肥胖大鼠海马内TNF-α和APP mRNA水平较正常组升高(P<0.01),而PPARγ和IDE mRNA表达减少(P<0.01);蛋白免疫印记技术及免疫组织化学法检测与实时荧光定量PCR结果一致。结论: 肥胖时大鼠海马内存在炎性改变,TNF-α表达升高,IDE和PPARγ表达减少,Aβ沉积增加。IDE作为Aβ的重要降解酶,其表达减少是Aβ沉积的关键因素;PPARγ作为调控IDE转录的核转录因子,在本实验肥胖大鼠海马内表达下降,提示IDE生成减少可能与PPARγ作用下降有关。     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠肾组织中PPARγ、TGF-β1表达的影响

目的：探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达和罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其可能机制。方法: 将大鼠随机分成3组，正常对照组（n=6）、阿霉素肾病组（n=7）、罗格列酮治疗组（n=7），12周后测大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、血脂和血肌酐、尿素氮，用免疫组化检测肾组织NF-κB p65的核转位及ELISA（夹心法）检测肾组织NF-κB p65的活性，RT-PCR测肾皮质PPARγ mRNA及TGF-β₁ mRNA的表达及免疫印迹检测肾皮质PPARγ、TGF-β₁蛋白表达，并进行相关分析。 结果: 与阿霉素肾病组相比，罗格列酮治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄减少，血清白蛋白升高，血甘油三酯和胆固醇下降,差异显著(P＜0.01),肾脏病理损害减轻；肾组织NF-κB p65活化和TGF-β₁ mRNA和蛋白的表达均明显受抑制，而肾皮质PPARγ mRNA和蛋白表达显著增强，差异显著（P＜0.01)；阿霉素肾病组和罗格列酮治疗组大鼠肾组织中NF-κBp65活性与PPARγ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.8305, P＜0.01）；肾组织中PPARγ mRNA与TGF-β₁ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.7938, P＜0.01 ）。结论:罗格列酮作用于阿霉素肾病大鼠后，可能通过上调PPARγ表达，部分抑制肾组织NF-κB p65活性，进而抑制肾组织中TGF-β₁ 表达，从而使系膜基质沉积减少，肾组织病变减轻。     

Peroxisome proliferator-activated receptor agonists in a battle against the aging kidney

As aging is a complex phenomenon characterized by intraindividual and interindividual diversities in the maintenance of the homeostatic condition of cells and tissues, changes in renal function are not uniform and depend on associated diseases and environmental factors. Multiple studies have investigated the possible underlying mechanisms of age-related decline in kidney function. Evolutionary, molecular, cellular and systemic theories have been postulated to explain the primary disease independent age-related changes and adaptive responses. As peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) are involved in a broad spectrum of biological processes, PPAR activation might have an effect on the prevention of cell senescence. In this review, we will focus on the experimental and clinical evidence of PPAR agonists in a battle against the aging kidney.     

MicroRNA在微血管病变调控机制方面的研究进展

Microangiopathy is characterized by capillary basement membrane thickening and microthrombus formation. The process of microangiopathy involves multiple organs and tissues, and seriously endangers the patients’ health and quality of life during the later stage. Recent evidence shows that microRNAs play an important role in the regulatory mechanism of microangiopathy, including inflammatory response, oxidative stress, abnormalities of glucose and lipid metabolism, abnormal activation of the rennin-angiotensin system and so on. The regulatory mechanism has unique features of microangiopathy in different organs. At present, more and more attention has been paid to the roles of microRNAs in the pathogenesis of microangiopathy.