骨髓单个核细胞局部移植预防缺血性胆道狭窄的实验研究

目的 探讨骨髓单个核细胞局部移植对缺血胆管组织血管再生的促进作用机制,观察对胆道缺血性病变的预防和治疗效果.方法 将30只清洁级昆明小白鼠随机分为3组:①缺血胆管骨髓单个核细胞移植组(A组),②缺血胆管PBS注射组(B组),③对照组(C组),每组10只.3组均于胆囊管汇入肝总管处向下解剖一段长约0.5 cm完全游离的胆总管.A组和B组用2枚显微血管夹钳夹游离胆总管的两端,90 min后取出血管夹(C组不钳夹胆管).3组均游离大网膜一束约0.3 cm×0.3 cm×0.5 cm,将其环绕并固定于游离的胆总管.A组将BrdU示踪剂标记的同种系小鼠骨髓单个核细胞悬液均匀注射于环绕的大网膜上,B组和C组仅注射等量磷酸盐缓冲液.术后21d再开腹行胆道造影.取包绕胆管的大网膜和胆管组织制作石蜡切片.用兔抗BrdU单克隆抗体(NeoMarkers,USA)和标有异硫氰酸荧光素(FITC)的山羊抗兔IgG进行免疫组织化学染色和免疫荧光染色(SABC法),观察缺血胆管局部骨髓单个核细胞的分布与分化.分别用第Ⅷ因子相关抗原的抗体和VEGF抗体进行免疫组织化学染色,检测毛细血管密度.结果 术后第21天,A组狭窄率为40%,明显低于B组(100%),C组无胆管狭窄发生;A组骨髓单个核细胞集中分布于缺血胆管周围,其中一些已分化成血管内皮细胞,毛细血管密度明显高于B组和C组(P＜0.01).结论 移植到缺血胆管局部的骨髓单个核细胞,在缺血微环境的诱导下,可分化成血管内皮细胞,并通过促进新生毛细血管的形成,改善缺血胆管血供,明显降低胆管狭窄和梗阻的发生率.     

基质细胞衍生因子联合骨髓单个核细胞移植治疗大鼠肢体缺血的实验研究

目的将基质细胞衍生因子(SDF-1)用于自体骨髓单个核细胞(BM-MNC)移植治疗肢体缺血,初步探讨SDF-1促进血管新生的机理和疗效。方法建立大鼠左后肢缺血模型,将动物随机分为非缺血对照组,缺血对照组,SDF-1局部应用组,自体BM-MNC移植组以及两者联合应用组。检测缺血后24 h左后肢腓肠肌SDF-1含量及CD133+细胞数量;于移植后4周动脉造影后处死动物,免疫组化法检测缺血区新生血管密度,评价血管新生情况。结果缺血对照组24 h肌组织SDF-1含量为(1．31±0．20)ng/50μg总蛋白,非缺血对照组为(0．93±0．29)ng／50μg总蛋白(P<0．05); CD133+细胞数(2．10±0．62)vs．(0．24±0．10)个／HP,P<0．01。SDF-1局部应用可增加缺血区CD133+细胞浸润数量(3．64±0．69)个／HP(P<0．01);并可提高四周后组织内新生血管数量;SDF-1与自体骨髓单个核细胞移植联合应用,可进一步提高新生血管数量。结论SDF-1可能在肢体缺血后自体干细胞的动员中起重要作用,其局部应用可促进缺血区血管新生或进一步提高干细胞移植治疗缺血的疗效。     

犬自体骨髓干细胞在缺血肢体中新生血管形成中的作用

目的:探讨犬自体骨髓干细胞在缺血组织的新生血管形成中的作用.方法:抽取犬骨髓,经免疫磁珠系统分离出CD 34细胞,体外扩增并向血管内皮细胞诱导分化;建立犬双下肢缺血动物模型,将诱导分化细胞移植入一侧缺血肢体中作为实验组,另一侧缺血肢体植入等体积的生理盐水作为自体对照组.移植后6周,检测缺血肢体中新生血管的形成.结果:细胞移植后6周,动脉造影显示实验组缺血肢体侧枝循环增加,明显多于对照组.微血管密度检测实验组为(14±2.3)个/高倍镜视野,明显高于对照组(6±2.1)个/高倍镜视野(P<0.05).激光共聚焦显微镜证实缺血肢体中移植的自体骨髓干细胞参与了新生血管形成.结论:自体骨髓干细胞移植可以促进缺血肢体组织中的新生血管形成.     

自体骨髓CD34+干细胞移植治疗严重肢体缺血的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞移植是否能增加缺血肢体的新生血管形成.方法抽取5只犬骨髓20 ml,经Ficoll分离单核细胞,免疫磁珠分离CD34+细胞,在体外经血管内皮细胞生长因子诱导分化为内皮细胞,并经vWF抗染色鉴定.建立犬双侧肢体缺血动物模型,将Dil荧光标记的内皮细胞植入缺血肢体中.结果 CD34+干细胞移植4周后,激光共聚焦显微镜证实缺血肢体中移植的自体骨髓干细胞参与了新生血管形成;动脉造影见干细胞移植的肢体侧枝循环明显增加,微血管密度检测移植组也明显高于对照组(12.0±2.8 vs. 5.0±1.6/每高倍镜视野,t=4.17, P<0.05);干细胞移植的肢体ABI平均为0.58±0.14,对照肢体ABI平均为0.32±0.11,差异有统计学意义(t=2.95, P<0.05).结论自体骨髓干细胞移植能有效的促进缺血组织内的新生血管形成.     

自体骨髓CD34+干细胞移植治疗严重肢体缺血的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞移植是否能增加缺血肢体的新生血管形成。方法抽取5只犬骨髓20ml,经Ficoll分离单核细胞,免疫磁珠分离CD34+细胞,在体外经血管内皮细胞生长因子诱导分化为内皮细胞,并经vWF抗染色鉴定。建立犬双侧肢体缺血动物模型,将Dil荧光标记的内皮细胞植入缺血肢体中。结果CD34+干细胞移植4周后,激光共聚焦显微镜证实缺血肢体中移植的自体骨髓干细胞参与了新生血管形成;动脉造影见干细胞移植的肢体侧枝循环明显增加,微血管密度检测移植组也明显高于对照组(12.0±2.8vs.5.0±1.6/每高倍镜视野,t=4.17,P<0.05);干细胞移植的肢体ABI平均为0.58±0.14,对照肢体ABI平均为0.32±0.11,差异有统计学意义(t=2.95,P<0.05)。结论自体骨髓干细胞移植能有效的促进缺血组织内的新生血管形成。     

日本大耳兔胆道缺血再灌注损伤模型的建立

目的建立日本大耳兔胆道缺血再灌注损伤模型,用于肝移植术后胆道并发症及胆道损伤等研究。方法采用无损伤动脉夹联合胆总管及肝总动脉阻断制作胆道缺血模型,以假手术组(SO)及单纯肝动脉阻断组(HAO)作为对照,阻断时间分为2h和3h,各组分别于复流前、复流12h、1、2、3、7d取血测AST、ALT、TBA水平;取胆汁行胆汁TBIL、TBA、GGT测定。术后一周观察动物死亡情况;动物处死后取肝胆组织行石蜡切片HE染色光镜下观察。以单纯肝总动脉阻断组做对照。结果血清、胆汁指标和动物术后7d存活率联合阻断组与单纯肝总动脉阻断组相比差异显著,前者差于后者。随着缺血时间的延长,胆道损伤逐渐加重,病理改变由可逆性损伤转化为不可逆性损伤。结论联合胆总管及肝总动脉阻断胆道缺血再灌注模型胆道缺血完全,重复性好,复制简单,是较好的胆道缺血再灌注损伤模型。     

人脐带间充质干细胞移植预防兔缺血性胆道病变的初步实验研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSC)移植在防治兔肝内缺血性胆道病变中的作用。方法将18只新西兰大白兔随机分成3组(每组6只):(1)A组(假手术组),仅切开腹腔,不予任何特殊处理,术后分层关腹;(2)B组(实验模型组),建立肝内缺血性胆道病变模型;(3)C组(hUC-MSC移植组),术前12h经耳缘静脉注射hUC-MSC(2×106/kg)5ml,然后按B组实验操作建立肝内缺血性胆道病变模型。术后定时监测生化指标变化情况。术后4周开腹行胆道造影。处死动物后,取第一肝门处汇管区肝组织做病理学检查。结果与A组比较,B组和C组术后多个时间点各项生化指标均有不同程度升高(均为P<0.05),但C组的生化指标升高程度明显低于B组(均为P<0.05),下降趋势明显。术后4周胆道造影、病理学检查结果示,B组的肝内胆管上皮细胞破坏严重,C组的胆管上皮细胞破坏较B组明显减轻,管壁结构完整。结论术前hUC-MSC移植能够有效减轻缺血性胆道病变的程度,预防缺血性胆道病变的发生。     

日本大耳兔胆道缺血再灌注损伤模型的建立

目的 建立日本大耳兔胆道缺血再灌注损伤模型，用于肝移植术后胆道并发症及胆道损伤等研究。方法 采用无损伤动脉夹联合胆总管及肝总动脉阻断制作胆道缺血模型，以假手术组(SO)及单纯肝动脉阻断组(HAO)作为对照，阻断时间分为2h和3h，各组分别于复流前、复流12h、1、2、3、7d取血测AST、ALT、TBA水平；取胆汁行胆汁TBIL、TBA、GGT测定。术后一周观察动物死亡情况；动物处死后取肝胆组织行石蜡切片HE染色光镜下观察。以单纯肝总动脉阻断组做对照。结果 血清、胆汁指标和动物术后7d存活率联合阻断组与单纯肝总动脉阻断组相比差异显著，前者差于后者。随着缺血时间的延长，胆道损伤逐渐加重，病理改变由可逆性损伤转化为不可逆性损伤。结论 联合胆总管及肝总动脉阻断胆道缺血再灌注模型胆道缺血完全，重复性好，复制简单，是较好的胆道缺血再灌注损伤模型。     

尿激酶灌注无心跳供肝预防肝内缺血型胆道病变的临床研究

目的 探讨降低无心跳尸体供体肝移植术后肝内缺血型胆道病变发生率的方法,进而减少再移植率,提高长期生存质量.方法 针对无心跳尸体供肝在热、冷缺血状态下胆道微循环中可能存在的微血栓形成,进行前瞻性临床研究.以2006年1月至2007年3月实施并存活超过1年的肝脏移植病人112例为实验组;以1999年7月至2005年12月完成并存活超过1年的肝脏移植220例为对照组.实验组在供肝切取冷灌注时及供肝修整完毕后两次应用尿激酶灌洗供肝动脉系统.比较两组肝内缺血型胆道病变的发生率.结果 对照组220例中13例受体术后发生肝内缺血型胆道病变,发生率5.9%,发生时间为术后3～11个月;实验组112例中2例分别在术后3、6个月发生肝内缺血型胆道病变,发生率1.8%.结论 (1)无心跳尸体供肝存在较高的肝内胆道缺血型病变发生率和再移植率.(2)对无心跳尸体供肝常规采用尿激酶两次灌洗方案能有效降低肝内缺血型胆道病变的发生率.     

尿激酶灌注无心跳供肝预防肝内缺血型胆道病变的临床研究

目的 探讨降低无心跳尸体供体肝移植术后肝内缺血型胆道病变发生率的方法,进而减少再移植率,提高长期生存质量.方法 针对无心跳尸体供肝在热、冷缺血状态下胆道微循环中可能存在的微血栓形成,进行前瞻性临床研究.以2006年1月至2007年3月实施并存活超过1年的肝脏移植病人112例为实验组;以1999年7月至2005年12月完成并存活超过1年的肝脏移植220例为对照组.实验组在供肝切取冷灌注时及供肝修整完毕后两次应用尿激酶灌洗供肝动脉系统.比较两组肝内缺血型胆道病变的发生率.结果 对照组220例中13例受体术后发生肝内缺血型胆道病变,发生率5.9%,发生时间为术后3～11个月;实验组112例中2例分别在术后3、6个月发生肝内缺血型胆道病变,发生率1.8%.结论 (1)无心跳尸体供肝存在较高的肝内胆道缺血型病变发生率和再移植率.(2)对无心跳尸体供肝常规采用尿激酶两次灌洗方案能有效降低肝内缺血型胆道病变的发生率.     

Effects of autologous bone marrow mononuclear cells implantation on cholangiocytes apoptosis in model of intrahepatic ischemic type biliary lesion in rabbits

Aim

To investigate the effects of autologous bone marrow mononuclear cells (BM-MNCs) implantation on regulation of cholangiocyte apoptosis in a model of intrahepatic ischemic type biliary lesion (ITBL) in rabbits.

Materials and Methods

Thirty Japanese white rabbits were divided randomly into 3 groups (10 per group) including controls (group A), ITBL model (group B), and BM-MNCs implantation groups (group C). All rabbits underwent the same surgical procedure to prepare the liver for graft removal during transplantation. Subsequently, no additional vascular intervention was performed in group A. In group B, the hepatic artery and common bile duct were clamped with microvascular clips for 2 hours, where after the clips were removed to recover the blood supply. Group C received, BM-MNCs (10⁸ cells per rabbit) injected through the hepatic artery after removing the clips. The animals were killed 4 weeks after operation. The survival rate, histopathologic examination, cholangiocyte apoptosis with terminal uridine nick-end labeling (TUNEL) staining and expressions of Bcl-2 and Bax proteins were examined using immunohistochemical staining.

Results

Group A animals showed a survival of 100%; the rates in groups B and C were both 90%. Histopathologic examination revealed normal intrahepatic cholangiocytes in group A, obviously damaged ones in group B, and alleviated damage in group C. TUNEL staining indicated apoptosis of cholangiocytes in group B was more serious than that in group A or group C. Immunohistochemical staining demonstrated significantly decreased Bcl-2 expression in group B compared with that in group A; Bcl-2 expression in group C returned to the level of group A. Simultaneously, the Bax expression presented adverse results; the ratios of Bcl-2/Bax were ranked as group A > group C > group B.

Conclusion

Implantation of autologous BM-MNCs significantly reduced apoptosis of intrahepatic cholangiocytes and prevented or abated intrahepatic ITBL.     

普通超声及超声造影检测兔胆道缺血模型胆道异常的可行性研究

目的探讨普通超声及超声造影应用于检测兔胆道缺血模型胆道异常的可行性。方法将20只健康新西兰兔随机分为两组,对照组及肝动脉和胆总管联合阻断2h(HBO2h)组(各10只)。HBO2h组用无损伤动脉夹阻断肝动脉及胆总管下段2h后去除动脉夹制作胆道缺血模型,对照组不进行任何手术处理。术后5d两组实验兔先后采用普通超声、超声造影观察胆总管-左叶胆管情况,然后处死动物取胆总管-左叶胆管标本行苏木素-伊红(HE)染色,对胆管组织缺血损伤程度进行评分,CD34免疫组织化学染色后行微血管密度(microvascular density,MVD)定量分析。结果普通超声表现:对照组门静脉管径/胆管管径比值为3.47±0.23,所有胆管(100%)均表现为管壁连续性好、无增厚,管腔清晰;HBO2h组胆管明显扩张,门静脉管径/胆管管径比值为1.25±0.42,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01);所有胆管均表现为管壁毛糙、增厚。超声造影表现:对照组所有胆管壁(100%)较肝实质提早增强,动脉期胆管壁呈细线状高增强,门静脉期及延迟期呈等增强;HBO2h组中60%(6/10)表现为动脉期胆管壁呈增强水平明显降低,门静脉期及延迟期呈低增强;40%(4/10)表现为增强扫描全过程均呈无增强;与对照组相比,HBO2h组各时相胆管壁增强表现差异均有统计学意义(均为P<0.05)。病理学表现:对照组胆管黏膜上皮细胞和黏膜下腺体上皮细胞呈柱状,排列紧密、完整,无上皮细胞变性、坏死、脱落等,胆管损伤评分为0分,MVD为(6.1±2.5)个。HBO2h组胆管壁增厚,胆管黏膜上皮细胞及黏膜下腺体上皮变性、坏死、脱落,管壁炎症细胞浸润,胆管损伤评分为(2.1±0.6)分,MVD为(2.2±1.6)个,与对照组比较差异有统计学意义(均为P<0.01)。结论普通超声及超声造影能较早发现胆道缺血兔模型的胆道异常,为缺血型胆道病变动物实验研究提供了一种简便、无创、动态监测病程发展的有效手段。     

肝移植术后胆泥超声声像图表现及其与预后相关性的初步探讨

目的探讨肝移植术后胆泥超声表现及其与预后的关系。方法回顾性分析36例肝移植术后胆泥患者的超声声像图表现,按治疗结果分为不良疗效组和疗效稳定组,比较两组间初次发现胆泥时的超声特点。结果缺血性胆道病变合并胆泥者在不良疗效组中占95%(19/20),在疗效稳定组中则仅为13%(2/16),差异有统计学意义(P0.05)。疗效稳定组的胆泥均位于肝门部(16/16),胆泥与胆管壁分界清晰(14/16),肝门部胆管壁无增厚(14/16),肝内胆管未见扩张(14/16);不良疗效组胆泥分布范围广,除肝门部外,常累及肝内胆管(10/20),胆泥与胆管壁分界模糊(15/20),肝门部胆管壁增厚明显(16/20),肝内胆管扩张(19/20);上述4项指标在两组间差异有统计学意义(均为P0.05)。结论在不同预后组间胆泥的声像图特点有差异,对合并有缺血性胆道病变超声特点的胆泥,提示预后较差,可能需要进行积极的介入治疗。     

Adenomyoma of the Common Hepatic Duct Mimicking Bile Duct Cancer: Report of a Case

We report an unusual case of adenomyoma of the common hepatic duct mimicking bile duct cancer. A 50-year-old woman was referred to our hospital for the investigation of general fatigue. Laboratory data showed abnormal liver test results and computed tomography showed a mass lesion in the hepatic hilum and dilatation of the intrahepatic bile ducts. These findings led to a preoperative diagnosis of hilar bile duct carcinoma, and we performed a left lobectomy with resection of the extrahepatic bile duct. Macroscopically, an elevated lesion was found in the common hepatic duct, which was confirmed histologically to be an adenomyoma. Bile duct strictures are rarely caused by benign tumors of the biliary tract, such as adenomyoma. Surgical resection of the bile duct should be considered for all bile duct strictures because it is often difficult to differentiate malignant from benign lesions in this location preoperatively, and malignant cells may be present in the lesion.     

不同浓度盐酸消融兔胆管的实验研究

目的：了解不同浓度盐酸消融胆管后兔的肝功及胆管组织改变,为临床应用消融栓塞胆管治疗肝内胆管结石提供实验依据。方法：观察20%、15%、10%和5%的盐酸消融右外叶胆管后兔的存活情况、肝脏功能和胆管组织病理改变。结果：胆管消融术后所有动物均未死亡,存活率100%。20%盐酸及15%盐酸胆管消融造成兔右外叶肝脏几近坏死。10%盐酸胆管消融导致兔右外叶近肝门部肝实质完全坏死,肝叶中部及边缘组织以汇管区为中心的大片坏死。5%盐酸胆管消融后兔右外叶近肝门部及中部肝实质以汇管区为中心的坏死,肝叶边缘仅胆管坏死。与20%、15%和10%盐酸组兔相比,5%盐酸组的肝功能损害最轻。结论：盐酸作为胆管消融剂,能够导致胆管组织凝固性坏死,破坏胆管上皮,终止胆管上皮及胆管周围腺体的分泌;5%为盐酸消融胆管的较理想浓度。     

肝动脉栓塞术后的肝内外胆道损毁性病变

目的 探讨经导管肝动态栓塞术后对胆道损伤的病因、治疗及预防。方法 总结５例因肝动脉栓塞引起的胆道损伤患者,其中４例为肝血管瘤经导管动脉栓塞术后,１例为手术时结扎肝动脉注射ＴＨ胶后。动物实验观察向大鼠肝动脉内注射乙醇复制血管栓塞剂对肝脏的损伤。结果 ５例患者均有胆道毁坏性病变,甚至造成胆汁性肝硬化,４例进行胆管空肠吻合及胆道支撑。实验结果证实肝动脉注射血管硬化剂无水乙醇后可以引起邻近汇管区肝脏局部坏     

胆道锌型综合征动物模型的建立

目的 建立胆道铸型综合征的动物模型,探讨胆道铸型综合征发生的病理机制.方法 40只日本大耳白兔被随机分成两组,实验组用石炭酸腐蚀肝内外胆道上皮,后以支撑管连接;对照组(假手术组)仅作肝外胆道的横断及支撑管连接.术后观察4周后处死,行肝脏大体标本解剖及病理切片分析.结果 全部兔均按预期方案手术成功,在随后的观察期内,实验组有6只兔在术后3周左右死亡,实验组及对照组在观察期均出现精神萎靡、食欲不振、大便性状改变及体质量减轻等症状,但实验组症状偏重.实验组兔处死后大体标本见肝门部粘连严重,胆总管横断以上扩张,4只出现胆道壁坏死,6只出现肝外带的胆汁潴留性肝脓肿,所有实验动物均可见胆道铸型的存在.对照组兔大体标本见肝内外胆道全部扩张,肝门部无明显粘连,肝内外胆道壁光整,无胆道铸型.病理切片损伤后24h出现肝内大胆管黏膜的大片坏死、脱落;72 h可见肝内外大小胆管内均充盈着大量粉染物质,部分大胆管正常腺上皮为扁平上皮覆盖,管壁周围有大量炎细胞浸润;术后21 d见大胆管失去正常黏膜上皮,为纤维组织及扁平上皮覆盖.结论 胆道铸型综合征动物模型已初步建立,该征起因于胆道上皮的严重损伤,继而出现的炎性反应是胆道铸型形成及出现相关病征的基础.     

Heterotopic gastric mucosa in the hilar bile duct mimicking hilar cholangiocarcinoma: report of a case

We herein report a case of heterotopic gastric mucosa in the hilar bile duct. An asymptomatic 58-year-old male was noted to have mild liver dysfunction in March 2009 during the follow-up for angina pectoris. Abdominal-enhanced CT revealed wall thickening from the upper common hepatic bile duct to the left hepatic bile duct. Endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) showed stenosis at the junction of the left hepatic bile duct. Although the patient??s serum tumor markers were all within the normal ranges, the possibility of malignant disease of the biliary tree could not be ruled out. Left hepatectomy with the caudate lobe and resection of the extrahepatic bile duct were performed. Histopathologically, the resected specimen showed a polypoid lesion measuring 2 × 2 cm in size that projected into the lumen of the left hepatic bile duct. Microscopic examination revealed this polypoid lesion to be composed of mucous glands resembling gastric fundic glands, with parietal and chief cells. We also review eight other reports of heterotopic gastric mucosa in the biliary tree previously published in the English literature.