运用FQ-PCR技术监测亚甲蓝光化学法对血浆乙型肝炎病毒的灭活效果

目的通过荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术对血浆病毒灭活前后乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)浓度进行测定,判断亚甲蓝(MB)光化学法灭活乙型肝炎病毒的效果,为临床判断病毒灭活效果提供直接和客观依据。方法用4份已证实为HBV-DNA阳性的血浆,经可见光(>3000LUX)照射不同时间(0、5、10、15、30min)后,用FQ-PCR分别测定这些血浆的HBV-DNA浓度,并与未用MB处理的血浆作比较,判断随照射时间不同,HBV被灭活的效果。结果4份HBV-DNA阳性患者的血浆未经处理时,其病毒核酸浓度分别为5.6×107、3.2×106、1.8×106和3.5×105拷贝/ml,加入MB未经照射时HBV-DNA浓度即明显下降(P<0.05),可见光照射5min后HBV-DNA浓度分别下降为未经任何处理时的浓度的15.89%、11.56%、4.39%和1.23%。随照射时间的延长,病毒核酸浓度逐渐下降,照射30min后,HBV-DNA浓度均下降为零。结论用MB加光照30min处理,可达到将血浆乙肝病毒灭活的效果。     

光照度对亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的影响

目的在亚甲蓝(Methylene Blue,MB)光化学法灭活血浆病毒的过程中,采用不同光照度对血浆进行灭活,探讨血浆主要生化指标的变化情况,以找出对血浆影响最小的灭活光照度。方法将300袋机器单采血浆(200ml/袋),处理为含MB浓度为1μmol/L的MB血浆。分3组(100袋/组),分别置于3种不同光照度下处理35min(其它灭活条件相同),并检测血浆相关质控指标。结果在MB光化学法灭活血浆的过程中,不同光照度对血浆总蛋白浓度和凝血因子Ⅷ含量会造成不同影响,而对血浆其它主要成分和生化指标的影响不明显。结论初步证明,当可见光的光照度为30000—33000Lux时,MB光化学法灭活血浆的主要成分和生化指标变化最小,较适合于输注人体。     

热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒效果的研究

目的研究热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果。方法采用细胞培养法和基因检测技术,对热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果进行了评价。结果经56℃水浴中热力预灭活处理1.5 h,辛德毕斯病毒滴度≤0.5 TCID50/ml,灭活对数值达到6.33 TCID50/ml;未经预灭活的辛德毕斯病毒在1μmol/L亚甲蓝+光照(MB+L)处理中随光照时间的延长,病毒残余滴度逐渐下降至检测限(TCID50/ml=0.5)。经热力灭活预处理的辛德毕斯病毒与未经预处理的病毒核酸载量之间具有相关性(R20.98,显著性F0.01)。结论热力灭活预处理的辛德毕斯病毒能够反映活病毒的亚甲蓝病毒灭活效果,有望成为安全而有效的病毒灭活效果评价制品。     

亚甲蓝光化学法灭活寨卡病毒的研究

目的探讨亚甲蓝光化学反应对血浆中寨卡病毒的灭活效果。方法血浆中加入寨卡病毒后,使用一次性病毒灭活输血过滤器材在病毒灭活照射仪内进行亚甲蓝光化学法病毒灭活(亚甲蓝浓度为1μM、照射强度为35 000 Lx、灭活时间为30 min)。分别在灭活处理前以及灭活处理的第5、15、30 min留样。所取样品用免疫荧光法检测病毒滴度,并用RT-qPCR检测病毒RNA载量。结果灭活前,血浆中寨卡病毒的滴度和核酸载量分别为(5.55±0.18)log TCID_(50)/0.1mL和(9.08±0.75)log copies/mL。灭活后以及经过Vero细胞连续3代培养后,均未检测到病毒感染性,滴度下降(5.05±0.19)log TCID_(50)/0.1mL。病毒RNA载量在灭活后仍有(8.07±0.68)log copies/mL,传代培养从第1代到3代,都没有检测到病毒RNA。结论亚甲蓝光化学法能有效灭活血浆中的寨卡病毒。     

荧光定量PCR技术在血液筛查中的应用及可行性分析

目的　了解 ELISA法筛查血液乙型肝炎病毒 ( hepatitis B virus,HBV)的漏检率 ,探讨荧光定量聚合酶链反应 ( Flurescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术用于混合血浆标本病毒核酸检测的可行性。　方法　应用 FQ-PCR技术对常规 ELISA初复检正常献血者 (包括无偿献血者和个体献血者 )的微量血浆汇集池标本 ( 1 0人份× 2 0 μ1 )进行 HBV DNA检测 ,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。用双蒸水和 HBV DNA阴性汇集池中的血浆标本分别对 HBV DNA标准品(浓度为 1 0 3拷贝 /ml)作 1 0～ 5 0倍稀释后行 FQ-PCR测定 ,观察不同的血浆标本混合后是否存在 Taq酶抑制物的叠加作用及对 PCR结果有无影响。对浓度为 1 0拷贝 /ml～ 1 0 4拷贝 /ml的 HBV DNA标准品分别进行 FQ-PCR检测 ,确定试剂盒的敏感度。　结果　 1 2 0 0份无偿献血者标本中有 1 1例 HBV DNA阳性 ( 0 .92 % ) ;4 70份个体献血者标本中有 1 0例 HBVDNA阳性 ( 2 .1 3% )。双蒸水与混合血浆稀释的 HBV DNA标准品的 FQ-PCR检测结果 (定性 )完全一致。试剂盒的检出下限为 1 0 2拷贝 /ml。　结论　 ELISA法筛查血液存在较高的 HBV漏检率 ,FQ-PCR用于混合血浆标本的病毒核酸检测是可行的     

丙型肝炎病毒样颗粒作为亚甲蓝光化学法灭活HCV效果评价物的可行性研究

目的探讨丙型肝炎病毒样颗粒(HCVLPs)在亚甲蓝光化学灭活处理过程中的变化趋势及其作为亚甲蓝光化学法灭活HCV效果评价物的可行性。方法以HCV阳性血浆作为平行对照组(HCV RNA载量约6.53 logcopies/m L)(n=6),将HCVLPs用代血浆调整成合适浓度(HCV RNA定量约为6.74 logcopies/m L)的悬液作为实验组(n=5),将2组分装至PVC血袋中,MB+L 1μmol/L进行病毒灭活处理,分别于光照处理0、5、10、20、30 min时取样,用荧光定量PCR技术检测病毒核酸载量;同时以细胞病变法测定HCV模型病毒sindbis病毒的残余滴度,验证MB+L灭活HCV的效果。结果模型病毒sindbis的病毒滴度降至检测限以下(log TCID50/m L≤0.5);MB+L处理过程中,随着光照处理时间的增加,HCV及HCVLPs的核酸载量明显下降,分别从6.53与6.74下降至4.51和2.89log copies/m L(P0.05),且2组在不同取样点的HCV RNA载量之间具有相关性(R20.98,Significance F0.01)。结论 HCVLPs能够反映MB+L灭活处理中HCV RNA动态变化,或有望成为安全而有效的HCV灭活评价物来监控HCV灭活效果。     

核酸纯化柱提取核酸定量检测丙型肝炎病毒RNA的临床应用

目的观察核酸纯化柱提取法（简称柱提法）对血浆标本中丙型肝炎（简称丙肝）病毒核糖核酸（HCV-RNA）进行定量检测的临床应用效果。方法分别用柱提法和酚-氯仿提取法提取血浆标本中的HCV-RNA，用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对117例抗-HCV阳性的丙肝患者同时进行HCV-RNA定量检测，并对结果进行比较分析。结果117例抗-HCV阳性丙肝患者以酚-氯仿提取法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为66．7％（78／117），以柱提法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为79．5％（93／117）。两法比较，差异有统计学意义（X^2=4．26，P〈O．05）。将两法所测浓度结果换算成对数值，经“检验两者差异无统计学意义（μ=1．61，P〉0．05）。结论采用核酸柱提法提取血浆标本中HCV-RNA进行定量检测简单、快速，分离效率高，容易掌握，适于临床常规应用。     

血浆病毒灭活治疗乙型慢性活动性肝炎的探讨

目的探讨自身血浆灭活对缓解期乙型慢性活动性肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)的清除作用。方法选择69例缓解期乙型慢性活动性肝炎患者为治疗对象,每2周单采1次血浆,第1次采集血浆400ml,用亚甲蓝和光照灭活病毒,并于6h内冻存。第2次先采集400ml血浆,再回输第1次采集的400ml灭活血浆,同时采集400ml血浆。将第2次采集的800ml血浆病毒灭活后冻存,待第3次采集时回输用。这样第3次可冻存血浆1200ml,第4次可冻存血浆1600ml。共单采7次。最后1次可置换自体灭活血浆2800ml。1个疗程3个月。第1次灭活置换前和最后1次置换后分别留取血清,采用聚合酶链反应结合Taqman荧光探针技术对血清中HBV进行定量测定。结果灭活置换术前、后病毒平均浓度分别为(5.23×105±2.25×102)copy/ml和(2.95×104±1.03×102)copy/ml,灭活置换术前、后HBV含量下降显著(P<0.05)。结论自体血浆病毒灭活置换术对外周血HBV有较强的清除作用。     

核黄素光化学作用灭活大肠杆菌的研究

目的研究核黄素光化学反应对细菌的灭活作用,探讨分析核黄素光化学灭活病原体的机理。方法将含有细菌的培养液4.950ml注入5ml血袋中,再加入10mmol/L的核黄素溶液50μl使其终浓度为100μmol/L,将血袋置控温光照仪中接受400—500nm波段可见光双侧照射[剂量(8.0—32.0)J/cm2],照射时温度为(4±2)℃;照射后标本通过细菌培养,透射电镜影像、核酸检测(LacZ基因片段)等方法观察核黄素光化学作用灭活大肠杆菌的效果。结果400—500nm可见光激发的核黄素光化学作用可以有效灭活大肠杆菌达6log;透射电镜影像示经核黄素光化学处理的大肠杆菌其拟核所在区域出现多个空泡;PCR显示经核黄素光化学处理的大肠杆菌其LacZ基因片段的复制被完全阻止。结论可见光激发的核黄素光化学作用可以有效灭活大肠杆菌,核酸是核黄素光化学产生病原体灭活作用的主要靶点。     

吩噻嗪染料对人新鲜血浆中病毒的光灭活

为了保证血液及其制品的安全性,消除病毒的传播,必须对其进行病毒灭活。本文采用吩噻嗪染料(主要是亚甲蓝和甲苯胺蓝)在可见光照射下,灭活血浆中被膜病毒,效果良好。由于亚甲蓝和甲苯胺蓝等吩噻嗪染料对被膜病毒的表面结构有很强的亲和性,因而能穿透病毒被膜面与其核酸,尤其是鸟嘌呤残基结合,这正是光动力学作用的靶结构。所以,对HSV、VSV、流行性感冒等病毒,即使染料浓度仅为1μmol/L,便能使病毒滴度降低10~6,况且,AIDS 和HIV-1 对光灭活尤其敏感,以至在2分钟内就能使其滴度降低到不能检测的程度。同时,经过该灭活程序后,血浆蛋白活性降低不到20%;从交叉免疫电泳图谱看,它与对照组(未经灭活)没什么差别,说明血浆蛋白结构基本上没有改变,看来,经光动力学处理的新鲜血浆从治疗意义上讲,同未经处理的新鲜冰冻血浆是相同的。尽管还有必要进一步更详细地探讨在此处理过程中是否有新抗原的产生等问题,但是,这仍不失为一种灭活新鲜血浆中病毒的有效     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。