不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响

背景：富血小板血浆生物功能的发挥受多种因素的控制，如个体差异、富血小板血浆的使用浓度、富血小板血浆载体、富血小板血浆激活方式等均可影响富血小板血浆的作用。 目的：观察不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响。 方法：抽取兔耳中央动脉全血制备富血小板血浆，稀释富血小板血浆，使其中血小板最终计凝数约为全血的5倍。在16只新西兰兔颅骨顶部分别制备4个直径为8 mm的全厚层骨缺损，按随机数字表法将60 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、1 000 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、富血小板血浆+β-磷酸三钙与单纯β-磷酸三钙植入4个缺损区域内。术后1，3个月X射线、光镜观察颅骨修复情况，计算各组新骨生成面积百分数。 结果与结论：术后1个月，各组缺损边缘较清晰，缺损周边有不同程度新骨生成，β-磷酸三钙颗粒部分降解，降解处由新骨代替，仅见少量骨陷窝，缺损中心β-磷酸三钙周围可见纤维包绕，仅少数标本可见新骨生成；X射线显示边界清晰，缺损区密度较为均一；各富血小板血浆组新骨生成百分数均高于β-磷酸三钙组(P < 0.05)，但富血小板血浆各组间差异无显著性意义(P > 0.05)。术后3个月，各组缺损边界不清，新骨生成量增加，缺损周边β-磷酸三钙颗粒部分或全部降解并由新生骨所代替，部分区域出现骨小梁，新生骨中骨陷窝增多，多数标本缺损中央有新骨生成；X射线显示各组缺损边缘模糊不清，缺损周边部分密度高于缺损中心部位，与其他正常部位骨密度相当；各富血小板血浆组新骨生成百分数亦明显高于β-磷酸三钙组(P < 0.05)，富血小板血浆+β-磷酸三钙组高于其他3组(P < 0.05)，两凝血酶组差异无显著性意义(P > 0.05)。提示富血小板血浆可促进新西兰兔颅骨缺损修复，60，1 000 U/mL凝血酶对富血小板血浆修复新西兰兔颅骨缺损的作用无影响，可能与并未找到凝血酶的最佳浓度有关。     

β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸支架复合骨髓基质细胞修复节段性骨缺损

背景：组织工程β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸支架材料具有良好的生物相容性。 目的：评估骨髓基质细胞与β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸复合体修复兔桡骨大段骨缺损成骨的效果。 方法：取新西兰大白兔40只,建立桡骨双侧大段骨缺损模型,其中35只右侧植入自体骨髓基质细胞与β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸复合物作为实验组,左侧植入β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸支架材料作为对照组;另5只作为空白对照不作任何处理。植入后4,8,12,16周拍摄X射线片观察骨缺损修复情况。 结果与结论：实验组术后2周可见缺损处有散在的、少量模糊状骨痂生成,术后4周可见明显骨生成影像,成云雾状,均匀分布在骨缺损区,术后8周整个缺损区均可见骨痂生成,成骨现象更加明显,部分髓腔已通,术后12~16周,缺损区已完全被新生骨组织充填,骨髓腔已完全再通,修复区较正常桡骨细,骨缺损修复效果明显优于对照组与空白对照组(P < 0.01)。说明自体骨髓基质细胞与β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸复合移植可较完全修复大节段骨缺损。     

β-磷酸三钙脱有机质骨的成骨性能

背景：人工发孔方法制备的β-磷酸三钙材料在孔隙结构上与天然松质骨的孔隙结构存在巨大的差异，进而影响了其本身的生物学性能。 目的：采用体内成骨试验方法验证牛松质骨煅烧制备的β-磷酸三钙脱有机质骨的体内成骨活性。 设计、时间及地点：对比观察，动物体内实验，于2005-07/2006-10在解放军总医院骨科研究所完成。 材料：将健康牛松质骨脱去有机成分后，经2次高温煅烧方法制备形成β-磷酸三钙脱有机质骨标准试件，经辐照灭菌后备用。 方法：健康新西兰大白兔12只，按4，8，12周3个取材时间分成3组，每组4只，将β-磷酸三钙脱有机质骨4个试件随机植入上述3组动物一侧下肢的骨缺损中，同时在每只兔另一侧下肢制备相同骨缺损模型，不植入任何材料，为空白对照。 主要观察指标：于材料植入后1 d以及4，8，12周分别拍摄兔膝关节正侧位X射线片，观察缺损部位新骨形成情况，并与空白对照组进行对比。 结果：随着β-磷酸三钙脱有机质骨植入时间的延长，材料周边及中心部位逐渐有新生骨组织长入，但植入的材料无明显降解吸收，新骨长入量有限。空白对照至12周仅缺损周围有少量新骨生成。 结论：β-磷酸三钙脱有机质骨具有体内成骨活性，但降解缓慢影响新骨的替代和改建过程。     

磷酸三钙多孔生物陶瓷复合自体骨髓间充质干细胞修复股骨头坏死模型的超微结构观察

背景：股骨头坏死病灶清除后的骨缺损难以修复,磷酸三钙多孔生物陶瓷与兔骨髓间充质干细胞的复合培养体内成骨的超微结构仍不明确。 目的：通过观察磷酸三钙多孔生物陶瓷与兔骨髓间充质干细胞复合培养体内成骨的超微结构,了解其在股骨头缺损修复中的成骨效应,验证磷酸三钙多孔生物陶瓷作为组织工程载体材料的可行性。 设计、时间及地点：随机对照开放性动物体内实验,于2008-02/08在中日友好医院骨坏死与骨循环实验室完成。 材料：体外培养兔骨髓间充质干细胞,并与β-磷酸三钙多孔陶瓷材料复合共同培养2周。 方法：新西兰大白兔30只,随机分为3组,制作股骨头坏死缺损模型后,空白对照不作填充,磷酸三钙组填充磷酸三钙多孔生物陶瓷,磷酸三钙+骨髓间充质干细胞组填充磷酸三钙多孔生物陶瓷和骨髓间充质干细胞的复合物。 主要观察指标：通过环境扫描电镜观察骨髓间充质干细胞与材料的复合情况;回植体内6,12周后,取材,通过电镜观察磷酸三钙多孔生物陶瓷和骨髓间充质干细胞体内成骨的超微结构,了解材料降解及骨组织的替代过程。 结果：磷酸三钙多孔生物陶瓷与骨髓间充质干细胞复合培养良好。空白对照组缺损区6,12周均见纤维组织结构,无骨小梁结构;磷酸三钙组6周材料和骨基质交界不清,材料开始降解,12周材料与周围组织边界模糊,材料部分降解,多孔框架结构不清;磷酸三钙+骨髓间充质干细胞组6周新生骨从宿主骨长出,12周可见成熟骨组织的连续平行纤维结构网络,材料降解,表面有较多的成骨细胞。后2组在股骨头缺损修复成骨方面优于空白对照组,磷酸三钙+骨髓间充质干细胞组成骨更佳。 结论：磷酸三钙多孔生物陶瓷是良好的组织工程支架材料,易与骨髓间充质干细胞复合,可用于股骨头坏死骨缺损的修复。     

骨唾液酸蛋白与骨形态发生蛋白体内成骨活性的差异*★

目的：研究证明，骨唾液酸蛋白可能与骨形成和骨改建有关。实验拟评价骨唾液酸蛋白在大鼠体内的成骨活性并与骨形态发生蛋白相对比。 方法：实验于2006-12/2007-04在解放军广州军区广州总医院动物实验中心完成。①实验分组：8周龄雄性SD大鼠24只，随机数字表法分为骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物组，骨形态发生蛋白-β-磷酸三钙复合物组，β-磷酸三钙组，空白对照组，每组6只。②实验方法：应用重组人骨唾液酸蛋白及骨形态发生蛋白2分别与β-磷酸三钙复合并植入直径8 mm 的大鼠颅骨骨缺损内。其中骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物组植入骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物，骨形态发生蛋白-β-磷酸三钙复合物组植入骨形态发生蛋白-β-磷酸三钙复合物，β-磷酸三钙只植入β-磷酸三钙，空白对照组未植入任何材料。③实验评估：术后8周取出标本，行大体、Ｘ射线、组织学观察及各种植入物的碱性磷酸酶活性。 结果：纳入大鼠24只，均进入结果分析，各组植入物未完全吸收，周围均未见明显炎症反应。①骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物和骨形态发生蛋白-β-磷酸三钙复合物在大鼠颅骨骨缺损内形成新骨，与宿主骨相连接，但骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物组的成骨量、新骨密度、骨组织成熟程度均较骨形态发生蛋白低。②颅骨缺损植入物中骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物组和骨形态发生蛋白-β-磷酸三钙复合物组的碱性磷酸酶活性均高于β-磷酸三钙组及空白对照组(P < 0.01)，而骨形态发生蛋白-β-磷酸三钙复合物组的碱性磷酸酶活性比骨唾液酸蛋白-β-磷酸三钙复合物组高(P < 0.05)。 结论：骨唾液酸蛋白在骨缺损环境中具有成骨效应，与骨形态发生蛋白对比，骨唾液酸蛋白成骨效应较弱。     

壳聚糖/β-磷酸三钙/rhBMP-2可注射性复合体修复兔下颌骨缺损的实验研究

背景：传统固态组织工程骨不能满足口腔颌面外科不规则骨缺损的修复，液态细胞和生长因子难以在其中达到均匀分布。随着微创伤外科技术的发展，研制和应用可注射性骨替代材料己成为一个重要的努力方向。 目的：观察壳聚糖/β-磷酸三钙/重组人骨形态发生蛋白2可注射性复合物修复兔下颌骨缺损的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-05/2009-03在暨南大学医学院动物实验室完成。 材料：应用液态壳聚糖和固态β-磷酸三钙体外混合形成的复合体为支架，加入重组人骨形态发生蛋白2冻干粉，制成可注射性人工骨。 方法：本实验24只动物48侧分为4组，每组12侧颌骨缺损：实验组1，植入CS/β-TCP/rhBMP-2复合物；实验组2，植入CS/β-TCP载体；对照组1，植入自体骨（取自该动物髂骨）；对照组2，未植入任何材料。 主要观察指标：术后2，4，8周各处死8只（与正文不一致）每组2只4侧，取材后行X射线、苏木精-伊红染色、I型胶原免疫组化染色及扫描电镜观察材料降解及新骨生成情况，并应用双能X射线骨密度仪检测骨矿物密度，以探明成骨的质量和成骨速度。 结果：①大体观察显示，各实验组骨缺损区骨痂量和骨痂厚度随时间延长而逐渐增多增厚，且各时间点，CS/β-TCP/rhBMP-2组的骨痂量与自体骨组相当，而多于其它组。○2X线显示，各组缺损区透光区面积随时间延长而逐渐减小，术后2周，CS/β-TCP/rhBMP-2组和自体骨组修复区边缘和中心有散在的小片状阻射影像，术后4周，空白对照组、CS/β-TCP组修复区中心才出现散在的小片状阻射影像，术后8周，CS/β-TCP/rhBMP-2组和自体骨组缺损区无透光区，其他组缺损区透光区也较4周有所减小。○3组织学观察显示，各时间点CS/β-TCP/rhBMP-2组、自体骨组两组骨基质均分别较CS/β-TCP组和空白对照组多，且CS/β-TCP/rhBMP-2组和自体骨组骨基质无明显差别。空白对照组最差。○4SEM结果显示，术后4周，材料与周围骨床呈纤维骨性结合，材料已开始降解；术后8周，CS/β-TCP/rhBMP-2组材料与周围骨床形成骨性结合，间隙基本消失；其他实验组间隙也有所减小，材料降解明显，界面处不能看到完整材料结构。实验组，各组区别？○5术后骨密度测量显示各组骨缺损区随时间延长密度逐渐增大，CS/β-TCP/rhBMP-2组术后2，4，8周骨密度值明显优于CS/β-TCP组和空白对照组(P<0.05)，CS/β-TCP/rhBMP-2组和自体骨组相比差异无显著性意义(P>0.05)。 结论：①CS/β-TCP/rhBMP-2复合体具有良好的生物相容性、降解性、骨引导及骨诱导能力。②CS/β-TCP可作为rhBMP-2良好的注射性载体，有希望成为微创外科修复骨缺损的新型可注射载体材料。     

聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合肌肉移植修复骨缺损

背景：大段骨缺损修复多以植骨为主,如果能将带血运的组织与人工骨同时植入,理论上更有利于新生组织血运建立及人工骨的爬行替代重建。 目的：观察聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合自体带血供自体肌肉移植修复大段骨缺损的效果。 方法：手术造成30 mm绵羊大段桡骨缺损,抽签随机分为3组：实验组植入聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨及自体带血运的屈指长肌,对照组仅植入聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨,空白对照组未植入任何材料。3组均以钢板固定骨缺损区,术后24周进行X射线检测及组织学观察。 结果与结论：实验组桡骨缺损处完全成骨修复,皮质骨与髓腔轮廓清晰,骨痂为较成熟板层骨;对照组骨缺损基本完全修复,但新生骨密度及髓腔轮廓清晰度及骨痂成熟度均不如实验组;空白对照组无有效骨痂形成,缺损区被大量纤维组织填充。说明聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合自体带血供肌肉移植能够很好修复绵羊桡骨30 mm的大段骨缺损。     

β-磷酸三钙/聚-L-乳酸复合材料的骨内降解★

背景：调控聚乳酸类可吸收材料的降解速率，使材料降解与新生骨爬行替代速度更同步，加入羟基磷灰石或β-磷酸三钙等无机粒子是目前的主流选择。 目的：对比观察β-磷酸三钙/聚-L-乳酸复合材料和聚-L-乳酸在松质骨内的降解速度及诱导成骨能力。 方法：将β-磷酸三钙/聚-L-乳酸复合材料及聚-L-乳酸材料分别植入12只新西兰大白兔双侧股骨内髁及外髁后，于术后6，12，24周3个时间点取材，测定其各个时间点的生物吸收率，扫描电镜和光学显微镜观察其在松质骨内的形态学变化，周围新骨爬行替代及异物反应情况。 结果与结论：各个时间点β-磷酸三钙/聚-L-乳酸与周围骨质贴合比聚-L-乳酸材料更紧密，未见明显异物反应。6周时β-磷酸三钙/聚-L-乳酸材料生物吸收率小于聚-L-乳酸材料，12周后生物吸收率增速加快，同时材料表面出现均匀分布的微孔及裂隙；术后24周内两种材料均未见新生骨爬行替代。结果表明β-磷酸三钙/聚-L-乳酸复合材料早期降解较聚-L-乳酸材料慢，有利于移植物植入早期的坚强固定；6周后降解加快，24周内未见诱导成骨现象。     

两种磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响

背景：国内外关于骨水泥浆料固化过程中对细胞影响及解决方案的研究报道甚少。 目的：观察β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥和壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响。 设计、时间及地点：对比观察,于2006-08/12在北京大学医学部细胞与生物研究室完成。 材料：自制2种可注射磷酸钙骨水泥：β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥和壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥;小鼠成骨前体细胞株MC3T3-E1由日本RIKEN细胞库提供。 方法：将小鼠成骨前体细胞株MC3T3-E1分别接种于β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥和壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥的固化块及浆料上,以细胞接种于24孔板作空白对照,用吖啶橙染色后在荧光显微镜下观察,对细胞进行计数分析。 主要观察指标：①细胞形态。②细胞计数。 结果：①荧光显微镜下可见黏附于材料块上活细胞的核呈亮绿色荧光,细胞形态完整,未见裂解。材料也吸收部分荧光,呈深绿色的背景。而在磷酸钙骨水泥浆料上仅有少数活细胞存留,明显少于β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥固化块组和空白对照组。②β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥和壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥固化块与空白对照组相比,对MC3T3-E1细胞数无影响。两种材料浆料上的细胞数显著低于相应骨水泥固化块组和空白对照组(P < 0.01)。 结论：β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥和壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥材料的浆料固化过程对MC3T3-E1细胞有不利影响,致使细胞数降低。     

富血小板血浆诱导犬骨髓间充质干细胞的体外成骨*

背景：富血小板血浆中含有大量骨再生所需的生长因子,且各生长因子的比例是机体自身形成的,具有良好的协同作用。 目的：探讨富血小板血浆体外诱导犬骨髓间充质干细胞成骨的效果。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-06/2008-02在中南大学湘雅医院中心实验室完成。 材料：健康12月龄雄性比格犬,由中南大学湘雅医学院实验动物部提供。 方法：收集第3代犬骨髓间充质干细胞,分为4组：对照组加入标准培养基;成骨诱导培养基组向培养板孔内加入含胎牛血清、地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的高糖DMEM培养基;富血小板血浆组根据预实验结果,向培养板内加入含体积分数为6.25%富血小板血浆的低糖DMEM培养基;联合组向培养板内加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、体积分数为6.25%富血小板血浆的高糖DMEM培养基。 主要观察指标：细胞内碱性磷酸酶活性,免疫细胞化学染色检测Ⅰ型胶原的表达,改进Von Kossa染色标记钙结节形成情况,RT-PCR检测诱导后骨钙素mRNA的表达。 结果：各组碱性磷酸酶活性均随诱导时间的延长而逐渐增高,联合组升高幅度最为明显(P < 0.05)。诱导7,14 d后,成骨诱导培养基组、联合组Ⅰ型胶原均呈阳性表达,富血小板血浆组、对照组Ⅰ型胶原始终呈阴性表达。诱导14 d后,成骨诱导培养基组、联合组可见卵圆形钙结节。诱导7,14 d后,对照组与富血小板血浆组之间骨钙素mRNA表达水平无明显差异(P > 0.05),此2组骨钙素mRNA表达水平均明显低于成骨诱导培养基组、联合组(P < 0.05);成骨诱导培养基组骨钙素mRNA表达水平明显低于联合组(P < 0.05)。 结论：经成骨条件培养基诱导培养的骨髓基质干细胞,富血小板血浆能在体外显著诱导其成骨指标的表达。