瘦素对缺氧复氧L02肝细胞凋亡及Fas/FasL表达的影响

目的： 观察瘦素(leptin)对缺氧复氧人正常肝细胞（L02）凋亡的影响。方法: 将L02细胞分别分为正常对照组、单纯缺氧12 h复氧组(IR组)和缺氧12 h复氧加不同浓度的瘦素（分别为100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L、800 μg/L 和1 600 μg/L）干预组, 以流式细胞仪分析、DNA缺口末端标记 (TUNEL) 试验、荧光定量 PCR 等方法观察leptin 对L02肝细胞凋亡、Fas/FasL mRNA表达的影响。结果: （1）与正常对照组相比,IR组细胞凋亡率和TUNEL细胞阳性率增加（P<0.01）,加用不同浓度瘦素干预组的细胞凋亡率和TUNEL细胞阳性率与IR组相比明显下降（P<0.05）;（2）与正常对照组相比,IR组 L02 细胞中Fas/FasL mRNA表达明显上调(P<0.01);加用不同浓度瘦素干预组与IR组相比,Fas/FasL mRNA表达下降,以400 μg/L瘦素作用明显,结果有显著差异（P<0.05）。结论: 瘦素能减轻缺氧复氧培养L02肝细胞的凋亡,其机制可能与其下调细胞中Fas/FasL mRNA的表达有关。     

Fas/FasL介导的细胞凋亡在Ⅲ期压疮创面形成中的作用

目的:观察压疮创面边缘组织、中心组织及周围正常组织中的细胞凋亡现象,探索细胞凋亡与压疮形成的关系,及在深度压疮创面愈合中的作用与意义。方法:临床收集Ⅲ期压疮组织样本8例,含正常组织、溃疡边缘及中心组织。通过常规石蜡切片、原位末端标记(TUNEL)技术及原位杂交的检测方法确定细胞凋亡数、Fas/FasL mRNA在溃疡不同部位的定位及表达量的变化规律。结果:正常组织中,Fas/FasL mRNA仅在表皮细胞有极少量表达,在其它细胞均呈阴性表达,TUNEL凋亡阳性细胞极少;从溃疡边缘组织到中心组织,Fas mRNA阳性表达逐渐增加并出现在部分成纤维细胞内,中心组织与正常组织比较,明显差异,P0.01,与边缘组织相比(P0.05);并且凋亡阳性细胞数逐渐增多,差异显著,P0.01。FasL mRNA的表达呈同样的增长趋势,正常组织、边缘组织及中心组织3组组间差异显著,P0.01。结论:从正常组织到溃疡边缘及中心组织,随着Fas/FasL mRNA的表达量的增加,凋亡细胞明显增多,说明细胞凋亡在压迫性溃疡形成过程中可能起着重要作用。     

HDV/HBV感染树鼩肝组织中的肝细胞凋亡

目的探讨 HDV/ HBV感染树鼠句肝组织中 Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE表达与 HDV感染之间的关系 ,以及Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用。方法采用免疫组化技术对 HDV/ HBV感染树鼠句肝组织中 Fas/Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE的表达进行检测 ;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测。结果 HDAg表达与 Fas/ Fas L、Bcl2 /Bax和 ICE表达之间关系密切 ( P<0 .0 5 ) ,HDAg表达越强 ,Fas、Fas L、Bax和 ICE表达也越强 ,而 Bcl2 表达则越弱。 Fas/Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切 ( P<0 .0 5 ) ,Fas、Fas L、Bax和 ICE表达越强 ,凋亡细胞越多 ;相反 ,Bcl2 表达越强 ,凋亡细胞越少。结论肝细胞内 HDAg表达可诱导 Fas、Fas L、Bax和 ICE表达 ,但对 Bcl2 表达无明显诱导作用 ;Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE在肝细胞凋亡中起重要作用。     

细胞凋亡和Fas/FasL表达在移植肾急性排斥时意义

目的:探讨移植肾急性排斥(AR)时细胞凋亡与Fas和Fas配体(FasL)表达的作用及其临床意义.方法:分别用原位末端标记技术 (TUNEL法)和免疫组织化学方法检测23例移植肾AR标本中细胞凋亡和Fas/FasL的表达.结果:细胞凋亡和Fas/FasL表达主要在AR移植肾小管上皮发生,且凋亡指数和Fas/FasL表达与肾组织病理损伤程度平行,与正常肾对照组和移植肾功能稳定组比较差异有统计学意义( P <0.01).结论:肾小管上皮细胞凋亡在AR所致的移植肾损伤中起重要作用,Fas/FasL系统可能参与移植肾AR,是造成肾小管上皮细胞凋亡的重要因素.TUNEL法检测细胞凋亡可作为判断移植肾病理变化和预后的重要指标.     

STAT3和β-catenin在肝癌组织高表达并增加肝癌细胞凋亡

目的研究信号转导子与转录激活子3(STAT3)、β联蛋白(β-catenin)在肝癌中的表达,并探讨其和肝细胞凋亡及增殖之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测肝癌组织及相应癌旁组织标本中的STAT3、β-catenin与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡情况。结果癌组织中STAT3表达阳性率为70.8%、β-catenin表达阳性率为51.4%,均明显高于癌旁肝组织的阳性率。患者肝癌组织中STAT3、β-catenin表达均与临床分期、肿瘤分化程度与肝外转移相关,和患者性别、肿瘤直径无关。肝癌组织中凋亡指数(AI)、增殖指数(PI)明显高于癌旁肝组织。STAT3蛋白和β-catenin蛋白阳性的肝癌组织AI/PI明显高于STAT3蛋白和β-catenin蛋白阴性组AI/PI。结论 STAT3、β-catenin蛋白高表达的肝癌凋亡增加。     

睾丸性不育症中Livin、Bim蛋白表达与凋亡的关系

目的探讨睾丸性不育症中Livin、Bim蛋白表达及其与凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法检测Livin和Bim蛋白在睾丸性不育症组织中的表达;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,TUNEL)技术检测凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果睾丸性不育症生精细胞中Livin蛋白表达明显低于正常睾丸组织(P<0.05);Bim蛋白表达和AI明显高于正常睾丸组织(P<0.05)。Livin与Bim和AI呈负相关(r=-0.427,r=-0.399,P均<0.05),Bim与AI呈正相关(r=0.414,P<0.05)。结论人睾丸组织表达Livin蛋白,Livin和Bim蛋白参与了精子形成过程。AI与生精障碍程度相关。     

结直肠腺瘤及癌变组织CHOP蛋白表达与细胞凋亡的相关性研究

目的: 检测和探讨结直肠腺瘤及癌变组织C/EBP同源蛋白(CHOP)表达和细胞凋亡及其与临床病理的关系,并分析CHOP与细胞凋亡指数(AI)的相关性。方法: 采用免疫组织化学SABC法和原位末端标记法分别检测59 例正常肠黏膜、67 例结直肠腺瘤和56 例结直肠腺癌组织CHOP表达及细胞凋亡。结果: CHOP在伴高级别上皮内瘤变和恶变的腺瘤和腺癌组织阳性表达率均显著高于正常肠黏膜和早期腺瘤(P<0.05),且与腺瘤大小、病理类型和肠癌大小、浸润深度相关(P<0.05);伴高级别上皮内瘤变和恶变的腺瘤和腺癌组织AI显著高于正常肠黏膜和早期腺瘤(P<0.05),AI与腺瘤大小、病理类型和肠癌大小有关(P<0.05);伴高级别上皮内瘤变和恶变的腺瘤和腺癌组织CHOP阳性表达者AI显著高于阴性表达者(P<0.05),在具有某相同临床病理特征的腺瘤和肠癌组织中CHOP阳性表达者AI显著高于CHOP阴性表达者(P<0.05)。结论: CHOP和细胞凋亡异常共同参与结直肠腺瘤癌变,CHOP表达与细胞凋亡增加有关,CHOP可能通过促细胞凋亡介导腺瘤癌变。     

乙型肝炎肝组织Fas，FasL和HBV抗原的表达

目的 评价Fas和FasL介导细胞凋亡在乙型肝炎肝损伤中的作用及其与HBV抗原的关系。方法 应用免疫组化方法检测了62例乙型肝炎患者肝组织内的Fas、FasL和HBsAg、HBcAg,并以6例下正常肝组织为对照。结果 Fas/FasL在正常肝组织内无表达;Fas主要在乙型肝炎患者肝细胞质内表达,58例阳性（93．5％）;FasL在肝内浸润的单个核细胞和肝细胞质内均见到,37例阳性（59．7％）。结论 Fas/FasL的表达程度与肝组织活动性炎症程度密切相关;Fas/FasL介导的细胞凋亡可能在乙型肝炎时肝损伤中起重要作用;Fas/FasL表达程度与肝内HBV抗原HBsAg、HBcAg无明显相关性。     

慢性乙型肝炎患者肝细胞凋亡的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者肝细胞凋亡与肝组织诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、肝脏病理及血清转氮酶水平之间的相关关系.方法 取37例CHB患者和10例正常对照,采用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝组织中的细胞凋亡情况,免疫组化法检测肝组织iNOS的表达,并常规测定患者肝组织炎症分级和纤维化分期、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV DNA水平.结果 所有CHB患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性.正常对照肝组织中未见到TUNEL阳性肝细胞.在CHB肝组织中,凋亡指数(A1)与炎症分级(r=0.404,P=0.015)及肝组织iNOS水平(r=0.465,P=0.004)明显相关并有统计学意义,而与血清ALT水平、HBV DNA以及组织学纤维化分期无明显关系.结论 慢性乙型肝炎患者体内氧化应激水平可能是肝细胞凋亡的诱导因素之一,细胞凋亡参与了CHB的肝细胞损伤过程,但并不影响患者的生物化学指标.     

自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及相关基因的表达

目的 通过比较正常妊娠模型小鼠及自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达,从细胞及分子水平探讨自然流产的发病机制.方法建立正常妊娠模型CBAXBALB/c和自然流产模型CBAXDBA/2.用免疫组化SABC法测定两组模型孕13 d蜕膜细胞Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达,并通过MIAS-2000医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析,其结果用平均灰度值表示;同时应用DNA缺口原位末端标记技术(TUNEL)测定两组模型孕13天蜕膜细胞凋亡情况.结果与正常妊娠模型相比,自然流产模型蜕膜细胞Bcl-2蛋白的表达降低(P＜0.01);Bax蛋白的表达明显升高(P＜0.01);FasL的表达明显升高(P＜0.01);Fas的表达两组比较无明显差异(P＞0.05).蜕膜细胞凋亡指数(AI),自然流产模型明显高于正常妊娠模型(P＜0.01).结论 早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常是自然流产的机制之一,Bcl-2/Bax,Fas/FasL途径可能是诱导早孕期蜕膜细胞凋亡的重要因素.     

三七总皂甙降低兔肺缺血再灌注损伤和抑制细胞凋亡

 目的: 探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及三七总皂甙的作用及机制。方法: 健康日本大耳白兔84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1、3、5h组和相应三七总皂甙干预组。复制肺缺血再灌注损伤模型。用原位缺口末端标记(TUNEL)法、聚丙烯酰胺凝胶电泳观测肺组织细胞凋亡,原位杂交技术检测肺组织细胞Fas/FasL系统和Caspase-3基因表达。结果: 肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数(肺缺血再灌注5h组:22.08±1.93;对照组:2.04±0.67)、Fas/FasL和Caspase-3基因表达(肺缺血再灌注5h组:0.241±0.029;对照组:0.121±0.015)均显著高于对照组(P<0.01),并出现电泳梯形条带结构;三七总皂甙干预组Fas/FasL mRNA及其Caspase-3的表达(三七总皂甙干预5h组:0.199±0.020;肺缺血再灌注5h组:0.241±0.029)显著低于缺血再灌注组(P<0.01),肺组织细胞凋亡指数(三七总皂甙干预5h组:12.58±1.82;肺缺血再灌注5h组:22.08±1.93)也显著低于缺血再灌注组(P<0.01),梯形条带结构基本消失。肺组织细胞凋亡指数分别与Caspase-3 mRNA及Fas/FasL mRNA之间均呈显著正相关(P<0.01)。结论:三七总皂甙可能通过抑制Fas/FasL系统的激活,阻遏肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

肾综合征出血热患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达及与血清sFas/sFasL的相关性研究

目的　探讨Fas FasL系统介导的细胞凋亡在肾综合征出血热 (HFRS)致病机理中的作用。方法　采用SABC免疫组化法检测HFRS病人外周血淋巴细胞Fas FasL的表达 ;采用ELISA法测定HFRS病人血清sFas sFasL的浓度。结果　HFRS病人发热期、低血压休克期、少尿期及多尿期外周血淋巴细胞Fas的表达明显增强 ,与正常对照组比较差异有极显著性 (P <0 .0 0 1) ;发热期、低血压休克期及少尿期淋巴细胞FasL的表达明显增强 ,与正常对照组比较差异有极显著性 (P <0 .0 0 1) ;HFRS病人各期血清sFas的浓度增高 ,与正常对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,其中少尿期sFas的浓度最高 ,与其它各期比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;发热期与低血压休克期血清sFasL的浓度增高 ,与其它各期及正常对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;淋巴细胞Fas及FasL的表达经直线相关分析(r=0 .885 5 ,P <0 .0 0 1) ,呈高度正相关 ;淋巴细胞FasL的表达与血清sFasL浓度经直线相关分析(r=0 .480 3,P <0 .0 1) ,呈高度正相关。结论　HFRS的致病过程中存在Fas FasL介导的细胞凋亡 ,sFas浓度的高低与机体损害的程度有关 ;淋巴细胞FasL的高表达及血清sFasL的浓度增高 ,由此而引起的细胞凋亡是机体清除病毒的主要机制之一     

三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Fas/FasL的影响

目的：探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及三七总皂甙的作用及机制。 方法: 健康日本大耳白兔84只，随机分为对照组、肺缺血再灌注1、3、5 h组和三七总皂甙干预1、3和5 h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法观测肺组织细胞凋亡指数，免疫组化和原位杂交技术检测肺组织细胞Fas/FasL系统蛋白和基因表达的变化。 结果: 肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数和Fas/FasL蛋白及基因表达均显著高于对照组（均P<0.01）。三七总皂甙干预组Fas/FasL mRNA及其蛋白质的表达显著低于缺血再灌注组（P<0.01），肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组（P<0.01）。肺组织细胞凋亡指数分别与Fas/FasL蛋白和Fas/FasL mRNA之间均呈显著正相关（r分别=0.540,0.658,0.668,0.686;均P<0.01）。 结论: Fas/FasL系统活化启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。三七总皂甙可能通过抑制Fas/FasL系统的激活，阻遏肺组织细胞凋亡，从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

黄芩苷对惊厥持续状态幼年大鼠海马GFAP和NF-κB表达的影响

目的:观察幼年大鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后脑组织海马中胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、核因子κB(NF-κB)的表达及神经细胞凋亡的变化,并探讨黄芩苷(baicalin,BC)对三者的影响。方法:将195只19日龄SD雄性大鼠随机分成生理盐水对照组(NS组)、惊厥持续状态组(SC组)和黄芩苷预处理组(BC组)3组;各组再按处死时点不同随机分为4 h、12 h、24 h、48 h和72 h亚组。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型;应用免疫组化法检测大鼠海马中GFAP和NF-κB蛋白的表达情况,RT-PCR法检测GFAP的mRNA表达,TUNEL法检测神经细胞凋亡数的变化。结果:(1)免疫组织化学法检测显示SC组幼年大鼠海马中GFAP表达增强,与NS组比较差异有统计学意义(P0.05);与SC组比较,BC组的GFAP表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);SC组幼年大鼠海马中NF-κB表达增强,与NS组比较差异显著(P0.05);与SC组比较,BC组的NF-κB表达明显降低(P0.05)。(2)RT-PCR检测结果显示GFAP的mRNA表达趋势与蛋白基本相似。(3)SC组在惊厥后12 h海马CA1区TUNEL阳性细胞数已显著高于NS组(P0.01),48 h达峰值,而BC组TUNEL阳性细胞数在12 h~48 h均较SC组显著下降(P0.05或P0.01),但仍高于NS组(P0.05)。结论:SC后大鼠海马GFAP和NF-κB的表达增强。黄芩苷可下调匹鲁卡品致痫大鼠海马GFAP和NF-κB的表达,并使神经细胞凋亡数减少,提示黄芩苷在SC引起的脑损伤时对大鼠有保护作用。     

肺缺血再灌注损伤中Fas/FasL系统的表达及川芎嗪的影响

目的： 探讨肺缺血再灌注损伤Fas/FasL系统的表达及其与肺泡上皮细胞凋亡的关系及川芎嗪的影响。方法: 采用在体兔单侧肺左肺门持续性阻断1 h，再灌注1、3、5 h缺血-再灌注损伤的动物模型。TMP干预组于缺血前1h静脉滴注川芎嗪60 mg/kg。用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的发生情况；用原位杂交的方法检测兔肺组织Fas/FasL mRNA的表达。结果: IR组与 TMP组在肺缺血再灌注后1、3、5 h发生明显的肺泡上皮细胞凋亡。TMP组各时相细胞凋亡指数明显低于IR组（P<0.01）；肺组织Fas/FasL mRNA的表达与肺泡上皮细胞凋亡呈显著正相关（r₁=0.900,r₂=0.869,均P<0.01）。 结论: Fas/FasL系统在肺缺血再灌注诱导的肺泡细胞凋亡中起着重要作用，川芎嗪因抑制Fas/FasL，而减轻由Fas/FasL系统激活导致的细胞凋亡，从而对缺血再灌注肺具有保护作用。     

牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤时细胞凋亡的影响

目的:从细胞凋亡的角度探讨肢体缺血再灌注(LIR)后急性肺损伤(ALI)的发病机制及牛磺酸的影响。方法:复制大鼠肢体缺血再灌注(LIR)损伤动物模型,采用TUNEL法、电泳法、半定量逆转录聚合酶链反应(SqRT-PCR)及免疫组织化学等技术观察LIR后肺损伤发生过程中,肺泡上皮及血管内皮细胞凋亡变化以及Fas/FasL系统蛋白质和mRNA表达的改变。结果:大鼠LIR后,肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡明显增加;肺组织Fas/FasLmRNA和蛋白质表达明显上调,DNA断链率、组织钙含量和活性氧(ROS)升高,且与肺泡上皮及血管内皮细胞凋亡的增加相一致。结论:肺泡上皮及血管内皮细胞凋亡以及Fas/FasL系统表达明显上调可能参与LIR后ALI的发生;牛磺酸可减少肺组织细胞凋亡,但并非通过影响Fas/FasL基因表达而实现其保护效应。     

Elf-1在非小细胞肺癌中的表达与肿瘤细胞凋亡及患者预后的关系

目的探讨转录因子Elf-1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与凋亡抑制蛋白(inhibitorof apoptosis protein,IAP)家族中最强的凋亡抑制因子survivin关系。方法采用免疫组化PV-9000法检测60例NSCLC组织芯片及9例正常肺组织中Elf-1的表达水平;脱氧核苷酸移换酶(terminal deoxynucleotidy transferase,TdT)介导的dUTP切口末端标记方法(TUNEL)检测癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果在正常肺组织中有1例Elf-1弱阳性,余为阴性,在NSCLC组织中的阳性率为70.0%,其表达水平与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移、临床分期和术后生存期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明其过表达与患者的生存率有关,阳性患者的生存率明显低于阴性患者(P<0.01)。Spearman相关分析显示,Elf-1在NSCLC组织中的表达与AI呈负相关(r=-0.708,P<0.01)。结论 Elf-1在NSCLC组织中的过表达影响着肿瘤细胞的凋亡,与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移和预后有关,检测其表达水平可作为判定NSCLC恶性生物学行为的参考指标。