SUMO介导截短型人HGF制备及抗肝纤维化作用

目的研究截短型人肝细胞生长因子突变体(tvNK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞LX-2纤维化的影响。方法把经PCR和双酶切的小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)和tvNK1的融合基因SUMO-tvNK1插入原核表达载体pET28a,诱导表达和Ni2+亲和层析纯化SUMO-tvNK1;进一步经SUMO蛋白酶Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,MTT法观察其对TGF-β1诱导LX-2纤维化细胞增殖的影响,qPCR及蛋白印迹(WB)检测其对I型胶原蛋白(col1α1)和α–平滑肌球蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。结果宿主菌Rosetta/pET28a-SUMO-tvNK1在37℃经1 mmol/L IPTG诱导5 h获得SUMO-tvNK1的可溶性表达,将超声破碎后上清液经Ni2+亲和层析成功获得SUMO-tvNK1,进一步经Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,SDS-PAGE鉴定其分子量约为22.0 kDa,MTT显示20和40 ng/mL的tvNK1能明显抑制TGF-β1活化的人肝星状细胞LX-2增殖,qPCR及WB显示20和40 ng/mL的tvNK1能显著抑制活化的LX-2细胞中Col1α1和α-SMA在m RNA和蛋白水平表达。结论 SUMO蛋白可用于制备tvNK1,其能抑制TGF-β1活化的LX-2细胞增殖并具有抗纤维化作用,为进一步体内外功能研究打下基础。     

HBx蛋白促进纤维化相关因子在人肝星状细胞中的表达

目的研究转染HBx基因的肝细胞在体外促进纤维化相关因子在肝星状细胞中的表达,进而探讨HBx促肝纤维化的机制。方法首先以表达HBx蛋白的肝细胞（QSG7701-HBx）与Lx-2细胞（人肝星状细胞株）共培养,并以转染pcDNA3空载体的肝细胞（QSG7701-pcDNA3）和母细胞QSG7701为对照;共培养后应用RT-PCR检测LX-2细胞α-SMA、TGF．[31、CTGF和Col Ⅰ（I型胶原）的mRNA表达;应用Western blot检测共培养后LX-2细胞α-SMA、TGF．131和CTGF蛋白表达;同时应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测共培养后细胞上清液中ColⅠ浓度。结果（1）RT-PCR结果显示,与QSG7701-HBx细胞共培养的LX-2细胞的α-SMA、TGF-β1、CTGF和Col Ⅰ的mRNA表达明显高于两对照组QSG7701-pcDNA3和QSG7701（P〈0．05）。（2）Westem blot分析显示,与QSG7701-HBx细胞共培养的LX-2细胞的α-SMA、TGF—p1和CTGF蛋白表达也明显高于两对照组（P〈0．05）。（3）ELISA检测Lx·2细胞分别与QSG7701、QSG7701-pcDNA3和QSG7701-HBx细胞共培养的上清液colⅠ其浓度分别为（191．2±20．8）ns／ml、（200．2±21．6）ng／ml和（500．5±43．4）ng／ml,QSG7701-HBx明显高于两对照组（P〈0．05）,这表明HBx蛋白能促进LX．2细胞分泌colⅠ有助于肝纤维化的形成。结论与QSG7701-HBx细胞共培养后,肝星状细胞中的纤维化相关蛋白表达明显增强,体外实验证实HBx具有诱导肝纤维化的作用。     

PI3K/Akt信号通路在虾青素调节LX-2细胞活化中作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在虾青素调节人肝星状细胞(LX-2细胞)活化中的作用。方法实验设对照组、低、中、高剂量虾青素组(5、10、20μmol/L)、抑制剂组(25μmol/L LY294002)、抑制剂+虾青素组(25μmol/L LY294002+20μmol/L虾青素),作用48 h后检测LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(col1a1)mRNA表达水平、各组细胞Akt及其磷酸化水平。结果与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中α-SMA和col1a1 mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖关系(P0.05);与对照组比较,抑制剂组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.42±0.05)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.23±0.05)、(0.35±0.06)]均明显降低(P0.05);与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.60±0.07)、α-SM A和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.48±0.07)、(0.61±0.04)]均明显降低(P0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.18±0.04)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.11±0.05)、(0.20±0.03)]均明显降低(P0.05)。结论虾青素可通过PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞活化,发挥抗非酒精性脂肪肝纤维化作用。     

肝星状细胞中Notch1的表达及其意义

目的研究Notch通路中Notch1在大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的表达及其意义。方法细胞免疫组化检测细胞内Notch1的表达并采用MTT、real-time PCR及Western blot等多种技术检测HSC-T6细胞在Notch1沉默后增殖、凋亡和细胞外基质的变化;并利用细胞免疫荧光染色检测α-SMA的表达。结果 Notch1蛋白表达于HSC-T6细胞的胞质并随着HSC活化而增加。与正常组相比,TGF-β1组的细胞表现出Notch通路的激活,即Notch1及其下游分子Hes1的mRNA和蛋白表达量均表达上调;随着Notch1的沉默,MTT结果提示Notch1沉默组的细胞增殖率明显下降,但Western blot结果提示凋亡相关蛋白Caspase3表达量却未改变;同时细胞免疫荧光结果显示α-SMA表达下调且伴有Ⅰ型胶原及Notch下游分子Hes1表达下调,而E-cadherin表达量则明显上调。结论沉默Notch1可抑制TGF-β诱导的肝星状细胞活化,提示Notch1可促进肝纤维化进程。     

六溴环十二烷对视黄醛类X受体α、孕烷X受体、过氧化物酶体增殖物活化受体γ的影响及其相互作用

目的探讨六溴环十二烷(HBCDs)对小鼠神经母细胞瘤细胞N2a增殖的影响以及对3个重要细胞核受体:视黄醛类X受体α(RXRα)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)、孕烷X受体(PXR)表达及其相互作用的影响。方法用不同浓度的3种非对映异构体(±)α-HBCD,(±)β-HBCD,(±)γ-HBCD处理N2a细胞,Cell counting kit-8(CCK-8)法检测HBCD对N2a的细胞毒性作用;流式细胞术检测HBCD对N2a细胞周期的影响;实时荧光定量(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(Western blot,WB)法分别用于检测3个细胞核受体RXRα、PPARγ、PXR和下游靶基因细胞色素P450亚酶CYP3A11的mRNA及蛋白表达水平的变化;免疫共沉淀技术分析RXRα、PXR、PPARγ受体间的相互作用。结果β-HBCD对N2a的细胞毒性明显大于α-HBCD,γ-HBCD没有明显的细胞毒性。α-HBCD、β-HBCD对N2a细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量效应关系(P0.05),其半数抑制浓度(IC_(50))分别为60.07和10.52μmol/L,γ-HBCD的细胞毒性较小,镜下可见黑色絮状物,CCK-8法未能测定出其IC_(50);α-、β-HBCD会使细胞周期阻滞在G2/M期;染毒24 h后,RXRα、PPARγ、PXR及CYP3A11的mRNA及蛋白表达水平均呈现上升趋势(P0.05);在N2a细胞内,α-HBCD染毒前后,RXRα与PPARγ、PXR之间始终存在交互作用关系。结论α-HBCD、β-HBCD对N2a细胞具有增殖抑制作用,细胞周期主要阻滞在G2/M期。α-HBCD、β-HBCD均可诱导3种细胞核受体RXRα、PPARγ和PXR的表达升高,PXR受体下游表达基因CYP3A11的表达也明显升高(P0.05)。RXRα与PPARγ、PXR三个细胞核受体之间始终存在交互作用,但是受体间相互作用的分子机制有待深入研究。     

球松素对C3H10T1/2细胞成脂分化的抑制作用研究

目的探讨山核桃叶提取物球松素对小鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化的影响。方法 MTS法检测不同浓度球松素处理的细胞成活率以界定适宜的浓度范围;油红O染色法结合异丙醇萃取法定性和定量分析球松素对细胞成脂分化的影响;GPO-PAP酶法检测球松素处理后细胞中甘油三酯含量的变化;荧光定量PCR和Western blot分别检测成脂分化中C/EBPα、PPARγ、FABP4 mRNA和相关蛋白的表达水平。结果 30μmol/L、50μmol/L球松素对细胞成脂分化有明显的抑制作用,且能显著减少甘油三酯堆积;10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L球松素能明显抑制PPARγ、C/EBPαmRNA表达;5μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L球松素能明显降低FABP4 mRNA表达;50μmol/L球松素能明显降低PPARγ、C/EBPα和FABP4蛋白表达。结论山核桃叶提取物球松素对C3H10T1/2细胞成脂分化具有抑制作用,可能与调控PPAR信号通路和相关基因表达有关。     

转化生长因子β1小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 观察转化生长因子β1小干扰RNA（TGFβ1 siRNA）对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 利用脂质体将TGFβ1 siRNA表达质粒转入肝星状细胞中,培养72 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用Western blotting和RT-PCR法分别检测细胞TGFβ1和a-SMA蛋白表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中IV型胶原和透明质酸含量.结果 与无关对照siRNA组相比,TGFβ1和a-SMA蛋白表达分别下调（79±5）%和（55±4）%（均P〈0.01）;细胞增殖活性降低（25±4）%（P〈0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调（63±6）%和（57±4）%（均P〈0.01）;培养上清中IV型前胶原和透明质酸含量分别降低（53±8）%和（46±8）%（均P〈0.01）.结论 TGFβ1 siRNA能显著下调TGFβ1的表达,抑制肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌.     

罗格列酮与全反式维甲酸对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响

目的 研究PPARγ激动剂罗格列酮（RSG）与全反式维甲酸（ATRA）对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响及其机制的研究.方法 体外培养SGC7901细胞,实验分为空白对照组、10μmol/L ATRA组、12.5 μmol/L RSG、25 μmol/L RSG组,10 μmol/L ATRA和25 μmol/L RSG联合组.MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期,HE染色检测细胞形态,免疫细胞化学检测PPARγ蛋白,RT-PCR检测PPARγmRNA.结果 10 μmol/L ATRA、12.5 mmol/L RSG、25 mmol/L RSG及两药联合时皆可抑制SGC7901细胞的增殖,且存在浓度及时间依赖,两药联合作用72 h时,生长抑制率为（29.73±0.69）%.ATRA、RSG皆可使细胞周期G0/G1期延长,S期下降,两药联合作用时,S%为（12.87±0.35）%,细胞形态向正常方向转化,细胞的PPARγ蛋白核内表达及PPARγmRNA表达上调,两药联合后作用进一步加强,PPARγ/GAPDH的浓度比值高达0.646.结论 ATRA、RSG均可抑制SGC7901细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞分化和上调PPARγ蛋白及PPARγmRNA的核内表达,ATRA和RSG联合较单药作用效果更强.     

口山酮抑制肝星状细胞活化作用及其机制研究

目的研究去甲基雏菊叶龙胆酮（DMB）对肝星状细胞（HSC）活化的影响及其机制。方法培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,分别加入1、3或10μM DMB孵育12-48 h。细胞组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;酶联免疫吸附试验测定I型胶原的合成;逆转录PCR检测转化生长因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）mRNA水平。结果体外培养的HSC-T6表现为激活状态,表达α-SMA和合成I型胶原。处理DMB能显著降低体外培养的HSC-T6表达α-SMA细胞数目和I型胶原的合成,且呈浓度依赖性。而且,DMB能浓度依赖性降低HSC TGF-β1和CTGF mRNA水平。结论DMB能抑制HSC的活化,其作用与抑制TGF-β1-CTGF促纤维化通路有关。     

尼克酰胺对小鼠前脂肪细胞增殖及分化影响

目的探讨尼克酰胺(NAM)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响及其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,添加NAM,观察其对细胞增殖及分化的影响,以添加白藜芦醇(Res)作阳性对照,以不添加任何药物为空白对照;用水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖,用染色比色法检测细胞的分化,采用蛋白免疫印记(westernblot)技术检测沉默信息调节因子1(Sirt1)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)位点的蛋白质表达。结果干预48 h后,NAM组细胞相对数量是对照组的1.152倍,NAM+Res组是Res组的1.272倍;NAM组细胞相对脂肪是对照组的1.519倍,NAM+Res组是Res的1.321倍;添加NAM后Sirt1、PPARγ、42和24KDa的C/EBPα蛋白表达水平分别是对照组的0.381、2.107、1.005和1.233倍,NAM+Res组Sirt1、PPARγ、42KDa和24KDa的C/EBPα表达水平分别是Res组的0.421、2.226、2.031和1.544倍。结论 NAM可增加3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,机制可能...     

白藜芦醇对高脂饮食大鼠心肌PPARγ/AP-1信号影响

目的观察白藜芦醇对高脂饮食大鼠心肌过氧化物酶增殖物激活受体(PPARγ)及其下游信号分子激活蛋白-1(AP-1)表达影响。方法雄性SD大鼠32只,随机分为对照、高脂、吡格列酮、白藜芦醇4组;分别喂饲普通、高脂饲料,灌胃给予吡格列酮、白藜芦醇10 mg/(kg.d),连续6周;分别检测心肌PPARγmRNA、PPARγ、AP-1蛋白表达变化。结果高脂组PPARγmRNA表达(0.36±0.04)较对照组(0.48±0.04)明显降低(P<0.05);白藜芦醇组(0.54±0.11)较高脂组表达明显升高(P<0.05);高脂组PPARγ蛋白表达(0.40±0.02)较对照组(0.52±0.02)明显降低(P<0.05),而AP-1表达明显升高(P<0.05);白藜芦醇组PPARγ表达较高脂组升高,AP-1表达较高脂组降低(P<0.05)。结论白藜芦醇对高脂状态下大鼠心肌PPARγ/AP-1信号转导通路有激活作用。     

油酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及PPARγ介导机制

目的探讨油酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及PPARγ介导的机制。方法不同浓度油酸处理体外培养成熟的3T3-L1脂肪细胞24h,并选取100μmol/L油酸加与不加过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂GW 9662处理3T3-L1脂肪细胞,运用实时荧光定量PCR方法检测处理前后脂联素及PPARγmRNA的表达水平,并用western-blotting法测定脂联素蛋白表达水平。结果与对照组相比,油酸在浓度为25、50、100μmol/L时上调脂联素及PPARγmRNA的表达,随着浓度的增加脂联素和PPARγmRNA的表达下降;油酸中加入GW 9662处理后脂联素mRNA及蛋白的表达水平分别降低77%、78.01%(P<0.05)。结论油酸在一定浓度范围内能上调3T3-L1脂肪细胞脂联素及PPARγ基因表达,且呈剂量依赖关系,加入PPARγ拮抗剂GW9662后能够阻断这种上调作用,提示油酸可通过激活PPARγ来调节脂肪细胞脂联素的表达。     

稳定表达HBx的人肝星形细胞系的建立及其生物学特性初探

目的建立稳定表达HBVX蛋白（HBx）的LX-2细胞系,并初步研究HBx对于肝星形细胞（HSC）的增殖及其I型胶原蛋白表达的影响。方法构建包含HBx基因的重组慢病毒载体LV5-X,并转染LX-2细胞,同时用对照质粒转染LX-2细胞,经嘌呤霉素筛选后获得HBx稳定表达的LX-2-X和对照LX-2-C细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,Western印迹检测细胞株中HBx的表达。在LX-2细胞系的生物学特性探索方面,应用CCK_8法检测细胞的增殖;Real—timePCR检测细胞中I型胶原蛋白mRNA的表达;ELISA法愉测细胞培养上清中I型胶原蛋白的表达。结果成功构建重组慢病载体LV5-X,感染LX-2细胞后建立细胞系LX-2-X和LX-2-C,嘌呤霉素筛选3d后,荧光显微镜显示近100％细胞发出绿色荧光,Western印迹证实LX-2-X细胞稳定表达HBx。培养72h和96h后LX-2-C细胞增殖明显高于LX-2和LX-2-C细胞组（P〈0．05）;PCR证实LX-2X细胞I型胶原蛋白mRNA合成高于LX-2和LX-2-C细胞组（P〈0．05）;ELISA结果显示LX一2一X细胞I型胶原蛋白表达高于LX-2和LX-2-C细胞组（P〈0．05）。结论成功构建了稳定表达HBx的LX-2细胞系;HBx能够促进HSC的增殖,并增加I型胶原蛋白的表达。     

十溴联苯醚对C57BL/6小鼠组织中脂联素和PPARγ的影响

目的研究十溴联苯醚(BDE-209)对小鼠组织中脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法 24只成年雄性C57/BL小鼠随机分为BDE-209染毒处理高(800 mg/kgbw)、中(600 mg/kgbw)、低(300 mg/kgbw)剂量组和未染毒的对照组,6周后采用反转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法测定小鼠肝、肺和脂肪中脂联素和PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果 4组小鼠肺质量、脂肪质量和体重增重差异均有统计学意义(P0.05),其中高剂量组小鼠肺质量、脂肪质量和体重增重均大于对照组和低剂量组(P0.05)。4组小鼠肝、肺和脂肪脂联素mRNA和蛋白表达量差异均有统计学意义(P0.05);其中高剂量组小鼠肝、肺和脂肪脂联素m RNA表达量均高于对照组,但低于低剂量组(P0.05)。4组小鼠肝、肺和脂肪PPARγm RNA和蛋白表达量差异均有统计学意义(P0.05);其中高剂量组小鼠肝、肺和脂肪PPARγm RNA和蛋白表达量均高于对照组和低剂量组(P0.05)。结论 BDE-209可增加小鼠肺质量、脂肪质量和体重,可能与BDE-209激活了PPARγ受体,导致脂肪细胞异常分化和脂联素含量下降有关。     

表皮葡萄球菌对成纤维细胞的增殖及表型转变的影响研究

目的检测成纤维细胞在表皮葡萄球菌刺激下增殖及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化规律,探讨乳房假体植入术后表皮葡萄球菌感染相关包膜挛缩机制。方法 MTT法检测普通培养液、不同浓度表皮葡萄球菌SE RP62A及SE AT12228裂解液培养的成纤维细胞生长情况;Western blot及免疫组化法检测不同培养液培养成纤维细胞α-SMA的表达。结果 SE RP62A对成纤维细胞的生长有明显的促进作用(P<0.05),SE AT12228对成纤维细胞的生长无明显影响;SE RP62A能激活成纤维细胞转化为α-SMA表达阳性的肌成纤维细胞,α-SMA蛋白表达水平明显高于SE ATCC12228组及普通培养液组(P<0.01),SE ATCC12228组有部分细胞转化为肌成纤维细胞;两组细菌刺激后的细胞第5天及第7天均能维持较为稳定的α-SMA蛋白表达水平;空白组的细胞α-SMA阴性,虽然于培养第5天α-SMA蛋白表达水平有所上升,但第7天时逆转(P<0.05)。结论 SE RP62A能促进成纤维细胞增殖,相比SE ATCC12228更有利于成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。     

非酒精性脂肪肝小鼠肝组织PPARα和UCP-2表达

目的 探讨过氧化物酶增殖活化受体α(PPARα)和解偶联蛋白2(UCP-2)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝组织中的表达.方法 雄性成年ICR小鼠30只随机分成3组,每组10只,即对照组(普通饲料)、模型A组(普通饲料4周+高脂饲料4周)、模型B组(高脂饲料8周),分别测定肝脏指数并制作肝脏病理切片,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,测定小鼠肝组织中PPARα和UCP-2 mRNA表达.结果 对照组、模型A、B组小鼠肝指数分别为(3.89±0.87)％、(7.42±0.95)％、(9.38±1.07)％,模型组小鼠肝指数均高于对照组(P＜0.01),模型小鼠肝脏脂肪变性明显;模型A、B组小鼠肝组织中PPARα mRNA表达量分别为(0.63±0.33)、(0.45±0.19),低于对照组的(1.16±0.27)(P＜0.01),模型A、B组小鼠肝组织中UCP-2 mRNA表达量分别为(0.67±0.76)、(0.89±0.52),高于对照组的(0.25±0.13) (P＜0.01).结论 发生NAFLD的小鼠肝组织中PPARα和UCP-2 mRNA表达异常.     

不同浓度甘草甜素对肝星状细胞增殖的影响及其调控机制的研究

目的探讨不同浓度甘草甜素对肝星状细胞增殖的影响及其调控机制的研究。方法用MTY法检测三组不同浓度甘草甜素对肝星状细胞增殖的抑制率,用免疫细胞化学法检测细胞周期素cyclinE的表达情况。结果MTT法检测不同药物浓度组：空白对照组、0．8mg／L甘草甜素组、1．2mg／L甘草甜素组、1．6mg／L甘草甜素组细胞增殖抑制率分别为0,2．73％,14．75％,25．96％,差异有统计学意义（P〈0．05）;不同浓度甘草甜素组中cyclinE阳性表达细胞数与对照组比较明显减少,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论甘草甜素能够浓度依赖性的抑制大鼠肝星状细胞增殖;甘草甜素可通过降低细胞周期素cyclinE的表达从而抑制大鼠肝星状细胞增殖。’     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

纤维化淤胆性肝炎肝组织α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达

目的了解纤维化淤胆性肝炎(FCH)肝星状细胞(HSC)活化状态及其与肝纤维化的关系。方法肾移植术后乙型肝炎病毒(HBV)相关性FCH患者9例,正常者5例作为对照。用免疫组织化学的方法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果FCH肝组织α-SMA与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达显著增加,表达分布部位一致,定量分析呈明显正相关(P<0.01)。结论肾移植术后HBV相关性FCH患者肝纤维化的发生与HSC的活化状态有关。