rSj26-Sj32融合蛋白Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清IgG

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白对慢性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法分别用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)作为包被抗原,采用Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者(40例)血清IgG,同时以华支睾吸虫病(21例)、卫氏并殖吸虫病(13例)、泡型棘球蚴病(10例)、囊型棘球蚴病(9例)、乙型肝炎(20例)和肺结核患者(20例)及健康人(43例)血清作为对照。结果 rSj26-Sj32融合蛋白检测慢性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为92.5%(37/40)和94.9%(129/136);SjAWA的为95.0%(38/40)和91.9%(125/136),两种抗原检测率间的差异无统计学意义(P>0.05)。两种方法与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清均有不同程度的交叉反应;但与囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应。rSj26-Sj32融合蛋白诊断慢性日本血吸虫病的阳性预测值、阴性预测值及诊断效率分别为84.1%(37/44)、97.7%(129/132)和94.3%(166/176),SjAWA的为77.6%(38/49)、98.4%(1...     

rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值.方法 利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)建立IgG-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作对照.结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为90.00%(45/50)、97.67%(42/43)和92.00%(46/50)、97.67%(42/43),二者比较差异无统计学意义(x2值均为0.0,P均＞0.05);SjAWA与泡型棘球蚴病患者血清的交叉反应率为20.00%(2/10),rSj26-Sj32与泡型棘球蚴病患者血清未见交叉反应,二者比较差异无统计学意义(x2=0.5,P＞0.05);rSj26-Sj32和SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应率分别为14.29%(3/21)、7.69%(1/13)和19.05%(4/21)、7.69%(1/13),与囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均未见交叉反应,二者比较差异无统计学意义(x2值均为0.0,P均＞0.05).rSj26-Sj32-IgG-ELISA和SjAWA-IgG-ELISA诊断急性日本血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值和诊断效率分别为97.83%(45/46)、89.36%(42/47)、93.55%(87/93)和97.87%(46/47)、91.30%(42/46)、94.62%(88/93),二者比较差异无统计学意义(x2值均为0.0,P均＞0.05).结论 rSj26-Sj32融合蛋白可用于急性日本血吸虫病的免疫诊断.

Abstract：

Objective To study the diagnostic value of rSj26-Sj32-IgG-ELISA for acute schistosomiasis japonica. Methods Purified rSj26-Sj32 fusion protein and crude Schistosoma japonicum antigen (SjAWA)were used to establish IgG-ELISA to detect serum of patients with acute schistosomiasis, and clonorchiasis sinensis,paragonimiasis westermani, alveolar echinococcosis, cystic echinococcosis, type B hepatitis, lung tuberculosis patients and healthy human serum were used as control. Results The sensitivity and specialty were 90.00%(45/50) ,97.67% (42/43) and 92.00% (46/50),97.67% (42/43) in detection of acute schistosomiasis japonica with rSj26-Sj32and SjAWA, respectively, and the difference was not statistically significant(x2 were both 0.0, all P ＞0.05). The serum cross-reaction reactivity was 20.00%(2/10) in patients with alveolar echinococcosis with SjAWA,but no cross-reaction with rSj26-Sj32, the difference was not statistically significant(x2 = 0.5, P ＞ 0.05). The serum cross-reactivity were 14.29% (3/21 ), 7.69% (1/13) and 19.05% (4/21 ), 7.69% (1/13) among patients with clonorchiasis sinensis and paragonimiasis westermani by rSj26-Sj32 and SjAWA, but no cross reaction with type B hepatitis and lung tuberculosis patients, the difference was not statistically significant (x2 were both 0.0, all P ＞ 0.05). The positive predictive value, the negative predictive value and the diagnostic efficiency with acute schistosomiasis japonicum by rSj26-Sj32-IgG-ELISA and SjAWA-IgG-ELISA were 97.83% (45/46),89.36% (42/47),93.55% (87/93)and 97.87% (46/47),91.30% (42/46),94.62% (88/93), respectively, and the difference was not statistically significant (x2 were both 0.0, all P ＞ 0.05). Conclusion rSj26-Sj32 fusion protein can be used for the immune diagnosis of acute schistosomiasis japonica.     

rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的研究

目的探讨rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA诊断慢性血吸虫病的价值。方法用rSj26GST Sj32融合蛋白作为包被抗原,通过rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果该法检测慢性血吸虫病的敏感性和特异性分别为95.00%和100.00%,且与泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为100.00%、95.56%和97.59%。结论rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA可用于慢性血吸虫病的免疫诊断。     

rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值。方法用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立ELISA方法,检测急性日本血吸虫病患者血清中的特异性IgM抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较二者的敏感性、特异性和交叉反应性。结果 rSj26-Sj32-IgM-ELISA和SjAWA-IgM-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清特异性IgM抗体的敏感性分别为98.0%和96.0%,特异性均为97.7%;SjAWA-IgM-ELISA检测华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清时存在不同程度的交叉反应,而rSj26-Sj32-IgM-ELISA则未见交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白对急性日本血吸虫病具有较高诊断价值,可用作急性日本血吸虫病的诊断抗原。     

rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断研究

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法分别以rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)作为包被抗原,通过Immunogold-IgG-Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病人血清及健康人血清作为对照。结果 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA检测日本血吸虫抗体的敏感性和特异性分别为95.00%和97.67%,且与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性日本血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值分别为97.44%和95.45%,诊断效率为96.39%,与SjAWA-Immunogold-IgG诊断效率(96.39%)相同。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的诊断。     

重组GST—HD融合蛋白用于血吸虫病诊断和疗效考核的研究

目的 探讨重组GST-HD融合蛋白用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法 用IPTG诱导表达日本血吸虫中国大陆株23kDa分子（SjC23)的大亲水片段的融合蛋白（GST-HD），再经Glu-tathione Sepharose4B凝胶进行亲和纯化，建立应用纯化的GST-HD融合蛋白检测抗SjC23抗体的ELISA血吸虫开门见山诊断方法（GST-HDELISA），用该方法和常规的SEA-ELISA平行检测血吸虫病人，肝吸虫病人及健康人血清，同时检测32份同一病人治疗前、治疗后半年的配对血清，比较两种方法诊断血吸虫病的效能和疗效考核价值。结果 GST-HDELISA和SEA-ELISA检测90份病人血清的阳性率分别为95.55%和93.33%，检测29份肝吸虫病人血清，交叉反应率分别为0和3.44%，检测40份健康人血清假阳性率分别为0和2.5%。融合蛋白中的GST分子对实验结果没有影响，检测32份治疗前、治疗后配对病人血清，治疗后6个月GST-HD抗体的阴转率达75.0%，而SEA抗体的阴转率仅为12.5%。结论 重组表达的GST-HD融合蛋白分子是一种新的血吸虫病基因工程免疫诊断抗原，具有较高的免疫诊断和病效考核价值。     

日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/26GST)的免疫原性鉴定

目的：鉴定纯化的重组日本血吸虫线粒体相关融合蛋白（rSj338/26GST）的免疫原性。方法：对已构建的阳性表达菌pGEX-6p-1/Sj338进行大量诱导表达，并对纯化蛋白进行活性分析。将粗提包涵体蛋白、复性包涵体蛋白、经分子筛纯化并复性的蛋白分别免疫新西兰家兔2只。用Western blot及Dot-ELISA方法检测特异性抗体的免疫原性及各组抗体水平。结果：用分子筛纯化的融合蛋白rSj338/26GST经SDS－PAGE电泳鉴定显示达电泳纯；Western blot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及rSj338/26GST免疫兔血清识别。Dot-ELISA法检测结果表明，经分子筛纯化并复性的rSj338/26GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高，为1：51200。结论：纯化后的融合蛋白rSj338/26GST具有较高的纯度及较强的免疫活性，可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子，值得进一步深入研究。     

日本血吸虫病诊断抗原研究进展

血吸虫病免疫诊断技术的发展为血吸虫病控制做出了重要贡献。血吸虫抗原检测特异性抗体是目前血吸虫病免疫诊断的常用方法,所使用的抗原可分为粗制虫源抗原、纯化虫源抗原和重组抗原。研制高敏感性、高特异性和具有早期诊断价值的抗原是免疫诊断研究的重点。本文对近年日本血吸虫病诊断抗原研究进展进行了综述。     

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。     

日本血吸虫病重组诊断抗原研究进展

随着分子生物学和免疫学技术的发展,将重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断已成为当前血吸虫病研究领域的热点。本文将近10年用于日本血吸虫病免疫诊断的重组抗原研究进展作一综述。     

日本血吸虫重组质粒pQE30-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

目的构建日本血吸虫重组质粒pQE30-Sj26GST-Sj32,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎日本血吸虫成虫,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获Sj26GST和Sj32抗原编码基因;采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因;将融合基因克隆至原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30-Sj26GST-Sj32并转化大肠埃希菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1 991 bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pQE30中,SDS-PAGE显示表达产物为分子质量单位约为61 ku的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的18%;Western blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pQE30-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性。     

日本血吸虫rSj14-3-3疫苗和rSj26 GST疫苗联合免疫保护作用研究

目的观察日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)疫苗和重组M r2600谷胱甘肽S转移酶(rSj26GST)疫苗联合免疫对小鼠的保护作用。方法将含有Sj14-3-3和Sj26GST编码基因的菌株E.coliBL21/p ET28a涂布LB/Kana/IPTG/X-gal平板,培养、收集细菌、超声碎菌、分离、纯化,分别取5μL进行SDS-PAGE,观察纯化结果,采用BCA法测定重组蛋白的浓度。联合免疫组BALB/c小鼠分别在第0、2、4周用rSj14-3-3疫苗rSj26GST疫苗联合免疫;而单独免疫的rSj14-3-3组及rSj26GST组,与上组同步各自免疫3次。末次免疫后2周进行感染攻击,45d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵。同时设PBS对照组。计算各组间的减虫率和减卵率,以及虫卵肉芽肿的大小。结果联合免疫组的减虫率为38.38%,显著高于rSj14-3-3(16.98%)和rSj26GST组(26.80%)(P0.01)。联合免疫组以及rSj14-3-3、rSj26GST组减卵率分别为48.81%、25.27%、41.41%;联合免疫组rSj14-3-3和rSj26GST组,肝组织中每条雌虫平均产卵数显著低于PBS对照组(P0.01)。联合组小鼠虫卵肉芽肿的直径为(173.9±35.0μm),显著小于对照组(267.7±28.6μm)(P0.01),联合组亦明显低于rSj14-3-3和rSj26GST组(P0.01)。结论联合免疫组的保护作用优于rSj14-3-3和rSj26GST单独免疫组。且联合免疫疫苗具有一定的抗虫卵肉芽肿及抗肝纤维化作用。     

RT-PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原编码基因诊断急性日本血吸虫病的初步研究

目的探讨RT PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14 3 3抗原编码基因用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法从急性日本血吸虫病患者血清中提取总RNA,利用RT PCR方法扩增Sj26、Sj32和Sj14 3 3抗原编码基因,用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定,同时以华支睾吸虫病患者血清、卫氏并殖吸虫病患者血清和正常人血清总RNA作为对照。结果50份急性日本血吸虫病血清均通过RT PCR扩增出了400bp的Sj14 3 3抗原编码基因片段,但未扩增出676bp的Sj26和1 270bp的Sj32抗原编码基因片段;对照组呈阴性反应。RT PCR扩增Sj14 3 3抗原编码基因片段敏感性和特异性均为100%,与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清未见交叉反应。结论RT PCR扩增Sj14 3 3抗原编码基因可用于急性日本血吸虫病的基因诊断。     

重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病效果的研究

目的　研究重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病的效果。方法　在洲垸亚型血吸虫病流行区 ,选择两个村居民役用水牛 ,试验组 96头水牛免疫重组GST抗原 ,对照组 90头水牛不免疫作对照 ;观察两组水牛血吸虫感染率、湖洲感染性钉螺密度等的变化。结果　试验组免疫 2 0个月后检测水牛 5 6头 ,感染率为 5 36 % ,比免疫前 (13 5 4 % )下降了6 0 4 1% ,比对照组同期 (16 6 7% )低 6 7 85 % ,试验组外洲易感地带感染性钉螺密度较免疫前降低了 71.4 3%。居民血吸虫感染率基本无变化。结论　水牛免疫重组GST抗原能产生一定的保护力 ,对降低水牛血吸虫病情有明显作用。     

Smads在日本血吸虫病小鼠肝纤维化形成过程中的表达

目的　从转录水平研究参与转化生长因子β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)信号传导的Smads分子在日本血吸虫病小鼠肝纤维化形成过程中的表达。　方法　以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠形成肝纤维化动物模型,分别于感染后第 8、12、16和24周取小鼠肝组织 ,作病理学检测,观察肝纤维化程度,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)的方法检测模型组和正常组小鼠肝组织中Smad2、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA水平。　结果　Smad 2mRNA水平在感染12周后表达下降(P<0.05),16周后恢复正常,2 4周后再次下降(P<0.05)。Smad 3mRNA水平在感染后 16周开始明显升高 ,达正常水平的2倍(P<0.05)。Smad4和Smad7的mRNA水平在肝纤维化形成过程中与正常组比较无明显差异。　结论　Smad3促进肝纤维化形成。Smad2对肝纤维化形成具有双效性 ,即感染初期属于促进因子 ,感染后期属于抑制因子。     

RT-PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原编码基因用于慢性日本血吸虫病诊断的研究

目的探讨RT-PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原编码基因用于慢性日本血吸虫病诊断的价值。方法从慢性日本血吸虫病患者血清中提取总RNA,用RT-PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原编码基因,以1.2%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型包虫病、囊型包虫病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果 RT-PCR扩增出约400 bp的Sj14-3-3抗原编码基因片段,但未扩增出676 bp的Sj26和1 270bp的Sj32抗原编码基因片段。对照组呈阴性反应。结论 RT-PCR扩增Sj14-3-3抗原编码基因可用于慢性日本血吸虫病的基因诊断。     

抗疟原虫单抗 M26-32IgM 的单体化及其免疫学特性研究

目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26—32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26—32杂交瘤细胞,接种BALB／c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨酸裂解IgM类M26—32单抗成单体IgM亚单位。经间接免疫荧光检定两种抗体的效价,并用胶体金标记,分别检测恶性疟原虫和间日疟原虫可溶性抗原。结果接种20只小鼠,共采集约80mL单抗腹水,经HiTrap IgM HP柱纯化,获得了纯度较高的M26—32单抗。经L一半胱氨酸裂解后,Native电泳显示天然IgM被裂解为单体亚单位,IFA结果显示,亚单位M26-32与天然五聚体IgM滴度无差别。经胶体金标记后,两种金标抗体均分别能检测1：100稀释的恶性疟原虫和1：10稀释的间日疟原虫可溶性抗原。结论建立了L-半胱氨酸裂解IgM类M26—32单抗为单体IgM亚单位及其胶体金标记的方法,为利用M26—32进一步制备相应快速诊断工具奠定基础。