分枝杆菌噬菌体D29裂解酶基因的表达与鉴定

目的：在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性。方法：在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒后,在耻垢分枝杆菌中进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE检测,对诱导培养重组菌进行混浊度测定、透射电镜观察以鉴定其裂解活性。结果及结论：成功构建了重组穿梭质粒pUV-gene10并使gene10在耻垢分枝杆菌中获得表达,表达产物能有效降低宿主菌培养液混浊度,降解宿主菌细胞壁,证实gene10表达产物为噬菌体裂解酶,并推测其为非经典分泌蛋白。     

噬菌体D29的稳定性研究

目的 考察噬菌体D29的稳定性,为噬菌体D29吸入制剂的处方工艺研究提供依据.方法 对不同浓度噬菌体溶液在不同温度条件下的稳定性,以及噬菌体溶液冻干过程及冻干品在不同温度下的放置稳定性进行评价.结果 温度对噬菌体溶液稳定性影响显著,4℃条件下噬菌体D29溶液在1年内保持稳定,但反复取用会影响其稳定性;糖类和蛋白类对噬菌...     

不同采样液对噬菌体活性的影响研究

目的了解噬菌体在不同采样液中耐冲击能力的强弱,筛选用于液体冲击式采样器采集噬菌体气溶胶的最佳采样液和耐冲击性强的噬菌体。方法使用全玻璃液体冲击采样器（AGI-10）对噬菌体进行耐冲击实验,采样液选用蒸馏水（DW）、磷酸盐缓冲液（PBS）和SM液,每种采样液又分为加橄榄油组（50μl）和不加橄榄油组（0μl）,在以7L/min的气流冲击30min后测定采样液中噬菌体滴度和终末采样液体积,采用校正存活率评价噬菌体耐冲击性。结果同一种噬菌体在不同采样液中的耐冲击性不同,以SM液作为采样液时,噬菌体存活率较高,SM液中是否加入橄榄油对噬菌体的耐冲击性没有影响。噬菌体SM701、SM702、PhiX174、EcP1和F2在SM液中经7L/min的气流冲击60min后,校正存活率分别约为79%、77%、86%、50%和71%。结论噬菌体在不同采样介质中的耐冲击性不同,其中以SM液保护效果最佳,噬菌体SM701、SM702和PhiX174的耐冲击性较强。     

大气生物气溶胶实时监测与Andersen6级采样结果的对比研究

目的研究利用荧光分析识别生物粒子的实时监测技术和Andersen6级采样器采样对大气生物气溶胶采样结果的影响,为大气生物气溶胶监测方法提供理论依据。方法利用生物粒子实时监测采样仪采集大气生物气溶胶粒子,用Andersen6级采样器作为对照,比较两种方法采集的生物气溶胶粒子的浓度变化。结果实时监测采集到的生物粒子浓度为20~120个粒子（pts）/L,Andersen6级采样器检测到的微生物气溶胶菌落浓度集中在0.2~5cfu/L。实时监测每6s检测空气中生物粒子数,可实时、直观反映空气中粒子浓度的变化,而Andersen6级采样器检测结果是一定采样时间内的生物气溶胶的菌落浓度,需要较长的培养时间。两种采样方法检测到的大气生物气溶胶粒子浓度总的年度变化趋势基本一致,但是浓度值在不同采样时段分散性很大。结论实时监测采样灵敏度高,可及时反映生物粒子浓度的变化情况,比传统采样方法更适用于实时监测大气生物气溶胶本底变化规律,帮助判断是否存在生物气溶胶暴露的危害。     

利用噬菌体表面呈现技术制备HIV-1整合酶单链抗体的初步研究

目的：研制ＨＩＶ－１整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ，ＩＮ）的重组噬菌体单链抗体。方法：采用噬菌体表面呈现方法。结果：由ＩＮ蛋白免疫的小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中构建了单链抗体基因ｃＤＮＡ文库，克隆入噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，经转化大肠杆菌ＴＧ１，获得了库容为３．５×１０５的表达文库。利用包被在酶联板上的ＩＮ蛋白进行四轮亲和富集，筛选出７６株具有ＩＮ结合活性的重组噬菌体。对随机挑选的一株克隆进行了ＤＮＡ序列分析，证明其符合小鼠抗体序列。结论：获得了抗ＨＩＶ－１ＩＮ的噬菌体单链抗体，为其进一步研究打下基础。     

痰液和BALF的结核分枝杆菌培养对部队肺结核患者的诊断价值比较

目的 评估痰和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的结核分枝杆菌快速培养对部队肺结核患者的诊断价值.方法 以来自部队的痰涂片检测阴性的疑似肺结核患者为研究对象,收集病员的痰液和BALF标本,采用BACTEC MGIT 960液体培养法(简称MGIT 960法)分别进行结...     

重组结核分枝杆菌Rv2389c蛋白的纯化及其生物学功能的初步研究

目的：纯化晕组的结核分枝杆菌促进复活因子（resuscitation-promoting factor，Rpf）Rv2389c蛋白，并研究其对结核分枝杆菌、卡介苗（BCG）和藤黄微球菌的生长有无促进作用？方法：用亲和层析柱纯化重组的结核分枝杆菌Rv2389c蛋白，并将其加到一定浊度的结核分枝杆菌、BCG和藤黄微球菌培养液中，每隔一定时间测定菌液OD600值。结果：经过纯化，得到了去掉谷胱苷肽转移酶（GST）标签的重组Rv2389c蛋白，浓度为306.9μg／ml，且发现Rv2389c蛋白对结核分杆菌、BCG和藤茧微球菌的牛长都有一定的促进作用。结论：成功纯化了重组结核分枝杆菌Rv2389c蛋白，并证实它具有生物学活性，能促进结核分枝杆菌、BCG和藤黄微球菌的生长，为进一步研究其机制奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌D型肠毒素抗血清的制备和致敏血球效果的初步观察

我们制定了制备抗-SED血清的免疫方案,抗原用量6.9mg/兔,注射8针,免疫时间共14周。实验表明,抗-SED血清效价可达1∶128,所制备的抗血清与纯度高(98%)及纯度较低(50%～60%)的SED肠毒素都只产生1条沉淀线,并且融合,同SEA、SEB、SEC_I、SEC_Z均没有交叉反应。硫铵盐析沉淀法提取的抗-SED IgG,用于致敏醛化血球,该抗体诊断致敏血球检出SED灵敏度较高,约1ng/ml。同时用该抗体诊断血球对6种罐头食品人工污染SED肠毒素进行了检验,检出灵敏度为0.78～3.12ng/ml,略低于含纯SED标本,食物成分对反向间接血凝没影响,不出现假阳性和假阴性。效价高或效价低的抗-SED血清都可用于致敏醛化血球。     

EOS 2D与3D测量双下肢各参数可靠性和稳定性的对比研究

目的:对比研究EOS 2D与3D测量在双下肢冠、矢状面各参数中的可靠性和稳定性。方法:搜集2019-2020年1年内于本影像中心行双下肢或全身EOS检查的50例患者,两位医师对50例患者的影像数据进行2D和3D测量,保存所得数据,生成Excel表格并进行统计学分析。采取一致性检验对各测量参数进行分析,并计算出组内相关系数和组间一致性相关系数。结果:除股骨外翻角外,EOS 2D与3D测量各组的组内相关系数与组间一致性相关系数均>0.9,表示两者一致性极佳;股骨外翻角的组内相关系数和组间一致性相关系数亦均>0.6;进一步的线性回归模型分析结果也显示各测量参数的2D与3D测量之间显著相关(皮尔森系数r>0.80);Bland-Altman图显示大于92%(4/50)的点在均值为±1.96标准差范围内,显示两种测量方式具备较好的一致性和稳定性。结论:EOS常规2D与3D两种测量方式结果无差异统计学意义,两者都具备较高的可靠性和稳定性。     

中央腺体内前列腺癌3D 1 H-MRSI的初步研究

目的 应用3D氢质子磁共振波谱成像（3D ^1H-MRSI）研究中央腺体（CG）前列腺癌（PC）的代谢特点,并初步探讨3D ^1H-MRSI对CG内PC的鉴别诊断价值。资料与方法 分析18例良性前列腺增生（BPH）和16例PC的3D ^1H-MRSI表现,16例PC中2例源于CG,14例肿块较大同时累及外周带和CG。测量CG内PC及BPH的CG体素（Cho＋Cre）／Cit比值及Cho／Cre比值,并分别对PC与BPH体素的两组代谢物比值进行比较。结果 CG内PC波谱主要表现为Cit峰明显下降甚至消失,Cho峰显著升高,两者波峰可呈现倒置。CG的腺体增生组织主要表现为Cit峰高耸,Cho峰次之,Cre峰最低,基质增生者Cit、Cho峰均降低;CG内PC体素（Cho＋Cre）／Cit比值显著高于BPH的CG（P〈0．001）,但两组体素存在部分重叠（29／133,21．8％）。CG内PC体素的Cho／Cre比值明显高于BPH的CG（P〈0．001）,但两组之间重叠较多（105／133,78．9％）。结论 CG内PC的诊断存在一定困难,其（Cho＋Cre）／Cit明显高于BPH的CG,但与BPH有部分重叠,综合Cit峰降低、Cho峰升高、Cho／Cre增大有助于CG内PC的检出。     

99mTc-DTPA aerosol for same-day post-perfusion ventilation imaging: Results of a multicentre study

A multicentre study was performed in an attempt to evaluate a submicronic technetium-99m diethylene triamine penta-acetic acid aerosol generated by a newly developed delivery system, the aerosol production equipment (APE nebulizer), for same-day post-perfusion ventilation imaging in patients with clinically suspected pulmonary embolism. Quantitative comparison between the DTPA aerosol and krypton gas demonstrated a close correlation with respect to regional pulmonary distribution of activity and peripheral lung penetration (n=14,r=0.94,P<0.001 andr=0.75,P<0.0025, respectively). In 169 consecutive patients, DTPA aerosol images performed immediately following perfusion (inhalation scan I) were compared to those carried out on the next day (inhalation scan 11) with respect to image quality and assessment of perfusion-ventilation matches or mismatches. Agreement between inhalation scans I and II with respect to perfusion defects matched or mismatched to ventilation was found in 166/169 (98%) studies. The image quality of inhalation scan I was equal to that of scan II in 72%; inhalation scan I was superior in 11% of cases, while scan 11 was superior in 17%. This submicronic^99mTc-labelled DTPA aerosol is well suited for fast same-day post-perfusion ventilation imaging in patients with clinical suspicion of pulmonary embolism.     

一种正压生物防护服细菌气溶胶防护效果的研究

目的研究某种正压生物防护服对生物气溶胶的防护效果。方法采用人工发生黏质沙雷茵气溶胶,用Andersen6级采样器采样,对该正压生物防护服对细菌气溶胶的防护效果进行了检测。结果与结论该正压生物防护服对暴露于颗粒质量中值直径约1．674μm的细菌气溶胶粒子防护效率达到99．90％以上。该正压生物防护服通过高效过滤系统为防护服内提供洁净空气,对细菌气溶胶有较好的防护效果。     

负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA（pre-miR-29a）的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-miR29a）。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞（HEK293）,包装重组慢病毒Ad-miR29a,扩增、收集并纯化。对纯化后的Ad-miR29a进行滴度测定、感染性鉴定及PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×109 pfu/ml。PCR鉴定Ad-miR29a可扩增出pre-miR-29a特异片段,而对照Ad-LacZ不能扩增出pre-miR-29a特异片段。Ad-miR29a感染人胃癌SGC-7901细胞后,可明显提高miR-29a的表达丰度。结论成功包装了负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究microRNAs在肿瘤发生发展中的作用,以及miR-29a在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。     

3D dento-maxillary osteolytic lesion and active contour segmentation pilot study in CBCT: semi-automatic vs manual methods

Objectives:

This study was designed to evaluate the reliability of a semi-automatic segmentation tool for dento-maxillary osteolytic image analysis compared with manually defined segmentation in CBCT scans.

Methods:

Five CBCT scans were selected from patients for whom periapical radiolucency images were available. All images were obtained using a ProMax® 3D Mid Planmeca (Planmeca Oy, Helsinki, Finland) and were acquired with 200-μm voxel size. Two clinicians performed the manual segmentations. Four operators applied three different semi-automatic procedures. The volumes of the lesions were measured. An analysis of dispersion was made for each procedure and each case. An ANOVA was used to evaluate the operator effect. Non-paired t-tests were used to compare semi-automatic procedures with the manual procedure. Statistical significance was set at α = 0.01.

Results:

The coefficients of variation for the manual procedure were 2.5–3.5% on average. There was no statistical difference between the two operators. The results of manual procedures can be used as a reference. For the semi-automatic procedures, the dispersion around the mean can be elevated depending on the operator and case. ANOVA revealed significant differences between the operators for the three techniques according to cases.

Conclusions:

Region-based segmentation was only comparable with the manual procedure for delineating a circumscribed osteolytic dento-maxillary lesion. The semi-automatic segmentations tested are interesting but are limited to complex surface structures. A methodology that combines the strengths of both methods could be of interest and should be tested. The improvement in the image analysis that is possible through the segmentation procedure and CBCT image quality could be of value.     

病毒气溶胶飞沫在室内环境中传播扩散机制的研究进展

该文综述了病毒气溶胶飞沫的物理特性,病毒气溶胶飞沫在室内环境中传播扩散机制的3种研究方法,即理论分析法、数值模拟法和实验研究法的研究进展,指出了病毒气溶胶飞沫在室内环境中传播扩散机制的研究中存在的问题和发展趋势。     

miR-29a抑制胃癌细胞内靶基因VEGF-A的表达及意义

目的 验证胃癌细胞株SGC-7901内miR-29a对靶基因VEGF-A的直接调控作用.方法 采用负载miR-29a的腺病毒载体（Ad-miR29a）感染人胃癌细胞株SGC-7901,上调SGC-7901细胞内miR-29a的表达丰度后,采用RT-qPCR及Western blot法分别检测SGC-7901细胞内VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达;进一步采用双荧光素酶实验及突变实验,验证miR-29a是否通过结合在VEGF-A 3＇UTR而直接抑制靶基因表达.结果 与感染阴性对照Ad-LacZ的SGC-7901细胞相比,感染Ad-miR29a的SGC-7901细胞内VEGF-A蛋白表达下降（0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P＜0.01）,且VEGF-A mRNA水平亦下调（0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P＜0.05）;荧光素酶实验显示,与阴性对照相比,转染miR-29a mimic后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性明显下降（0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P＜0.05）;而在VEGF-A 3＇UTR与miR-29a的结合位点被突变之后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性得以恢复.结论 miR-29a通过结合于VEGF-A 3＇UTR相应位点,直接抑制VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达.miR-29a可能成为胃癌基因治疗的有效靶标.     

弗氏志贺菌2a GadB蛋白的功能研究

目的探究gadB基因的潜在功能及其对弗氏志贺菌2a 301株致病能力的影响。方法利用λ-Red重组系统构建弗氏志贺菌2a 301株的gadB缺失突变株,随后进行基本的表型实验测评,并初步评价其毒力,最后制备突变株和野生株全菌蛋白样品,利用双向电泳技术比较二者在蛋白表达谱上的差异。结果成功获得gadB基因缺失株;生化实验发现缺失株不能利用甘油发酵;而豚鼠角膜实验发现突变株炎症反应稍轻于野生株;全菌蛋白表达谱中发现10个差异蛋白。结论利用双向电泳鉴定到一些可能与GadB有关的蛋白,为gadB潜在功能的研究提供了线索。