血红素氧合酶-1在胰岛素对乳鼠心肌细胞保护机制中的作用

目的探讨血红素氧合酶（HO）1在胰岛素对缺氧/复氧心肌细胞保护机制中的作用。方法体外培养SD乳鼠心肌细胞,分为7组常氧对照组,缺氧/复氧对照组,不同剂量胰岛素组（160、320、640、960mU/L）,胰岛素加原卟啉锌组（胰岛素640mU/L、原卟啉锌10μmol/L）。除常氧对照组外,其余各组均给于缺氧3h,再复氧1h处理。检测心肌细胞HO1蛋白表达、HO活性、细胞生存率及乳酸脱氢酶（LDH）值。结果与缺氧/复氧对照组比较,各胰岛素组心肌细胞HO1蛋白表达显著增加,HO活性、细胞生存率显著增高,LDH显著降低。原卟啉锌能显著抑制HO活性,阻止胰岛素对心肌细胞的保护作用。结论胰岛素能够增加缺氧/复氧心肌细胞HO1的表达,增高HO活性,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

SOCS1介导CT-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的保护作用

目的通过使用细胞因子信号抑制物1（SOCS1））反义寡核苷酸（ASODN）干预,从细胞和分子水平阐明SOCS1如何介导心肌营养素-1（CT-1）对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法用改良的方法培养出生1～3d的乳鼠心肌细胞,分为对照组：DMEM液培养6 h;缺氧复氧组;CT-1组：缺氧复氧＋CT-1;ASODN组1：缺氧复氧＋CT-1＋ASODN（终浓度为20μmol/L）;ASODN组2;SODN组：缺氧复氧＋CT-1＋SODN;ScODN组：缺氧复氧＋CT-1＋ScODN。测定心肌细胞的存活率、线粒体膜电位（Δψm）、细胞活性氧（ROS）、细胞凋亡率及SOCS1水平。结果缺氧复氧组较对照组心肌细胞凋亡率增加、ROS水平升高、心肌细胞存活率降低、Δψm下降,P均〈0.05;而CT-1组较缺氧复氧组心肌细胞存活率上升、凋亡率减少、Δψm增加。SOCS1 ASODN干预后,心肌细胞凋亡率和ROS水平明显升高,Δψm水平下降。缺氧复氧组SOCS1 mRNA和蛋白较对照组有所增加;CT-1组SOCS1 mRNA和蛋白均较缺氧复氧组升高,SOCS1 ASODN干预后下降。结论 SOCS1介导了CT-1减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤。     

缺氧后适应与心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及机制探讨

目的 探讨缺血后适应与心肌营养素-1（CT-1）对心肌细胞缺氧复氧的保护作用及其机制.方法 将体外培养的H9C2细胞株分为正常对照组（a组）、缺氧复氧组（b组）、缺氧复氧＋缺氧后适应组（c组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋ CT-1组（d组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋ ERK抑制剂组（e组）、缺氧复氧＋缺氧后适应＋CT-1＋二甲基亚砜组（f组）,MTS法检测各组细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测细胞外调节激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达、Q-PCR检测Bad mRNA的表达.结果 与a组比较,其他各组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA和p-ERK1/2（除外e组）表达量增加,P均＜0.05;与b组比较,c组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,Bad mRNA表达、凋亡率下降,P均＜0.05;与c组比较,d组细胞存活率、p-ERK1/2表达量均增加,细胞Bad mRNA表达、凋亡率下降（P均＜0.05）;与d组比较,e组细胞存活率下降,细胞凋亡率、Bad mRNA表达量增加,p-ERK1/2表达量下降;d、e组各项指标指标比较差异无统计学意义.结论 缺氧后适应可减少心肌细胞缺氧复氧损伤,联合CT-1后保护作用明显加强,而ERK1/2抑制剂可阻断这种保护作用;该保护机制可能与CT-I激活ERK1/2信号通路,下调Bad mRNA的表达有关.     

白藜芦醇通过TLR4通路对H9C2细胞高糖缺氧/复氧损伤的作用

目的 观察白藜芦醇(RES)对H9C2心肌细胞高糖及缺氧/复氧条件下Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨RES通过TLR4通路对糖尿病心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制。方法 培养H9C2心肌细胞建立缺氧/复氧及高糖心肌细胞损伤模型,并给予白藜芦醇处理。随机将H9C2心肌细胞分为对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+RES处理组、高糖组、高糖+缺氧/复氧组、高糖+缺氧/复氧+RES处理组。ELISA法测定各组乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,CCK8和AnnexinV/PI分别检测细胞增殖和凋亡,Western-blot法检测TLR4蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,缺氧/复氧组及高糖组细胞增殖、SOD水平明显下降(P<0.05),LDH、MDA水平明显升高(P<0.05),TLR4表达明显增多,缺氧/复氧组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),而高糖组细胞凋亡率有所升高,但差异无统计学意义。RES处理后,缺氧/复氧+RES组、缺氧/复氧+高糖+RES组LDH、MDA水平及细胞凋亡率与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较明显降低(P<0.05),SOD水平及细胞增殖能力与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较显著提高(P<0.05);TLR4蛋白的表达在缺氧/复氧和高糖组均有明显上升,在加入RES后,缺氧/复氧+RES组、缺氧/复氧+高糖+RES组TLR4蛋白表达量与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较均有下降,但差异无统计学意义。结论 白藜芦醇通过TLR4通路抑制TLR4蛋白表达可能是其减轻糖尿病心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制之一。     

缺氧与缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的比较及意义

目的 :研究单纯缺氧与缺氧复氧对体外培养的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响 ,探讨凋亡在心肌细胞缺氧 /复氧损伤中的作用。方法 :取体外培养的新生大鼠心肌细胞 ,分两组 ,均置于 95 0 ml/ L N2 ,5 0 ml/ L CO2 孵箱中培养16 ,32 ,4 8h,其中一组缺氧后再恢复正常条件培养 6 h,分别造成缺氧和缺氧 /复氧损伤的细胞模型 ,TUNEL 染色观察凋亡细胞形态学变化 ,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。结果 :心肌细胞经历缺氧和缺氧 /复氧损伤后 ,TU NEL 染色可见凋亡阳性细胞 ;应用流式细胞仪定量检测 ,心肌细胞缺氧培养 16 ,32 ,4 8h后 ,其凋亡率分别为 :（2 .9± 0 .5 ） % ,（6 .2± 0 .8） %和 （2 6 .6± 3.0 ） % ;心肌细胞在缺氧 16 ,32和 4 8h后复氧 6 h,其凋亡率分别为 :（5 .5± 0 .7） % ,（11.0± 1.1） %和 （14 .2± 1.6 ） %。结论 :心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高 ;缺氧 /复氧较单纯缺氧可进一步加重心肌细胞的损伤     

重组人生长停滞特异性蛋白6对缺氧/复氧原代心肌细胞及H9c2细胞损伤的影响

目的研究外源重组人生长停滞特异性蛋白6(rhGas6)对缺氧/复氧(H/R)诱导的原代乳鼠心肌细胞及H9c2细胞损伤的影响。方法体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞及H9c2细胞,随机各分为3组:正常组、H/R组及rhGas6预处理组(rhGas6组)。观察各组细胞形态及心肌细胞搏动频率,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)浓度及半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果原代心肌细胞及H9c2细胞H/R组均较正常组细胞活力下降,凋亡率、LDH及Caspase-3水平均较正常组增高。而Gas6组与H/R组比较,细胞活力增加,凋亡率、LDH及Caspase-3水平均减低(P<0.05)。结论 rhGas6对H/R诱导的原代心肌细胞及H9c2细胞损伤均发挥着潜在的保护作用,并可能是通过抑制Caspase-3活性减少细胞凋亡发挥的。     

卡托普利对再灌注损伤心肌细胞LDH和MDA的影响

目的 :观察卡托普利对大鼠心室肌细胞缺氧 -复氧损伤的影响。方法 :酶解法分离心肌细胞 ,将实验分为 9组 :不缺氧组、单纯缺氧组、缺氧 -复氧组、卡托普利 0 .0 5、0 .1、0 .2、0 .4、0 .8和 1.6μmol/L灌流组。观察杆形心肌细胞百分比、测定乳酸脱氢酶 （L DH）活性、L DH活性百分比和丙二醛 （MDA）含量。结果 :不缺氧组心肌细胞的生存率、释放 L DH活性百分比、MDA含量无明显变化。单纯缺氧组心肌细胞的生存率下降 ,释放 L DH活性百分比明显增加 ,MDA的含量亦增加 ;复氧组较缺氧组心肌细胞造成更严重的损伤 （P<0 .0 1） ;卡托普利 0 .0 5,0 .1μm ol/L 对缺氧 -复氧造成的损伤无明显作用 （P>0 .0 5） ,但 0 .2 ,0 .4,0 .8和 1.6μm ol/L能明显提高心肌细胞缺氧 -复氧过程中的生存率、减少脂质过氧化产物的生成 ,且呈剂量依赖性。结论 :卡托普利对缺氧 -复氧损伤的心肌细胞具有剂量依赖性保护作用     

异丙酚对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后凋亡的影响

目的探讨异丙酚对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法把培养的18孔乳鼠心肌细胞随机分成3组:对照组、单纯缺氧/复氧组、异丙酚处理组。培养3 d的乳鼠心肌细胞给予1 h缺氧和3 h复氧处理（单纯缺氧/复氧组）。复氧期间给予异丙酚（25μmol/L）处理（异丙酚处理组）,复氧结束后采用DNA原位末端缺口标记技术（TUNEL）测定心肌细胞凋亡比例同时用免疫组化法测定心肌细胞内抗凋亡分子Akt、Bcl-2和促凋亡分子p38 MAPK的表达。结果与对照组相比,异丙酚显著降低了缺氧/复氧诱导的心肌凋亡（10.1%±3.2%vs25.3%±6.2%,P<0.01）,并改变了缺氧/复氧过程中凋亡介导因子的活性。免疫组化的结果显示,异丙酚增加了心肌细胞内抗凋亡蛋白pAkt和Bcl-2的形成,降低了促凋亡蛋白p38的活性。结论异丙酚对培养心肌细胞缺氧损伤后的凋亡有显著的保护作用,该作用与其对pAkt、Bcl-2和p38的影响密切相关。     

人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用

目的观察人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用。方法采用人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧进行预处理,通过检测氧化应激、凋亡指标观察人参皂苷Rb1的作用。将细胞随机分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧加人参皂苷Rb1(50、100、200μmol/L),按实验设计因素处理后,通过蛋白电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3,检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS),TUNEL法检测细胞凋亡。结果缺氧复氧处理可使H9c2心肌细胞的ROS和MDA水平显著增加,SOD活性显著下降,上调caspase-3的表达,增加H9c2心肌细胞的凋亡。人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞MDA表达量,增加SOD活性,降低ROS水平,且人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞caspase-3的表达量及凋亡细胞数量。结论人参皂苷Rb1可降低缺氧复氧对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及凋亡,从而对缺氧复氧H9c2心肌细胞起保护作用。     

microRNA-1对心肌缺氧复氧中细胞凋亡的影响

目的明确心肌缺氧复氧(H/R)时miR-1的表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法建立乳大鼠心肌细胞H/R模型,TUNEL检测细胞凋亡、Western-Blot检测凋亡蛋白表达和实时荧光定量PCR检测miR-1表达。重组miR-1慢病毒感染乳大鼠心肌细胞,Western-Blot检测各组相关凋亡蛋白的表达。重组miR-1慢病毒感染乳大鼠心肌细胞后H/R处理,通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,软件分析和计算心肌细胞凋亡率。结果心肌细胞H/R后,细胞凋亡率明显增加,同时促凋亡蛋白(Bax和Caspase-3)表达水平增加和抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降。在成功构建心肌细胞缺氧复氧细胞模型后,检测到心肌细胞miR-1表达水平下降。与对照组相比,感染LV-rno-miR-1组促凋亡蛋白(Bax和Caspase-3)明显增加和抗凋亡蛋白Bcl-2降低,而感染LV-rno-miR-1 sponge凋亡蛋白的结果相反。相对于感染LV-rnomiR-1组和缺氧复氧组,感染LV-rno-miR-1病毒后缺氧4小时复氧12小时,细胞凋亡率进一步增加。结论 miR-1具有促进细胞凋亡的作用。miR-1表达下降可能是心肌细胞缺氧复氧时维持稳态的一种自我调节机制。     

碱性成纤维细胞生长因子诱导老年大鼠心肌细胞保护及其机制研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对老年大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其保护机制。　方法　在分离的老年大鼠心肌细胞H/R模型上,观察bFGF预孵育对H/R后心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出、ATP含量和细胞存活率的影响,并采用滤纸法测定心肌细胞外信号调节激酶(ERKs)活性的变化。　结果　bFGF激活ERKs,并呈剂量依赖性减轻H/R所致心肌细胞损伤,表现为细胞存活率〔bFGF10ng组(70.0±4.6)%,H/R组(53.0±4.5)%,P＜0.01〕和细胞内ATP含量〔bFGF10ng组(23.1±2.3)nmol/106细胞,H/R组(12.3±2.1)nmol/106细胞,P＜0.01〕升高,细胞浆酶LDH漏出〔bFGF10ng组（257.3±51.0）U/L,H/R组（372.5±69.2）U/L,P＜0.05〕减少;ERKs上游激酶抑制剂PD098059完全消除上述保护作用〔PD098059组细胞存活率（57.0±5.8）%,ATP含量（15.1±2.6）nmol/106细胞,培养液中LDH活性（325.5±59.0）U/L,与bFGF10ng组比较均为P＜0.01〕。　结论　bFGF可以提高老年大鼠心肌细胞对于缺氧的耐受性,其保护机制涉及ERKs的活化。     

心肌细胞缺氧复氧损伤时Mipu1启动子活性、Mipu1 mRNA表达变化及意义

目的探讨心肌细胞缺氧复氧损伤时心肌缺血预适应表达上调蛋白1(Mipu1)启动子活性的变化及其作用。方法按本课题组的常规方法复制心肌细胞缺氧复氧模型,先予缺氧(95%N2-5%CO2,无血清低糖DMEM)处理6 h,再分别复氧(95%空气-5%CO2,10%FBS-高糖DMEM)6、12、24 h。采用MTT法检测心肌细胞活性,比色法测定心肌细胞LDH活性,双荧光素酶报告基因技术检测启动子PGL3-Mipu1活性,实时定量PCR法检测Mipu1mRNA表达。结果缺氧6 h复氧(6、12、24 h)后心肌细胞活性减低,LDH释放增加,启动子PGL3-Mipu1活性增加,Mipu1 mRNA表达上调,且在缺氧6 h复氧12 h时变化最明显。结论 Mipu1可能参与了心肌细胞的缺氧复氧损伤,其可能通过调控凋亡相关基因发挥作用。     

硫化氢对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用

目的:研究不同浓度的硫化氢(H_2S)对缺氧不同时间的乳鼠心肌细胞损伤的直接影响及其对复氧损伤的间接影响,分析其对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用.方法:原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧硫氢化钠(NaHS)0组、缺氧硫氢化钠 100 μmol/L组、缺氧硫氢化钠 200 μmol/L组、缺氧硫氢化钠400 μmol/L组以及缺氧-复氧硫氢化钠0组、缺氧-复氧硫氢化钠100 μmol/L组、缺氧-复氧硫氢化钠 200 μmol/L组、缺氧-复氧硫氢化钠 400 μmol/L组.在缺氧24 h、48 h、72 h后及复氧2 h后均检测细胞存活数量、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:缺氧硫氢化钠100 μmol/L组、缺氧硫氢化钠200 μmol/L组和缺氧硫氢化钠 400 μmol/L组缺氧培养24 h、48 h和72 h后与各自时间点缺氧硫氢化钠0组比心肌细胞存活数量升高(P<0.01)、培养液中乳酸脱氢酶活性降低(P<0.01),差异均有统计学意义;缺氧硫氢化钠 200 μmol/L组和缺氧硫氢化钠 400 μmol/L组在缺氧培养24 h后较缺氧硫氢化钠100 μmol/L组心肌细胞存活数量升高(P<0.01)、培养液中乳酸脱氢酶活性降低(P<0.05～0.01),差异均有统计学意义.缺氧-复氧硫氢化钠100 μmol/L组、缺氧-复氧硫氢化钠200 μmol/L组和缺氧缺氧-复氧硫氢化钠400 μmol/L组缺氧培养24 h、48 h、72 h并复氧2 h后较各自时间点缺氧-复氧硫氢化钠0组比心肌细胞存活数量升高(P<0.01)、复氧后心肌细胞乳酸脱氢酶漏出量降低(P<0.01),差异均有统计学意义.结论:100~400 μmol/L 硫氢化钠对缺氧-复氧心肌细胞具有保护效果.200~400 μmol/L 硫氢化钠对缺氧24 h的心肌细胞保护作用较好.     

一氧化氮在乳鼠心肌细胞缺氧—复氧预处理延迟保护效应中的作用

探讨缺氧—复氧损伤对乳鼠心肌细胞一氧化氮释放和一氧化氮合酶活性的影响以及一氧化氮在心肌细胞延迟缺氧预处理中的作用。在培养乳鼠心肌细胞缺氧预处理的模型上，测定缺氧—复氧损伤对乳鼠心肌细胞一氧化氮释放和一氧化氮合酶活性，观察延迟缺氧预处理以及N-硝基-L-精氨酸、L广精氨酸、硝普钠对心肌细胞延迟缺氧预处理的影响。结果发现，缺氧—复氧后乳鼠心肌细胞一氧化氮释放增加，一氧化氮合酶活性升高。延迟缺氧预处理可以减少缺氧一复氧对心肌细胞的损伤。非选择性一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-广精氨酸可以阻断延迟缺氧预处理的心肌保护作用，L广精氨酸不能模拟延迟缺氧预处理，硝普钠可以模拟延迟缺氧预处理。结果提示，一氧化氮可以诱导心肌细胞的延迟缺氧预处理。     

融合蛋白PEP-1-SOD1预处理对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察表达的融合蛋白PEP-1-SOD1能否转导入人脐静脉内皮细胞,以及转导的PEP-1-SOD1融合蛋白能否减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧／复氧损伤。方法构建原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化基因工程菌BL21（DE3）,表达出N端带有6个组氨酸“标签”的SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白。将纯化后的融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察这种融合蛋白的转导能力及其在细胞内的活性。采用体外培养的人脐静脉内皮细胞建立缺氧／复氧损伤模型,检测不同浓度的PEP-1-SOD1对氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞的生存率、乳酸脱氢酶和丙二醛含量的影响。结果PEP-1-SOD1融合蛋白能高效地转导人体外培养的人脐静脉内皮细胞,并表现出剂量依赖性和时间依赖性的特点,2μmol/L PEP-1-SOD1-30min组SOD1酶活性为（60．88±6．73）U／ml,显著高于对照组酶活性（41．06±4．19）U／ml,P〈0．01,转导入细胞内的PEP-1-SOD1融合蛋白的活性可以维持至24h。PEP-1-SOD1各浓度组均提高缺氧／复氧人脐静脉内皮细胞的生存率,减少乳酸脱氢酶的释放量,降低丙二醛含量。结论PEP-1-SOD1融合蛋白能直接以天然有活性的形式转导入人脐静脉内皮细胞内,且能明显减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧／复氧损伤。这种蛋白转导方式,为用SOD1防止在体缺血／再灌注损伤的研究奠定了基础。     

缺氧前、后处理1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞缺氧/复氧损伤拮抗作用的差异及相关机制

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)缺氧前、后处理对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤拮抗作用的差异及相关机制。方法:分离SD乳鼠(1~2 d龄)心肌细胞进行体外培养。对培养的心肌细胞进行H/R处理以模拟心脏缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤。将培养的心肌细胞随机分为对照组、H/R组、H/R+S1P缺氧前处理(H/R+pre-S1P)组及H/R+S1P缺氧后处理(H/R+post-S1P)组,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测培养基中LDH的水平,caspase-3活性检测试剂盒检测心肌细胞中caspase-3的活性,Western blot检测ATP激活的蛋白激酶(AMPK)、激活的苏氨酸激酶(Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白磷酸化水平及S1P裂解酶-1(S1P lyase 1,SPL1)蛋白表达的水平。结果:与对照组相比,H/R组心肌细胞活力显著降低(P0.01),培养基中LDH的浓度和细胞中caspase-3的活性显著增高(P0.01)。S1P缺氧前处理可明显增加H/R处理后心肌细胞的活力(P0.01),减少LDH释放和caspase-3的活性(P0.01);而H/R+post-S1P组的各项指标与H/R组比较均无明显差异。Western blot检测发现,S1P缺氧前处理可明显增高心肌细胞中AMPK、Akt和ERk1/2磷酸化的水平(P0.05),而S1P缺氧后处理未激活AMPK、Akt和ERK1/2生存信号。Western blot检测发现,缺氧处理组心肌细胞中SPL1表达的水平较对照组显著升高(P0.01)。结论:缺氧前用S1P处理可激活AMPK、Akt、ERK1/2生存信号,显著减少心肌细胞凋亡,增加细胞的存活率,减轻心肌细胞H/R损伤;而S1P缺氧后处理不能发挥以上保护作用,其机制可能是缺氧处理导致心肌细胞SPL1的表达上调,通过降解S1P而减弱了其介导的抗心肌细胞H/R损伤的作用。     

缺氧前、后处理1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞缺氧／复氧损伤拮抗作用的差异及相关机制

目的：探讨1-磷酸鞘氨醇（S1P）缺氧前、后处理对心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤拮抗作用的差异及相关机制。方法：分离SD乳鼠（1—2d龄）心肌细胞进行体外培养。对培养的心肌细胞进行H／R处理以模拟心脏缺血／再灌注（ischemia／reperfusion,r／R）损伤。将培养的心肌细胞随机分为对照组、H／R组、H／R＋SIP缺氧前处理（H／R’pre—S1P）组及I-I／R＋SIP缺氧后处理（I-I／R＋post—S1P）组,采用四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyltetrazo｜ium。MTT）比色法检测心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）检测试剂盒检测培养基中LDH的水平,caspase-3活性检测试剂盒检测心肌细胞中caspase．3的活性,Westernblot检测ATP激活的蛋白激酶（AMPK）、激活的苏氨酸激酶（Akt）、细胞外信号调节激酶1／2（ERKl／2）蛋白磷酸化水平及SIP裂解酶．1（SIPlyase1,SPLl）蛋白表达的水平。结果：与对照组相比,I-1／R组心肌细胞活力显著降低（P〈0．01）,培养基中LDH的浓度和细胞中easpase-3的活性显著增高（P〈0．01）。S1P缺氧前处理可明显增加H／R处理后心肌细胞的活力（P〈0．01）,减少LDH释放和caspase-3的活性（P〈0．01）;而I-I／R＋post—S1P组的各项指标与H／R组比较均无明显差异。Westernblot检测发现,S1P缺氧前处理可明显增高心肌细胞中AMPK、Akt和ERkl／2磷酸化的水平（P〈0．05）,而SIP缺氧后处理未激活AMPK、Akt和ERKl／2生存信号。Westernblot检测发现,缺氧处理组心肌细胞中SPLl表达的水平较对照组显著升高（P〈0．01）。结论：缺氧前用S1P处理可激活AMPK、Akt、ERKl／2生存信号,显著减少心肌细胞凋亡,增加细胞的存活率,减轻心肌细胞H／R损伤;而S1P缺氧后处理不能发挥以上保护作用,其机制可能是缺氧处理导致心肌细胞SPLl的表达上调,通过降解SIP而减弱了其介导的抗心肌细胞H／R损伤的作用。     

白介素33对乳鼠心肌细胞乏氧/复氧损伤时胞内活性氧自由基生成的影响

目的探讨白介素33(IL-33)对乳鼠心肌细胞乏氧/复氧损伤的保护作用及胞内活性氧自由基(ROS)生成的影响。方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,将原代培养的心肌细胞随机分为单纯对照(C)组、加药对照(rIL-33 100 ng/ml,C1)组、乏氧/复氧(A/R)组、A/R+rIL-33(1、10、100ng/ml)组,乏氧培养3 h后,复氧2 h。免疫组化鉴定心肌细胞;MTT法检测细胞存活率;ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;流式细胞仪检测细胞凋亡(AV-PI双标法)、胞内ROS生成量(ROS-DHE荧光探针)。结果与C组相比,A/R组心肌细胞存活率明显下降(P<0.01),LDH漏出显著增高(P<0.01),凋亡率及胞内ROS含量显著增加(P<0.01);与A/R组相比,IL-33治疗组剂量依赖性地提高细胞存活率(P<0.01),降低LDH漏出率、细胞凋亡率(P<0.01)及胞内ROS含量(P=0.03);加药对照组与C组相比,心肌细胞存活率、凋亡率、胞内ROS含量差异无统计学意义。结论 IL-33在心肌乏氧/复氧损伤过程中可以剂量依赖性地发挥抗细胞凋亡作用,其保护作用机制可能与增强心肌抗氧化能力,减少胞内ROS生成有关。     

麦冬皂苷D对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制.方法:体外培养心肌细胞H9c2,实验分为心肌细胞未行任何干预的对照组、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D组(H/R+OpD组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)过表达组(H/R+OpD+PI3K组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+pcDN...     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。