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目的 观察糖基化终产物(advanced glyeosylation end-products,AGEs)对THP-1巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶.1(aeyl coenzyme A:cholesterol acyhransferase-1,ACAT-1)表达的影响.方法 将糖基化-牛血清白蛋白(AGE-modified bovine serum albumin,AGE-BSA)与佛波酯(PMA)诱导分化72h的THP-1巨噬细胞共同孵育,运用RT-PCR和Western blot分别检测巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 PMA诱导72 h后,THP-1细胞停止增殖,由单核细胞分化成为巨噬细胞.用50、100、200和400 mg/L AGE-BSA处理巨噬细胞后,细胞ACAT-1 mRNA相对表达量逐渐增加;ACAT-1蛋白表达的平均积分光密度值也逐渐增加,二者较对照牛血清白蛋白组明显增加(P<0.05).用200 mg/LAGE-BSA作用巨噬细胞0、12、24、36 h和48 h后,细胞ACAT-1 mRNA相对表达量逐渐升高;ACAT-1蛋白表达的平均积分光密度值也逐渐升高,较0 h明显增加(P<0.05).结论 AGEs可上调THP-1巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白的表达,呈浓度和时间依赖性,这可能与糖尿病动脉粥样硬化有关. 相似文献
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目的 研究瘦素对单核 /巨噬细胞转分化过程中酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶 - 1(ACAT - 1)表达效应的影响。方法 在RPMI16 4 0培养基中培养人单核细胞 (THP - 1) ,加入佛波酯 (PMA)培养 4 8h ,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。运用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)、蛋白质免疫印迹等方法 ,观察单核巨噬细胞转分化前后瘦素对ACAT - 1mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 单核巨噬细胞转分化前后ACAT - 1表达增加 ,瘦素可明显增加ACAT - 1的表达。结论 动脉粥样硬化 (AS)事件的发生可能与ACAT - 1表达增强有关 ,瘦素可能通过ACAT - 1表达增强导致AS提前发生。 相似文献
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目的研究酰基辅酶A- 胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)和酰基辅酶A- 胆固醇酰基转移酶2(ACAT2)在结肠癌中的表达及临床意义。方法收集60 例结肠癌患者的结肠癌组织、癌旁组织和正常肠道黏膜组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学法分别检测3 组组织中ACAT1 和ACAT2 的基因和蛋白表达水平,采用SPSS 20.0 软件分析其表达量与结肠癌患者临床病理因素之间的关系。结果结肠癌组织中ACAT1 和ACAT2 在基因和蛋白水平的表达量与癌旁组织和正常肠道黏膜比较,差异有统计学意义(P <0.05),结肠癌组织高于另外两组。ACAT1 和ACAT2 的基因表达与患者的年龄、Duke 分期、组织分化程度相关,且二者在结肠癌组织中的表达相关(P <0.05)。结论ACAT1 和ACAT2 在结肠癌组织中呈高表达,且与患者的部分临床病理特征相关,对临床上早期诊断结肠癌有一定的参考价值。 相似文献
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目的:探讨中药粉防已碱对高脂饮食兔主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)表达的影响。方法:将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料,C组)、高脂模型组(高脂饲料,CH组)和粉防已碱组(高脂饲料 Tet,Tet组)。喂养12周后处死动物,从主动脉根部连续切片,常规HE染色,计算机图像扫描,分析主动脉内膜和管壁厚皮;血管壁脂质苏丹Ⅳ染色;Westemblot方法测定主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶表达。结果:CH组粥样斑块面积,内膜和血管壁厚度显著高于Tet组(P<0.01),而C和Tet组之间差异无显著性;ACAT蛋白含量各组差异无显著性(P>0.05)。结论:Tet具有抑制血管壁脂质沉积的作用,但不影响ACAT酶蛋白的表达。 相似文献
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目的:重组表达人ACAT的N端片段。方法:将编码ACAT氨基末端包含第一个跨膜区的cDNA片段克隆至不同的大肠杆菌表达载体中,构建了多种大肠杆菌表达质粒,再转化至大肠杆菌中进行表达研究。 相似文献
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人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶C端片段在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:为了表达人ACTC端片段并制血表达载体其抗体。方法:将编码人ACAT羧基端包含跨膜(463-550氨基酸残基)的cDNA片断克隆至不同的大肠杆菌表达载体中,构建了毓表达质粒,并在多种大肠杆菌中进行了表达研究。结果:在详细探索到达条件的基础上,经温敏诱导,成功地在大肠杆菌AR68中表达了N端融合ProteinA BC domain的人ACAT羧基末端包含第二个跨膜区的片段,表达量约20mg/L 相似文献
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目的利用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)mRNA的表达。探讨胰岛素和高糖对人THP-1细胞分化的巨噬细胞ACAT-1mRNA表达的影响。方法体外培养人单核细胞株THP-1细胞,由佛波醇肉豆蔻酸乙酸盐(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由胰岛素和高糖共同干预不同时间(0、6、12、24、48h),用实时定量PCR检测ACAT-1mRNA表达。结果胰岛素和高糖共同作用不同时间后巨噬细胞ACAT-1mRNA的表达量间差别有显著性意义(P<0.01),作用12h与0、6、24、48h的ACAT-1mRNA表达量间差别均有显著性意义(P<0.01),作用48h的ACAT-1mRNA表达量与0h相比差别无显著性意义(P>0.05)。结论胰岛素和高糖共同作用下,巨噬细胞ACAT-1mRNA表达逐渐增加,12h达到高峰,然后逐渐下降,48h恢复到0h时水平。成功建立和应用实时定量PCR检测巨噬细胞ACAT-1mRNA水平是准确评价巨噬细胞功能的方法之一。 相似文献
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目的 研究高热量、高脂肪饮食对幼龄大鼠血清低密度脂蛋白(LDL)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及脂肪组织中肿瘤坏死因子—α(TNF—α)的影响.探讨高能、高脂饮食对幼龄大鼠脂代谢的影响。方法 采用高热量、高脂肪饲料饲养21日龄SD大鼠8周.检测大鼠血清LDL、ox-LDL及脂肪组织中TNF—α的浓度。结果 实验组ox-LDL、LDL、TNF-α较正常对照组显著升高.ox-LDL水平与LDL、TNF-α水平呈一定程度的正相关。结论 高热量、高脂肪饮食造成了幼龄大鼠ox-LDL水平升高.TNF-α的表达量增高.脂质代谢紊乱与免疫炎性反应协同作用可能导致幼龄大鼠处于亚临床状态的动脉粥样硬化,增加了成年后患动脉粥样硬化的危险性。 相似文献
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目的:阐明低密度脂蛋白(LDL)分子颗粒与脑动脉粥样硬化之间的内在关系。方法:以胆固醇负荷家兔为动物模型,从血浆LDL的脂质生化学和超微形态学的角度对其进行动态观察。结果:随着胆固醇负荷时间的增加,血浆LDL中脂质过氧化物(LPO)和载脂蛋白B(ApoB)的含量逐渐增加,血浆LDL分子颗粒也明显增大。结论:血浆LDL分子颗粒的增大可能是引起脑动脉粥样硬化形成的原因之一。因此,膳食结构的改变可以预防和阻止脑动脉粥样硬化的形成。 相似文献
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目的:比较不同温度以聚乙烯硫酸(PVS)沉淀法分离血清脂蛋白的效果,并观察温度对低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定值的影响。方法:选取6℃,20℃,30℃条件下,用PVS作沉淀剂对37份血清标本及低密度脂蛋白胆固醇定值血清进行沉淀分离,取上清液测定胆固醇含量,用定值血清原液做标准液计算LDL-C值。结果:用定值血清原液做标准计算LDL-C值,37份标本均值6℃比20℃高5.56%,20℃比30℃高6.83%;用相同温度沉淀处理的定值血清上清液做标准计算LDL-C值,37份标本均值6℃比20℃高3.11%,20℃比30℃高1.69%。结论:温度对PVS沉淀分离血清脂蛋白的效果有影响,使用同条件沉淀处理的定值血清做标准测定LDL-C值较好。 相似文献
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Zhu-qin Zhang Hou-zao Chen Rui-feng Yang Ran Zhang Yu-yan Jia Yang Xi De-pei Liu Chih-chuan Liang 《中国医学科学杂志(英文版)》2010,25(4):222-227
Objective To verify the regulation of acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 2 (ACAT 2), which is associated with cholesterol metabolism, by saturated fatty acids (SFAs). Methods Palmitic acid (PA), the most abundant saturated fatty acid in plasma, and oleic acid (OA), a widely distributed unsaturated fatty acid, were used to treat hepatic cells HepG2, HuH7, and mouse primary hepatocytes. In addition, PA at different concentrations and PA treatment at different durations were applied in HepG2 cells. In in vivo experiment, three-month male C57/BL6 mice were fed with control diet and SFA diet containing hydrogenated coconut oil rich of SFAs. The mRNA level of ACAT2 in those hepatic cells and the mouse livers was detected with real-time polymerase chain reaction (PCR). Results In the three types of hepatic cells treated with PA, that SFA induced significant increase of ACAT2 expression (P〈0.01), whereas treatment with OA showed no significant effect. That effect of PA was noticed gradually rising along with the increase of PA concentration and the extension of PA treatment duration (both P〈0.05). SFA diet feeding in mice resulted in a short-term and transient increase of ACAT2 expression in vivo, with a peak level appearing in the mice fed with SFA diet for two days (P〈0.05). Conclusion SFA may regulate ACAT2 expression in human and mouse hepatic cells and in mouse livers. 相似文献
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内源性高甘油三酯血症患者血浆VLDL、LDL及HDL对血小板聚集功能的影响 总被引:3,自引:2,他引:1
目的 研究内源性高甘油三酯血症 (HTG)患者血浆极低密度脂蛋白 (VL DL )、低密度脂蛋白 (L DL )及高密度脂蛋白 (HDL )对血小板聚集功能的影响。方法 对 2 1例内源性高甘油三酯血症患者与 2 1例正常对照者用一次性密度梯度超速离心法分离血浆 VL DL、L DL及 HDL。测定这三种脂蛋白的 2 34nm吸光度 (A2 34 )、电泳迁移率 (REM)及硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS)含量。分别将这三种脂蛋白加入由正常人新鲜血浆构成的反应系统中 ,用血小板聚集仪分别测定 ADP诱导的血小板 5 min最大聚集率。结果 内源性 HTG患者血浆 TG含量平均升高 2 .73倍 ,HDL - C下降 1.71倍 ,同时 L PO升高 1.2 2倍 ;HTG组 VL DL、L DL及 HDL的 REM、A2 34 、TBARS含量均较对照组显著增加 (P<0 .0 1) ,表明内源性 HTG患者血浆 VL DL、L DL及 HDL均发生了氧化修饰生成Ox- VL DL、Ox- L DL及 Ox- HDL。血小板聚集率在分别加入 HTG组患者的 VL DL、L DL及 HDL后均比加入正常组相应脂蛋白明显增加 (P<0 .0 5及 P<0 .0 1)。相关分析表明 ,HTG- L DL及 HTG- HDL A2 34 、REM及 TBARS含量与血小板聚集率呈正相关 (P<0 .0 1)。结论 HTG患者血浆 VL DL、L DL及 HDL发生了氧化修饰 ,并使血小板聚集增加 相似文献
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体外培养人脐静脉内皮细胞,观察拉米普利酸对由Cu2 、内皮细胞氧化修饰的LDL损伤内皮细胞的保护作用及与NO、cGMP的关系。结果发现:OLDL损伤内皮细胞,使MDA升高,NO、cGMP下降。拉米普利酸能有效对抗OLDL损伤内皮细胞的作用,降低MDA,升高NO、cGMP。一氧化氮合成酶拮抗剂硝基左旋精氨酸(N-L-Arg)能加强OLDL的损伤效应,且能部分拮抗拉米普利酸的保护作用。结果提示:拉米普利酸对OLDL损伤血管内皮细胞的保护作用与其促进内皮细胞NO合成和释放有关。 相似文献
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IntroductionIncreasingevidencesuggeststhatoxidizedLDL(OX-LDL)playsanimportantroleinthedevelopmentofatherosclerosis(AS).Protec... 相似文献
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【目的】研究在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导作用下,ATP结合盒转运子A1(ABCA1)对巨噬细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞化学趋向蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白质及白介素-1β(IL-1β)蛋白质表达的影响,在细胞水平证实ABCA1对动脉粥样硬化的影响。【方法】用氟波酯(PMA)刺激THP-1细胞使之转变为巨噬细胞,Ox-LDL(30μg/mL)刺激3、6、12、24h后,以荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及酶联免疫吸附法(ELISA)检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β mRNA和蛋白质表达量;用反义寡核苷酸(100nmol/L)抑制ABCA1的表达,观察Ox-LDL刺激下上述指标的改变。【结果】给予Ox-LDL刺激后,巨噬细胞ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白及IL-1β蛋白质表达均增高;给予反义寡核苷酸转染后Ox-LDL刺激3、6h,上述指标的mRNA表达降低(P<0.01),12、24h蛋白质表达降低(P<0.01)。【结论】在巨噬细胞,ABCA1可增加Ox-LDL诱导的炎症因子表达,参与动脉粥样硬化的发生。 相似文献
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天然和氧化极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 探讨天然和氧化极低密度脂蛋白(n-VLDL,ox-VLDL)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)的影响。方法 将n-VLDL和ox-VLDL作用于培养的HUVEC,用细胞酶联免疫吸附试验(cell ELISA)和单核细胞粘附试验检测VCAM-1蛋白在HUVEC的表达,用原位分子杂交检测VCAM-1 mRNA的表达。结果 正常培养的HUVEC表达VCAM-1,n-VLDL和ox-VLDL促进HUVEC表达VCAM-1,尤以ox-VLDL作用更强。单核细胞粘附试验显示,n-VLDL和ox-VLDL促进单核细胞向HUVEC粘附。结论 天然和氧化极低密度脂蛋白可能通过增强血管内皮细胞表达VCAM-1而促进血液单核细胞粘附于血管壁,从而在动脉粥样硬化的早期病变中起重要作用。 相似文献
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Ox-LDL诱导血管内皮细胞表达LOX-1 总被引:8,自引:0,他引:8
[目的]探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)作为氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的特异性受体在摄取ox-LDL后对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达LOX-1的影响以及LOX-1在ox-LDL诱导其自身表达中所起的作用.[方法]用天然低密度脂蛋白(n-LDL)、LOX-1的受体阻断剂聚肌苷酸[poly(I)]250μg/mL和爱兰苔胶(carrageenan)以及不同质量浓度的ox-LDL(0,10,20,50,100 μg/mL)与HUVECs作用于不同的时间(0,6,12,24,36 h),用Realtime RT-PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平,用Western blot测定LOX-1蛋白表达水平,并比较加入LOX-1阻断剂前后LOX-1表达的变化.[结果]在HUVECs中加入不同质量浓度的ox-LDL(0,10,20,50,100μg/mL),各组剂量的ox-LDL都可以增加LOX-1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),在10~50 μg/mL的剂量范围内有明显的剂量-效应关系.但n-LDL对LOX-1的表达无影响.随着ox-LDL与HUVECs作用时间的延长,LOX-1 mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.01),在6~24 h内呈明显的时间-效应关系(P<0.01).HUVECs预先与250 μg/mL的poly(I)或carrageenan作用2 h,然后再加入50 μg/mL的ox-LDL作用24 h.poly(I)和carrageenan都可以显著抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).[结论]Ox-LDL可以诱导HUVECs LOX-1的表达,该诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分拮抗.表明LOX-1不仅特异性地结合ox-LDL,而且介导ox-LDL对LOX-1表达的上调作用. 相似文献