一种新的肿瘤相关蛋白-OVA12和抗体制备及其初步应用

目的　制备原核表达的OVA12纯化蛋白 ,研究正常人与肿瘤患者血清中抗OVA12抗体水平的差异。方法　克隆OVA12的cDNA至pGEMT载体中 ,经测序确证后 ,将该基因插入原核表达载体pET32a( )中 ,并转化至E .coli表达菌BL2 1(DE3)中 ,诱导 6×His融合蛋白表达 ,经Ni2 亲和层析及胶回收技术纯化蛋白 ,并将蛋白免疫动物制备兔抗OVA12蛋白抗体 ;采用ELISA、Dotblot、Westernblot法比较正常人及肿瘤患者血清中抗体水平的差异。结果　获得纯化OVA12蛋白及高滴度的兔抗血清 ;ELISA法测定显示 ,正常人组OD均值为 0 17± 0 0 7,肿瘤患者组OD均值为0 32± 0 15 ,两组之间有显著性差异 (P <0 0 0 0 1) ,并选择其中样本经Westernblot、Dotblot加以进一步证实。结论　成功克隆OVA12基因 ,并获得纯OVA12蛋白和高滴度的兔抗血清 ;ELISA等方法测定肿瘤患者与正常人血清中OVA12抗体水平有明显差异 ,为临床检测的应用奠定基础。     

肿瘤特异抗原和相关抗原的研究现状及检测

恶性肿瘤“早期诊断”的概念应是针对无症状的“健康”者而言,但这又何其艰难,一是恶性肿瘤除个别器官(如心脏)较少发病之外,几乎在人体各个器官、组织皆可出现;二是在发病直至晚期无任何自觉症状。但是,运用现代生物医学技术能否早些发现一些容易检查出的癌症呢?无疑这是摆在我们面前亟待解决的问题。肿瘤抗原肿瘤细胞是由正常细胞转化而来,基本属于自我免疫耐受范围之内,与正常细胞不同的是高速占位性增殖、浸润与转移。这种破坏性的细胞生物性能,有无新生的异常细胞成分控制呢?目前的回答是肯定的。但因其为逃逸免疫识别,而异常抗原变化…     

人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位预测

目的:预测人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位。方法:B细胞表位预测,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、极性)预测为基础,结合ABCpred预测结果,并经二级结构预测筛选等综合分析。结果:OVA66的B细胞表位可能位于209-216,266-275,294-301,362-368和391-396氨基酸残基的区域内或附近。结论:该结果对应用合成肽抗原进行肿瘤患者的早期诊断研究具有重要指导意义。     

一个新的肿瘤相关抗原p62和肝癌关系的研究进展

多数研究均已表明癌症病人的血清中含有针对一组特异性自身抗原的抗体，这一组特异性的抗原被称为肿瘤相关抗原(TAA)。肝癌是一种具有独特临床特征的肿瘤，在临床上可以发现一组从癌症前期一直到癌症等各个不同时期的病人。研究发现：1／3的肝癌病人血清中存在有自身抗体，并且在某些从慢性肝病发展成肝癌的病人血清中可伴随有新的自身抗体出现，这些新的自身抗体可能是机体针对细胞内参与细胞癌变过程中某些细胞内分子的反应。我们最近通过用一份含有自身抗体的肝癌病人血清筛选cDNA基因表达文库发现了一个新的被称为p62的肿瘤相关抗原。进一步研究发现，p62是一个存在于细胞浆中的蛋白质，它结合在编码人类二型类生长因子(IGF-Ⅱ)的mRNA上。以往研究发现IGF-Ⅱ在肝癌组织中有过量表达，并且在转基因动物模型中可引起动物肿瘤。p62的自身抗体在肝癌病人中的出现率为21％。p62抗原的表达与调节发育有关，其主要在胎肝而非成人肝脏中表达。我们一项最新的研究表明p62在大约30％的肝癌组织中有表达，这提示p62可能通过调节IGF-Ⅱ的表达而在肝癌或其它类型的肿瘤发生中起作用。本文将就肿瘤相关抗原p62有关的最新研究进展作一简要综述。     

肿瘤相关抗原p16的表达和纯化及其在癌症检测中的应用

肿瘤抑制蛋白p16是一个细胞cyclin依赖的细胞激酶抑制因子，具有调节细胞分裂周期的重要功能，p16基因的突变与肿瘤发生密切相关。以往的研究表明与细胞恶性转变有关联的一些蛋白如p53，c—mye，p62和survivin等可以诱发机体产生自身抗体，而这些自身抗体可以作为监测肿瘤发展的标志。是否血清中p16抗体也可作为一个肿瘤诊断的标志仍需要进行评价。本研究用GST融合蛋白纯化系统对体外表达的p16重组蛋白进行纯化，并进一步将其用做肿瘤抗原对癌症病人血清中存在的p16抗体进行检测。初步结果表明在多种肿瘤病人的血清中都可检测到p16抗体。由于本研究使用的样本数有限，是否p16抗体可以作为肿瘤的一个诊断标志仍需要做进一步的研究证实。     

联合检测血清肿瘤相关抗原在乳腺癌诊断中的应用

目的分析联合检测血清肿瘤相关抗原CA153、CA125、组织多肽特异性抗原（TPs）和骨桥蛋白（OPN）在乳腺癌诊断中的幄床应用价值。方法选取我院乳腺科154倒乳腺癌患者和40倒乳腺良性肿瘤患者为研究对象,所有患者全部检测血清肿瘤相关抗原（CA153、CA125、TPS、OPN）,其中,CA153、CA125、TPS采用电化学发光法检测,OPN采用酶联免疫吸附试验法（EusA）检测。结果乳腺癌组与乳腺良性肿瘤组血清肿瘤相关抗原浓度比较有统计学意义（P〈0．01）,CA153、CA125、TPS、OPN诊断乳腺癌的敏感性分别为：63．O％、60．4％、68．2％、64．9％;特异性分剐为：95．O％、90．O％、92．5％、92．5％。联合检测敏感性明显提高,高达96．8％。结论联合检测血清肿瘤相关抗原可明显提高乳腺癌诊断的敏感性,减少漏诊,具有重要的临床应用价值。     

肿瘤抗原特异性细胞毒T细胞和肿瘤免疫治疗

肿瘤抗原特异性细胞毒T细胞(CTL)是重要的抗肿瘤细胞。本文介绍了抗原呈递及CTL识别的分子基础，并对肿瘤相关抗原(TAA)及T细胞表位的鉴定、肿瘤相关抗原肽诱导特异性CTL应答的免疫原性、肿瘤相关抗原肽疫苗治疗肿瘤的原理以及T细胞免疫应用前景做一综述。     

应用肿瘤相关抗原P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的肽抗原检测非小细胞肺癌患者的自身抗体

目的 本研究主要探讨肿瘤相关抗原(TAAs)P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的自身抗体及其组合在非小细胞肺癌(NSCLC)检测中的潜在价值。方法 应用免疫信息学数据库和免疫学软件设计并用固相合成法合成P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的肽抗原(hAgs)。收集221名NSCLC患者和243名健康人的血标本,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测NSCLC患者和健康人血清中P53、IMPDH、LAMR1和ENO1自身抗体的水平,对不同病理类型及分期的NSCLC自身抗体的水平进行分析。结果 NSCLC患者血清中P53、IMPDH、LAMR1和ENO1自身抗体水平均显著上调(P<0.001),在NSCLC腺癌患者血清中的水平明显高于鳞癌(P<0.05);Ⅰ期NSCLC患者的P53、IMPDH、LAMR1和ENO1的自身抗体水平明显高于健康对照组(P<0.001)。结论 肿瘤相关抗原P53、IMPDH、LAMR1和ENO1自身抗体,具有NSCLC的诊断潜能,同时显示出早期NSCLC筛查的潜能。     

梅毒螺旋体嵌合抗原的克隆表达及其临床应用

目的 在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体Tp15—17嵌合抗原,用于临床检测梅毒感染。方法 利用PCR法从Tp全基因组中分别扩增目的基因Tp15和Tp17,用T4DNA连接酶连接后,克隆进表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-6P-1＋Tp15-17,在大肠埃希菌中表达重组Tp嵌合蛋白,重组蛋白经亲和层析柱纯化后包被微孔板,初步建立间接ELISA法检测血清中的抗Tp抗体。结果 重组嵌合抗原获得了高效表达,免疫印迹试验显示重组抗原具有很强的抗原性。用重组嵌合抗原建立间接ELISA法,对梅毒螺旋体抗体阳性参比血清及梅毒患者血清的检测符合率100％。结论 重组梅毒螺旋体嵌合抗原Tpl5—17能够作为梅毒螺旋体诊断性ELISA抗原。     

建立夹心ELISA法测定纤维蛋白（原）降解产物E碎片的初步临床应用

目的为探索纤维蛋白（原）Ｅ碎片（ＦＤＰ－Ｅ）测定的临床意义。方法通过自制ＦＤＰ－Ｅ单克隆抗体建立夹心ＥＬＩＳＡ测定ＦＤＰ－Ｅ碎片的含量，同时结合Ｄ－Ｄｉｍｅｒ指标，测定２２例成人组，１５例小儿组以及４２例肝病组，４７例小儿肾脏疾病组患者。结果肝病和小儿肾脏疾病患者ＦＤＰ－Ｅ、Ｄ－Ｄｉｍｅｒ均明显升高，两者呈显著正相关（ｒ＝０．７８３６、０．６９１７）。结论提示ＦＤＰ－Ｅ可能亦可作为诊断血栓性疾病和血栓前状态的纤溶系统的分子标志物     

肿瘤微环境下HMSC分化为肿瘤相关成纤维细胞及其对肿瘤生长作用的观察

摘要：目的：鉴定人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cell,HMSC）在肿瘤微环境下分化为肿瘤相关成纤维细胞（tumor associated fibroblast,TAF）及对肿瘤生长作用的观察。 方法：用Transwell实验鉴定HMSC向人胃腺癌细胞株（SGC-7901）迁移的能力。对与人胃癌组织或SGC-7901培养上清液（TCM）长期共培养后的HMSC细胞,用免疫荧光染色检测肌动蛋白微丝(F-actin)的表达、免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及波形蛋白（vimentin）的表达。用实时定量PCR法检测与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞中α-SMA表达水平。分别以SGC-7901细胞、SGC-7901细胞＋HMSC细胞、胃癌组织与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞、TCM与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞接种裸鼠,构建裸鼠致瘤模型,测定4组模型致瘤时间及瘤体大小。 结果：Transwell实验结果表明HMSC在肿瘤微环境诱导下具有向肿瘤迁移的能力,诱导后的HMSC细胞高表达TAF细胞表面特征蛋白F-actin、α-SMA及vimentin,实时定量PCR结果表明与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞α-SMA mRNA表达水平分别为(0.58±0.05)和(0.52±0.06),与对照组(0.35±0.04)相比明显增高（F=4.72,F=5.31,P均<0.05）。 裸鼠致瘤模型显示经肿瘤微环境诱导后的TAF可促进体内肿瘤生长。 结论：肿瘤微环境诱导下HMSC活化并可分化为TAF,并对肿瘤生长起到促进作用。     

慢性乙型肝炎肿瘤相关抗原与肝纤维化指标相关性的临床研究

目的探讨慢性病毒性肝炎肿瘤相关抗原与肝纤维化指标的关系。方法对51例慢性乙型肝炎病毒感染者的血清进行检测,检测指标包括血清肿瘤相关抗原[癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）、CA19—9、CA72—4]、肝纤四项[透明质酸钠（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（ⅣC）、Ⅲ型前胶原（PⅢNP）]及肝功能[总胆红素（TB）、直接胆红素（DB）、间接胆红素（IB）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）],并对结果进行统计学分析。结果CEA、CA125与HA、LN、ⅣC的血清指标分别有相关关系,且CA19—9与肝纤四项的相关关系有统计学意义。另外,CA19—9、CA125与TB、DB、IB、ALT也有相关关系。结论肿瘤相关抗原CEA、CA125、CA19—9检测常用于早期发现恶性肿瘤,对于慢性病毒性肝炎患者,这三项指标的升高可能不代表存在恶性肿瘤,而与慢性肝炎纤维化和炎症程度密切相关。     

流式细胞仪检测白细胞胞浆内抗原髓过氧化物酶的实验研究及其应用

目的评价流式细胞仪检测胞浆内抗原髓过氧化物酶（MPO）的方法,探讨实验中各因素对检测结果的影响。方法以HL-60细胞为模型,多参数流式细胞仪分析,比较FACS、Fix＆Perm、Fixation＆Permeabiliza-tion 3种破膜剂处理及不同处理时间、不同荧光染料对实验结果的影响。检测正常人和急性白血病患者的MPO表达情况。结果FACS破膜剂对细胞的前向散射角/侧向散射角（FSC/SSC）影响最小,相对荧光强度（RFI）明显高于其他两者。3种破膜剂在破膜时间15 min时均可达到最佳效果。藻红蛋白（PE）标记的MPO抗体在荧光强度上明显优于异硫氰酸荧光素（FITC）。41例初发急性白血病患者和20例非白血病患者骨髓检测结果证实,MPO为急性髓系白血病诊断中最为敏感的髓系抗原。结论流式细胞仪检测MPO的标准推荐方法：应用FACS破膜剂15 min,标本必须当天完成检测,尽量采用PE标记的MPO抗体。MPO对急性白血病的诊断和分型非常重要。     

T抗原在胃癌组织中的表达及预后价值

目的 研究T抗原在胃癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系,并探讨其与胃癌术后生存率的关系.方法 应用免疫组化Envision法检测T抗原在胃癌中的表达情况,分析其与胃癌临床病理指标的关系及与胃癌术后生存率的关系.结果 106例胃癌组织中T抗原的阳性率为56.6%(60/106),而36例胃良性溃疡组织中无1例T抗原表达阳性;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、lV期胃癌组织中T抗原阳性率分别为23.1%(3/13)、61.3%(19/31)、59.1%(26/44)、66.7%(12/18),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ期明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);高分化、中分化、低分化胃癌组织中T抗原阳性率分别为35.3%(12/34)、60.7%(17/28)、70.5%(31/44),呈逐渐升高的趋势,中分化、低分化与高分化相比差异有统计学意义(P<0.05);胃癌中伴有淋巴结转移者T抗原阳性率为74.2%(66/89)、无淋巴转移者为35.3%(6/17),两者比较差异有统计学意义(P<0.01);胃癌中伴有肝转移者T抗原阳性率为100%(8/8)、无肝转移者为53.1%(52/98),两者比较差异有统计学意义(P <0.05);胃癌中伴有腹膜转移者T抗原阳性率为90.0%(9/10),无转移者为53.1%(51/96),两者比较差异有统计学意义(P <0.06);T抗原的表达与胃癌的部位无关(P>0.05);T抗原阳性与T抗原阴性患者术后生存率相比,Ⅰ、Ⅱ期差异无统计学意义,而Ⅲ、Ⅳ期差异有统计学意义(均P<0.05).结论 T抗原在胃癌有高表达而在良性溃疡中无表达,T抗原的表达与胃癌的部位无关,T抗原的表达随着胃癌的分期、分化及淋巴结、肝、腹膜转移而升高,T抗原表达的胃癌患者术后生存率差,因此T抗原可能成为胃癌预后判断的一个良好指标.     

重组Kinectin蛋白的表达、纯化及应用研究

目的优化重组kinectin蛋白的诱导表达及纯化条件;探讨用其致敏的树突状细胞(DC)对自体T淋巴细胞增殖能力的影响。方法以pMAL-C2为载体构建重组质粒,并转入TB1宿主菌。从IPTG加入时机、诱导温度、诱导时间及IPTG浓度方面对工程菌的诱导条件进行优化;过Amylose-resin亲和层析柱对诱导产物进行分离纯化。用获取的MBP-kinectin融合蛋白致敏从人外周血中分离培养的DC,并用ELISA检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法检测致敏DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。结果 工程菌在37℃振荡培养2个小时后加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,降低温度到34℃继续诱导3个小时,可明显提高诱导效率;所得MBP-kinectin与DC共培养上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,均高于麦芽糖结合蛋白(MBP)组和空白对照组,且差异有统计学意义。结论pMAL-C2载体可用于构建kinectin重组质粒;通过对诱导条件的优化,可获得较高的诱导效率;所得MBP-kinectin融合蛋白能致敏DC并具有很强的刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。