细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡及其周期特异性分析

目的分析细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的时间效应及其细胞周期的特异性.方法 (1)利用透射电镜观察细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时凋亡小体的形成;(2)应用流式细胞仪技术检测细胞色素C诱导HL-60细胞的凋亡率并分析其凋亡的时-效关系以及凋亡与细胞周期的关系.结果 (1)细胞色素C作用HL-60细胞24小时发生凋亡,形成凋亡小体;(2)细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的作用体现一定的时间效应,作用时间不同,诱导凋亡率亦不相同,其中作用24小时凋亡率最高;(3)细胞色素C诱导HL-60凋亡的作用具有细胞周期特异性,随凋亡率升高,S期和G2期细胞比例随之下降,且S期细胞比例与凋亡率二者呈显著负性关系(r=0.718,P＜0.01).结论细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期密切相关,其周期特异性具有一定的实际意义.     

放射诱导HL-60细胞凋亡的流式细胞计量术分析

目的　定性和定量地分析放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡。　方法　以人类白血病细胞系ＨＬ６０ 为材料,应用光学显微镜和电子显微镜及琼脂糖电泳定性分析６０ Ｃｏ 放射线诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡的发生,应用ＤＮＡ流式细胞计量术和末端转移酶（ＴｄＴ） 介导的缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ） 的流式细胞定量检测ＨＬ６０ 细胞凋亡。　结果　（１） 放射后ＨＬ６０ 出现细胞体积缩小,染色质固缩致密化、边缘化,染色体断裂,凋亡小体和细胞膜保持完整等形态学特征。（２） 琼脂糖电泳表现为特征性ＤＮＡ“梯谱”。（３）流式细胞计量术发现放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡在照射后６ｈ 已较明显,而且细胞凋亡百分比随着照射剂量增加而增加。ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡百分比值比ＤＮＡ流式细胞分析的方法得到的值要小,但差异无显著意义。　结论　流式细胞计量术结合细胞形态学检查和（ 或） 琼脂糖电泳能较好、简便、迅速地分析放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡     

131Ⅰ-GMCSF诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期阻滞的研究

目的观察和探讨131Ⅰ-GMCSF诱导HL-60细胞凋亡及其与细胞周期的关系.方法采用体外放射免疫治疗模型,通过MTT比色法、TUNEL来研究131Ⅰ-GMCSF辐射后HL-60细胞的存活率、凋亡率的改变;用流式细胞术及免疫细胞化学方法细胞周期的改变.结果放射性浓度≥18.5×108 Bq/L时HL-60细胞存活率显著下降.131Ⅰ-GMCSF能致HL-60细胞凋亡、细胞发生G2/M期阻滞.结论 GMCSF作为载体携带131Ⅰ能诱导HL-60细胞凋亡,凋亡与细胞发生G2/M期阻滞有关.     

~(131)I-GMCSF诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期阻滞的研究

目的　观察和探讨1 31 I-GMCSF诱导HL - 6 0细胞凋亡及其与细胞周期的关系。方法　采用体外放射免疫治疗模型,通过MTT比色法、TUNEL来研究1 31 I -GMCSF辐射后HL - 6 0细胞的存活率、凋亡率的改变;用流式细胞术及免疫细胞化学方法细胞周期的改变。结果　放射性浓度≥18.5×10 8Bq/L时HL - 6 0细胞存活率显著下降。1 31 I -GMCSF能致HL - 6 0细胞凋亡、细胞发生G2 /M期阻滞。结论　GMCSF作为载体携带1 31 I能诱导HL - 6 0细胞凋亡,凋亡与细胞发生G2 /M期阻滞有关。     

榄香烯诱导HL-60细胞程序死亡

药物学研究表明诱导肿瘤细胞程序死亡／凋亡(apoptosis)可能是许多化疗药物杀伤肿瘤细胞的机制之一，细胞凋亡与细胞坏死有本质区别，凋亡的特征有质膜保持完整性，核染色质固缩，内源性核酸内切酶激活将染色质DNA降解成寡聚核小体，电泳带谱表现为特征性梯状带。榄香烯(elemene)系我国自行研制的抗癌新药。     

细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡及其与细胞周期关系分析

目的　分析细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡的时间效应及其与细胞周期的关系。方法　 (1)利用透射电镜观察细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡时凋亡小体的形成。 (2 )应用流式细胞仪技术检测细胞色素 C诱导 HL-6 0细胞的凋亡率并分析其凋亡的时 -效关系以及凋亡与细胞周期的关系。结果　 (1)细胞色素 C作用 HL- 6 0细胞2 4小时出现凋亡 ,形成凋亡小体。 (2 )细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡的作用体现一定的时间效应 ,8～ 2 4小时作用时间范围内 ,凋亡率随时间延长而明显增高。 (3)细胞色素 C诱导 HL- 6 0凋亡与细胞周期密切相关 ,随凋亡率升高 ,S期和 G2 期细胞比例随之下降 ,且 S期细胞比例与凋亡率二者呈显著负相关 (r=- 0 .718,P<0 .0 1)。结论　细胞色素 C诱导 HL- 6 0细胞凋亡与细胞周期密切相关 ,其周期特异性具有一定的实际意义。     

S-Trityl-L-Cysteine诱导HL-60细胞有丝分裂阻滞和凋亡

目的研究 S-三苯甲基-L-半胱氨酸（S-Trityl-L-Cysteine,STLC）对急性白血病 HL-60细胞有丝分裂阻滞和凋亡的影响,初步探讨药物作用下HL-60细胞有丝分裂阻滞和凋亡间的因果关系。方法将HL 60细胞分成不加药对照组和不同剂量 (1、2.5、5、10、50、100 μmol/L) STLC加药组,药物作用一定时间后,台盼蓝染色观察HL-60细胞活性变化, MTT法检测其对HL 60细胞的抑制效应, 免疫荧光染色观察细胞及其核的特征,流式细胞术分析细胞周期和亚二倍体峰的变化,Annexin-v/PI双染检测药物处理前后正常骨髓细胞凋亡比率。结果MTT和台盼蓝染色实验显示STLC抑制HL-60细胞生长并致其死亡;免疫荧光染色见核破裂及凋亡小体和细胞体积增大等典型有丝分裂灾变细胞凋亡现象;细胞周期和凋亡分析表明 STLC 致HL-60细胞凋亡比率与药物浓度和作用时间呈正相关,致G₂/M期阻滞比率24 h和48 h随药物浓度增加而升高,而72 h无明显变化,进一步研究发现STLC处理早期即可致G₂/M期有丝分裂阻滞和凋亡的同时发生,撤除药物作用后有丝分裂阻滞呈可逆性恢复,STLC作用下正常骨髓细胞凋亡比率无明显变化。结论STLC诱导HL-60细胞阻滞在G₂/M期并致其凋亡,显示较强的抗有丝分裂和抗肿瘤效果,药物处理早期有丝分裂阻滞和凋亡同时发生提示尚有该药物作用新机制的存在。     

抗癌药物诱导人B淋巴细胞白血病细胞的凋亡及周期特异性

目的探讨抗癌药物对人Ｂ淋巴细胞白血病细胞株Ｎａｌｍ－６细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）的影响及周期特异性。方法临床常用的抗癌药物与Ｎａｌｍ－６细胞相互作用８～２４小时后,利用低倍体ＤＮＡ－ＦＣＭ测定法和ＴｄＴ测定＋ＤＮＡ染色法进行检测。结果ＡＤＲ、ＶＰ１６、ＣＰＴ、ＭＴＸ和Ａｒａ－Ｃ能明显诱导细胞凋亡,主要作用于Ｓ期。ＣＰＭ、６ＭＰ和ＰＲＤ则有较低的凋亡细胞诱导率,ＣＰＭ在大剂量时主要引起细胞坏死。６ＭＰ诱导Ｇ１和Ｓ期细胞凋亡,ＰＲＤ诱导Ｇ１期细胞凋亡,ＣＰＭ诱导凋亡作用无明显的周期特异性。结论抗癌药物能诱导人Ｂ淋巴白血病细胞株Ｎａｌｍ－６细胞凋亡。低倍体ＤＮＡ－ＦＣＭ测定法能检测细胞的凋亡率,ＴｄＴ测定＋ＤＮＡ染色法能呈现凋亡细胞与细胞周期的关系。临床上可利用此两种方法检测肿瘤细胞的凋亡率,抗癌药物的疗效及其周期特异性。从而有助于化疗方案的设计及预后的评估。     

三氧化二砷诱导的结肠癌细胞凋亡及其与细胞周期的关系

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对结肠癌细胞的凋亡诱导作用及其与细胞周期的关系。方法：采用透射电镜、丫啶橙荧光染色,ＴｄＴ及流式细胞仪检测药物作用前后细胞在形态学及细胞周期２等方面的变化。结果：形态学观察发现Ａｓ２Ｏ３诱导的ＬｏＶｏ细胞死亡呈现凋亡特征,研究表明随经物作用时间延长,凋亡细胞比例逐渐增加。Ａｓ２Ｏ３在低浓度时主要干扰细胞在Ｓ期的通过,高浓度时则选择性诱导Ｓ期细胞凋亡。结论：Ａｓ２ｏ     

流式细胞术检测亚砷酸、硼替佐米对淋巴瘤细胞株细胞周期和凋亡率的影响

 目的　研究不同浓度的亚砷酸（As2O3）、硼替佐米（BOR）单用及联合应用对恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞细胞周期的影响。方法　采用流式细胞术（FCM）检测不同浓度梯度As2O3、BOR单用及联合应用对Raji细胞作用后,不同时间（24、48、72 h）G1、S期占整个细胞周期的比例以及凋亡率。结果　FCM检测细胞周期显示：As2O3使Raji细胞细胞周期阻滞在G1期,使G1期细胞占细胞周期的比例明显增高,S期明显减少,呈现剂量、时间依赖效应（P＜0.0001）,并出现明显凋亡峰。BOR对Raji细胞G1、S期所占比例与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。而两药联合组与单用As2O3组亦无明显差异（P＞0.05）。但两药联合组凋亡率由16.98 %提高到45.84 %。结论　As2O3阻抑细胞周期于G1期来对Raji细胞发挥作用,两药联合增加促凋亡作用。     

土贝母皂苷诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和细胞凋亡

背景和目的：土贝母皂苷是由传统中药土贝母块茎中分离得到的,由土贝母苷甲（79%）和土贝母苷乙（21%）组成。本研究旨在探讨土贝母皂苷抗肿瘤作用的机制。方法：MTT法检测土贝母皂苷对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA电泳图谱的变化。结果：土贝母皂苷对人宫颈癌HeLa细胞的生长具有强制作用,且这种作用呈时间剂量依赖关系,处理24、48和72h的IC50值分别为20.0、18.8和8.8μmol/L.流式细胞术分析显示,15、30、35μmol/L土贝母皂苷处理5h,HeLa细胞G2/M期细胞数从9.80%分别增加到21.90%、25.92%和27.00%;处理12h,G2/M期细胞数增加更显著,从8.20%分别增加到21.40%、31.15%和34.55%。40μmol/L土贝母皂苷处理一定时间,形态学检查发现细胞核明显皱缩、核染色质凝集边聚等特征,流式细胞术检测发现凋亡峰,DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯形条带。结论：土贝母皂苷使细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡可能在其抗肿瘤作用中具有重要意义。     

白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究

目的  探讨白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4经外源性IL-33以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）特异抑制剂（SB203580）处理72 h后,采用Annexin V/DAPI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞周期检测试剂盒检测细胞周期,Western blot 检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases 1,CDK1）蛋白表达以及p38 MAPK的磷酸化水平。结果 与对照组相比,IL-33组的HL-60和NB4细胞经IL-33作用后,细胞凋亡水平降低（P<0.05）,细胞周期中S期比例升高（P<0.001）;而SB+IL-33组细胞经SB203580和IL-33联合处理后,细胞凋亡水平高于IL-33组（P<0.05）,S期细胞的百分比低于IL-33组（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与对照组相比,IL-33组细胞的p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK） 水平和CDK1蛋白表达水平均显著增高（均P<0.05）,而SB+IL-33组的p-p38 MAPK水平以及CDK1水平较IL-33组显著下降（均P<0.05）。 结论 IL-33可通过激活p38 MAPK,抑制急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4细胞的凋亡,抑制细胞周期停滞。     

HIV-1Vpr体外诱导肿瘤细胞凋亡与细胞周期阻滞的研究

目的 研究HIV-1 Vpr诱导Hela、Lovo、HepG2细胞凋亡和G2期阻滞效果.方法 构建含有HIV-1 Vpr基因的pcDNA4-Vpr重组载体,体外转染Hela、Lovo、HepG2细胞,同时设pcDNA4-EGFP质粒转染对照组、FUGENE组和空白对照组.转染后24、48、72 h,通过甲臜化合物法检测...     

Camptothecin(CPT)和Cytosine arabinoside(Ara-C)联合应用对MOLT-4细胞株周期特异性凋亡的影响

目的以急性T淋巴细胞白血病细胞株MOLT-4为模型,探讨作用于同一细胞周期的化疗药物 Camptothecin(CPT)和Cytosine arabinoside(Ara-C)联合应用时是否具有抗癌增效作用、引起细胞凋亡的周期时相性是否发生改变及对细胞周期检测点(ckeckpoint)的影响.方法喜树碱(CPT)(0.25 μmol/L),阿糖胞苷(Ara-C)(1.00 μmol/L),及喜树碱(CPT)(0.25 μmol/L) 阿糖胞苷(Ara-C)(1.00 μmol/L) 二药共同诱导急性早幼粒白血病细胞株MOLT-4细胞4 h,分别采用激光共聚焦显微镜(Confocal)观察其细胞的形态变化,采用Sub-G1法,API法及cyclins/DNA双参数法,运用流式细胞术分析凋亡、凋亡细胞的周期时相性及CyclinE的表达规律.以Western blot印迹法检测Bcl-2蛋白的表达.结果喜树碱和阿糖胞苷联合应用时,凋亡细胞的数目明显增加,二者具有协同效应.发生凋亡的细胞大多数仍然是S期细胞.CyclinE的表达升高,bcl-2蛋白的表达降低.结论作用于同一细胞周期的化疗药物CPT和Ara-C联合应用时,具有协同效应但并不改变细胞周期的作用点(Checkpoint).CyclinE和Bcl-2蛋白似乎在药物作用时起着关键性的调节作用,并对检测点的敏感性产生重要影响.     

The effect in the KHT sarcoma of CCNU and MISO on cell cycle progression evaluated by flow-cytometry

Previous studies using the KHT sarcoma have shown that misonidazole (MISO) enhances the cytotoxicity of 1-(2-chloroethyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourea (CCNU) by as much as a factor of 2.0. In the present study flow cytometry was used to monitor the changing DNA distributions of cells dissociated from solid tumors at successive times following treatment with CCNU, applied either alone or in combination with 0.5 mg/g MISO. The proportion of cells in late S and the G2M phases of the cell cycle increased gradually after CCNU treatment. MISO did not significantly change this block in cell progression, which persisted for at least 48 hr after treatment in all cases. CCNU shows marked carbamoylating activity, which has been associated with inhibition of RNA processing and with the degree of chemopotentiation achieved with MISO. Consequently, to evaluate whether MISO chemopotentiation was influencing the RNA distributions in tumors, RNA histograms were generated using acridine orange to differentially stain cellular DNA and RNA. By 24 hr after treatment, CCNU clearly altered the distribution of RNA, but no significant differences could be detected between results obtained from drug and drug plus sensitizer treated groups. These studies demonstrate the effect of CCNU on cell cycle progression in vivo. The addition of MISO did not result in further perturbation of the total tumor population, suggesting that cell cycle redistribution does not play a major role in chemopotentiation by MISO.     

三氧化二砷诱导卵巢癌OVCAR-3细胞周期阻滞及凋亡

目的探讨As2O3对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响.方法采用MTT法及集落形成实验测定细胞的增殖活力,通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡,应用流式细胞仪进行细胞周期解析、凋亡及bcl-2蛋白表达的检测.结果As2O3呈剂量依赖性抑制OVCAR-3细胞增殖,抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)为2μmol/L.0.5～5μmol/L的As2O3作用7天,集落抑制率均在40%以上(P＜0.01).2μmol/L与5μmol/L的As2O3作用12 h后,细胞周期出现了G2/M期阻滞及亚二倍体凋亡峰,随着作用时间的延长,凋亡细胞随G2/M期细胞减少而逐渐增多.细胞形态学观察可见分裂期细胞及凋亡细胞明显增加.0.5～5μmol/L的As2O3均能下调bcl-2蛋白的表达.结论As2O3能够抑制卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖,诱导M期阻滞及细胞凋亡.