普乐林诱导HL-60细胞分化和凋亡研究

目的 :研究中药葛根的提取物普乐林对HL 6 0细胞的诱导分化和促凋亡作用。方法 :采用硝基苯唑氮兰(NBT)还原、NBT/MTT值及细胞表面抗原CD11b表达 ,观察细胞分化程度 ;通过细胞形态、DNA片段电泳、流式细胞(FCM)DNA含量分析检测细胞凋亡。结果 :80 μg .ml 1,16 0 μg .ml 1和 32 0 μg·ml-1普乐林对HL 6 0细胞具有诱导分化效应 ;且 32 0 μg .ml 1普乐林与 1μmol.L 1全反式维甲酸效果相当。 32 0 μg .ml 1和 6 40 μg.ml 1普乐林分别作用HL 6 0细胞 36h ,可出现典型的细胞凋亡形态。DNA凝胶电泳出现片段化的梯状带谱 ;普乐林同时可影响HL 6 0细胞的细胞周期进展 ,且随其浓度的增高 ,亚G1期细胞所占比例增加。结论 :普乐林具有诱导HL 6 0细胞分化及凋亡的双重作用。     

醋酸棉酚对白血病HL-60细胞凋亡及分化的影响

目的:通过醋酸棉酚(GAA)对经典白血病细胞系HL-60的研究,探索GAA治疗白血病的可能性. 方法: 用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度GAA促进HL-60细胞凋亡及诱导分化的作用. 结果: GAA在浓度》6 μmol/L时可显著抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量效应;在诱导分化浓度下(1, 4 μmol/L),GAA可促进HL-60细胞向成熟粒细胞分化(P《0.05). 结论: GAA对白血病细胞HL-60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.     

法舒地尔对HL-60细胞增殖、凋亡、分化及侵袭作用的影响

目的:探讨ROCK酶抑制剂法舒地尔对HL-60细胞增殖、凋亡、分化以及侵袭作用的影响。方法:用台盼蓝拒染实验绘制法舒地尔作用下,HL-60细胞的生长曲线;MTT法检测法舒地尔对HL-60细胞增殖抑制。应用流式细胞术CD11b抗原表达,硝基四唑氮蓝(NBT)还原实验分析法舒地尔对HL-60细胞分化影响。采用AnnexinV/PI双染试剂盒上流式细胞仪测定细胞凋亡。利用Transwell穿孔板法观察法舒地尔对HL-60细胞侵袭力的影响。结果:法舒地尔抑制HL-60细胞呈浓度和时间依赖性、法舒地尔作用于HL-60细胞12、24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为(89.65±12.45)μmol/L、(69.21±15.48)μmol/L、(65.29±20.31)μmol/L以及(58.54±10.02)μmol/L。法舒地尔诱导HL-60细胞凋亡呈时间和剂量依赖性。法舒地尔可增加HL-60细胞后硝基四唑氮蓝阳性率,上调CD11b单核分化抗原的表达。法舒地尔明显抑制HL-60细胞穿透Transwell小室,侵袭到穿孔膜外。结论:法舒地尔有抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡、促进分化及抑制侵袭等多种抗白血病作用。     

天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显。结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应。     

人白血病细胞 HL-60凋亡启动时相的亚细胞蛋白质组学研究

目的：建立全反式维甲酸（ ATRA）诱导HL-60细胞凋亡启动模型,分析凋亡启动时细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白的表达情况。方法：体外培养HL-60细胞,氮唑蓝（ MTT）比色法检HL-60细胞测增殖活性,流式细胞术（ FCM）检HL-60细胞测细胞凋亡和细胞周期分布;高速离心法分离对照组与凋亡启动时相的HL-60细胞核、膜和细胞器以及细胞质等组分蛋白;双向电泳（2-DE）HL-60细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白,图像分析软件分析2-DE图谱,筛选差异表达蛋白,并进行液相色谱串联质谱（ LC- MS/MS）鉴定。结果：ATRA明显抑制HL-60细胞增殖,并随浓度、时间的增加,抑制作用也越显著;以1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞48 h早期凋亡比例为13.21％,细胞形态也存在明显变化;筛选出22个差异表达蛋白点,其中5个蛋白在凋亡启动时表达上调,15个蛋白表达下调,2个蛋白只在凋亡启动时表达;它们的功能主要涉及与细胞凋亡相关的蛋白,与细胞分化、增殖相关的蛋白和其它蛋白。结论：1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞生长48 h,成功建立细胞凋亡启动模型;凋亡启动时相的HL-60细胞质、膜和细胞器以及细胞总蛋白的表达都存在差异,这些差异表达蛋白可能在细胞凋亡启动时起重要作用。     

维甲酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察维甲酸（ＲＡ）在体外诱导ＨＬ６０细胞（人早幼粒细胞白血病细胞株）凋亡的作用,探讨维甲酸治疗早幼粒细胞白血病的作用机制。方法：用ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段定量测定技术、流式细胞术分析及光镜和电镜观察凋亡细胞。结果：在体外培养中加维甲酸５０ｍｇ／Ｌ孵育４ｈ,ＤＮＡ片段率达５５７％±１２１％,而对照为１２５％±４９％（Ｐ＜０００１,ｎ＝９）;流式细胞术检测发现,在５０ｍｇ／Ｌ维甲酸作用下,细胞凋亡达５０％,对照为９％。电镜观察维甲酸组ＨＬ６０细胞出现典型的凋亡细胞形态改变。维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡具有剂量及时间依赖性,维甲酸作用６ｈ,出现凋亡高峰;随维甲酸浓度升高,诱导凋亡作用明显增强。在环孢素Ａ（ＣｓＡ）存在时,低浓度的维甲酸也有明显诱导ＨＬ６０细胞凋亡作用。结论：维甲酸在体外能诱导ＨＬ６０细胞凋亡,ＣｓＡ能增强维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡活性。研究提示诱导白血病细胞凋亡是维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的重要机制之一。     

拓扑替康对HL-60细胞凋亡的影响

目的:探讨拓扑替康(TPT)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响.方法:取倍增期的HL-60细胞分组培养,实验组培养液中加入0.15 μmol/L的TPT,空白对照组继续常规培养.分组培养4 h、12 h后分别采用流式细胞仪Annexin V-FITC染色及TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:分组培养4 h后,实验组细胞凋亡率为(28.57±3.16)%,高于空白对照组的(3.12±0.38)%,差异具有统计学意义(t=13.85,P=0.000 2).分组培养12 h后,实验组TUNEL阳性细胞数达38.33%,高于空白对照组的2.67%(χ2=117.08,P<0.05).结论:拓扑替康具有诱导HL-60细胞凋亡的作用.     

AsI_3-Tu与RNA诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的探讨新型砷剂配合物碘化砷-硫脲(AsI3-Tu)与RNA联用对HL-60细胞凋亡的影响。方法应用四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖,倒置显微镜观察细胞形态学变化、凯氏定氮法测定细胞蛋白质的含量、流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果①1-16/μmol/LAsI3-Tu对HL-60细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。②RNA能增强AsI3-Tu对HL-60细胞增殖的抑制作用。结论AsI3-Tu能有效诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡,RNA与AsI3-Tu联合应用能增强AsI3-Tu的作用。     

维生素K2对HL-60细胞生长及凋亡、分化的诱导作用

目的：观察维生素K2(VK2)对HL-60细胞生长及凋亡、分化的诱导作用。方法：通过四氮唑蓝比色,细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期、凋亡率及CD14的表达,观察VK2对HL-60细胞的影响。结果：HL-60细胞经10／μmol/L以上浓度的VK2作用后增殖受到抑制,10μmol/L、20μmol/L VK2作用72h后,细胞形态呈现凋亡细胞的特征。5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L VK2作用于HL-60细胞72h凋亡率分别为7．16％、11．31％、20．36％,与对照组相比差异显著。G0/G1期细胞阻滞,CD14的表达与对照组相比无差异性。结论：VK2对HL-60细胞有生长抑制作用,能诱导HL-60细胞发生凋亡,具有一定的量效和时效关系,单独使用VK2的分化作用不显著。     

足叶乙甙诱导HL-60细胞凋亡及其bcl-2基因表达

研究HL-60细胞在足叶乙甙（Vp16）诱导的细胞凋亡中bcl－2基因表达，以说明药物致调亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，DNA梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析bcl－2mRNA及其蛋白的表达水平。结果：Vp16有效地诱导HL60细胞凋亡，12h形成DNA缺口，16h出现DNA梯形片段，24h形成调亡小体，48hDNA完全降解；细胞凋亡时其bcl－2mRNA和蛋白水平都较处理前明显降低。结论:bcl－2基因表达的下调在Vp16诱导的HL-60细胞调亡中起一定作用。     

HL-60细胞诱导分化过程中酸性磷酸酶活性的变化

研究结果表明,经 DMSO 诱导的 HL—GO细胞酸性磷酸酶活性升高不到2倍,出现第Ⅰ组同工酶;经 TPA 诱导后 AcP 活性升高4～5倍,并出现Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组同工酶。超微结构观察发现,DMSO 处理的 HL—60细胞 AcP 活性局限在溶酶体及粗面内质网;TIPA 诱导的细胞 AcP 反应在溶酶体、粗面内质网、核周界及高尔基复合体膜囊等处均为阳性。结果提示,HL-60细胞 AcP 酶活性变化,对研究白血病细胞诱导分化有重要意义。     

VP-16诱导HL-60细胞凋亡的研究

探讨topoⅡ抑制剂的抗瘤机制。方法选择人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL－60为实验模型,以VP－16为诱导剂,用形态学观察、DNA电泳及流式细胞术(FCM)等方法对其凋亡情况进行了研究。 结果经VP－16处理的HL－60细胞呈典型凋亡形态学改变,出现梯状DNA条带(DNA ladder),FCM DNA直方图上G 0／G t峰前有明显的亚二倍体凋亡峰。表明经VP-16处理的HL-60细胞的确发生了凋亡,这种调亡作用对药物有浓度依赖性,但无严格时间依赖性,不需药物的持续作用,并与S期细胞降低有关。而缺乏topoⅡ的HPBL则无此作用,不受VP－16诱导而凋亡。结论诱导细胞凋亡是VP－16的抗瘤机制之一,且这种作用是由topoⅡ介导的。     

各种分化诱导剂对人白血病HL-60细胞中神经节苷脂合成及唾液酸转移酶的影响

作者采用[~(14)C]-半乳糖研究佛波酯(TPA)、二甲基亚砜(DMSO)、GM3(NeuAe-Gal-Gle-cer)等诱导HL-60细胞分化过程中神经节苷酯(Sg)合成及CMP-Neu Ac:LacCer唾液酸转移酶(ST1)活性的变化。TPA、GM3促进HL-60细胞合成[~(14)C]-Gg,也促进GM3的合成。DMSO抑制HL-60细胞合成[~(14)C]-Gg,但促进GM3的合成。各种制剂处理EL-60细胞后,均能使ST1活性升高,但GM3使ST1活性增加不明显,可能是终产物对ST1的反馈抑制。结果提示Gg(GM3)的生物合成和ST1的活性变化与HL-60细胞的分化增殖有关。     

凝集素活性在HL－60细胞内的表达

应用小鼠脾淋巴细胞凝集试验，测定了ＨＬ－６０细胞提取液内源性凝集素活性。结果表明，ＨＬ－６０细胞含有很高的内源性凝集素活性。经胰蛋白酶和半乳糖抑制试验表明，该内源性凝集素为一类糖结合蛋白，具有半乳糖特性。进一步试验结果表明，这种含内源性凝集素活性的ＨＬ－６０细胞提取液，能刺激淋巴细胞增殖、转化。这一作用可能与肿瘤免疫有关。     

乐铂对HL－60细胞程序化死亡诱导作用研究

从细胞形态、流式细胞术、－ＤＮＡ／蛋白质含量及ＤＮＡ电泳等实验证明，在相当于临床治疗剂量范围内，乐铂对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用主要为诱发白血病细胞的程序化死亡。     

尼莫地平对HL-60细胞凋亡的影响及其机制

目的研究尼莫地平(NMDP)对HL-60细胞的作用及其机制。方法取对数生长期HL-60细胞并调整细胞浓度为5×108/L,分为对照组和实验组,置24孔板培养,每孔加入HL-60细胞培养液1.5 mL,实验组各孔再加NMDP 0.01 g/L。分别培养0、8、16、24 h,通过倒置显微镜观察细胞的动态变化;采用Giemsa染色光学显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA的碎片;流式细胞仪检测DNA含量;细胞免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果实验组细胞从培养8 h起,可见不同程度的变形、出泡,细胞和小泡仍保持膜的完整性,随着培养时间延长,出泡细胞增加,细胞体积变小,部分细胞裂解;对照组细胞一直无形态学变化。Giemsa染色可见实验组细胞核膜裂解,染色质呈紫红色或蓝紫色,分割成块状,浓缩、靠近核膜,呈边集现象,并有典型的凋亡小体形成;对照组细胞保持大小一致,胞内染色质呈紫红色或蓝紫色,分布均匀。DNA凝胶电泳显示,实验组在8、16、24 h出现典型的梯形带。实验组细胞的凋亡率随时间延长而增加,自8 h起与对照组差异有显著意义(t=15.06~20.75,P<0.01)。实验组Bcl-2蛋白表达下降,16、24 h与对照组比较差异有显著意义(t=3.66、5.62,P<0.05);Bax蛋白表达升高,与对照组比较,162、4 h有显著性差异(t=4.13、7.55,P<0.01)。Bcl-2/Bax蛋白表达比值逐渐下降,与对照组比较,8、16、24 h差异皆有显著性(t=5.32~7.76,P<0.05)。结论NMDP可诱导HL-60细胞凋亡。Bcl-2/Bax蛋白比值下降,可能是NMDP诱导HL-60细胞凋亡的机制之一。     

雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

细胞毒淋巴细胞浸润与鼻咽癌细胞凋亡关系的探讨

目的 探讨细胞毒淋巴细胞浸润与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系。方法 收集未经治疗的鼻咽癌活检组织30例,采用TUNEL法定量测定鼻咽癌细胞凋亡的程度,用免疫组化的方法检测肿瘤内TIA-1阳性细胞毒淋巴细胞数。结果 按组织学分类,角化性鳞状细胞癌6例,分化型非角化性癌8例,未分化癌16例,平均凋亡指数分别为58.8、62、4和31.6。角化性鳞状细胞癌、分化型非角化性癌与未分化癌之间差异有显著性(P<0.05);每1000个癌细胞范围内浸润的TIA-1阳性细胞为8～62个,在角化性鳞状细胞癌中平均为10.2个,分化型非角化性癌中平均为20.6个,未分化癌平均为22.4个,角化性鳞状细胞癌明显低于分化型非角化性癌、未分化癌,差异有显著性(P<0.05);在分化型非角化性癌、未分化癌中,TIA-1阳性细胞多者,凋亡指数较高(r=0.4047,P<0.05)。结论 鼻咽癌细胞凋亡程度在不同组织学类型中差异有显著性;鼻咽癌组织内TIA-1阳性细胞数在不同的组织学类型中有差别;分化型非角化性癌组织中,TIA-1阳性细胞多者凋亡指数较高。说明细胞毒淋巴细胞具有促进鼻咽癌细胞凋亡的作用。     

一氧化氮对白血病HL-60细胞作用的研究

目的 :探讨NO对髓系白血病细胞HL - 6 0的作用。方法 :以SNP为NO供体 ,采用MTT法检测细胞生长抑制率 ,光镜、电镜观察细胞形态学变化 ,DNA电泳、FCM检测凋亡率等方法。结果 :SNP在 0 .5～ 4 .0mmol/L浓度范围内能明显抑制HL - 6 0细胞的生长 ,此作用有浓度和时间依赖性 ;且在作用 12h后细胞出现凋亡 ,SNP2 .0mmol/L浓度作用 36h ,凋亡率达 6 8.71% ,DNA电泳出现梯形带。NO清除剂N -乙酰半胱氨酸能显著降低SNP的这种作用 (P <0 .0 1)。结论 :NO对HL - 6 0细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。