人类血小板抗原-15系统PCR-SBT分型技术的建立

目的建立人类血小板抗原(HPA)-15系统的分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。方法采用本研究合成的引物及G&T公司的商品化试剂盒,应用PCR-SBT技术对200名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,采用第l4届ISBT血小板协作组提供的l0份质控标本以及德国Inno-train公司提供的质控样品作为平行对照,进行验证。结果 200名汉族血小板志愿捐献者HPA基因频率为HPA-15a 0.430、HPA-15b 0.570;基因分型结果与ISBT公布的结果及Inno-train公司提供的质控样品的结果完全一致。结论所建立的HPA基因PCR-SBT分型技术具有高分辨率、高通量、高精确度、能直接发现新的等位基因等特点,具有广泛的应用前景。     

人类血小板抗原HPA-15系统PCR-SSP基因分型技术的建立

本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。采用第11届国际输血协会（ISBT）血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2＋离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-15系统基因分型技术。该分型技术的准确性和可靠性,采用第11届ISBT血小板协作组提供的质控样本进行验证,同时采用本研究合成的引物及商品化试剂盒,对50名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,作为平行对照。应用本研究的方法,对第11届ISBT送检的10份考核样本进行基因分型。结果表明：基因分型结果与ISBT公布的结果完全一致。50名随机的血小板志愿捐献者,经本研究的方法及美国G＆T公司的试剂检测,基因分型的结果相符合;观察到的基因频率：HPA-15a和-15b分别为0.5100和0.4900。结论：本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景。     

应用PCR-SSP方法进行人类血小板抗原1～6系统的基因分型

目的研究采用PCR-SSP技术,建立人类血小板抗原1～6系统(HPA-1,2,3,4,5,6)的基因分型方法.方法合成18条序列特异性引物,通过调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-1～6系统同步基因分型技术.对第10届及第11届国际输血协会(ISBT)血小板基因定型协作组送检的考核样本进行盲检来验证.并应用该技术对198名深圳地区健康的血小板志愿捐献者进行基因分型.结果应用本研究的方法,对第10届及第11届ISBT送检的考核样本进行基因分型,结果与ISBT公布的结果完全一致,符合率达100%.对198名随机的血小板志愿捐献者观察到的基因频率分别是:HPA-1a和1b为0.9924和0.0076,HPA-2a和2b为0.9545和0.0455,HPA-3a和3b为0.5556和0.4444,HPA-4a和4b为0.9975和0.0025,HPA-5a和5b为0.9848和0.0152,HPA-6a和6b为0.9798和0.0202.结论本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景.     

岳阳地区无偿献血者HPA1-6,15基因分型及频率调查

目的 了解岳阳地区汉族人群血小板抗原1-6,15多态性分布及基因频率.方法 采用PCR-SSP方法对岳阳地区204名无血缘关系固定血小板无偿捐献者进行HPA1-6及HPA-15系统的基因分型.结果 岳阳地区无偿献血者HPA1-6,15基因分型未发现HPA-1bb、-2bb、-4bb、-5bb.其中基因频率占98％以上的有HPA-1aa、-4aa、-5aa,本研究首次发现HPA-6bb,说明HPA-6具有多态性,杂合程度较低.结论 岳阳地区汉族人群HPA分布具有本地人群特点,调查数据分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,HPA-3和15系统具有多态性,在同种免疫性血小板随机输注时易产生同种免疫反应.     

青岛地区汉族人群HPA-1—5,15多态性分布研究

目的研究青岛地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-5,15抗原分布多态性。方法采用PCR-SSP方法对青岛地区918名无血缘关系固定血小板无偿捐献者进行HPA1-5及HPA-15系统的基因分型.结果各被检系统等位基因频率分别是1a=0.9940,1b=0.0060,2a=0.9319,2b=0.0681,3a=0.5822,3b=0.4178,4a=0.9897,4b=0.0104,5a=0.9804,5b=0.0196,15a=0.4913,15b=0.5087;HPA基因频率分布与国内资料比较,HPA-1与北方人群(河南),HPA-2与南方人群(四川)差异有统计学意义;与台湾人群HPA-2,-4,与日本人群HPA-2,-3,-5,与美国黑人HPA-1,-2,-5,与白人HPA-1,-4,-5,-15分别有统计学显著性差异。结论青岛地区汉族人群HPA分布具有本地人群特点。本组HPA数据分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,可以作为北方汉族人群HPA基因分布频率数据库和青岛本地化血小板供者HPA资料库。     

河南汉族人群血小板抗原HPA1-16bw基因多态性研究

摘要：目的：研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。 方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。 结果：HPA1-6和HPA-15基因频率分别为1a 0.987 5,1b 0.012 5; 2a 0.946 9,2b 0.053 1; 3a 0.590 6,3b 0.409 4; 4a 0.996 9,4b 0.003 1; 5a 0.990 6,5b 0.009 4; 6a 0.981 2,6b 0.018 8;15a 0.540 6,15b 0.459 4。 HPA7-14bw,16bw仅检测到a/a等位基因,基因频率均为1.000 0。经χ²检验各系统HPA符合Hardy-Weinberg平衡法则。HPA基因分布存在种族和地区差异。 结论:河南汉族人HPA-15 和HPA-3基因型杂合率最高。HPA基因分型有助于输注血小板时降低免疫性血小板减少症的发生概率。     

使用Taqman PCR技术建立人类血小板抗原-1～5、15分型体系

目的了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1～5、15多态性分布,分析评估新的分型技术。方法利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1～5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对。结果 HPA各等位基因频率分别为HPA-1a:0.999,HPA-1b:0.001,HPA-2a:0.953,HPA-2b:0.047,HPA-3a:0.582,HPA-3b:0.418,HPA-4a:0.999,HPA-4b:0.001,HPA-5a:0.988,HPA-5b:0.012,HPA-15a:0.524,HPA-15b:0.476;有1份标本HPA-5等位基因与SSP检测结果产生差异。结论上海地区HPA各等位基因频率与国内各地区人群分布无明显差异,与中国汉族人群HPA分布情况基本吻合,实验数据经验证符合Hardy-Weinberg平衡定律,实验结果准确可靠;HPA-5差异经测序验证判断可能由PCR-SSP非特异扩增所致;TaqMan技术在HPA抗原系统分型应用中特异性高,反应时间短,具有良好的应用前景,是现有技术方法的一种重要补充。     

云南汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA基因多态性的分析

目的研究云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B基因和HPA1-17基因多态性,建立已知型血小板献血者基因数据库。方法分别采用PCR-SSOP和PCR-SSP方法对1 000名云南地区无血缘关系的汉族血小板献血者做HLA-A、B和HPA1-17系统基因分型,计算基因型频率、基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出HLA-A位点14个,HLA-B位点35个。A*02(35.81%)、A*11(35.42%)和A*24(17.72%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-A座位的主要等位基因;B*46(12.87%)、B*40(60)(10.83%)和B*15(62)(9.78%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-B座位的主要等位基因。每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a、17a基因;HPA-4a、7a-14a、16a、17a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、2、5、6主要以a/a纯合子居多,a/a基因型频率分别是0.989、0.960、0.990、0.980,没有b/b纯合子出现。在HPA1-17中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.392、0.360、0.248;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.339、0.467、0.194。经χ2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结论云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA1-17基因频率与南方汉族接近,也呈现其自身特点。应建立本地区的血小板供者分型数据库。     

血小板特异性糖蛋白抗体在血小板输注无效患者中分布的研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者的血小板特异性糖蛋白抗体的表达及PTR与血小板特异性抗原的相关性。方法采用ELISA方法检测27名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体,应用PCR-SSP的方法检测其HPA-1～17基因分型。结果 27名PTR患者的HPA基因频率为HPA-1a(0.900),1b(0.100);HPA-2a(0.926),2b(0.074);HPA-3a(0.648),3b(0.352);HPA-4a(0.981),4b(0.019);HPA-5a(0.940),5b(0.060);HPA-6a(0.815),6b(0.185);HPA-7a～14a、16a、17a(1.000),7～14、16、17b(0.000);HPA-15a(0.463),15b(0.537);PTR患者的HPA抗原分布与健康献血者的基因频率无统计学差异(P>0.05)。血小板抗体阳性的27名PTR患者中,血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体阳性表达者占78%(21/27)、GPⅠa/Ⅱa抗体阳性占70%(19/27)。对3名PTR患者作血小板特异性抗原分析发现:患者产生的血小板特异性糖蛋白抗体与HPA基因型密切相关,以抗-HPA-3b、-5b为常见。结论多次输注血小板无效的患者,应选择与其HPA基因型一致的血小板供者,以提高血小板输注疗效,避免血液资源的浪费。     

人类血小板抗原全套基因分型方法的建立与应用

目的 建立一种基于DNA扩增和测序分型(PCR sequencing-based typing,PCR-SBT)的人类血小板抗原HPA-1～HPA-16w的基因分型方法.方法 从免疫多态性数据库中下载HPA-1～HPA-16w的全套HPA核酸序列,以Primer Premier 5.0软件设计引物,特异性扩增包含HPA-1a/lb到HPA-16aw/16bw多态性的核酸片段.通过调整引物序列和PCR条件获得单一的特异性扩增产物.PCR产物纯化后直接进行DNA序列分析并确定HPA基因型.通过对2份标准样本的HPA分型验证PCR-SBT方法的准确性;并利用PCR-SBT法对2008年度国际输血协会(ISBT)第14届国际血小板免疫学工作组提供的16份比对样本(包括6个含有基因突变的干扰样本)进行HPA基因分型.结果 设计11对引物扩增和测序16个HPA系统.2份标准样本的HPA基因型分别为HPA:1aa/2aa/3ab/4aa/5ab/6aa/7aa/8aa/9aa/10aa/11aa/12aa/13aa/14aa/15aa/16aa和HPA:1aa/2aa/3aa/4aa/5aa/6aa/7aa/8aa/9aa/10aa/11aa/12aa/13aa/14aa/15as/16an.16份ISBT考核样本的256个HPA基因型结果清晰,其中HPA-1～HPA-6w、HPA-9w和HPA-15共8个系统的128个基因型结果与ISBT参考结果完全一致.结论 建立了HPA-1～HPA-16w的PCR-SBT分型方法,结合高通量的DNA序列分析仪,具有简单、快速和准确的优点,适合于临床HPA全套基因分型,具有良好的应用前景.     

血小板功能检测的研究进展

血小板在执行生理性止血的同时,也在病理性血栓形成过程中起重要作用。血小板功能检测对于临床相关疾病的诊断和抗血小板药物的筛选及相关研究有着重要的意义。目前,血小板功能检测的实验与方法日益增多,但所有这些检测方法均有不足之处,因而有必要研究和发展一种操作简便、检测灵敏度高的方法。本文对近年来血小板功能检测方法诸如血小板的一般功能检测、血小板黏附功能测定、血小板聚集功能测定、血小板释放功能测定、血小板凝血活性检测和流式细胞术在血小板功能检测中的应用等研究进展进行了综述,并对研究前景作了简单的展望。     

Platelets do not adsorb HLA class I molecules during storage of pooled platelet concentrates

The origin of HLA class I molecules on platelets is still under discussion. Adsorption of HLA molecules on platelets using specific experimental conditions has been described. The study presented investigates whether there is a significant elution and adsorption of HLA class I molecules on platelets during storage of pooled random platelet concentrates (PRPC) under routine conditions. Platelet concentrates (PCs) from whole blood were prepared from HLA-A2-positive and HLA-A2-negative donors, pooled and stored under routine conditions. In addition, platelets from HLA-A2-negative donors were pelleted and resuspended in cell-free plasma from HLA-A2-positive donors. HLA-A2-positive PCs (positive control), HLA-A2-negative PCs (negative control) and HLA-A2-negative platelets in plasma from HLA-A2-negative donors were stored simultaneously. Binding of FITC-conjugated monoclonal murine antihuman HLA-A2 antibodies (anti-HLA-A2-mab) was measured during 5-day storage by flow cytometry. An increased binding of anti-HLA-A2-mab during storage was found on HLA-A2-negative platelets (P < 0.005) independently whether they were incubated with cell-free plasma or platelets from HLA-A2-positive donors or autologous HLA-A2-negative cell-free plasma. However, non-specific binding of IgG controls increased equally, whereas anti-HLA-A2-mab binding to platelets from HLA-A2-positive donors did not decrease during storage. This study suggests that there is no significant elution and adsorption of HLA class I antigens of platelets in pooled PCs during storage under the usual conditions for platelet storage. Increased anti-HLA-A2-mab signal was due to non-specific binding. Therefore, HLA class I compatible platelets should maintain their compatibility for an immunized patient when stored in a pool with HLA incompatible platelets and shortened survival after transfusion should not be expected.     

血小板抗原基因分型与配型在血小板输注中的应用简

本研究建立已知HPA基因型血小板供者库,开展相同HPA基因型血小板交叉配型后输注,防止血小板抗体的产生,解决血小板无效输注.应用PCR-SSP技术对血小板献血者和患者进行HPA基因分型,采集与患者ABO血型及HPA基因型相同血小板制剂,再加以固相凝集法配型相合后输注.结果表明,牡丹江地区HPA血型分布的遗传特征具有本地区人群特点,具有最高杂合度的是HPA-15,其次是HPA-3.采用ABO血型及HPA基因型均相同加固相凝集配型相合血小板输注有效率94.4％.采用ABO血型相同随机血小板固相凝集配型相合输注有效率77.8％.结论：牡丹江地区HPA血型分布的遗传特征具有多态性,采用血小板HPA同基因型供者采集加配型输注可防止血小板免疫性抗体及输注无效的发生,采用ABO同型随机血小板加配型输注是提高血小板输注的效果、防止输注无效发生的既经济又简便的方法.     

PAS or plasma for storage of platelets? A concise review

Platelet additive solutions (PASs) are becoming increasingly popular for storage of platelets, and PAS is steadily replacing plasma as the storage medium of platelets. PASs are electrolyte solutions intended for storage of platelets, and they are used to modulate the quality of the platelets by adding specific ingredients. All currently available PASs contain acetate. Acetate reduces the amount of glucose that is oxidised into lactic acid and thereby prevents the lowering of pH, which decreases platelet quality. Furthermore, the oxidation of acetate leads to the production of bicarbonate, which serves as buffer. The presence of potassium and magnesium in PAS prevents the lowering of pH and reduces the degree of spontaneous activation of the platelets during storage. In the hospital, platelets stored in PAS result in about half of the number of allergic transfusion reactions as compared with platelets in plasma. Recovery and survival after transfusion, as well as corrected count increments, are at least as good for platelets in PAS as for plasma, and recent data suggest they may even be better. Therefore, with the current generation of PASs, PAS should be preferred over the use of plasma for the storage of platelet concentrates.     

肿瘤患者血小板输注无效的临床分析

目的探讨本院患者血小板输注情况及临床疗效观察,了解血小板输注无效的原因,以便做好预防工作。方法 2010年1月-2012年12月对本院312名血小板减少的肿瘤患者输注机采血小板,并于输注前后检测血小板,以校正患者血小板计数增值(CCI)和24 h血小板回升率,判定输注效果并讨论影响因素。采用简易致敏红细胞血小板血清学技术(SEPSA)检测76名血小板输注无效的肿瘤患者血小板相关抗体,统计抗体分布。结果 75.6%(236/312)的患者输注后血小板数有不同程度的增高,血液病患者输注血小板有效率明显低于实体肿瘤患者(χ2=29.87,P0.05)和其他肿瘤患者(χ2=6.06,P0.05)。输注次数2次的患者(无效率为5.1%)输注血小板无效率明显低于输注次数7次患者(无效率为57.1%),也低于输注3-4次(无效率为39.5%)、5-7次患者(无效率为46.4%),血小板输注无效率随输注次数的增加而增加。分析76名肿瘤患者血小板输注无效原因,其中免疫因素占60.5%,非免疫因素占39.5%。结论反复输注产生血小板抗体是PTR发生的主要原因,多次输注者应进行血小板抗体的筛选,避免或减少造成血小板输注无效的原因,提高血小板输注的有效率。     

The post-platelet 100,000 count: effects of platelet collection and future

Currently, the majority of platelets transfused in the United States are collected by apheresis. The recent Food and Drug Administration guidance document published maintains that a postdonation platelet count for a donor remain >100,000/μL. During apheresis procedures, platelets are released from the splenic pool into circulation. This allows for higher postdonation platelet counts than anticipated. Some current plateletpheresis instruments take this into account when determining a safe product to be collected. On other instruments, the software does not allow for this correction. This may impact collections, but is expected to be resolved with a software update.     

Transfusing platelets 2 h after the completion of amphotericin-B decreases its detrimental effect on transfused platelet recovery and survival

Platelet transfusion support is required during bone marrow aplasia following ablative chemotherapy and bone marrow progenitor cell transplantation (BMT). Amphotericin-B is frequently given to these patients, both therapeutically and prophylactically, and has been described to have a negative impact on the results of platelet transfusions. We conducted a prospective study of the effect of amphotericin-B on transfused platelet recovery and survival in 81 BMT or acute leukaemia patients. One hundred and ninety-five platelet transfusions administered to 81 consecutive patients were analysed. The platelets were transfused 2 h after the completion of amphotericin-B. Using this schedule resulted in no effect of amphotericin-B on platelet recovery or survival, although platelet increments were modestly depressed in patients receiving high- vs. low-dose amphotericin-B. We conclude that the timing of amphotericin-B infusion be evaluated in patients demonstrating poor platelet recovery and survival. Transfusing platelets at least 2 h after the completion of amphotericin-B decreases the detrimental effect of this antifungal agent on transfused platelet recovery and survival.     

2项联合检测作为血小板活化特异标志物的评价

目的探讨平均血小板平均体积(MPV)和血小板分布宽度(PDW)作为血小板活化特异标志物的可行性研究。方法受试者分3组,其中健康对照组100例,心肌梗死组63例,脑梗死组54例,采用Sysmex XE-2100型全自动血细胞分析仪对所有受试者静脉血MPV、PDW进行测定。同时随机抽取广州医学院第二附属医院住院患者100例,在采血后1、2、3和4h分别检测静脉血MPV和PDW。结果与健康对照组比较,心肌梗死组、脑梗死组的MPV、PDW均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。采血后进行不同时间检测发现,随着时间的延长,MPV增加,PDW降低。结论在血栓性疾病中MPV、PDW呈增大趋势;MPV联合PDW检测可作为血栓性疾病病情监测与预后判断的重要指标。     

临床727例次单采血小板输注效果分析

为分析临床单采血小板输注效果及其影响因素,回顾性分析湘雅第三医院2010年9月至2011年5月进行单采血小板输注的254名患者的727例次输注资料,计算血小板计数增高指数(CCI)和血小板回收率(PPR)评价血小板输注效果,统计输注有效率,根据患者病症、输血次数、血型和脾肿大与否分组进行统计学比较。结果表明,727例次输注单采血小板有效456例次,占62.72%,以急性失血性贫血和慢性系统性疾病患者输注效果较为明显,尤其是慢性肾疾病(有效率为94.12%);脾脏肿大影响血小板输注效果(有效率仅为40.35%);血小板输注次数与输注效果呈负相关。结论:脾脏肿大和血小板输注次数是影响输注效果的因素。