急性白血病p53基因P1启动子区域DNA甲基化研究

目的：通过检测急性白血病（AL）中p53基因P1启动子异常甲基化，探讨p53基因异常甲基化在急性白血病中的意义。方法:分别使用限制性内切酶MspⅠ、HpaⅡ、EcoRⅡ、BstNⅠ酶切提取基因组DNA，然后分别使用酶切后产物及基因组DNA为模板进行PCR扩增。产物电泳后在凝胶成像分析系统内观测电泳条带及摄像；部分标本的电泳条带经凝胶回收纯化后进行测序。结果:急性白血病患者p53基因第一启动子甲基化阳性率为38.7％，而急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者分别为45.5％、35.0％。正常对照标本中未检测到p53基因的异常甲基化。p53基因甲基化情况在急性白血病病人与正常人之间经过统计学检验，P<0.05；但急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病患者之间无显著差异，P>0.05。分析急性白血病患者p53基因甲基化与患者临床资料之间的关系，其中，p53基因异常甲基化与肝脾淋巴结是否肿大之间的关系经统计学分析P<0.05。结论:①部分急性白血病患者存在p53基因第一启动子异常甲基化，正常对照中未检测到p53基因的甲基化；②p53基因第一启动子在急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病均可发生异常甲基化，两者之间发生甲基化的概率无统计学差异；③p53基因异常甲基化与肝脾淋巴结肿大有显著差异，但p53基因异常甲基化与急性白血病治疗效果及预后的关系尚不能确定，须进一步研究确定。     

p53基因研究新进展

肿瘤抑制基因在肿瘤发生过程中有重要作用,其中P~(53)基因最引现人注目。P~(53)基因的突变与人类一半以上的肿瘤发生相关。P~(53)基因参与细胞生长的负调控。研究发生P~(53)基因编码的P~(53)蛋白可通过调控Cipl基因表达而调控细胞生长。即P~(53)蛋白可刺激Cipl基因产生分子量为21kD的蛋白,这种蛋白能够有效抑制某些促使细胞通过细胞周期进入有丝分裂的酶活性,从而抑制细胞生长。这就解释了为什么正常的P~(53)基因的缺失可导致细胞的无限生长。此外,P~(53)基因与DNA损伤药物诱导的细胞凋亡有关,与非DNA损伤药物诱导的细胞凋亡无关。     

改进的甲基化特异PCR法及在抑癌基因p16检测中的应用

目的　介绍一种 Ｃｐ Ｇ 岛甲基化分析方法,即甲基化特异的 Ｐ Ｃ Ｒ（ ｍ ｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ , Ｍ Ｓ Ｐ） 法以及对该法的改进。方法　用亚硫酸氢盐修饰被测 Ｄ Ｎ Ａ 后,再进行甲基化与非甲基化特异的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,并对 Ｍ Ｓ Ｐ 法进行改进。应用该法分析了颌面部鳞癌中ｐ１６ 基因５′ Ｃｐ Ｇ 岛甲基化状态。结果　发现一些颌面部鳞癌组织中有ｐ１６ 基因５′ Ｃｐ Ｇ 岛的甲基化。采用加热变性代替强碱变性,用透析法脱盐,以及用限制酶 Ｔａｑ Ⅰ取代 Ｂｓｔ Ｕ Ｉ来判断甲基化与非甲基化的扩增片段等均取得了良好的效果。结论　 Ｍ Ｓ Ｐ 法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改进后该方法更加简便可行。     

p53基因第7内含子序列的多态性位点分析

目的 测定中国人ｐ５３基因内含子７序列的多态性位点。方法 收集１０５名正常人外周血标本，用聚合酶链反应扩增ｐ５３基因第７内含子，用双链四色荧光标记测序方法进行序列分析。结果 在ｐ５３基因第７内含子上，跑外显子第７最后一个碱基７３ｂｐ处有１个Ｃ和Ｔ多态位点、距９３ｂｐ处有１个Ｔ和Ｇ多态位点，其中基因型呈ＴＧ型的２２例，呈ＣＴ型的３７例，ＣＴ／ＴＧ杂合型的４６例，未发现基因型为ＴＴ和ＣＧ单体型的个体。     

乳腺癌中p53基因缺失及p53蛋白的异常表达

乳腺癌中ｐ５３基因缺失及ｐ５３蛋白的异常表达郭文斌张嘉庆杨德启乔新民张庆广阚秀虞有智一、材料与方法１．材料来源：４７例乳腺癌及正常腺体均来自我院乳腺中心１９９４～１９９６年间手术切除标本。全部病例均有病理学诊断。２．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交：用酚、氯仿／...     

p53下游基因及其作用

p53基因是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因 ,它多方面的功能主要是通过激活或抑制大量p53下游基因的表达来完成的。目前主要使用两种策略鉴定p53下游基因 :一种是消减杂交和差异扫描 ;另一种是利用p53下游基因在启动子区域或者内含子内包含有p53结合位点。已经鉴定的p53下游基因主要包括p53负调控基因mdm2 ;细胞周期负调控相关基因p2 1waf 1/cip 1,14 3 3 σ ,cyclinG ;DNA复制与修复基因gadd 45;细胞永生化基因igf bp3 ;细胞凋亡相关基因bax ,gml,p2xm ,killer/dr 5和pag 60 8;抑制血管生成基因tsp 1;以及应答细胞胁迫基因tp 53tg1,csr和pig 3等     

改进的甲基化特异PCR法在抑癌基因p16检测中的应用

目的 介绍一种ＣｐＧ岛甲基化分析方法,即甲基化特异的ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＭＳＰ）法以及对该法的改进。方法 用亚硫酸氢盐修饰被测ＤＮＡ后,再进行甲基化与非甲基化特异的ＰＣＲ扩增,并对ＭＳＰ法进行改进。应用该法分析了颌面部鳞癌中ｐ１６基因５′ＣｐＧ岛甲基化状态。结果 发现一些颌面部鳞癌组织中有ｐ１６基因５′ＣｐＧ岛的甲基     

外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学效应

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因对人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的生物学作用。方法：将含有野生型ｐ５３基因的ｐＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体，通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染ＧＬＣ－８２细胞，用流式细胞仪、电镜及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，观察野生型ｐ５３基因对ＧＬＣ－８２细胞的生物学效应。结果：电镜观察可见，转染野生型ｐ５３基因，可使ＧＬＣ－８２细胞出现一些病理现象，如胞浆中有明显的空泡及线粒体肿胀；流式细胞仪分析显示，野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞周期停止于Ｇ１～Ｓ区；３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验提示，野生型ｐ５３基因能够抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ的合成。结论：这些结果阐明了野生型ｐ５３基因是抑制ＧＬＣ－８２细胞生长的部分机理。     

p53基因结构与功能研究的新进展

ｐ５３蛋白的信号区有１个ＳＨ－３区结合部位,非专一ＤＮＡ结合区可促进顺序专一的ＤＮＡ结合区与ＤＮＡ损伤部位结合。ｐ５３蛋白可整合细胞对各种危急情况的反应,其信息传递途径上游是各种危急状况,有ＡＴＭ类的基因起作用。ｐ５３蛋白通过靶基因ｐ２１ＷＡＦ－１及ＧＡＤＤ４５调控Ｇ１关卡,也参加了Ｇ２／Ｍ关卡的调控;通过上调靶基因Ｂａｘ、ＩＧＦ－ＢＰ－３,抑制ＢｃＬ－２基因表达,调控凋亡;维持基因组的遗传学稳定性,行使抑瘤基因功能。     

p53 肿瘤抑制基因研究进展

肿瘤抑制基因（又称抑癌基因或抗癌基因）的失活与癌基因的激活参与人类各种肿瘤的形成和发展。肿瘤是细胞的遗传突变，连续的多步遗传变化是细胞癌变的中心问题，原癌基因突变、重排、移位和扩增成为细胞癌基因，具有转化致瘤潜能；抑癌基因阻遏转化致瘤，是能够抑制细胞...     

p53 Protein expression in laryngeal squamous cell carcinomas bearing wild-type and mutated p53 gene

We performed an immunohistochemical analysis to investigate the expression of p53 protein in a panel of 18 laryngeal squamous cell carcinomas, 15 primary tumours and three in relapse, previously analysed by us for the presence of p53 gene mutations. Dysplastic and/or normal surrounding mucosa was evaluated in 15 different tumours. The results of our study are the following: (1) expression of p53 protein was observed in one out of five tumours positive for p53 gene mutations (20%) and in 10 out of 13 (80%) negative cases; (2), p53 protein over-expression was frequently observed in normal and/or dysplastic mucosa surrounding either wild-type (7/11) or mutated p53 tumours (2/4); (3), p53 immunoreactive cells showed a pattern of distribution in normal and mildly/moderately dysplastic mucosa (basal layers), different from that in severely dysplastic mucosa (whole thickness). These data further support the hypothesis that p53 protein over-expression may be a marker of the earliest phases of multistep tumorigenesis in laryngeal squamous cell carcinoma.     

Absence of p53 gene mutation and infrequent overexpression of p53 protein in hepatoblastoma

Ten cases of hepatoblastoma were studies for overexpression of p53 protein by immunohistochemistry and for possible p53 gene mutation by single strand conformation polymorphism (SSCP) analysis and direct DNA sequencing of the polymerase chain reaction products. Only one case of the macrotrabecular type at stage IV showed overexpression of p53 protein. No DNA mobility shift was found in any of the cases studies by SSCP analysis. DNA sequencing performed on the case showing overexpression of p53 protein revealed no mutation within exons 5 to 8. The associated adrenal cortical carcinoma of the same case also showed overexpression of p53 protein, but no mutation of the p53 gene. These results indicate that mutation of the p53 gene is infrequent in hepatoblastoma. This observation supports the view that mutation of the p53 gene is not as important in the oncogenesis of childhood neoplasms as in adult cancers.     

乳腺癌中p53基因丢失与p53 mRNA高表达相关性研究

为探讨乳腺癌组织中ｐ５３基因丢失与ｐ５３ ｍＲＮＡ表达的相关性，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及反转录－定量ＰＣＲ技术对４７例乳腺癌组织进行了检测。结果发现：ｐ５３基因杂合性缺失率为３４．０％；在乳腺正常腺体中有中度ｐ５３ＲＮＡ表达，面 肿瘤组织中有４０．０％，患者伴ｐ５３ ｍＲＮＡ高表达。ｐ５３基因与ｐ５３ ｍＲＮＡ高表达之间呈显著性相关。     

野生型p53基因脂质体转染细胞疫苗的制备

目的：制备具有治疗活性的野生型Ｐ５３基因真核表达载体的细胞疫苗。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ从人外周血淋总ｍＲＮＡ中扩增出全长的野生型Ｐ５３基因,将其克隆入ＴＡ克隆载体的经扩增后,将ｐ５３ｃＤＮＡ连入ＰＣＭＶ真核表达载体中,利用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将其转染ＤＵ１４５细胞并通过免疫组化的方法检测其表达情况。结果：Ｐ５３基因可在ＤＵ１４５细胞中稳定表达。结论：制备了可稳定表达可ＤＵ１４５细胞中的野生型     

脂质体介导的p53基因对肝癌细胞生长的抑制作用

目的 观察外源野生型ｐ５３基因在肝癌基因治疗方面的可行性。方法 将载有人野生型ｐ５３－ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐ５３－ｐｃＤＮＡ３,用阳离子脂质体介导转染人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２,用流式细胞仪检测ｐ５３－ｐｃＤＮＡ３对ＨｅｐＧ２细胞生长的影响。结果 通过观察细胞生长曲线与流式细胞仪检测细胞周期和细胞的凋亡指数发现,ＨｅｐＧ２细胞生长受到明显的抑制。结论 脂质体介导的ｐ５３基因可在Ｈ细胞中表达,且明显抑     

p53基因表达在辐射诱导骨髓细胞凋亡和修复中作用研究

目的 探讨p53基因表达在辐射导的骨髓细胞凋亡和修复中的改变与作用。方法 经^60Coγ射线以5．5Gy全身辐射78只LACA小鼠。于照后4wk内分批活杀，将骨髓分别进行HE染色和超薄切片，并进行P53蛋白LSAB免疫组化染色和突变型p53(mtp53)cDNA-DNA原位杂交。结果 照射后小鼠骨髓出现明显损伤及损伤后重建现象；照射后6h,造血细胞凋亡显著，并出现凋亡的典型改变；P53蛋白于造血细胞凋亡及修复时均明显增多，而mtp53DNA仅于修复期呈阳性。结论 p53基因表达与了辐射诱导的骨髓细胞凋亡和凋亡后的修复过程。     

IARC p53 mutation database: A relational database to compile and analyze p53 mutations in human tumors and cell lines

The tumor suppressor p53 gene is the most frequently mutated gene in human cancer. To date, more than 10,000 mutations have been described in the literature, and these data are available in various electronic formats on the World Wide Web. Here we describe the structure and format of the different p53 datasets maintained and curated at the International Agency for Research on Cancer (IARC) in Lyon, France. These include p53 somatic mutations (more than 10,000 entries), p53 germline mutations (144 entries), and p53 polymorphisms (13 entries), with the somatic mutations organized into a relational database using AccessTM. The main features of these datasets are (1) controlled entry with standardized format and restricted vocabulary, (2) inclusion of annotations on individual characteristics and exposures, and (3) a classification of pathologies based on the International Classification of Diseases for Oncology (ICD‐O). In addition, several interfaces have been developed to analyze the data in order to produce mutation spectra, codon analyses, or visualization of the mutation with the tertiary structure of the protein. All datasets and tools for analysis are available at http://www.iarc.fr/p53/homepage. Hum Mutat 14:1–8, 1999. © 1999 Wiley‐Liss, Inc.     

野生型p53基因诱导凋亡相关基因ANNEXIN A2的表达研究

目的探讨胡基因过表达介导不同转移潜能肿瘤细胞的凋亡分子机理，寻找与细胞凋亡和肿瘤转移的相关基因。方法应用mRNA差异显示方法分析腺病毒介导的野生型,053基因感染不同转移潜能的肺癌细胞系前后存在的表达差异基因，并用逆转录一聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法加以验证。结果分析发现，在柳基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达显著差异有统计学意义，经加基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达有明显下调。并且以Arfip 973细胞的表达缺失最为显著。经逆转录一聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法也验证了这种差异的存在。结论表明ANNEXIN A2基因的表达与p53基因诱导的肿瘤细胞凋亡存在密切的相关性。     

Higher frequency of p53 gene mutations in diffuse large B-cell lymphoma with MALT component

p53 gene mutation is not a frequent event in the tumorigenesis of lymphomas and the expression of p53 protein is independent of p53 gene mutations. The present study aimed to investigate mutations in the p53 gene in a series of extranodal B-cell lymphomas, and its association with p53 protein expression. A total of 52 cases were graded histologically into Grade 1, Grade 2 and Grade 3 tumors and p53 protein expression was detected using immunohistochemistry. Mutations in the p53 gene were analyzed using polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and mobility shifts were confirmed by direct sequencing. The tumors comprised 26 (50%) Grade 1, 9 (17%) Grade 2 and 15 (29%) Grade 3. A high proportion of Grade 2 (25%) tumors expressed p53 protein (P = 0.051) and carried p53 gene mutation (33%) (P = 0.218). However, p53 protein expression was not associated with p53 gene mutations (P = 0.057). Transversion mutations (88%) were more frequently detected than transition mutations (12%). The present study revealed that p53 gene mutations and p53 protein expression occurred in higher frequencies in Grade 2 tumors, which may be of pathogenetic importance. The high frequency of transversion mutations may reflect the influence of an etiological agent in the tumorigenesis of mucosa-associated lymphoid tissue (MALT lymphoma).     

Ⅲ期鼻咽癌p53蛋白表达与生物学行为及预后的关系及其与p53基因突变、潜伏膜蛋白-1表达的相关研究

目的：探讨Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中P53蛋白的表达与生物学行为及预后的关系,以及P53蛋白表达与P53基因突变和潜伏膜蛋白（LMP）－1蛋白表达的关系。方法：应用免疫组织化学EnVison法和聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测58Ⅲ例鼻咽分化型非角化性鳞癌标本。结果：58份Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中,P53蛋白总阳性率为65．5％（3858）,生存期在5年以下的患者阳性率为82．1％（32／39）,5年以上患者31．6％（6／19）,两组间P53蛋白表达差异有显著性意义（P＜0．05）,P53蛋白表达在有预底侵袭组为74．4％（29／39）,无颅底侵袭组为47．4％（919）,两组间差异有显著性意义（P＜0．05）,PCR－SSCP检测15例P53蛋白阳性的病例,P53基因5－8外显子突变率为0（0／15）,LMP－1蛋白免疫组织化学总阳性率为72．4％（42／58）,与P53蛋白表达呈正相关关系（r=0.504)。结论：本组Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌患者中P53蛋白表达与P53基因突变无相关关系。与LMP－1蛋白的表达相关,P53蛋白的表达阳性率随着患者生存期的延长而降低,有颅底侵袭组P53蛋白表达阳性率高于无颅底侵袭组。