钠离子对成骨细胞的影响及其与上皮钠通道的关系

目的探讨不同浓度钠离子(Na+)对大鼠成骨细胞(Ob)成骨功能的影响,及其与上皮钠通道(ENaC)的相关性。方法 Ob经1×10-4~1 mol/L Na+处理后,检测Ob的增殖和分化情况。再从中选3个浓度Na+处理Ob,RT-PCR测定成骨功能相关基因(Cbfa1,OPN,OC)及ENaC-α的表达变化。结果在1×10-4~1 mol/L范围内,Na+对Ob具有双向影响作用,与对照组相比低浓度Na+明显促进Ob分化,升高Na+浓度则抑制Ob分化,而Na+对Ob的增殖无影响。RT-PCR示:Na+对Ob中Cbfa1、OPN及OC表达同样具有双向作用,低浓度促进表达,高浓度抑制;并且ENaC-αmRNA在Na+调控下的变化情况与成骨功能相关基因及Ob分化活性的变化相一致。结论 Na+可直接影响Ob的分化及成骨功能相关基因的表达,而且Na+对Ob的影响作用与ENaC相关。     

致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞功能的影响

目的 研究致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞增殖、分化的作用。方法 经酶消化法从新生兔颅骨中分离成骨细胞,进行成骨细胞的碱性磷酸酶染色及成骨能力的检测。从经铬（Cr^6 ）致敏的新西兰兔外周血分离淋巴细胞并提取其培养上清液（LCM）,并分别观察在无LCM、加未经抗原（Ｃr^6 )刺激的LCM和加经Ｃr^6 刺激的LCM等3种情况下成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌的情况。结果 从兔颅骨分离的细胞碱性磷酸酶染色阳性,在长期培养中能够形成钙化结节。致敏淋巴细胞培养介质抑制成骨细胞的增殖、促进碱性磷酸酶的分泌,抑制骨钙素的产生。经方差分析检验均具有明显的统计学差异。结论 致敏淋巴细胞能够抑制成骨细胞的功能,可导致骨形成障碍。     

雌激素与流体剪切力对成骨细胞增殖和功能的间接影响

目的 :了解雌激素与流体剪切力对体外培养的成骨细胞增殖和功能的间接影响 .方法 :进行新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞原代培养 .选择恒定的雌激素浓度及合适的振荡频率分四种组合方式施加于成骨细胞 ,2 4h后用其培养液培养静止状态下的成骨细胞 ,观察不同时间段细胞增殖和碱性磷酸酶活性的变化 .结果 :经雌激素和机械力影响的条件培养液作用 12h后 ,可促进细胞增殖 (P <0 .0 1) ,该效果持续至 2 4h ,在 2 4h至 72h两因素表现为协同作用 (P <0 .0 1) ;对ALP的活性的影响在 12h之前两因素表现为拮抗作用及抑制作用 (P <0 .0 1) .2 4h后 ,机械力可促进ALP活性升高 ,并持续至 72h .结论 :雌激素和流体剪切力及两者复合作用均可通过旁分泌方式影响细胞的增殖和功能     

Osterix对成骨细胞分化影响的研究进展

Osterix(OSX)是最近由Nakashima等[1]发现的成骨细胞特异性转录因子,只在发育的骨组织中特异性表达,是成骨细胞分化和骨形成过程中所必需的转录因子[2]。骨髓基质干细胞分化为表达典型的成骨性标志基因的成骨细胞需要OSX的作用。OSX自身的突变或缺失也可导致骨形成的迟滞或停止。本文就OSX的结构组成,对成骨细胞生物活性的影响及其调节机制进行综述。1OSX的结构与生化特性OSX是一种具有锌指基序结构域的转录因子,由428个氨基酸组成。在其氨基酸序列的C末端存在的3个C2H2锌指结构为DNA结合域,此锌指结构与转录因子Sp1、Sp3和Sp4…     

他汀类药物对成骨细胞功能的影响

目的验证不同浓度的辛伐他汀对人类成骨细胞(OB)功能表达和体外成骨能力的影响,研究雌激素促进成骨作用的机制及剂量效应关系.方法取成人的髂骨松质骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,获得松质骨中的成骨细胞,进行纯化和培养.在此基础上添加不同浓度的辛伐他汀(1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×5-5mol/L)并进行培养.用生化法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,用放射免疫法测定细胞培养液中骨钙素(OC)和细胞间质的钙含量.结果辛伐他汀对成骨细胞ALP活性和骨钙素分泌的影响均呈正相关,即各浓度辛伐他汀对ALP活性、骨钙素的分泌和成骨细胞的成骨能力均有刺激作用,并与辛伐他汀剂量呈正相关.结论辛伐他汀能增加成骨细胞的ALP活性和骨钙素的产生,提高成骨细胞的成骨能力.     

大鼠成骨细胞的体外培养和生物学特性的研究

目的：建立一种成骨细胞的体外培养方法,并研究不同培养时期成骨细胞的生物学特性。方法：用成年雌性大鼠松质骨为培养细胞来源,组织块培养法和胰酶消化法相结合进行成骨细胞培养,并测定成骨细胞不同培养阶段的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性和骨钙素（ＯＣ）分泌水平。     

破骨细胞对成骨细胞作用的研究

目的：探讨破骨细胞及其亚细胞结构对成骨细胞生长和功能的影响。方法：在获取大量破骨细胞的基础上，以细胞生物学方法探讨破骨细胞及其产生骨吸收后，破骨细胞、细胞培养基和亚细胞结构对成骨细胞生长和功能、成骨细胞核结合因子Cbfα1表这的影响。结果：破骨细胞及破骨细胞产生骨吸收后，破骨细胞、细胞培养基和亚细胞成分对成骨细胞的生长和功能均有促进作用，可使成骨细胞的Cbfα1mRNA的表达明显增强。     

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨成骨生长肽(OGP)羧基端片段[OGP(10~14)]及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法大鼠颅盖骨成骨细胞体外培养至第3代,分别加入10-15~10-7mol/L的OGP(10~14)或G38I,48h后行细胞计数,并用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖情况。细胞分为实验组[OGP(10~14)组和G38I组]及对照组,实验组给予10-11mol/L的药物干预48h。电镜观察细胞超微结构的变化,测定培养上清液碱性磷酸酶(ALP)含量,用免疫组织化学方法比较细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中核结合因子a1(Cbfa1)和Ⅰ型胶原mRNA表达水平的变化。结果在较低浓度时,随药物浓度升高,OGP(10~14)和G38I促进细胞数增加、提高细胞活性的作用增强,10-11mol/L药物作用时成骨细胞数分别为37×104/ml和30×104/ml,进一步升高药物浓度反而抑制细胞增殖。电镜下实验组细胞粗面内质网发达,胞质中有大量分泌囊泡。对照组细胞囊泡中可见钙盐结晶。OGP(10~14)组和G38I组与对照组比较,细胞培养上清液ALP含量高(4·47U/g、3·82U/g vs2·21U/g),细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量多,Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平较高,差异均具有统计学意义(P<0·01,P<0·05)。结论OGP(10~14)及其衍生物G38I具有与OGP全长肽相同的促进成骨细胞增殖、提高细胞活性的作用,OGP(10~14)和G38I可上调成骨细胞Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平,增加细胞中Ⅰ型胶原的合成,促进细胞分化和成骨作用。     

不同强度静磁场对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究不同强度的静磁场加载对成骨细胞ALP活性的影响,探索磁力正畸的最佳磁场强度,为临床合理应用静磁场提供试验依据。方法：采用静磁场加载装置,对体外培养的成骨细胞分别在0mT、8mT、50mT和160mT的磁场强度下给予24h、48h和72h的静磁场加载,利用IFCC法检测静磁场加载后成骨细胞ALP活性的变化。结果：8mT、50mT和160mT的静磁场作用24小时、48小时和72小时后,与对照组相比,成骨细胞碱性磷酸酶活性增加,其中以50mT组的碱性磷酸酶活性增加最多。结论：静磁场可以增加成骨细胞的碱性磷酸酶活性,促进成骨细胞成骨;不同强度的静磁场的促成骨作用不同,50mT的静磁场有更好的促成骨作用,在临床应用时应注意选择静磁场的强度。     

乳鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性检测方法初探

目的探讨乳鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的检测方法,为研究骨代谢异常及骨质疏松症等骨病提供简便可靠的检测手段.方法采用经体外培养的乳鼠成骨细胞,制备上清液、裂解液和冻融液样本,分别用二乙醇胺、2-乙基氨基乙醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇3种不同缓冲液的试剂方法,测定其碱性磷酸酶活性,并作比较分析.结果使用二乙醇胺缓冲液的试剂方法,对3种标本的测定值都最高,与各组比较分析,差异均有显著性(P＜0.01),且变异系数最小,其他两种方法的测定结果无明显差异(P＞0.05).用3种不同缓冲液试剂方法检测3种不同方法制备的标本,均以裂解液中碱性磷酸酶活性最高,冻融液次之,上清液最低,分析结果,差异均有显著性(P＜0.01).结论用二乙醇胺缓冲液的试剂方法,测定体外培养乳鼠成骨细胞裂解液碱性磷酸酶的活性,效果较为理想.     

雌激素水平对大豆苷原(DAI)促大鼠成骨细胞分化作用的影响

 目的  观察基础雌激素(estrogen)水平对大豆苷原(daizein,DAI)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境(包括空白对照)雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐(p-nitropheny-phosate,PNPP)法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α(ERa)、雌激素受体β(ERβ)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响。结果  培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱。其中100 nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23%分别降至8%(17β-雌二醇为100 pmol/L)和-11%(17β-雌二醇为1 000 pmol/L),显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用。为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养(含2%去激素胎牛血清)。此时补充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加(16%~21%,P<0.05)。继续补充雌激素至1 000和10 000 pmol/L 时,其作用反而减弱。该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态(≤100 pmol/L)可增强其作用。为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素(100 pmol/L)和DAI(100 nmol/L)单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化。结果显示,100 pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用。结论  DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素(≤100 pmol/L)状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用。     

氟化物对乳鼠颅骨成骨细胞活性的影响

目的:建立大鼠颅骨成骨细胞体外培养技术,用一种新的试剂alamarBlueTM研究不同浓度氟化物对大鼠成骨细胞活力的影响.方法:应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞;AlamarBlueTM摄入法检测细胞增殖.结果:100μmol/L～1 mmol/L氟化钠在体外可刺激细胞增殖,2 mmol/L以上氟化钠可抑制细胞增殖.结论:氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的增殖具有双向作用,即低浓度促进,高浓度抑制.     

Cbfa1在强直性脊柱炎活动期的表达及意义

目的 探讨核心结合因子 (core-binding factor a1,Cbfa1)在强直性脊柱炎(AS)活动期的病理性表达及意义.方法 通过原位杂交技术检测活动期AS患者与对照组(骨盆骨折患者以及静止期AS患者)骶髂关节滑膜组织中Cbfa1的表达情况,用图像分析系统比较它们的表达差异.结果 在活动期AS患者骶髂关节滑膜组织中Cbfa1阳性表达,而对照组骶髂关节滑膜组织中Cbfa1均阴性表达,图像灰度值比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Cbfa1在活动期AS患者骶髂关节滑膜组织中阳性表达,证实其在强直性脊柱炎骶髂关节病理性成骨硬化过程中起着重要作用.控制AS病理过程中Cbfa1的表达,可能为治疗强直性脊柱炎提供新的思路.     

骨组织工程中成骨细胞与细胞因子的研究

构建携带细胞因子和成骨细胞的组织工程化人工骨研究是骨组织工程研究的热点之一。本文综述了组织工程化人工骨构建中细胞因子的作用。以及成骨细胞的来源,分离和培养等的研究现状,并分析了各种细胞因子的相互作用及相关细胞因子转基因的研究进展。     

低氧诱导因子-1α在骨形成过程中对成骨细胞功能的调控

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α对成骨细胞功能的调控及其在骨形成过程中的作用。方法应用Cre-Loxp重组酶技术,在体内外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因及其上游调控VHL基因,在体外将成骨细胞在2％氧浓度培养48h后检测血管内皮生长因子（VEGF）、核结合因子a1（RunX2）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）的表达,在体内取3个月龄小鼠股骨远端骨组织,应用组织切片和Micro-CT方法检测骨组织形态计量学指标和骨矿密度（BMD）。结果体外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因后,由于HIF-1α的表达下降导致VEGF、RunX2、ALP、OC的表达水平降低,而敲除VHL基因后由于HIF-1α的表达上调导致上述基因的表达升高。体内条件性敲除HIF-1α基因小鼠骨组织形态计量学指标和BMD均劣于野生型小鼠,而体内条件性敲除VHL基因小鼠以上指标均优于野生型小鼠。结论在生理和病理条件下,由于低氧环境的存在,HIF-1α能够通过促进成骨细胞的功能而调控骨形成过程。     

VEGF在新生鼠胫骨上端成骨细胞中自分泌作用的研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在鼠成骨细胞中的自分泌作用.方法:切取新生鼠胫骨上端组织,采用免疫组织化学染色方法,检测VEGF及其受体Flt-1和KDR/Flk-1在新生鼠胫骨上端成骨细胞中蛋白质的表达.结果:免疫组织化学染色证实新生鼠胫骨上端中的成骨细胞同时表达VEGF及其受体Flt-1和KDE/Flk-1.结论:作为一种重要的血管性因子,VEGF的自分泌作用方式在成骨细胞的分化中起重要作用.