肝癌患者CD8+CD28-Foxp3+调节性T细胞的变化及意义

目的:探讨肝癌患者外周血和癌组织中CD8~+CD28~-Foxp3~+调节性T细胞(CD8~+CD28-Foxp3~+Tregs)的改变及意义。方法:采用流式细胞仪检测72例肝癌患者和22例健康对照人群外周血CD8~+CD28~-Foxp3~+T细与CD8~+T细胞比值(CD8~+CD28-Foxp3~+Tregs/CD8~+T),分析CD8~+CD28~-Foxp3~+Tregs/CD8~+T与肝癌患者临床病理因素的关系;分别用免疫组化和Western blot检测肝癌患者癌组织及癌旁组织中Foxp3阳性细胞与Foxp3蛋白表达水平。结果:与健康对照人群比较,肝癌患者外周血CD8~+CD28~-Foxp3~+Tregs/CD8~+T明显升高(P0.05);外周血CD8~+CD28~-Foxp3~+Tregs/CD8~+T与患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(均P0.05);肝癌组织中平均Foxp3阳性细胞数与Foxp3蛋白表达量均明显高于癌旁组织(均P0.05);外周血CD8~+CD28~-Foxp3~+Tregs/CD8~+T,肝癌组织Foxp3阳性细胞数与Foxp3蛋白表达量在高、中、低分化的肝癌中均呈依次升高趋势,但差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:CD8~+CD28~-Foxp3~+Tregs在肝癌患者外周血及癌组织中增多,可能与肿瘤免疫抑制作用有关,其检测对肝癌患者病情有一定评估价值。     

肝移植急性排斥反应者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞的变化

目的 探讨良性终末期肝病患者肝移植术后外周血CD4+CD25+叉状头螺旋转录因子(Foxp3)+调节性T淋巴细胞在急性排斥反应期的变化及意义.方法 2004年12月至2008年1月间,符合入选条件的良性终末期肝病患者共55例,按照术后是否发生急性排斥反应分为排斥组(14例)和无排斥组(41例).肝移植术前用流式细胞仪检测患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率(简称CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率),出院后1年内每隔3～6个月复查;发生急性排斥反应时,于治疗前和治疗缓解后(3～6个月)复查.比较两组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率的变化,对排斥组发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxr3+T细胞百分率与排斥反应活动指数(RAI的相关性进行统计学分析.结果 肝移植术前,排斥组与无排斥组外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率的差异无统计学意义(P＞0.05).排斥组患者发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率为(2.23±0.54)%,低于无排斥组的(2.99±0.86)%,差异有统计学意义(P＜0.01).排斥组中,患者发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率低于未发生急性排斥反应时的(3.67±0.70)%,差异有统计学意义(P＜0.01).排斥组患者发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率与RAI呈负相关(r=-0.80,P＜0.01).结论 监测肝移植受者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞的变化,可辅助诊断急性排斥反应及判断其严重程度.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peripheral blood (PB) CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells (Tregs) in patients with benign end-stage liver disease after liver transplantation and the relationship between levels of PB Tregs and acute rejection. Methods A prospective analysis was performed on 55 consecutive patients who underwent liver transplantation.Fourteen out of 55 cases suffered from acute rejection after liver transplantation were defined as rejection group,while the rest patients were classified into no acute rejection group. PB was obtained from liver transplant patients at different time points longitudinally: pre-transplant, post-transplant within one year and acute rejection. The circulating CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs in PB were measured by flow cytometry. Blood samples were drawn during acute rejection, at the same time, liver biopsies were performed. The circulating CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs were compared between two groups.Results There was no difference between two groups in levels of circulating CD4+ CD25+ Foxp3 + Tregs cells pre-transplant. However, the levels of circulating CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs in rejection group were decreased significantly as compared with no-rejection group (2. 23 % ± 0. 54 % vs. 2. 99 % ±0. 86 %,P＜0.01). The frequency of CD4+ CD25+ Foxp3+ T cells was negatively correlated with rejection activity index (RAI) (r = - 0. 80, P＜0. 01 ). Conclusion Monitoring PB CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs levels may be helpful in evaluating the immune state and act as a more sensitive marker for acute rejection diagnosis in the patients following liver transplantation.     

乳腺癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及意义

目的:探讨乳腺癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(简称Foxp3+Treg)的变化及意义。方法:选择40例乳腺癌患者和32例乳腺良性肿瘤患者,采用流式细胞术检测外周血Foxp3+Treg、CD8+CD28+T细胞、NK细胞水平;用Western blot和RT-PCR病变乳腺组织Foxp3蛋白与m RNA表达。结果:乳腺癌患者外周血中Foxp3+Treg比例较乳腺良性肿瘤患者明显升高,而CD8+CD28+T细胞、NK细胞比例明显降低(均P0.05),且乳腺癌患者外周血Foxp3+Treg水平与CD8+CD28+T细胞和NK细胞水平呈负相关(r=-0.631,r=-0.578,均P0.05);乳腺癌患者术后外周血Foxp3+Treg水平较术前明显降低(P0.05)。乳腺癌组织中Foxp3蛋白与m RNA的表达均较乳腺良性肿瘤组织明显升高(均P0.05)。结论:Foxp3+Treg和其标记分子Foxp3在乳腺癌患者中的表达增加,且可能通过抑制CD8+CD28+T细胞和NK细胞而产生肿瘤免疫抑制。     

不同免疫抑制方案对肾移植术受者CD4~+ Foxp3~+ 调节性T细胞的影响

目的 探讨不同免疫抑制剂方案对肾移植术受者外周血CD4~+ Foxp3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)表达水平的影响.方法 定群研究了2006年1月至2008年1月在本移植中心接受初次移植50例随访满1年肾移植受者,分为钙调神经蛋白抑制组(钙调神经蛋白抑制剂+吗替麦考酚酯+强的松)19例,其中环孢素组10例,他克莫司组9例;雷帕霉素组(雷帕霉素+吗替麦考酚酯+强的松)31例.另取20例行规律血液透析终末期肾病患者为对照组.采用流式细胞仪的方法检测3组外周血CD4~+ Foxp3~+ Treg占CD4~+ T细胞的比例,比较各组间表达水平与不同免疫抑制方案的关系.结果 钙调神经蛋白抑制剂组、雷帕霉素组和终末期肾病组3组年龄、性别比无统计学差异(P>0.05).钙调神经蛋白抑制剂组、雷帕霉素组2组冷缺血时间、HLA错配率、群体反应性抗体(PRA)和急性排斥反应发生率无统计学差异(P>0.05).雷帕霉素组和终末期肾病组CD4~+ Foxp3~+ T细胞占CD4~+ T细胞的比例均明显高于钙调神经蛋白抑制组,差异有统计学意义(P<0.01).使用环孢素患者和他克莫司患者外周血中CD4~+ Foxp3~+ T细胞占CD4~+ T细胞的比例之间无显著性差异(P>0.05).结论 肾移植术后服用雷帕霉素组患者外周血CD4~+ Foxp3~+ Treg占CD4~+ T细胞的比例显著高于服用钙调神经蛋白抑制组患者,提示雷帕霉素有助于诱导宿主对移植肾免疫耐受.     

CD4+、CD8+和NK在结直肠癌中的表达及其与淋巴结微转移的关系

目的 检测不同Dukes分期结直肠癌患者淋巴结细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与NK细胞活性表达,探讨两者间关系.方法 采用常规苏木素.伊红(HE)染色病理切片检测21例结直肠癌患者281枚淋巴结转移癌灶及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者淋巴结CK20 mRNA表达;采用流式细胞仪检测患者外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞活性表达.结果 HE染色法检出有淋巴结转移者为16枚(6%,16/281),RT-PCR法检出有淋巴结转移者140枚(50%,140/281);按有淋巴结微转移重新Dukes分期后,手术前,A、B期患者血CD4+、CD4+/CD8+高于c期(P<0.05);A期患者血CD8+低于C期(P<0.05);B期患者血NK细胞活性高于C期(P<0.05).新Dukes分期与血CD4+呈负相关(r=-0.497,P<0.01);与CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.714,P<0.01);与CD8+呈正相关(r=0.945,P<0.01).结论 RT-PCR方法对淋巴结微转移的检出率明显优于HE染色切片法,结直肠癌淋巴结微转移的发生与患者免疫功能明显低下密切相关.     

Foxp3+调节性T细胞与乳腺癌淋巴结转移及增殖的关系

目的:探讨Foxp3~+调节性T细胞(Tregs)与乳腺癌淋巴结转移及增殖的关系。方法:用免疫组化法检测168例女性乳腺癌患者癌组织中CD4和Foxp3(调节性T细胞标志)的表达,以42例女性乳腺良性病变乳腺组织为对照,分析Tregs与乳腺癌淋巴结转移及乳腺癌组织细胞核增殖相关抗原Ki-67表达的关系。结果:乳腺癌组织中CD4~+T细胞与Foxp3~+T细胞(Tregs)的数量均高于乳腺良性病变组织,差异均有统计学意义(均P0.05);有淋巴结转移的乳腺癌组织中CD4~+T细胞与Foxp3~+T细胞数均高于无淋巴结转移的乳腺癌组织,但仅后者差异有统计学意义(P0.05)。乳腺癌组织中Tregs的浸润数量与Ki-67表达之间无关(P0.05)。结论:乳腺癌组织微环境存在免疫抑制,Tregs浸润数量与淋巴结转移关系密切,但与肿瘤增殖无关,提示Tregs可作为判断乳腺癌患者有无淋巴结转移的新指标。     

骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞与aGVHD的关系

目的 研究患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(以下简称CD4+CD25+Foxp3+T细胞)的比率、Foxp3 mRNA和Foxp3蛋白的表达与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.方法 选择37例行HIA相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT))的患者作为研究对象.采用流式细胞术检测患者allo-HSCT前7天(-7 d)、移植当天(0 d)、移植后30天(+30d)、+60 d和+90 d时骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞所占的比率;定量聚合酶链反应(PCR)检测Foxp3 mRNA相对表达量;蛋白印迹(Western blot)法检测Foxp3的蛋白表达水平.结果 37例患者存移植后100 d内发生aGVHD 13例(aGVHD组),未发生aGVHD 24例(无aGVHD组).CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率在0 d时最低,与-7、+30、+60、+90d时比较.差异均有统计学意义(P<0.01);与aGVHD组比较,无aGVHD组患者的CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).aGVHD组患者移植后Foxp3的表达水平逐渐升高,但明显低于无aGVHD组,尤其在+60和+90 d时的差异有统计学意义(P<0.01).Western blot法检测结果 表明,aGVHD组受者的Foxp3蛋白表达也明显低于无aGVHD组.结论 CD4+CD25+Foxp3+T细胞对防止发生aGVHD具有重要作用,监测患者骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率可以预测aGVHD的发生.     

乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平的检测及意义

目的：探讨乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）水平检测的意义。 方法：流式细胞术检测74例乳腺癌患者与30例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞百分比,分析CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平与乳腺癌患者临床病理特征及相关免疫组化指标的关系。 结果：乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的百分比高于健康对照者[（9.15± 2.24）% vs.（2.29±1.36）%],差异有统计学意义（P<0.05）。统计分析显示,乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平与肿瘤组织学分级、淋巴结转移、pTNM分期以及HER-2、pS2、nm23的表达有关（均P<0.05）,而与肿瘤大小、病理类型以及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、p53、Ki-67表达无关（均P>0.05）。进一步相关性分析显示,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平与肿瘤组织学分级、淋巴结转移数、pTNM分期、HER-2的表达呈正相关（r=0.583,r=0.333,r=0.919,r=0.604,均P<0.05）而与pS2、nm23表达呈负相关（r=-0.229,r=-0.401,均P<0.05）。 结论：乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平升高,并与与乳腺癌的进展、转移密切相关,对其检测可能有助于患者预后及治疗效果的评估。

     

CD8+T细胞和调节性T细胞在食管癌中表达及与预后的关系

目的 探讨食管癌组织中CD8+T细胞、Foxp3阳性调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)表达及对预后的影响.方法 应用免疫组织化学SP法检测CD8、Foxp3在90例食管癌组织间质、癌巢中的表达,计数阳性细胞,分析阳性细胞数目与预后的关系.结果 间质中CD8+T细胞的数量与浸润深度、分化程度呈负相关(P<0.05);Foxp3+Treg细胞数量与淋巴结转移、病变长度呈正相关(P<0.05).本组病例3年总生存率66.67%(60/90).单因素生存分析显示,无论癌巢或间质中,CD8+T细胞计数高者的总体生存曲线优于计数低者,差异有统计学意义(P<0.05);roxp3+Treg细胞计数高者的累计生存情况较计数低者差(P<0.05).多因素分析显示,间质浸润的CD8+T、Foxp3+Treg细胞数量和病变长度是影响生存期的独立因素(P<0.05).结论 间质中浸润的CD8+T细胞数量、Foxp3+Treg细胞数量是影响食管癌患者预后的独立因素,Foxp3+Treg细胞数量增多预后不良,CD8+T细胞数量增多则预后良好.     

不同免疫抑制剂对肝移植受者外周血中调节性T淋巴细胞比例的影响

目的 探讨西罗莫司(SRL)和钙调磷酸酶抑制剂(CNI)对肝移植受者外周血中CD4+CD25high T淋巴细胞水平的影响.方法 排除肝移植远期移植肝功能异常的受者,将移植肝功能长期(超过2年)稳定的受者47例纳入研究,其中免疫抑制方案使用SRL者15例(SRL组),使用CNI(均为他克莫司)者32例(CNI组).以同期38名健康成人志愿者作为正常对照.使用流式细胞仪检测各组受试者外周血中单个核细胞CD4、CD25及Foxp3的表达水平,比较各组间外周血中CD4+CD25high调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的差异.结果 与正常对照组相比,CNI组外周血淋巴细胞中CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著减少(P<0.05),SRL组CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).SRL组、正常对照组和CNI组受试者外周血中CD4+ CD25high Foxp3+ Treg 细胞占CD4+ T淋巴细胞的比例依次降低,分别为1.88%(1.56%～2.60%)、1.15%(0.57%～1.48%)和0.84%(0.46%～1.45%),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).CD4+ CD25 high T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率超过95%,CD4+ CD25 low T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率低于20%,CD4+ CD25-T淋巴细胞不表达Foxp3.结论 SRL可促进肝移植受者外周血中Treg细胞水平的升高,而CNI可降低Treg细胞的水平.     

蛋白质精氨酸甲基转移酶5和驱动蛋白超家族23在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的观察蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)和驱动蛋白超家族23(KIF23)在结直肠癌的癌组织中表达,探讨PRMT5和KIF23的表达水平与结直肠癌病理特征的关系。方法收集2015年5月至2020年5月惠州市中心人民医院联合广东医科大学附属医院经病理学确诊的结直肠癌组织标本及对应癌旁正常组织标本93例,采用免疫组织化学法检测当中组织的PRMT5和KIF23表达,组间比较采用χ²检验。结果结直肠癌的癌组织中PRMT5表达率为72.04%(67/93),显著高于癌旁正常组织中PRMT5表达率17.20%(16/93),两者比较差异有统计学意义(χ²=56.590,P<0.01);结直肠癌的癌组织中KIF23表达率63.44%(59/93),显著高于癌旁正常组织中KIF23表达率12.90%(12/93),两者比较差异有统计学意义(χ²=50.321,P<0.01)。PRMT5表达水平和结直肠癌的组织学分化程度、淋巴结转移、肿瘤淋巴结转移(TNM)分期呈明显相关(χ²=6.364、7.107、5.415,P<0.05),KIF23表达水平和结直肠癌的浸润深度、组织学分化程度、淋巴结转移、TNM分期呈明显相关(χ²=5.911、4.543、7.560、4.1560,P<0.05)。结论PRMT5和KIF23在结直肠癌的癌组织中呈高表达,与结直肠癌临床病理特征具有一定关系。     

胃癌中CXCR4和CD133的表达及其对淋巴转移的影响

目的:探讨CXCR4和CD133在胃癌原发灶中的表达及其对淋巴转移的影响。方法:对50例原发性胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织行免疫组化染色法定位检测CXCR4和CD133蛋白;选用半定量RT-PCR及Western blot法测定CXCR4和CD133 mRNA与蛋白表达量,分析两者的相关性及其与淋巴管浸润和淋巴结转移的关系。结果:CXCR4和CD133分子均定位于肿瘤细胞膜表面,极少数CXCR4位于细胞核内。胃癌组织中CXCR4和CD133表达阳性率及mRNA和蛋白的表达量均明显高于癌旁胃黏膜组织(均P<0.05);CXCR4和CD133 mRNA相对灰度值在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P=0.011,P=0.038);N1组CXCR4蛋白相对灰度值明显高于N0组(P=0.023),而低于N2+N3组(P=0.008),N1组和N2+N3组CD133蛋白灰度值明显高于N0组(P=0.04,P=0.01),但N1组与N2+N3组之间无明显差异;淋巴管浸润组中的CXCR4和CD133蛋白相对灰度值均高于淋巴管无浸润组(P<0.05);在淋巴转移患者中,CXCR4和CD133蛋白相对灰度值分别与转移淋巴结数(r=0.480,r=0.426)及转移性淋巴结比率(r=0.502,r=0.489)呈正相关。结论:CXCR4和CD133在胃癌原发灶中高表达,两者呈正相关,其联合表达与转移淋巴结比率和转移淋巴结数呈正相关,推测胃癌CD133阳性细胞亚群可能在CXCR4介导下更易导致淋巴管浸润和淋巴结转移。     

CD105和VEGF在大肠癌新生血管中的表达

目的　探讨CD 10 5和血管内皮生长因子 (VEGF )在大肠癌新生血管中的表达及两者之间的关系。方法　采用鼠抗人CD10 5和免疫人VEGF单克隆抗体 ,通过免疫组化技术对 48例大肠癌手术切除标本及 48例远癌大肠组织的微血管密度 (MVD)及VEGF进行检测。结果　以CD10 5标记的大肠癌组织MVD及VEGF的表达与远癌组织间的差异具有非常显著性 (P <0 .0 1) ;大肠癌组织中MVD与VEGF的表达呈显著正相关 (P <0 .0 1) ;大肠癌组织MVD及VEGF的表达均与大肠癌的淋巴结转移、远处转移及Dukes分期有关 (P <0 .0 1)。结论　CD10 5和VEGF在大肠癌组织新生血管中均有良好表达 ,可作为大肠癌新生血管有价值的标志物。     

胃癌组织中CD133的表达及其临床意义

目的研究胃癌组织中CD133表达的相互关系,重点明确术前、术后外周血单核细胞中CD133mRNA表达的临床意义及其与胃癌原发灶CD133表达的关系。方法 50例胃癌、10例胃溃疡穿孔及10名健康自愿者入组研究。胃癌患者术前和术后1周抽外周静脉血各4 ml,密度梯度离心法分离单核细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD133 mRNA表达水平。胃溃疡穿孔患者术前抽外周静脉血、健康自愿者抽晨血各4 ml。胃癌原发灶及癌旁正常胃黏膜组织分别行RT-PCR、免疫组织化学染色检测CD133 mRNA和蛋白的表达。分析CD133表达对各临床病理特征和预后的影响。结果健康自愿者及术前胃溃疡患者及胃癌患者外周血中CD133 mRNA的半定量值分别为0.029±0.060、0.059±0.099及0.270±0.163(P=0.000)。胃癌患者术前外周血CD133 mRNA表达与肿瘤组织分化程度、淋巴管浸润、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均有关(P<0.05)。相关分析显示,胃癌患者术前外周血中CD133 mRNA半定量值与淋巴结转移率(rs=0.422,P=0.002)、癌转移淋巴结枚数(rs=0.398,P=0.004)呈正相关,并与胃癌原发灶中CD133 mRNA的表达呈正相关(rs=0.337,P=0.017)。胃癌原发灶中CD133蛋白表达阳性者,术前外周血中CD133 mRNA的半定量值较CD133蛋白表达阴性者高(Z=-2.539,P=0.011)。50例胃癌患者行胃癌根治术后1周,其外周血中CD133 mRNA半定量值明显高于术前CD133 mRNA的表达水平(P=0.021)。胃癌浸润深度较深者,术后CD133 mRNA表达升高更明显(Z=-1.978,P=0.039)。术后外周血中CD133 mRNA高表达者较低表达者预后更差(χ2=6.193,P=0.013)。结论胃癌患者术前外周血高表达CD133 mRNA,其与肿瘤分化程度、淋巴管浸润、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及胃癌原发病灶CD133蛋白表达有关,且与淋巴结转移率、癌转移淋巴结枚数及胃癌原发灶中CD133 mRNA的表达呈正相关。术后患者外周血中CD133 mRNA半定量值较术前明显升高,这一升高提示肿瘤浸润程度较深,患者预后较差。