茯苓等9种中药植物雌激素活性筛选的实验研究

目的对几种中药进行了植物雌激素的活性筛选。方法采用人乳腺癌细胞增殖法与酵母茵雌激素筛检实验法对9种中药进行了植物雌激素活性的研究。结果成功地建立了E—SCREEN法与Yeast Estrogen Screen实验法，此两种方法均可检测到1×10^-13mol／L的雌二醇。在这两种体外雌激素活性筛选实验条件下，当归、泽泻、川芎、牡丹皮、桂枝均有雌激素活性；而茯苓、桃仁则无雌激素样活性。结论E—SCREEN法敏感性高，并有快速、简便等优点，适用于大量化合物的初选。     

四物汤及其组方中药的药物血清对MCF-7细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的:探讨四物汤及其组方的四味中药的药物血清对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响,评价其植物雌激素活性.方法:正常性未成熟雌性SD大鼠,体重70±5g,按体重均衡和随机的原则分为7组(正常对照组、己烯雌酚组、四物汤组、熟地组、白芍组、当归组和川芎组),每天分别早、晚两次灌胃给药,给药均持续4d,第5d腹主动脉取血,分离血清,0.22p.m微孔滤膜过滤,-20℃贮存备用.应用MTT法检测药物血清对MCF-7细胞增值率、流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率.结果:白芍、当归和川芎等中药的药物血清均可显著促进MCF-7细胞体外增殖(P＜0.01),熟地可促进MCF-7细胞体外增殖(P＜0.05),熟地、当归和川芎等中药的药物血清均可显著促使MCF-7细胞S期细胞数和细胞增殖指数PI增加(P＜0.01),白芍的药物血清均可促使MCF-7细胞增殖指数PI增加(P＜0.05),而在本实验条件下四物汤复方的舍药血清使MCF-7细胞数略有增加,但无统计学意义(P＞0.05);白芍、当归、川芎和四物汤的药物血清均可显著抑制MCF-7细胞的凋亡(P＜0.01);结论:熟地、白芍、当归和川芎等中药有植物雌激素活性,本实验配伍比例条件下,四物汤复方的植物雌激素活性弱于其组方的各味中药.     

赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响

目的：评价赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响。方法：采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，分别以E-SCREEN法观察赤豆提取物对其增殖的影响，以RT-PCR法、Western blot法观察赤豆对孕激素受体mRNA和蛋白表达的影响，并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价赤豆提取物发挥雌激素样作用的机制。结果：与溶剂对照组比较，赤豆（10～200 μg·mL^-1）能显著促进MCF-7细胞的增殖，100 μg·mL^-1时作用达到最大；赤豆提取物能明显诱导MCF-7细胞孕激素受体(PR)基因mRNA和蛋白的表达，以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论：赤豆提取物具有雌激素活性，此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。     

黑大豆乙醇提取物的雌激素样作用及其机制研究

目的:评价黑大豆乙醇提取物(black soybean ethanol extract,BSE)的雌激素样作用及其作用机制。方法:采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞,分别以E-SCREEN法观察BSE对其增殖的影响、以RT-PCR法观察BSE对其雌激素效应基因mRNA表达的影响,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价BSE发挥雌激素样作用的机制。结果:与溶剂对照组相比较,BSE(10～200μg.mL^-1)能显著促进MCF-7细胞的增殖,100μg.mL^-1时作用达到最大;BSE能明显诱导MCF-7细胞pS₂,孕激素受体(PR)基因mRNA的表达,并与药物浓度有一定相关性;以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论:BSE能促进MCF-7细胞的增殖,诱导雌激素效应基因mRNA的表达,即BSE能通过雌激素受体发挥雌激素样作用。     

基于共转染的植物雌激素活性成分筛选方法的建立与应用

目的:建立一种以共转染为基础的、高效灵敏的植物雌激素活性成分的细胞筛选方法,应用此方法研究鹰嘴豆提取部位的雌激素效应.方法:RT-PCR方法扩增人雌激素受体α(hERα)cDNA,并构建哺乳细胞表达载体pERα.将此载体与含有雌激素应答序列(3 ×ERE)的Luc报告基因载体(pERE-Luc)以不同比例共转染MCF-7细胞,比较不同比例下Luc的活力,确定最佳共转染比例.用芒柄花素、鹰嘴豆豆芽素A和染料木素等植物雌激素验证了该模型的灵敏性,并进一步测定了鹰嘴豆不同提取部位的Luc活力.结果:将pERα与pERE-Luc共转染MCF-7细胞,与pERE-Luc单转染相比,显著提高Luc的活力,且在10∶1( pERE-Luc∶ pERα)时活力最高,Luc活力提高了5倍.用此转染比例测定芒柄花素、鹰嘴豆豆芽素A和染料木素等植物雌激素Luc活力测定结果表明,共转染能诱导Luc的表达,且ER特异性抑制剂ICI 182,780能抑制其活性.利用此模型发现鹰嘴豆的70％乙醇总提取物、乙酸乙酯部位和石油醚部位均具有大量的雌激素活性物质.ICI 182,780能有效抑制其雌激素效应.结论:成功建立了一种共转染为基础的植物雌激素活性成分的筛选方法,该方法具有较高的特异性和灵敏性,可用于植物雌激素活性成分的筛选.     

糖苷酶处理后药用植物提取物的雌激素活性

为了评价药用植物提取物的雌激素活性,用柚苷酶预处理,以MCF-7人乳腺癌细胞增殖及酵母双杂交试验诱导的b-半乳糖苷酶活性为指标,对29种药用植物提取物的雌激素活性进行筛选。 材料与方法:①将干燥的29种植物的药用部分(10g)粉碎,用50mL甲醇回流提取2h,提取液过滤,真空蒸干得甲醇提取物。②每种药用植物的甲醇提取物(40mg)与柚皮苷(20mg)混合后,加入2mL 0.2M乙酸盐缓冲液(pH 4.7),37℃温育3h。混合物用水饱合丁醇(3mL×3)提取,提取液真空浓缩得柚苷酶处理的提取物。③以MCF-7增殖和酵母双杂交试验检测上述提取物的雌激素活性。 结果:①…     

金雀异黄酮与芹菜素的雌激素样作用体外研究

目的:用雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7,检测金雀异黄酮(genistein)与芹菜素(apigenin)的雌激素样活性大小。方法:用MTT法研究金雀异黄酮与芹菜素对体外培养MCF-7细胞增殖的影响;Real-time RT-PCR法检测其对ERα,ERβ,PR,PS2 mRNA表达水平的影响。结果:金雀异黄酮与芹菜素促进MCF-7增殖;金雀异黄酮的1×10-10mol.L-1组显著增加ERαmRNA的表达水平,是对照组的17.76倍,是阳性对照E2组的1.75倍。芹菜素显著促进了PR mRNA表达水平,是对照组4.57倍,并达到E2组1.11倍。两者在不同浓度对ERα,ERβ,PR,PS2 mRNA中的一个或几个均有不同的促进作用。结论:金雀异黄酮与芹菜素均有明显的雌激素样作用,虽对于不同的雌激素应答基因(ERα,ERβ,PR,PS2 mRNA)表现出不同的促进表达作用,但金雀异黄酮更加强烈。提示植物雌激素发挥雌激素样作用的信号途径与雌激素信号途径并不完全相同;黄酮类药物的B环位置是雌激素样活性的关键位点之一,异黄酮(B环处于3位时)的雌激素样活性大于黄酮(B环处于2号位)。     

用重组酵母筛选模型评价黑种草中酚类成分的雌激素样活性

黑种草 Nigella damascena L.种子的主要成分为生物碱、萜类和黄酮类。作者采用重组酵母雌激素实验法研究了该植物种子的多种提取物及酚类成分的雌激素样活性。试药为该植物种子的甲醇、氯仿-甲醇和水提取物及3种酚类成分2,4-二羟基苯乙酸(1)、3,4-二羟基-β-苯乙醇(2)和2,4-二羟基苯乙酸甲酯(3),17β-雌二醇作阳性对照。     

杜仲雌激素样作用实验研究

目的用体外实验检测杜仲的雌激素样作用,并对其可能的作用机制进行探讨。方法采用MCF-7细胞增殖实验对杜仲进行雌激素样活性筛选,稳定转染ERα-ERE、ERβ-ERE荧光素酶报告基因的HEK293细胞荧光表达实验、蛋白质免疫印迹法探讨其作用机制。结果杜仲在0.5 ～1 mg/ml时可诱导MCF-7细胞增殖,1 mg/ml杜仲能显著促进ERE报告基因荧光素酶表达,差异有统计学意义(P 0.05、P 0.01 或P 0.001),1 mg/ml可上调雌激素受体ERα、ERβ的蛋白表达,0.5 ～1 mg/ml可上调雌激素膜受体GPR30的表达。结论杜仲具有雌激素样作用,其作用机制在于能与雌激素受体结合发挥作用。     

五加生化胶囊提取物对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的：观察五加生化胶囊的类雌激素样作用及有效药用部位。方法用 D-101型大孔树脂柱将五加生化胶囊60%乙醇提取物分离为水洗脱部位、20%乙醇洗脱部位、40%乙醇洗脱部位、60%乙醇洗脱部位，并将各洗脱部位分别配制成10、1、0.1、0.01 mg/ml 4个浓度，作用于MCF-7细胞，进行噻唑蓝（MTT）法检测，计算增殖率（PR）。结果在0.1 mg/ ml浓度时，水、20%乙醇及60%乙醇洗脱部位对 MCF-7细胞增殖均无影响（PR 分别为98.10%、101.06%、106.04%），与空白对照组比较(PR为100%)，差异无统计学意义（P＞0.05）；40%乙醇洗脱部位可促进 MCF-7细胞增殖（PR为108.22%），差异有统计学意义（P＜0.05）。在1 mg/ml浓度时，20%、40%及60%乙醇洗脱部位（PR分别为111.72%、122.48%、115.35%）均可明显促进MCF-7细胞增殖，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论五加生化胶囊40%乙醇洗脱部位植物雌激素活性最强。     

6种中药活性成分植物雌激素作用的比较研究

 目的观察蜕皮甾酮等6种中药活性成分对MCF-7细胞增殖、细胞周期的影响,以探讨它们的植物雌激素样作用及其可能机制。方法采用MTT细胞增殖实验观察6种中药活性成分:蜕皮甾酮、红花黄色素A、丹参酮I、丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素对雌激素受体(ER)阳性细胞系MCF-7增殖的影响,并以雌激素受体拮抗剂IC I182,780干预,探讨其发挥雌激素样作用的可能机制。同时,通过流式细胞术检测这些活性成分对MCF-7细胞增殖周期的影响。结果蜕皮甾酮、红花黄色素A、补骨脂素、异补骨脂素能够促进ER阳性细胞系MCF-7增殖,并将细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数。同时,加入ER拮抗剂IC I182,780可抑制其促增殖作用。丹参酮I和丹参酮ⅡA能够抑制ER阳性细胞系MCF-7增殖,但对其细胞周期影响不显著。同时,加入ER拮抗剂IC I182,780可减弱其对MCF-7增殖的抑制作用。结论蜕皮甾酮、红花黄色素A、补骨脂素、异补骨脂素能够促进MCF-7增殖,而丹参酮I和丹参酮ⅡA可抑制MCF-7细胞增殖,其作用均是通过ER介导的。     

千斤拔中的天然雌激素

日本富山医科药科大学的研究人员在对多种药用植物进行天然雌激素化合物筛选过程中发现,蔓性千斤拔(Moghania philippinensis)的甲醇提取物对人乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖以及酵母双杂交试验中对β-半乳糖苷酶的活性诱导均具有显著作用。经雌激素活性指导分离,从中分离得到几个活     

泡桐花提取物的雌激素活性筛选及其对OVA致过敏性哮喘小鼠的保护作用

目的:探讨泡桐花提取物雌激素活性及其对卵清白蛋白(OVA)致过敏性哮喘小鼠的保护作用。方法:体外采用MCF-7细胞模型筛选出泡桐花提取物具有雌激素样活性，采用雌激素受体拮抗剂(ICI182,780)、雌激素受体α拮抗剂(MPP)、雌激素受体β拮抗剂(THC)与雌激素膜受体GPR30拮抗剂(G15)干预雌激素活性有效剂量下的MCF-7细胞增殖，探讨其雌激素受体作用途径;采用小鼠子宫增重试验，计算性未成熟小鼠的子宫指数，以ELISA法检测血清雌二醇(E₂)、促卵泡生成素(FSH)与黄体生成素(LH)含量;采用Westren blot法测定小鼠子宫中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)和雌激素膜受体(GPR30)表达水平，进一步体内验证泡桐花提取物雌激素活性;OVA致过敏性哮喘小鼠模型，分为正常对照组、模型对照组、地塞米松0.5 mg/kg组、泡桐花提取物155、310、620 mg/kg组，每组8只，同时设置雌激素受体拮抗剂ICI182,780组，雾化激发前30 min共同作用小鼠，连续7 d，末次给药24 h后，小鼠脱颈处死，计算免疫器官脾脏和胸腺指数，E...     

舒肝健骨方对成骨样细胞增殖分化的影响及雌激素活性的检测

目的:观察舒肝健骨方对成骨样细胞增殖分化的影响,并检测舒肝健骨方是否有雌激素活性.方法:培养成骨样细胞MG-63,给予不同浓度的舒肝健骨方处理后,MTT法检测复方对MG-63细胞增殖的影响;对硝基苯酚法检测复方对MG-63细胞碱性磷酸酶(Alkaline phosphataae,ALP)活性的影响.培养MCF-7细胞,转染萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶质粒,双荧光素酶报告基因检测试剂检测复方雌激素活性.结果:舒肝健骨方在处理MG-63细胞48,72 h时,0.75～12 g·L-1的剂量能促进成骨样细胞增殖,并且呈现剂量依赖性;在作用24,48,72 h时,促进成骨样细胞碱性磷酸酶活性,呈剂量依赖性.舒肝健骨方的雌激素活性与阴性对照相比无统计学差异,与阳性对照雌二醇相比有显著性差异(P<0.05).结论:舒肝健骨方能够促进成骨样细胞的增殖分化,并且无雌激素活性.     

脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对MCF-7、MDA-MB231细胞株增殖的影响研究

目的比较脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对受体状态不同的人乳腺癌细胞株增殖的影响。方法运用MTT法研究不同浓度的脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对MCF-7、MDAMB231细胞增殖的影响,并以雌激素受体阻断剂ICI182,780和雌激素受体激动剂DPN、PPT为工具药来评价脱水淫羊藿素和金雀异黄酮雌激素样作用与雌激素受体(ERs)的关系。结果脱水淫羊藿素和金雀异黄酮终浓度为10~(-13)~10~(-7)mol/L时,MCF-7细胞株增殖均随浓度升高而增加,呈一定的剂量相关性;而各受试药物任何浓度对MDA-MB231细胞株均无显著增殖效果。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ICI182,780时,MCF-7细胞增殖作用被拮抗,MDA-MB231细胞增殖无明显变化。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ERα受体通路激动剂PPT时,MCF-7细胞增殖率明显增高(P<0.05),MDA-MB231细胞增殖无明显变化。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ERβ受体通路激动剂DPN时,MCF-7和MDA-MB231细胞增殖均无明显变化。结论脱水淫羊藿素与金雀异黄酮在一定剂量范围内均有雌激素样作用,两者作用相当,体外实验促进MCF-7细胞增殖作用可能主要是由ERα介导,而非ERβ介导。     

槲皮素对人类乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察槲皮素（Quercetin，Que）对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用MTT法测定槲皮素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231细胞增殖作用，并以雌激素受体拮抗剂ICI182、780为工具药来评价槲皮素发挥雌激素样作用与雌激素受体（ER）的关系，采用流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析。结果与溶剂对照组相比较，Que（10-50μmol／L）能显著促进MCF-7细胞的增殖，而抑制ER阴性MDA-MB231细胞，并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进，促进DNA合成，提高细胞分裂增殖指数，且Que促进MCF-7细胞增殖作用被ER拮抗剂所拮抗。结论Que具有雌激素活性，此作用是通过ER介导的。     

植物雌激素的研究进展

植物雌激素是植物中一类结构与功效类似于动物雌激素的天然杂环多酚类化合物,能够与雌激素受体亚基(ERα或ERβ)结合,发挥雌激素样或抗雌激素样作用。就植物雌激素成分的结构分类以及含植物雌激素成分的中药进行归纳总结,以期在数以千计的中药中寻找到具有雌激素样或抗雌激素样活性的新药源。     

总状升麻根茎中酚酯类成分未引起乳腺癌MCF-7细胞增殖

有研究显示,总状升麻Cimicifuga racemosa(L.)Nutt.根茎商用提取物中富含苯丙素酸酯的部位对人乳腺癌细胞株MCF-7显示出雌激素样作用,蜂斗菜酸是其活性成分之一。作者提取分离了总状升麻提取物中苯丙素酯和其他酚类成分,重新研究了提取部位、化合物对MCF-7细胞株增殖的作用。将     

黄芪注射液在生理量雌二醇环境下对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:探讨黄芪注射液在生理剂量雌二醇环境下对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响.方法:实验设细胞对照组,他莫昔芬对照组和生理剂量雌二醇环境下5个不同剂量的黄芪注射液组.用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡率,DAN ladder观察凋亡条带.结果:各剂量组黄芪注射液均无促MCF-7细胞增殖效应,且随作用时间延长,均能抑制MCF-7细胞增殖(P＜0.05),并呈剂量依赖性.在质量浓度为2×10-1～2×10-4 g/mL时,各剂量黄芪注射液作用24 h均可使MCF-7细胞周期阻滞于G0/G1或S期(P＜0.05).高剂量(2×10-1g/mL)黄芪注射液作用72 h可诱导MCF-7细胞凋亡.结论:一定剂量范围内的黄芪注射液可抑制激素受体阳性乳腺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞的有丝分裂于G0/G1或S期.     

雌激素受体阴性/阳性MCF-7细胞增殖速度差异及对鸡血藤提取物敏感性的研究

目的明确雌激素受体（ER）阴性、阳性MCF-7细胞增殖速度差异以及不同MCF-7细胞对鸡血藤黄酮类提取物SSCE抗肿瘤作用的敏感性。方法免疫细胞化学（ICC）方法确定3种MCF-7细胞（MCF-7-a、MCF-7-b、MCF-7-luc）ER表达情况,MTT法检测3种细胞的增殖速度以及对SSCE抑制肿瘤细胞生长作用的敏感性。结果 ER（＋）的MCF-7-a、ER（-）的MCF-7-b和MCF-7-luc倍增时间分别为（69.95±9.37）h、（47.17±5.27）h、（44.96±10.33）h,24 h、48 h、72 h各个时间点MCF-7-luc对SSCE的半数抑制浓度均低于另外两株细胞。结论 ER（-）的乳腺癌细胞恶性增殖速度高于ER（＋）的乳腺癌细胞;荧光素酶基因标记的ER（-）MCF-7细胞对SSCE抗肿瘤作用更加敏感;提示ER的表达情况与乳腺癌的恶性增殖程度有关,基因重组可能影响了细胞膜表面蛋白的表达,从而增强了细胞对药物的敏感性。