GM-CSF/IL-4基因修饰的瘤苗不同的免疫途径诱导不同免疫反应的观察

对细胞因子基因修饰瘤苗的研究表明,IL-2、IL-4、IFN-γ、GM-CSF等一系列细胞因子基因以不同载体转入肿瘤细胞制成瘤苗后皮下免疫小鼠,均可增强机体抗肿瘤免疫力,其机制可能是由于瘤苗分泌的细胞因子促进了免疫细胞对肿瘤抗原的识别、提呈及对肿瘤细胞的杀伤能力.有文献报道,逆转录病毒介导的GM-CSF和IL-4共同转染瘤苗可以有效激发机体抗肿瘤免疫力,为探讨不同途径瘤苗免疫后机体的免疫反应,我们采用皮下、腹腔、脾内、静脉四种途径接种GM-CSF、IL-4基因双重转染的小鼠红白血病细胞FBL-3瘤苗,发现免疫途径不同,所激发的免疫应答类型不同,诱导机体生成的免疫力不同,提示某些瘤苗应用时应选择适当的免疫途径.     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

瘤体内注射GM-CSF重组痘苗病毒的抗肿瘤免疫机理研究

痘苗病毒通过同源重组．可以用外来基因代替其胸苷激酶(TK）基因，得到表达外源基因的重组痘苗病毒。我们用表达小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的痘苗病毒(VVGM-CSF)治疗皮下荷B16黑色素瘤的C57BL／6小鼠。结果发现，该病毒体外感染B16细胞后可释放高水平的GM-CSF(26．5ng／ml)，     

A-LAK细胞的诱导及体内外抗肿瘤活性

淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL）无论在动物实验体系或人类肿瘤及转移的实验治疗中都获得了肯定的疗效。然而．这种疗法的临床治疗效果仅在部分病人中获得，维持时间短暂，且需大量LAK细胞及大剂量基因重组的白细胞介素-2(rIL-2)，而后者在部分病例中可产生较严重的毒性反应，     

成纤维细胞介导的IL-2及IL-6基因疗法增强常规瘤苗抗肿瘤作用的实验研究

研究表明，IL-2、IL-6单独或联合应用具有较强的抗肿瘤作用，但当大剂量使用时，却伴随着一系列毒副作用的发生，IL-6相对其它细胞因子具有毒性小功能广泛等优点，它能刺激T细胞的分化与增殖、诱导IL-2及IL-2R的表达，IL-2在免疫反应过程中也发挥了重要调节作用．其作用之一是能刺激杀伤性T细胞的增殖并增强其杀伤活性。     

hMIP-1β基因修饰瘤苗体内诱导抗肿瘤免疫效应的研究

目的：探讨人巨噬细胞炎性蛋白-1β（hMIP-1β）基因修饰瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫效应。方法：通过重组腺病毒载体介导将hMIP-1β基因导入CT26细胞中,X-gal染色法检测基因转染效率;ELISA法检测hMIP-1β基因修饰CT26细胞培养上清中hMIP-1β的含量;Boyden趋化小室法检测培养上清对CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、NK细胞及未成熟树突状细胞（imDCs）的趋化作用;制备hMIP-1β基因修饰的CT26细胞瘤苗并免疫BALB／c小鼠,观察其诱导免疫细胞的杀伤活性和保护性免疫反应。结果：腺病毒载体可介导hMIP-1β基因转染CT26细胞和表达（X—gal染色的阳性率〉95％）,培养上清中hMIP-1β水平为980pg／mL,并对CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、NK细胞及imDCs有显著的趋化作用,与转染对照基因LacZ的CT26细胞及野生型CT26细胞比较差异均有统计学意义,P〈0．01。hMIP-1β基因修饰的CT26细胞瘤苗免疫小鼠能有效诱导肿瘤特异性CTL活性和非特异性NK活性,产生明显的免疫保护作用,可抵抗肿瘤细胞的再攻击,成瘤率降低,肿瘤生长速度减慢,小鼠生存期延长。结论：hMIP-1β基因修饰瘤苗可诱导产生有效的抗肿瘤免疫保护作用,有希望成为预防肿瘤转移与复发的有效手段。     

放疗或化疗诱导淋巴细胞减少联合免疫重建和瘤苗免疫

目的利用淋巴细胞减少期T细胞发生增殖活化的原理,以全身照射或环磷酰胺引起淋巴细胞减少,联合免疫重建及肿瘤疫苗免疫,以增强机体的肿瘤特异性免疫反应。方法分别以放疗或化疗（环磷酰胺）引起小鼠淋巴细胞减少,然后输入同系小鼠的未致敏脾细胞,建立免疫重建的淋巴细胞减少小鼠模型（RLM）。用黑色素瘤细胞F10对前者行免疫．肿瘤攻击实验,并行T细胞亚群清除试验。而化疗-RLM-免疫模型的抗肿瘤免疫反应效果通过过继免疫治疗检测。免疫用瘤苗为GMCSF修饰的黑色素瘤细胞D6-G6。免疫后9～10d,采集肿瘤疫苗接种部位的引流淋巴结,制备效应T细胞,然后过继回输给荷瘤3d（D5）的小鼠。2周后处死小鼠,计数肺转移灶数目。结果63．2％的放疗-RLM-免疫组小鼠可对肿瘤攻击产生抵抗,显著高于正常-免疫组（16．7％,P〈0．0001）。CD8^＋T细胞是介导抗肿瘤保护性免疫的主要效应细胞。延长免疫重建和瘤苗接种之问的间隔可削弱保护性抗肿瘤免疫。化疗-RLM-免疫组效应T细胞的在体抗肿瘤活性显著强于正常．免疫组。结论在放、化疗引起的淋巴细胞减少期进行瘤苗免疫,有助于打破机体对肿瘤的免疫耐受,增强抗肿瘤免疫反应。     

分泌不同水平IL-2的基因修饰瘤苗具有不同的治疗效果

通过一系列动物模型，已经对IL-2基因修饰的瘤苗的免疫调节作用和肿瘤治疗效果进行了广泛研究，并且IL-2基因修饰的瘤苗已进入临床试用阶段。本研究表明，此种瘤苗分泌IL-2水平不同会直接影响其治疗效果，为了进行实验，作者制备了体外分泌21种不同水平IL-2(0．01～7500U／10^5细胞／天)的M-3黑色素瘤细胞，此水平囊括了目前为止所有报道的IL-2基因转染瘤苗分泌IL-2的水平。     

巨噬细胞在MIF基因修饰瘤苗诱导小鼠抗肿瘤免疫中的作用 *

研究巨噬细胞游走抑制因子（MIF）基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应的机理。方法： MIF基因修饰的FBL3瘤苗小鼠免疫后,观察腹腔巨噬细胞数量和功能的变化。结果： MIF基因修饰的瘤苗免疫后,小鼠腹腔巨噬细胞的数量,表面免疫相关分子的表达,以及TNF-α和NO的分泌水平增高,吞噬功能、杀伤活性和抗原提呈功能增强。结论： MIF基因修饰的瘤苗体内免疫后,其分泌的MIF显著增强了巨噬细胞的功能,被活化的巨噬细胞在瘤苗诱导机体抗肿瘤免疫中起重要的作用。     

TNF—α基因修饰瘤苗的抗肿瘤作用研究

本实验观察比较了H22肿瘤细胞TNF一x基因修饰前后的体内致瘤性及经照射后作为瘤苗的治疗作用.结果表明在实验剂量范围内,H22-TNF-x细胞较H22原肿瘤细胞致瘤性下降,且经照射后作为瘤苗对一定剂量的原肿瘤细胞有治疗作用.为基因修饰瘤苗的进一步研究打下基础.     

自体瘤苗治疗实体肿瘤对免疫功能的影响

目的:探讨自体瘤苗治疗实体瘤的临床应用价值及对患者免疫功能的影响。方法:46例瘤苗组实体瘤术后患者应用自体瘤苗,并与对照组20例进行比较,对其疗效进行判断评价,检测治疗前后外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值变化及NK细胞的活性、IgA、IgG、IgM免疫球蛋白水平。结果:瘤苗组治疗后CD3+,CD4+、CD4+/CD8+、免疫球蛋白水平较治疗前显著增加(P<0.05),对照组无明显变化(P>0.05)。近期随诊也表明瘤苗组效果明显优于对照组(P<0.01)。结论:自体瘤苗疗法可以恢复实体肿瘤患者受损的细胞免疫功能,提高治疗效果。     

冷冻瘤苗刺激的肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖及抗肿瘤活性研究

目的　研究两种不同肿瘤组织中分离的肿瘤浸润性淋巴细胞在冷冻瘤苗刺激下的增殖反应和抗肿瘤作用。方法　利用冷冻瘤苗刺激从肝癌组织、头颈恶性肿瘤组织手术标本中分离得到的TIL ,在培养 3 0天后 ,观察TIL的增殖反应及抗肿瘤活性。结果　冷冻瘤苗刺激后的TIL与未经冷冻瘤苗刺激的TIL相比 ,扩增倍数无显著差异。但抗肿瘤活性显著提高。结论　冷冻瘤苗刺激可使TIL的肿瘤杀伤活性大为增强 ,但并不能使TIL细胞更有效地扩增。     

MIP-1β基因修饰增强肿瘤相关抗原致敏树突状细胞的抗肿瘤免疫效果

目的:探讨通过增强树突状细胞(dendritic cells,DC)与T细胞的相互作用来进一步增强DC介导的抗肿瘤免疫效果.方法:体外培养的小鼠骨髓DC体外经携带人MIP-1β基因的重组腺病毒(adenovirus expressing human macrophoge inflammatory protein-1 beta,AdhMIP-1β)转染后(MIP-1β-DC),用小鼠CT26结肠腺癌细胞相关抗原冲击致敏,然后免疫正常同系小鼠,观察其体内诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的保护性免疫反应;通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分子在DC诱导抗肿瘤免疫应答中的作用.结果:经抗原致敏的MIP-1β-DC能更有效地诱导特异CTL活性,能使免疫动物产生更有效的免疫保护作用,抵抗肿瘤细胞的攻击.通过对其抗肿瘤免疫机理的分析发现,CD4 、CD8 T细胞共同参与了经抗原致敏的MIP-1β-DC介导的抗肿瘤免疫反应,是主要的抗瘤效应细胞,NK细胞作用不明显.结论:通过基因修饰增强树突状细胞对T细胞的体内趋化活性,能更有效地诱导抗肿瘤免疫反应,为树突状细胞介导的肿瘤免疫基因治疗开辟了新的途径.     

MIP-1β基因修饰增强肿瘤相关抗原致敏树突状细胞的抗肿瘤免疫效果

目的：探讨通过增强树突状细胞(dendritic cells, DC)与T细胞的相互作用来进一步增强DC介导的抗肿瘤免疫效果。方法：体外培养的小鼠骨髓DC体外经携带人MIP1β基因的重组腺病毒(adenovirus expressing human macrophoge inflammatory protein1 beta, AdhMIP1β)转染后(MIP1βDC)，用小鼠CT26结肠腺癌细胞相关抗原冲击致敏，然后免疫正常同系小鼠，观察其体内诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)的保护性免疫反应；通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分子在DC诱导抗肿瘤免疫应答中的作用。结果：经抗原致敏的MIP1βDC能更有效地诱导特异CTL活性，能使免疫动物产生更有效的免疫保护作用，抵抗肿瘤细胞的攻击。通过对其抗肿瘤免疫机理的分析发现，CD4+、CD8+ T 细胞共同参与了经抗原致敏的MIP1βDC介导的抗肿瘤免疫反应，是主要的抗瘤效应细胞，NK细胞作用不明显。结论：通过基因修饰增强树突状细胞对T细胞的体内趋化活性，能更有效地诱导抗肿瘤免疫反应，为树突状细胞介导的肿瘤免疫基因治疗开辟了新的途径。     

热休克预处理对瘤苗免疫效果的影响

肿瘤疫苗的特异性主动免疫效应与热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）密切相关。ＨＳＰ具有抗原肽伴侣（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）作用,ＨＳＰ作为一种载体结合肿瘤特异性抗原可诱导机体产生对其来源细胞具有杀伤活性的γδＴ细胞,表现出特异性的抗肿瘤免疫作用［１］。在体外培养条件下,热休克处理可诱导Ｈ２２肝癌细胞表面ＨＳＰ７０的表达［２］本文探索在Ｈ２２肝癌疫苗制备过程中,热休克预处理是否能增强小鼠Ｈ２２肝癌细胞瘤苗的特异性主动免疫效果。１ 材料与方法１．１ …     

恶性黑色素瘤冷冻瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的 寻求提高肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的抗肿瘤活性。方法 通过应用恶性黑色素瘤冷冻瘤苗来激活TIL，观察其抗肿瘤活性的改变。结果 经冷冻瘤苗激活的TIL在培养扩增10、20、30和40d的体外对自体恶性黑色素瘤细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增30d时为最高。结论 经恶性黑色素瘤冷冻瘤苗激活的TIL具有更高的体外杀伤自体恶性黑色素瘤细胞的能力。     

IL-6基因转染瘤苗体内造血调控的实验研究

白血病治疗中的难题之一就是放、化疗所致的血小板显著下降，临床常因此而不得不被迫减量或终止放、化疗。考虑到IL-6不仅具有免疫调节和抗肿瘤作用：而且能够刺激骨髓：脾脏粒细胞和巨核细胞的祖细胞增殖、分化，使外周血小板及中性粒细胞升高。我们用IL-6基因转染入白血精细胞并制备成新型瘤苗，     

TNFα基因和IL-2基因共转染的肿瘤细胞体内致瘤性和瘤苗效果的观察

如同联合应用两种具有协同作用的细胞因子可以达到更佳的免疫治疗效果一样，如果将两种具有协同作用的细胞因子基因共转染人一种肿瘤细胞内，此肿瘤细胞可能会具有更佳的抗肿瘤效果。IL-2和TNFα具有协同抗肿瘤作用和免疫调节作用。因此，本文选用IL-2基因和TNFα基因为共转染的目的基因，通过两步基因转移共转染人B16黑色素瘤细胞，观察了体内致瘤性和瘤苗效果。     

冷冻瘤苗刺激的肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖及抗肿瘤活性研究

目的 研究两种不同肿瘤组织中分离的肿瘤浸润性淋巴细胞在冷冻瘤菌刺激下的增殖反应和抗肿瘤作用。方法 利用冷冻瘤苗刺激从肝癌组织、头颅恶性肿瘤组织手术标本中分离得到的ＴＩＬ，在培养３０天后，观察ＴＩＬ的增殖反应及抗肿瘤活性。结果 冷冻瘤苗刺激后的ＴＩＬ与未经冷冻瘤苗刺激的ＴＩＬ相比，扩增倍数无显著差异。但抗肿瘤活性显著提高。结论 冷冻瘤苗刺激可使ＴＩＬ的肿瘤杀伤活性大为增强，但并不能使ＴＩＬ细胞更有效地扩增。     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。