细胞因子IL-7与IL-15联合优化胃癌EBV特异性CTL细胞培养体系

目的:探讨细胞因子白细胞介素-7（IL-7）和IL-15在胃癌EB病毒（EBV）抗原特异性细胞毒性T细胞（CTLs）培养中较IL-2的优势。方法:提取胃癌患者外周血单个核细胞贴壁培养2 h,贴壁细胞加IL-4和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导树突状细胞（DC）,成熟的DC负载EBV抗原肽与T细胞混合培养,诱导EBV-CTLs,比较在细胞因子IL-2或IL-7/15培养条件下诱导的EBV-CTLs的扩增能力、表型、免疫应答及体外杀伤能力的差别。结果:与细胞因子IL-2相比较,IL-7联合IL-15培养的EBV-CTLs细胞中含有较高比例的CD3+ T细胞［（91.2±1.5）% vs （80.8±1.6）%,P=0.008 4］以及较高比例的CD3+CD8+ T细胞［（66.8±2.3）% vs （30.17±6.9）%,P=0.007 6］;在维持中央记忆性T细胞扩增方面,IL-7联合IL-15扩增的EBV-CTLs细胞中含有较高比例的CD8+CD62L+ T细胞［（26.4±2.3）% vs （9.6±1.4）%,P=0.003 6］及CD8+CD27+ T细胞［（38.5±3.7）% vs （16.7±2.9）%,P=0.01］;在免疫应答能力方面,接触DC负载抗原肽24 h后,IL-7联合IL-15培养的EBV-CTLs能分泌更多的γ干扰素（IFN-γ）,且CD137上调明显高于IL-2组;在体外杀伤实验中,IL-7联合IL-15诱导的EBV-CTLs对表达EBV抗原的靶细胞表现出更强的杀伤作用。结论:IL-7联合IL-15在扩增胃癌抗原特异性EBV-CTLs方面具有优势,扩增的细胞中含有较高比例的CD3+CD8+ T细胞,且能维持中央记忆性T细胞的扩增,表现出有更强的免疫应答和体外抗肿瘤效果,为其进一步临床个体化治疗 EBV阳性胃癌提供客观实验依据。     

个体化新抗原特异性T细胞过继免疫：任重道远，砥砺前行

近年来,肿瘤新抗原掀开了个体化免疫治疗的新篇章,作为基于新抗原个体化免疫治疗的重要组成部分,新抗原特异 性T细胞的过继输注（ACT）疗法备受瞩目。本文将首先从新抗原特异性T细胞ACT治疗应用策略及临床应用现状介绍新抗原 特异性T细胞ACT治疗这一新兴的精准免疫治疗的发展现状,然后从新抗原的预测、新抗原特异性T细胞筛选及扩增等方面系 统地总结新抗原T细胞ACT治疗所面临的阻碍和挑战,最后从优化新抗原预测、增加新抗原特异性T细胞数量和多样性、防止新 抗原特异性T细胞过度分化或死亡、缩短生产周期和减少生产成本及探索联合治疗方式等五个方面对该领域的未来发展机遇和 研究方向进行重点阐述。     

肿瘤特异性γ δ T细胞扩增体系的建立及其抗肿瘤活性研究

目的:建立一种体外诱导肿瘤细胞特异性γ δ T细胞的培养体系.方法:从人外周血中分离单个核细胞(PBMCs),用不同浓度的磷酸抗原(IPP)与rhIL-2联合刺激γ δ T细胞增殖,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后 CD3+Vγ9+的 γ δ T 细胞数量以及比例,并计算其扩增效率.结果:经15天扩增培养后,高浓度组10μg/ml 的IPP联合500IU/ml rhIL-2刺激得到的γ δ T细胞的扩增效率最高,且扩增培养至第9天的γ δ T细胞对肿瘤细胞有一定的杀伤活性.结论:适宜浓度磷酸抗原(IPP)联合rhIL-2能有效体外诱导具有较强抗肿瘤活性γ δ T细胞的扩增.     

负载肝癌抗原的树突状细胞瘤苗诱导的抗肿瘤作用

目的 探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞（DC）体外经自体肝癌细胞抗原致敏后诱导的抗肿瘤作用。方法肝癌患者外周血经梯度密度离心法分离，获得DC前体细胞，用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSP）和重组人白细胞介素-4（rhIL-4）联合培养，诱导扩增DC。制备自体肝癌细胞抗原，体外脉冲DC，检测DC诱导自体T细胞增殖能力及细胞毒性T细胞（CTL）在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性，并检测肿瘤抗原致敏DC分泌的IL-12水平。结果经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能分泌IL-12和诱导较强的自体T细胞增殖，且能诱导特异性CTL，该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性，杀伤率明显高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率，而对3LLLEWIS肺癌细胞、H22肝癌细胞则无明显的．杀伤作用。结论肝癌患者外周血DC经自体肝癌细胞抗原致敏后能诱导高效而特异的抗肝癌免疫，其机制可能与增强T细胞应答和诱导机体产生肿瘤特异CTL而发挥特异性的抗肿瘤作用有关。     

卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究

目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应。方法采用免疫磁珠分离法(magnetic activated cell sorting，MACS)分离纯化正常人外周血CD3^ 细胞，体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激。溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响；MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力；利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性。结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用，且存在时间依赖性，在24h时促进作用最强。SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68．38％，显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18．31％)；而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61．02％和14．79％，有显著的抗原特异性(P=0．0001)。结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用。     

肝癌细胞抗原致敏树突状细胞诱导的体外抗肿瘤作用

目的　探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞 (DC)经自体肝癌细胞抗原致敏后诱导的体外抗肿瘤作用。方法　对肝癌患者外周血采用密度梯度离心法分离 ,获得DC前体细胞 ,用重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)和重组人白细胞介素 4(rhIL 4)联合培养 ,诱导扩增DC。制备自体肝癌细胞抗原 ,体外脉冲DC ,检测DC诱导自体T细胞增殖能力及细胞毒性T细胞 (CTL )在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性 ,并检测肿瘤抗原致敏DC分泌的IL 12水平。结果　经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能分泌IL 12和诱导较强的自体T细胞增殖 ,且能诱导特异性CTL ,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性 ,杀伤率显著高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率 ,而对CT 2 6细胞、BEL 740 2细胞无明显的杀伤作用。结论　肝癌患者外周血DC经自体肝癌细胞抗原致敏后能诱导高效而特异的抗肝癌免疫 ,其机制可能与增强T细胞应答和诱导机体产生肿瘤特异CTL从而发挥特异性的抗肿瘤作用有关。     

肿瘤过继免疫治疗临床级抗原特异性T细胞的研究进展

抗原特异性T细胞是肿瘤过继免疫治疗的核心,靶向性强、杀伤活性高、毒性作用小、疗效卓越的临床级细胞的制备是提高治疗效果的关键。近年来,全封闭自动化T细胞分离系统提高了安全性,新型人工抗原提呈方法和γc家族细胞因子增加了T细胞扩增效率,低分化表型T细胞的选择提高了有效性,而T细胞受体和嵌合抗原受体基因修饰赋予T细胞抗原特异性杀伤性能,病毒基因转导和理化基因转染T细胞方法的不断改进为基因修饰重定向T细胞的抗原特异性提供了保障。越来越多的临床试验展示了令人鼓舞的治疗效果,为肿瘤过继免疫治疗注入了新的生命力。     

脐血CD34^＋细胞体外扩增及树突状细胞诱导的实验研究

目的 研究脐血CD34^＋细胞在体外经造血细胞生长因子扩增后,诱导树突状细胞（DC）并观察该类DC在抗肿瘤免疫中的作用。方法 Ficoll分离脐血单个核细胞,免疫微磁珠法分离纯化CD34^ 细胞,以干细胞因子、flt3配体、白细胞介素－3和红细胞生成素体外扩增2周,诱导DC生成,观察肿瘤抗原负载后诱导特异性细胞毒T淋巴细胞生成和对肿瘤细胞杀伤作用。结果（1）脐血经免疫微磁珠法分离可获得高纯高的CD34^ 细胞;（2）2周体外扩增后,细胞数显著增加达150倍;体外集落试验证实该类细胞可形成粒单细胞集落形成单位／（CFU－GM）;（3）扩增的细胞可成功诱导成DC,并具有活化异体淋巴细胞的功能,负载肿瘤抗原后能诱导发生肿瘤特异性淋巴细胞,并可特异性杀伤Daudi肿瘤细胞。结论 脐血来源CD34^ 细胞在体外能成功地扩增,并诱导产生功能性DC。     

肿瘤冻融抗原协同IL-2诱导的人脐血CTL细胞体外扩增及杀瘤活性的研究

目的观测经肿瘤冻融抗原体外诱导的脐血细胞毒T淋巴(Cytotoxic T Lymphayte,CTL)细胞体外扩增及杀瘤活性.方法以肿瘤冻融抗原协同IL-2体外诱导脐血干细胞,使其中的CD8+细胞得以扩增,获得CTL细胞,观测其表型变化及杀瘤活性.结果CD4+和CD8+T淋巴细胞表达呈增高趋势,但无明显统计学差异;CTL细胞杀瘤活性远高于LAK细胞,且可长期存活.结论CTL细胞可作为过继免疫疗法进行深入应用研究.     

树突状细胞的肿瘤抗原负载

树突状细胞（DC）是体内功能最强的专职抗原提呈细胞，在诱导特异性抗肿瘤免疫反应中起着至关重要的作用。通过体外负载肿瘤抗原致敏DC可以有效地增强其抗原提呈能力，所制备的肿瘤抗原DC疫苗回输体内后可促进机体产生特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）和其他抗肿瘤免疫应答机制，有效地杀伤肿瘤细胞。目前已发展了多种针对DC负载肿瘤抗原的方法，有些方法已被应用到了人体肿瘤治疗。     

Bcap37完全细胞抗原冲击树突状细胞诱导特异性抗乳腺癌免疫实验研究

目的　研究 Bcap37完全细胞抗原冲击树突状细胞 (DC)能否诱导特异性抗肿瘤免疫 ,探索乳腺癌的免疫治疗方法。方法　从人外周血分离单核细胞 ,用 GM- CSF和 IL - 4诱导出 DC,反复冻融制备 Bcap37完全细胞抗原 ,将此抗原冲击的 DC与 T细胞共培养 ,以 7天后分离的 T细胞为效应细胞 ,与肿瘤细胞混合培养 ,MTT法测定对肿瘤细胞的抑制作用。结果　单核细胞经细胞因子诱导 8天 ,形态、表型及功能鉴定为成熟 DC;完全细胞抗原冲击 DC诱导的 T细胞对肿瘤细胞具有明显的抑制作用。结论　 Bcap37完全细胞抗原冲击 DC可有效诱导特异性抗肿瘤免疫     

肿瘤排斥抗原SART1

T细胞识别的鳞状细胞癌抗原(SART)是近年来从鳞状细胞癌中发现的肿瘤自身抗原，能特异性诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)产生杀瘤作用。SART1基因表达抗原蛋白SART-1259和SART-1800。SART-1259蛋白表达于多种肿瘤细胞细胞质，而在睾丸组织之外的正常组织不表达。从该抗原中得到的某些肽段能特异性诱导HLA限制性CTL产生杀瘤作用。现综述近年来SART1基因研究概况。     

DC联合小剂量IL-2大量扩增白血病特异性CTL的实验研究

目的： 建立和优化体外大量扩增白血病特异性CTL的方法。 方法： 用1×107FBL3细胞冻融产物（FBL3LY）冲击的DC每10天1次对C57BL/6小鼠反复接种，在第3次接种5 d后处死小鼠制备脾T细胞，每周用FBL3LY冲击的DC刺激，体外培养10 d后加入小剂量的IL2。 结果： 共培养至21 d， T细胞可扩增100倍以上，其中CD8+细胞比率明显增高。乳酸脱氢酶释放试验证实扩增所得CTL对FBL3细胞具有高效的杀伤作用（81.84±8.68%），而对K562细胞无特异性杀伤作用。 结论： FBL3LY冲击的DC联合小剂量IL2可大量扩增FBL3白血病特异性CTL，该方法的建立对提高白血病特异性CTL免疫治疗的临床疗效具有重要意义。     

不同浓度IL-2对体外诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞培养体系的影响

背景与目的：细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)介导的特异性细胞免疫在抗肿瘤免疫过程中发挥着主要作用。该研究探讨不同浓度IL-2(50、200和1000 U/mL)对体外诱导表位肽特异性CTL培养体系培养的细胞亚群比例和功能的影响,以及高剂量IL-2是否会诱导该体系中的调节性T细胞(regulatory cell,Treg)的富集。方法：选取HLA-A2超型的肿瘤患者和健康供者各10例,取外周血分离外周血单核细胞,使用环氧合酶-2(Cox-2)来源的CTL表位肽P321(ILIGETIKI)与不同浓度IL-2体外诱导肽特异性CTL。运用流式细胞仪检测细胞的增殖能力、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞亚群的比例、Treg细胞亚群的比例,以及CD8+T淋巴细胞分泌穿孔素(perforin)、颗粒酶B(granzyme-B)、干扰素IFN-γ的能力。使用Elispot实验检测实验组细胞分泌IFN-γ的能力。结果：高浓度的IL-2有利于细胞的增殖。肿瘤患者组的CD4+T淋巴细胞比例高于健康供者组,而CD8+T淋巴细胞比例较健康供者组低;不同浓度IL-2对CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Treg细胞亚群比例以及CD8+T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的能力没有影响。随着IL-2浓度的增高,Elispot实验出现的阳性斑点数越多。结论：不同浓度IL-2条件对体外诱导表位肽特异性CTL培养体系培养出的细胞亚群比例和功能没有影响,在50~1000 U/mL IL-2浓度范围内,高剂量的IL-2不会诱导该体系中的Treg的富集。但高浓度的IL-2可以提高细胞的增殖能力,并且促进细胞分泌IFN-γ,而高浓度的IL-2可以使培养体系中存在的NK细胞或NKT细胞能够非特异性产生IFN-γ,从而对Elispot实验产生干扰。因此,在体外诱导肽特异性CTL时选用50 U/mL的IL-2浓度可以很好地维持T细胞的增殖和存活,并且最大程度地降低对Elispot实验的干扰。     

树突状细胞经EB病毒膜抗原gp340刺激后诱导抗肿瘤免疫应答

目的：探索利用树突状细胞（dendritic cells，DC）制备针对EB病毒感染相关性肿瘤的疫苗，以解决EB病毒相关性肿瘤在机体内的免疫逃逸。方法：来源于正常人骨髓的CD34+造血干/祖细胞，体外以重组hGMCSF，hTNFα，hIL4，hIL3诱导培养2周，扩增出功能成熟的DC，经EB病毒表面膜糖蛋白gp340刺激，探讨DC诱导T淋巴细胞介导免疫应答的能力，观察负载抗原gp340 DC诱导出的抗原特异性CTL对EB病毒相关性肿瘤细胞的杀伤作用。结果：从人骨髓细胞中诱导扩增出的DC具有良好的免疫刺激活性；EB病毒表面膜糖蛋白gp340可有效负载DC，DC加工处理抗原后激发T淋巴细胞增殖反应的能力进一步增强；在EB病毒相关性肿瘤细胞的杀伤实验中，只有负载了抗原gp340的DC，才能刺激特异性CTL杀伤EB病毒相关性肿瘤细胞。结论：以控制EB病毒感染的疫苗致敏DC，能促进抗原提呈并启动抗肿瘤免疫，体外可有效杀伤EB病毒相关性肿瘤细胞。DC疫苗作为一种针对EB病毒相关性肿瘤的新型治疗性疫苗，会有着良好的研究价值和开发前景。     

白血病细胞来源的树突状细胞在治疗白血病中的应用

树突状细胞(DC)广泛分布于体内,是机体功能最强的抗原递呈细胞(APC),在免疫应答中起着桥梁作用.最近有文献报道,白血病细胞经诱导后能分化为DC,从而启动特异性的机体抗白血病免疫应答,使白血病的治疗取得了可喜进展.将白血病细胞诱导成为具有递呈肿瘤抗原特性的DC,激发自体特异性细胞毒性T淋巴细胞的产生,对白血病细胞产生杀伤作用,表明白血病细胞来源的DC的诱导方案,其细胞生物学特性及白血病的治疗具有广泛的应用前景.     

IL-21通过自分泌途径诱导Th17分化

Th17细胞，又称炎性辅助T细胞（THi），能够分泌IL-17、IL-17F和IL-22等，是近年来新发现的T细胞亚群，在组织炎症反应中发挥重要作用。目前研究表明IL-6和TGF—p能够诱导Th17细胞分化，IL-23能够促进其IL-17分泌。在这一过程中。STAT3和RORγ是Th17分化的关键性转录因子。论文作者通过体内外实验证明，IL-21不仅是Th17细胞分泌的特征性细胞因子之一，而且通过自分泌途径在Th17的分化中发挥重要作用，是炎症性疾病的又一重要的药物作用靶点。     

嵌合抗原受体T细胞技术及其临床应用

嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）疗法是利用基因改造技术,使 T 细胞表达肿瘤特异性嵌合抗原受体,以抗原依赖、非主要组织相容性复合体（MHC）限制的方式结合肿瘤抗原,肿瘤相关抗原（TAA）的单链抗体（scFv）和 T 细胞的活化序列在体外进行基因重组,形成重组质粒。在体外通过转染技术,转染经纯化与大规模扩增后的 T 细胞,启动并活化特异性杀伤肿瘤反应,其临床细胞治疗的应用显示出高效性,在白血病、淋巴瘤、黑色素瘤等恶性肿瘤治疗中均显示出良好的抗肿瘤效应,使得 CAR-T 技术成为主流细胞治疗手段。     

细胞及疫苗免疫疗法在多发性骨髓瘤中的研究进展

异基因造血干细胞移植和供者淋巴细胞输注能诱导多发性骨髓瘤(MM)患者的移植物抗骨髓瘤免疫效应,从而使患者获得长期生存,但其疗效的局限性和相关毒性限制了其在临床上的广泛应用.因此,目前正在寻求更有效的细胞免疫疗法和疫苗疗法,以诱导更特异、更稳定和更有效的抗骨髓瘤免疫应答反应,同时降低治疗相关的风险.随着分子生物学、基础免疫学和应用免疫学的发展,催生了一系列极具前景的MM治疗方法,如抗原特异性的嵌合受体和骨髓瘤特异性表位的靶向T细胞受体等修饰T细胞、疫苗致敏并体外扩增自体T细胞、扩增骨髓浸润的淋巴细胞及浆细胞、树突状细胞融合疫苗等.这些新兴的治疗方案与免疫调节制剂、程序性死亡受体1(PD-1)T细胞调节通路抑制剂结合,有望改善MM患者的治疗效果.介绍第58届美国血液学会(ASH)年会报道的关于细胞和疫苗免疫疗法在MM治疗中的相关信息,并探讨了将这些疗法与现有的治疗方案整合治疗MM的可行性.     

DC和NK细胞诱导的抗肿瘤CTL反应

细胞毒性T淋巴细胞（CTL）介导的细胞毒效应能够高效、特异性杀伤肿瘤细胞而不损伤周围组织。树突细胞（DC）是已知体内抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞,能摄取各种抗原,体内外能激发T细胞增殖,诱导特异性CTL生成。自然杀伤（NK）细胞在由DC引起的抗肿瘤免疫中发挥重要作用。近年来NK-DC细胞的相互作用在CTL反应中的作用引起关注。现综述DC、NK细胞在诱导抗肿瘤CTL反应中作用的研究进展。