β-榄香烯综合瘤苗主动免疫治疗临床试验研究-40例癌症患者的疗效分析

在过去瘤苗主动免疫治疗实验研究和初步临床试验的基础上，进一步扩大临床试验，进行应用评价。用本室申报的发明专利——以β-榄香烯为主的复合因素制备的自体瘤苗或异体瘤苗主动免疫疗法，治疗40例直肠癌，结肠癌及胃癌等术后患者,制备瘤苗的肿瘤组织取自癌症患者术后切下之肿瘤标本，在无菌条件下选取新鲜肿瘤组织，     

新城鸡瘟病毒用于肿瘤特异性免疫治疗的研究进展

在肿瘤免疫治疗基础上发展起来的肿瘤生物治疗(Biotherapy),着眼于调动机体的自身的抗癌能力,随着现代分子生物学、免疫学等科学技术的发展,已经成为继手术、化疗、放疗后的肿瘤第四种治疗模式.     

DC瘤苗制备及其在肿瘤免疫治疗中的应用

树突状细胞(DC)是目前功能最强的抗原递呈细胞，能刺激初始型T细胞增殖，激发机体免疫应答。研究发现肿瘤患者体内DC数量明显减少，其表型及功能明显缺陷。近年来DC培养及DC瘤苗的研究取得较大进展，DC瘤苗有望成为肿瘤免疫治疗的新方法。     

榄香烯对肿瘤细胞生物学特性的影响及其瘤苗免疫效应机制的研究

为研究我们创制的榄香烯(elemene,E)复合瘤苗主动免疫抗瘤效应的分子机制及其与热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的可能关系,本文通过光镜、电镜和流式细胞术(FCM)以热休克为比照,研究了抗癌中药有效组分榄香烯对小鼠H22腹水型肝癌(H-2~-)和L615白血病(H-2~k)细胞某些生物学特性(生存率、形态结构、坏死、凋亡、细胞周期等)的影响;在此基础上着重观察比较了:1.榄香烯或/和热休克H22和L615瘤苗的主动免疫保护效应.2.榄香烯复合瘤苗诸因素(榄香烯、MMC、戊二醛)与热休克对两种肿瘤细胞膜HSP70和HSP90表达的影响.3.分离纯化榄香烯、MMC诱导的H22肿瘤细胞的HSP70-肽复合物体内验证其主动免疫预防效应.     

新城鸡瘟病毒用于肿瘤特异性免疫治疗的研究进展

在肿瘤免疫治疗基础上发展起来的肿瘤生物治疗(Biotherapy)，着眼于调动机体的自身的抗癌能力，随着现代分子生物学、免疫学等科学技术的发展，已经成为继手术、化疗、放疗后的肿瘤第四种治疗模式。其作用机制有二，其一是诱导肿瘤细胞自身生长的停滞或凋亡，二是促进体内具有抗肿瘤特异性和细胞毒活性的T细胞产生。     

琐阳花色甙复合瘤苗免疫治疗肺肿瘤的实验研究

目的:研究琐阳花色甙复合瘤苗免疫治疗肺肿瘤的综合效应。方法:对肺肿瘤细胞系LCC,用琐阳花色甙对其进行系列生物修饰,构建琐阳花色甙复合瘤苗,用以治疗肺肿瘤。结果:经琐阳花色甙修饰构建的复合瘤苗,明显阻止LCC细胞的肺转移;显著抑制皮下肿瘤结节形成;明显延长荷瘤鼠的生存时间;治疗组小鼠脾细胞对小鼠肺癌的细胞毒活性显著增强。结论:琐阳花色甙修饰构建的LCC复合瘤苗,促进脾细胞的杀瘤活性,对肺癌有较好的实验治疗作用。     

人结肠癌主动特异性免疫治疗的初步研究

目的:探讨自体肿瘤疫苗的作用机制及临床意义。方法:50例进展期结肠癌病人术后,以自体肿瘤细胞疫苗辅助主动免疫治疗。术后第4周开始免疫接种(共4次,每次间隔7~10天);接种前3天及第4次接种后1周,采集外周血。采集血清监测血清IFN-γ、IL-10水平;用PPD及自体肿瘤抗原做皮肤迟发型过敏试验(DTH),48小时后测量红斑、硬结大小(mm);对DTH反应部位皮肤活检,用免疫组化染色,了解局部免疫活性细胞浸润;临床随访。结果:自体肿瘤细胞疫苗治疗后:血清IFN-γ水平升高,由(6.01±2.30)pg/ml升至(12.98±4.65)pg/ml;而IL-10水平由(19.80±10.15)pg/ml降至(8.92±4.60)pg/ml,差异有非常显著性(P<0.05);治疗前后病人对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强(P<0.01);DTH反应部位,CD8 T细胞、CD4 T细胞及DC细胞浸润明显增多;病人耐受性良好,无溃疡等严重副作用发生;随访结果显示:术后辅助自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗,可延长结肠癌病人的无瘤生存时间,降低复发率及死亡率。结论:自体肿瘤疫苗可激发病人特异性细胞介导的免疫反应;可改善肿瘤病人的抗瘤免疫反应;自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗,对于杀灭残留癌细胞、抗转移及复发有重要作用。     

榄香烯复合瘤苗对Hca-F肝癌小鼠的免疫治疗效应及对IL-10与IL-12分泌的影响

目的探讨榄香烯复合瘤苗（EC-TCV）对小鼠肝癌Hca-F的免疫治疗效应及治疗小鼠脾细胞IL-10与IL-12分泌的变化。方法带Hca-F小鼠分别用EC-TCV,CY,EC-TCV+CY治疗或不治疗（PBS对照）,观察比较肿瘤生长情况并用ELISA法测脾细胞与Hca-F细胞混合培养上清中的IL-10与IL-12。结果EC-TCV免疫治疗或CY化疗后,肿瘤潜伏期延长,瘤重减轻,用EC-TCV+CY进行化免治疗的小鼠在第15天活杀时均无瘤生长,与Hca-F细胞混合培养的EC-TCV治疗小鼠脾细胞培养上清中IL-10浓度明显降低（1.82±0.29pg/ml,P<0.05）,IL-12浓度明显升高(7.13±1.89pg/ml,P<0.05)。结论EC-TCV对Hca-F有免疫治疗效应,可与CY并用而加强,而EC-TCV主动免疫促进脾细胞IL-12分泌、抑制IL-10分泌可能是其抗瘤作用的机制之一。     

DC肿瘤融合瘤苗抗肿瘤效应的实验研究

目的:观察DC与肿瘤细胞融合后的瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫应答以及对荷瘤小鼠的治疗作用.方法:应用免疫磁珠分选和贴壁培养方法收集融合细胞,应用3H-TdR掺入法、4h51Cr释放法观察T细胞增殖反应的能力和CTL活性,并观察瘤苗对荷瘤小鼠保护性免疫反应和免疫治疗作用.结果:DC肿瘤融合瘤苗具有强烈的激活T细胞增殖和抗原提呈的能力,在体外、体内诱导出更强的特异CTL细胞毒活性,使免疫小鼠产生一定的免疫保护作用,抵抗Hepa1-6肝癌细胞的再次攻击,使治疗的小鼠肿瘤的生长明显缓慢,具有更明显的治疗作用.结论:DC与肿瘤细胞融合后进行体内免疫和治疗,能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应,为DC介导的肿瘤免疫治疗开辟了新的途径.     

Preliminary Results of Active Specific Immunization with Modified Tumor Cell Vaccine in Glioblastoma Multiforme

Object Treatment for glioblastoma multiforme has failed to show any progress for decades. While specific immunization with tumor cells modified with Newcastle-Disease-Virus (NDV) has been reported successful in some extracerebral tumors, its effect on glioblastoma is unknown. We report on 11 patients, in whom this approach was analyzed. Methods A vaccine was produced from autologous tumor cell cultures of 11 patients with glioblastoma. After completed surgery and radiotherapy an intracutaneous vaccination was performed 4 times with a 2 week interval and finally after 3 months. Local reactions, general side effects and survival were monitored closely. Results The local reaction of the skin after injection of vaccine increased from 1.67 to 4.05cm² in 8 weeks. The skin reaction after parallel injection of inactivated, untreated tumor cells increased from 0.11 to 1.09cm². The median survival was 46 weeks (mean 60 weeks). No side effects were noted. Conclusion Active specific immunization with NDV-modified glioblastoma cells produced a noticeable peripheral immune response. In this preliminary series survival of patients was not significantly longer after active specific immunization than after combined treatment of surgery, radiotherapy and chemotherapy. As there were no side effects, however, active specific immunization may be nobreak considered an alternative in the management of glioblastoma.     

细胞瘤苗对红白血病荷瘤小鼠抗瘤作用的研究

目的：观察三种瘤苗抗肿瘤作用。方法：用不同佐剂的三种瘤苗，免疫预防及治疗红白血病荷瘤小鼠。观察肿瘤生长情况，小鼠寿命，局部肿瘤、全身脏器反应及病理变化。结果：由灭活细胞、不完全福氏佐剂及细胞因子组成的瘤苗，预防后小鼠成瘤率低，预防及治疗后肿瘤生长速度减慢，存活期延长，与灭活细胞，灭活细胞加不完全福氏佐剂瘤苗相比，有显著性差异；病理可见瘤组织坏死及以单个核细胞为主的炎细胞浸润，各脏器无异常，结论：包含细胞因子的瘤苗是安全，方便，经济、有效的瘤苗。     

GM—CSF基因转染瘤苗预防性免疫保护作用的实验研究

为了观察低肿瘤负载时ＧＭＣＳＦ 基因转染瘤苗抗肿瘤作用及其效果。应用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因转染的、６０Ｃｏγ射线照射后制成的瘤苗,进行预防性免疫保护作用的研究;对荷瘤小鼠,手术切除肿瘤结节,研究该基因疗法对预防术后肿瘤复发的影响。结果表明, ＧＭＣＳＦ 基因转染瘤苗预防性免疫治疗后,能诱导小鼠产生特异性免疫反应,抵抗随后野生型亲本肿瘤细胞的攻击,并能有效地预防手术后肿瘤复发。以上结果揭示了应用该疗法进行肿瘤基因治疗的可行性。     

肝癌（H22）固化瘤苗的免疫实验研究

应用高温固化结合手术切除治疗肝癌曾作介绍.随访发现高温免疫远位效应.为研究此种治疗方法与免疫的关系.应用小鼠移植性肝癌H_(22)在65℃/5min射频条件下制备成固化瘤苗.用该瘤苗免疫小鼠(BALB/C)发现能特异性主动免疫抗同源H_(22)3×10~8癌细胞的攻击,抗癌率为86.6%,未出现瘤苗促癌生长现象.与对照组鼠比较,具有显著细胞免疫效应.认为固化瘤苗的实验有临床应用研究价值.     

细胞融合大鼠肝癌疫苗体内治疗和预防作用研究

目的 :观察大鼠 BERH - 2肝癌细胞与激活 B细胞的细胞融合大鼠肝癌疫苗对肿瘤的预防和治疗作用。方法 :应用 PEG将大鼠 BERH- 2肝癌细胞与激活 B细胞融合 ,制备细胞融合大鼠肝癌疫苗 ;部分肝癌疫苗免疫动物前经 6 0 Co照射 ;大鼠被肝癌疫苗免疫之前或之后 ,接种肝癌 BERH- 2细胞或组织块 ,观察疫苗对肝癌的预防和治疗作用。结果 :经细胞融合疫苗保护的大鼠可获 10 0 %无瘤生存 (8/8) ,而 HERH- 2或照射后 BERH- 2对照组大鼠均生长肿瘤死亡 (0 /8)。经皮下接种细胞融合肝癌疫苗治疗大鼠 ,肝内注射肝癌细胞的大鼠可获 85 %以上无瘤存活。照射后细胞融合肝癌疫苗与未照射的获得同样治疗效果。不经筛选的细胞融合疫苗也获相同治疗效果 ,而对照组大鼠均生长肿瘤后死亡。结论 :细胞融合肝癌疫苗对大鼠有预防和治疗作用 ,照射的细胞融合大鼠肝癌疫苗和不经筛选的融合细胞同样具有较好的治疗作用。     

SC及NDV修饰的瘤苗治疗胃癌的实验疗效研究

目的 :研究中药三棱、莪术的提取物SC修饰构建的肿瘤细胞疫苗对SGC 790 1胃癌细胞株的抗瘤效应及联合新城鸡疫病毒疫苗的实验杀瘤疗效。方法 :对SGC 790 1胃肿瘤细胞进行系列处理 ,用SC(sparganiumstoloniferumBuehhum、Curcumazedoariarosc SC ,Chinesetraditionalmedicine )及NDV (新城鸡瘟病毒 )对其进行生物构建 ,修饰构建的瘤苗经免疫小鼠 (1次 /周× 4 ) 2 8d后 ,接种SGC 790 1胃肿瘤细胞 ,观察抑制肿瘤肺转移、皮下结节形成及生存时间状况。结果 :经SC修饰构建的SC SGC 790 1瘤苗能明显阻止胃癌细胞的肺转移 ,显著抑制皮下肿瘤结节形成 ,能明显延长荷瘤鼠的生存时间 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5 )。由NDV构建的疫苗的抗瘤作用低于SC瘤苗组 ,在延长荷瘤鼠生存期方面和单瘤苗组相近 ,SC与NDV联合构建的瘤苗其抗瘤未呈生物放大及相加效应。结论 :SC修饰构建的SGC 790 1新型疫苗可以增强胃肿瘤细胞的免疫原性 ,对胃癌有较好的实验治疗效果     

H22微波瘤苗免疫小鼠抑瘤及免疫效果的研究

目的研究H22微波瘤苗免疫小鼠的抑瘤及免疫效果.方法用微波处理H22瘤株制备瘤苗,接种昆明小鼠右后肢外侧皮下0.2 mL,共接种3次,每次间隔7 d;对照组接种生理盐水.于末次接种后第7天每只小鼠左腋下皮下接种H22瘤株细胞2×106 .接种瘤株后第21天处死小鼠,测量瘤块的体积和重量,计算体积抑瘤率和重量抑瘤率,并进行血液淋巴细胞亚群分析和体内淋巴细胞转化实验.结果瘤苗组瘤块体积平均为2.86 cm3,明显小于对照组的8.02 cm3,差异有极显著意义,t＝5.711,P＝0.000,体积抑瘤率为64.34%.瘤苗组瘤块重量平均为2.55 g,明显小于对照组的6.35 g,差异有极显著意义,t′＝5.055,P＝0.000,体积抑瘤率为59.84%.瘤苗组CD3+,t=3.278,P=0.003、CD4+,t=2.548,P=0.017、CD8+,t=2.068,P=0.048和CD4+/CD8+比值,t=2.116,P=0.043,均以瘤苗组高于对照组,差异有显著意义或极显著意义.淋巴细胞转化率瘤苗组亦高于对照组,差异有极显著意义,t=4.976,P=0.000.结论H22微波瘤苗免疫小鼠对H22瘤株具有明显抑瘤作用.     

抗原致敏DC联合CIK在原发性肝癌治疗中的应用

目的:探讨负载自身肝癌裂解物的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养对CIK体外杀伤活性的影响,并观察抗原致敏DC(Ag-DC)联合CIK治疗原发性肝癌后患者的免疫状态、临床疗效及毒副反应.方法:选择24例原发性肝癌患者,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF和IL-4诱导产生DC,并负载自体肿瘤裂解物;悬浮细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK.将Ag-Dc与CIK共培养,观察CIK在体外对肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤活性;24例患者接受Ag-DC+CIK的过继免疫治疗,观察疗效.结果:1)Ag-DC与CIK共培养后,CIK体外肿瘤杀伤活性明显提高;2)Ag-Dc联合C1K治疗原发性肝癌可明显改善患者细胞免疫功能,提高临床疗效;3)除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应.结论:负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK可作为原发性肝癌常规治疗的有效辅助手段.     

红细胞肿瘤疫苗的制备及对肿瘤复发转移作用的观察

目的：制备一种新型肿瘤疫苗，观察其对肿瘤复发的转移的作用。方法：用PEG将血红细胞（RBC）与小鼠于宫颈癌（U14）细胞融合，制图瘤苗。MTT法检测新型瘤苗诱发的CTL活性。用复发瘤抑制率及肿瘤转移凶制率来评价瘤苗的疗效。结果：融合细胞携带了RBC的血型抗原。在小鼠体内瘤苗可激发特异的CTL活性，对U14细胞的杀伤率为37．8％；而对照小鼠前胃癌（MFC）细胞的杀伤率为22．0％。瘤苗治疗组复发瘤抑制率为39．9％，肺转移的抑制率为69．9％。结论：RBC与肿瘤细胞融合制备的细胞可作为瘤苗。该瘤苗可有效抑制肿瘤复发和转移。     

负载Walker-256肿瘤细胞抗原的树突状细胞疫苗的制备

目的 制备负载大鼠Walker-256肿瘤细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗,为进一步研究打下基础.方法 从大鼠骨髓细胞中利用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介导素4(IL-4)在体外定向诱导分化出DC,以液氮冻融法制备肿瘤抗原刺激DC制备肿瘤疫苗.ELISA检测培养液中IL-12的浓度.结果 得到大量具备典型光镜和电镜形态特征的DC,表达大鼠DC特异性标志OX62.负载抗原前后DC产生IL-12的水平存在明显差异(P＜0.05).结论 负载Walker-256肿瘤抗原的树突状细胞疫苗制备成功,具有促进Th1极化的潜能.