人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达细胞克隆SMMC7721-TNF的建立及其部分生物学特性的初步观察

用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721，G418筛选后，随机挑选10个细胞克隆，扩大培养，检测细胞培养液上清中TNFα的水平，将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学特性。Southern Blot证明TNFα基因完整地整合在细胞基因组中，     

瘤内直接注射TNFα基因对人肝癌裸鼠模型的抗瘤效应及其可能机制的初步研究

将L-tnfSN DNA用脂质体介导或磷酸钙沉淀法导入由SMMC7721细胞形成的裸鼠皮下瘤结，或者将含L-tnfSN DNA的逆转录病毒病毒颗粒直接导入皮下结节中。其后，测定外周血TNFα的水平，发现三种方法处理后均有TNFα的一过性的表达，但病毒颗粒直接注射法转导的TNFα基因表达高于其他两种方法(脂质体法次之，磷酸钙法最低）。     

TNF—α对人胃癌细胞IAP-2表达调节的体外实验研究

应用重组人肿瘤坏死因子（TNF-α）体外诱导三株胃癌细胞株SGC7901，MGC803和MKN45，同时检测诱导组和对照组细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（IAP-2）表达水平。结果表明，无TNF-α对照组，三析细胞均表达一定量IAP-2；TNF-α诱导组，当TNF-α诱导浓度在1×10^2-10^4u/ml时，三株细胞IAP-2表达量显高于对照组（P<0.01)；当TNF-α≥1×10^5u/ml时，细胞IAP-2表达量显减少（P<0.01)。上述结果提示，低浓度TNF-α体外可以促进人胃癌细胞IAP-2表达；高浓度时，则可抑制IAP-2表达。     

体外IL-2或IFN-α基因转染人肾癌细胞对其浸润性和转移性的影响

IL-2、IFN-α基因转染的人肾癌细胞体外生长及体内致瘤性下降，本文进一步IL-2和／或IFN-α基因转染对人肾癌R11细胞浸润性和转移性的影响。     

靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法.本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用.方法:设计并合成特异性靶向IGFIR的siRNA片段,构建SMMC7721-IGFlR-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞.通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤.同时设立对照组.根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Western blot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P＜0.05).病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721.IGF1R-mutation 组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P＜0.05).SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation 组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调.SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P＜0.05).结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长.     

TNF基因转染增强人胶质瘤细胞对LAK细胞杀伤敏感性及其细胞表面ICAM-1分子的持续表达

脑胶质瘤因其发生部位——中枢神经系统缺乏淋巴组织，且可分泌免疫抑制因子如TGF-β使其免疫治疗显得十分困难。为了探索脑胶质瘤有效的免疫治疗途径．本文研究了经脂质体途径将TNF-α基因转染入胶质瘤细胞U251-SP后其表面粘附分子表达的变化及其对免疫效应细胞LAK细胞杀伤敏感性的影响。     

nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性变化的实验研究

目的探讨nm23-H1基因转染和forskolin对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性的影响.方法应用PKA通路特异激动剂forskolin对人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981、转基因细胞株L9981-nm23-H1-pLXSN和空载体转染细胞株L9981-pLXSN共同培养,应用放免法检测forskolin处理后不同时间点三个细胞株PKA的活性变化.结果 (1)forskolin处理前L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1-pLXSN的PKA活性经F检验有显著性差异(P<0.01);两两比较L9981-nm23-H1-pLXSN的PKA活性显著高于L9981和L9981-pLXSN(P<0.01),而L9981与L9981-pLXSN之间比较无显著性差异(P>0.05).(2)在同一作用时间(30 min)下,三个细胞株经不同浓度forskolin处理后PKA活性均显著升高(P<0.01),在forskolin浓度为100 μmol/L时PKA活性最高,呈剂量依赖关系.(3)三个细胞株在同一浓度forskolin(100 μmol/L)处理下,PKA活性随作用时间升高,在forskolin作用时间为30 min时PKA的活性最高,呈时间依赖关系.结论 (1)nm23-H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的PKA活性,nm23-H1作为一种肿瘤转移抑制基因的作用机理与PKA信号通路可能有一定联系;(2)forskolin能显著上调L9981细胞株中的PKA活性,PKA活性升高呈时间和剂量依赖关系.     

靶向IGFIR的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

Objective:To investigate the effect of insulin-like growth factor 1 receptor (IGF1R) small interfering RNA (siRNA)on the growth of human liver cancer SMMC7721 cell xenograft in nude mice.Methods:siRNAtargeting IGF1R was designed,and plasrnid SMMC7721-1GF1R-siRNA was constructed and transfected into SMMC7721 cells (SMMC7721-1GF1R-siRNAcells); the cells transfected with SMMC7721-1GF1 R-mutation (SMMC7721-1GF1 R-mutation cells) were used as negative control,and untransfected cells as empty control.Stable cell clones were screened by G418,and transplanted into nude mice to establish cancer xenograft.Tumor growth was monitored.Tumor morphology was observed with HE staining.The expression of IGF1R protein in tumor tissues was detected by Western blot.Microvessel density (MVD) in tumor tissues was detected by SP immunohistochemistry.Cell apoptosis was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling (TUNEL) assay.Results:The tumor volume was significantly smaller in SMMC7721-1GF1R-siRNA group than in SMMC7721-1GF1R-mutation and SMMC7721 groups (P＜0.05).Necrosis and cell apoptosis were found in SMMC7721-1GF1R-siRNA group.The expression of tGF1R protein was significantly lower in SMMC7721-1GF1R-siRNA group than in SMMC7721-1GF1R-mutation and SMMC7721 groups (P＜0.05).MVD was significantly lower in SMMC7721-1GF1R-siRNA group than in SMMC7721-1GF1R-mutation and SMMC7721 groups (11.3±4.4 vs.36.7±7.6 and 28.4±6.5,P＜0.05).The apoptosis rate of tumor cells was significantly higher in SMMC7721-1GF1R-siRNA group than in SMMC7721-1GF1 R-mutation and SMMC7721 groups [(50.2±6.4)% vs.(5.4±1.0)% or (6.0±2.1)%,P＜0.05].Conclusion:1GF1R siRNA can inhibit the growth of SMMC7721 cell xenograft in nude mice.