卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究

目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应。方法采用免疫磁珠分离法(magnetic activated cell sorting，MACS)分离纯化正常人外周血CD3^ 细胞，体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激。溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响；MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力；利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性。结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用，且存在时间依赖性，在24h时促进作用最强。SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68．38％，显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18．31％)；而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61．02％和14．79％，有显著的抗原特异性(P=0．0001)。结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用。     

抗原致敏树突状细胞诱导CIK对胃癌细胞杀伤作用的研究

[目的]探讨抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导CIK（cytokine induced killer）的杀伤作用。[方法]联合应用粒/巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）及白介素-4（IL-4）从外周血单个核细胞中培养DC，用人胃癌细胞SGC提取肿瘤抗原致敏DC，流式细胞仪检测致敏前后DC表型的变化，用人胃癌细胞SGC提取肿瘤抗原致敏DC诱导CIK，用MTT法检测淋巴细胞的增殖及原致敏DC诱导CIK对SGC的杀伤效应。[结果]①利用GM-CSF及IL-4可从外周血单个核细胞中获取DC，肿瘤抗原可促进DC的成熟，肿瘤抗原致敏可促进DC成熟，细胞表面分子HLA-DR、CD86、CD86升高，CD14下降。②混合淋巴细胞反应提示成熟的DC可促进CIK细胞增殖。③SGC肿瘤抗原致敏DC诱导CIK对胃癌细胞SGC有特异性的杀伤作用，随着效靶比的升高，杀伤效应随之增强。[结论]抗原致敏的DC可通过诱导特异性CIK细胞及促进CIK细胞增殖两方面显著提高CIK细胞的杀瘤效应。     

可溶性抗原联合超抗原诱导的 CTL 抗瘤作用的实验研究

目的:探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞(CTLs)对肿瘤细胞杀伤机理.方法:外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养.对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定.结果:经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P＜0.05),对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化.结论:肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果.     

负载肝癌抗原的树突状细胞瘤苗诱导的抗肿瘤作用

目的 探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞（DC）体外经自体肝癌细胞抗原致敏后诱导的抗肿瘤作用。方法肝癌患者外周血经梯度密度离心法分离，获得DC前体细胞，用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSP）和重组人白细胞介素-4（rhIL-4）联合培养，诱导扩增DC。制备自体肝癌细胞抗原，体外脉冲DC，检测DC诱导自体T细胞增殖能力及细胞毒性T细胞（CTL）在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性，并检测肿瘤抗原致敏DC分泌的IL-12水平。结果经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能分泌IL-12和诱导较强的自体T细胞增殖，且能诱导特异性CTL，该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性，杀伤率明显高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率，而对3LLLEWIS肺癌细胞、H22肝癌细胞则无明显的．杀伤作用。结论肝癌患者外周血DC经自体肝癌细胞抗原致敏后能诱导高效而特异的抗肝癌免疫，其机制可能与增强T细胞应答和诱导机体产生肿瘤特异CTL而发挥特异性的抗肿瘤作用有关。     

可溶性结肠癌抗原与CD3mAb,IL-2联合诱导杀伤细胞的实验研究

IL-2诱导体外杀伤细胞扩增慢,高依赖IL-2,特异性差,影响了其疗效的发挥.根据报道CD3mAb与IL-2在杀伤细胞的诱导过程中有增强作用.为了获得具有高效,特异细胞毒活性的抗肿瘤效应细胞,我们采用CD3mAb、IL-2与可溶性肿瘤抗原(结肠癌抗原)联合诱导正常人外周血单个核细胞获得相对特异的杀伤细胞(TAK),并对TAK与LAK在增殖活性、杀伤活性及表型上进行了对比.     

卵巢癌可溶性抗原和抗CD3单抗体外共同诱导产生细胞毒T细胞

目的 为提高肿瘤生物治疗效果提供其实验基础。方法 用卵巢癌细胞提取可溶性成分作为肿瘤可溶性抗原(TSA),和抗CD_3,单抗(CD_3—McAb)体外共同诱导正常人外周血单个核细胞(PBMC),在含IL—2的培养基中培养,产生杀瘤性效应细胞。结果 经细胞表型分析,CD_8 T细胞为94.62％。这种细胞毒T细胞(CTL)对TSA来源的卵巢癌细胞具有选择性杀伤作用:对其它卵巢癌细胞的杀伤无选择性。结论 CTL对TSA来源的肿瘤细胞具有选择性杀伤作用,对其它细胞的杀伤无选择性。     

人骨髓来源的树突状细胞(DCs)诱导产生杀瘤细胞的作用

树突状细胞(DCs)是体内最强的抗原呈递细胞,国内外研究小组均有报道DCs负载抗原作为肿瘤疫苗或体外诱导CTL产生,用于免疫治疗肿瘤宿主获得良好抗瘤结果.这提示DCs可以提高抗肿瘤免疫,具有临床应用前景.我们以前报道肾癌可溶性抗原激活的杀瘤细胞(称T-AK)过继免疫治疗肾癌患者有良好临床疗效.本文报道在T-AK细胞体外培养系统中加入自体DCs,所诱导的杀瘤细胞称DC-TAK,其细胞增殖率和杀伤肿瘤细胞的作用均优于T-AK.我们从肾癌     

负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的:探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应.方法:外周血单核细胞在GM-CSF + IL-4 的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化.MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞.结果:凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83 表达增加﹙P<0.01﹚,而CD1a表达量下调﹙P<0.05).负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖.结论:GM-CSF + IL-4 诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞.     

肝癌细胞抗原致敏树突状细胞诱导的体外抗肿瘤作用

目的　探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞 (DC)经自体肝癌细胞抗原致敏后诱导的体外抗肿瘤作用。方法　对肝癌患者外周血采用密度梯度离心法分离 ,获得DC前体细胞 ,用重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)和重组人白细胞介素 4(rhIL 4)联合培养 ,诱导扩增DC。制备自体肝癌细胞抗原 ,体外脉冲DC ,检测DC诱导自体T细胞增殖能力及细胞毒性T细胞 (CTL )在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性 ,并检测肿瘤抗原致敏DC分泌的IL 12水平。结果　经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能分泌IL 12和诱导较强的自体T细胞增殖 ,且能诱导特异性CTL ,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性 ,杀伤率显著高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率 ,而对CT 2 6细胞、BEL 740 2细胞无明显的杀伤作用。结论　肝癌患者外周血DC经自体肝癌细胞抗原致敏后能诱导高效而特异的抗肝癌免疫 ,其机制可能与增强T细胞应答和诱导机体产生肿瘤特异CTL从而发挥特异性的抗肿瘤作用有关。     

抗原致敏DC诱导CIK细胞对肺腺癌细胞的杀伤作用

[目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，并与单独LAK、CIK细胞的杀伤效果进行比较。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化；把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；流式细胞仪检测DC经肿瘤抗原冲击和未经肿瘤抗原冲击其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达，前者明显高于后者，两者有显著性差异（P〈0．01）；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于DC—LAK细胞、CIK细胞和LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC-CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，DC-CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用明显高于DC—LAK、CIK、LAK细胞。     

可溶性抗原联合超抗原诱导的CTL抗瘤作用的实验研究

目的：探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞（CTLs）对肿瘤细胞杀伤机理。方法：外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养。对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定。结果：经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组（P〈0．05）,对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化。结论：肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一种非主要组织相容性复合体(MHC)限制性的细胞毒性T淋巴细胞.CIK用于杀伤肿瘤被认为是肿瘤过继免疫治疗的首选方案.树突状细胞(DC)在肿瘤细胞和T淋巴细胞的相互作用中起到桥梁和枢纽作用.二者共同培养后,不仅提高了CIK的增殖能力和杀伤活性,并且治疗范围广泛,对多个系统的肿瘤均具有较强的杀伤作用.     

负载酸洗抗原肽的树突状细胞诱导抗膀胱癌的作用

目的研究弱酸洗脱法提取抗原肽致敏的树突状细胞(DCs)诱导针对膀胱癌细胞的特异性杀伤效应。方法弱酸洗脱法获得BI U-87细胞抗原肽,用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导正常人DC并负载肿瘤抗原,进而激活T淋巴细胞;用MTT法检测其对BI U-87体外杀伤效应。结果弱酸可以洗脱肿瘤细胞膜表面大部分与MHC-Ⅰ类分子结合的抗原肽;外周血单个核细胞可培养出DC;效靶比40:1时负载膀胱癌抗原肽的DC诱导特异性CTLs可杀伤高达(78.5±7.0)%的BI U-87细胞。结论弱酸可以有效洗脱肿瘤细胞表面的Ⅰ类抗原肽,负载该类多肽的DC在体外可诱导出高效而特异的抗膀胱癌效应。     

负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的：探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应。方法：外周血单核细胞在GM—CSF＋IL-4的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化。MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞。结果：凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83表达增加（P〈0．01）,而CD1a表达量下调（P〈0．05）。负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖。结论：GM—CSF＋IL-4诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞。     

宫颈癌患者外周血树突状细胞抗宫颈癌免疫反应

[目的]研究自宫颈癌患者外周血分离、培养而来的树突状细胞体外对宫颈癌Hela细胞的抑制作用.[方法]应用细胞因子诱导培养从宫颈癌患者外周血分离的单核细胞,获得成熟DC.宫颈癌组织来源抗原致敏DC,激活T细胞增殖分化为细胞毒性T淋巴细胞(CTL).MTT法检测比较负载抗原DC与未负载抗原DC诱导的CTL对Hela细胞和SKOV3细胞不同的杀伤效应.[结果]宫颈癌细胞抗原致敏的DC,激活肿瘤抗原特异性CTL,对宫颈癌Hela细胞产生高效而特异的杀伤作用(56.410%),对卵巢癌SKOV3细胞仅有一定的杀伤作用(24.901%);而未致敏DC激活的CTL对以上两种肿瘤细胞只有很低的杀伤作用,分别为10.256%和20.151%.单纯肿瘤抗原刺激下的T细胞,对Hela和SKOV3细胞产生非特异性杀伤作用,其效率仅为1.865%及15.613%.[结论]宫颈癌患者外周血DC在体外能诱导高效而特异的抗宫颈癌细胞免疫反应,提示肿瘤抗原激活的DC作为疫苗在宫颈癌的免疫治疗中具有重要意义.     

胶质瘤抗原联合超抗原SEC诱导杀瘤性免疫细胞的实验研究

目的:使用胶质瘤可溶性抗原(GSA)联合超抗原SEC刺激外周血淋巴细胞,诱导产生杀瘤性免疫细胞,对胶质瘤细胞进行杀伤,探讨肿瘤免疫治疗新方法.方法:提取健康人外周血淋巴细胞,体外培养,并经GSA、超抗原SEC联合处理.流式细胞术(FCM)和细胞毒试验测定效应细胞表型和杀伤活性.结果:经GSA、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,于72h达到高峰,并且上调CD8+T细胞群,联合刺激诱导的效应细胞对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P＜0.05).结论:GSA与SEC联合应用诱导的效应细胞增殖快,细胞毒活性高,对抗原来源肿瘤细胞具有选择性杀伤作用.该实验研究为肿瘤免疫治疗提供了新的思路.     

树突状细胞与热休克处理抗原联合诱导抗肿瘤免疫的研究

目的建立体外培养与扩增脐血树突状细胞(DC)的方法,并利用DC与热休克处理的肿瘤抗原联合诱导产生一种高效特异的抗肿瘤免疫.方法用GM-CSF和IL-4联合刺激诱导脐血单个核细胞分化为DC,再用加热处理的肿瘤抗原负载,与同源的淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞共培养.用电镜观察DC形态,CD1a和HLA-DR试剂盒检测DC细胞表面CD1a和HLA-DR的表达情况,MTT法测定细胞杀伤活性.结果在体外,DC-LAK对同源的SPC-A-1细胞具有相对特异的杀伤作用,LAK和DC-L的作用不具有明显特异性,DC-LAK的细胞毒作用最强;加热抗原组作用明显优于未加热处理组.结论将DC与热休克处理的肿瘤抗原联合,可以诱导产生一种高效并具有相对特异性的抗肿瘤免疫活性细胞.     

CB6F1小鼠树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞的杀伤作用

[目的]探讨CB6F1小鼠脾树突状细胞(DC)的培养及其诱导针对小鼠路易斯肺癌(LLC)的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤的杀伤效应.[方法]应用CB6F1小鼠脾细胞在GM-CSF、IL-4等细胞因子作用下培养出DC,反复冻融法制备LLC抗原致敏DC,与淋巴细胞及IL-2混合培养诱导出肿瘤特异性CTL,利用乳酸脱氢酶法检测CTL的杀伤活性.[结果]用GM-CSF、IL4联合培养小鼠脾细胞第4d,可见细胞形态发生改变,培养第8d,可见典型的刺突样DC,通过流式细胞术检测了DC表型高表达CD80占76.5％,CD86占60.0％,MHCⅡ占67.4％,CD11C占80.6％.[结论]应用GM-CSF、IL-4、LPS等细胞因子培养CB6F1小鼠脾细胞经过肿瘤抗原冲击,可以培养出成熟DC,并且DC可以诱导出具有杀伤活性的肿瘤特异性CTL.     

人舌癌Tca8113肿瘤抗原对树突状细胞诱导 CTL杀伤活性的影响

目的 探讨人舌癌Tca8113细胞肿瘤抗原体外诱导外周血来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)对CTL杀伤活性的影响.方法 选取健康成年人,抽取外周血,分离单核细胞,经贴壁获得树突状细胞前体,在体外先后加入GM-CSF、rhIL-4和(或)肿瘤抗原、LPS诱导培养10 d,获得成熟DC;而未贴壁细胞经rhIL-2诱导培养,获得T淋巴细胞.实验中设置舌癌Tca8113组和对照EC9706组,每组再根据效应细胞不同分为A组Tca8113细胞冻融抗原致敏的DC与T淋巴细胞共培养组;B组未经致敏DC与T细胞共培养组;C组单纯T细胞组.结果 A、B、C组效应细胞对Tca8113细胞株的杀伤活性分别为(76.48±1.47)%、(50.17±3.34)%、(27.66±4.12)%.A与B组、A与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),A组效应细胞对EC9706杀伤活性为(51.18±5.31)%,与对Tca8113的杀伤活性相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人舌癌Tca8113细胞冻融抗原能增强DC-CTL效应细胞对舌鳞癌Tca8113细胞株特异性杀伤活性.     

共培养树突状细胞与CIK细胞的抗肿瘤研究

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是高效肿瘤杀伤细胞，树突状细胞(DC)是人体内最有效的专职抗原提呈细胞。研究表明当二者共培养时可更好地杀伤肿瘤细胞，使其有望成为肿瘤免疫治疗的新突破。现就两者共培养条件下的生物学特性、活性影响因素、杀瘤机制等作一综述。