肿瘤混合粘液核芯肽诱导的人肿瘤引流区淋巴结细胞毒反应

我们采用凝胶过滤和密度梯度离心技术从胰腺癌细胞株SW1990细胞匀浆和细胞培养上清中提取了肿瘤粘液，用无水氢氟酸去掉糖链后，经鉴定为不含糖的肿瘤混合粘液核芯肽(MUC)，主要成份为MU-C1、MUC2和MUC3。动物实验表明具有诱发细胞免疫反应作用，本研究进一步观察其诱导人肿瘤引流区淋巴结细胞的体外扩增及溶瘤的作用。     

肿瘤混合粘液核芯肽诱发小鼠免疫反应实验研究

我们采用凝胶过滤和密度梯度离心技术从胰腺癌细胞株SW1990细胞匀浆和细胞培养上清中提取了肿瘤粘液，用无水氧氟酸方法去掉糖链后获得粘液核芯肽，经PAGE和SDS-PAGE及免疫印迹分析表明．从细胞匀浆和细胞培养上清提取的粘液为同一成份。分子量为670kD，亚单位为28kD，以二硫链相连，     

癌相关抗原粘蛋白前体诱导人肿瘤引流区淋巴结的细胞毒作用

人肿瘤相关抗原可诱导宿主的细胞免疫反应已被证实。一些肿瘤粘蛋白也证实可诱发T细胞细胞毒作用。本研究是观察从胰腺癌细胞株提取的粘蛋白核芯肽诱导人肿瘤引流区淋巴结细胞的抗肿瘤免疫作用。4例乳腺癌、3例胃癌、3例结肠癌的肿瘤引流区淋巴结手术切除后立即在体外培养于含50μg/ml胰癌核芯肽及50单位IL-2的培养基中,观察其对多种癌细胞的杀伤效应(MMT法)。结果表明体外经胰癌核芯肽刺激后增殖的淋巴结细胞对多种肿瘤细胞有杀伤作用,如结肠癌、胃癌、胰腺癌及白血病细胞K562。本研究结果为以肿瘤粘蛋白核芯肽制备疫苗用于主动特异性免疫治疗或过继免疫治疗打下基础。     

应用噬菌体随机肽库筛选肿瘤MUC1/Y黏蛋白结合肽

目的：探索用噬菌体随机肽库筛选可用于肿瘤导向治疗的新型小分子载体。方法：以MUC1/Y黏蛋白的胞外段蛋白（MUC1/Yex）为靶分子,用凝胶亲和法和酶联板法分别筛选十二肽噬菌体随机肽库,ELISA鉴定阳性克隆,DNA序列测定后确定MUC1/Yex结合肽的氢基酸序列;免疫组化鉴定阳性噬菌体克隆及正常及肿瘤细胞的结合能力及特异 性。结果：通过4轮筛选,共获得3种MUC1/Yex的结合肽,分别为HHWHSRSQLSWF,HLKHKNYLPPTP和GNWYRHPHYLQP,其中HXXHS表位可能在与MU1/Yex的结合中起重要作用。阳性噬菌体克隆可与肿瘤细胞系MCF7,OVCA3,而不与正常外周血淋巴细胞结合。结论：筛选获得的MUC1/Yex结合肽具有一定的亲合力和肿瘤特异性,可进一步用于肿瘤导向治疗的研究。     

人胰腺癌相关粘蛋白核芯多肽的提取与特性

应用分子筛层析及氯化铯密度梯度离心从人胰腺癌细胞株SW1990提取、纯化获得粘蛋白,再用氟氢酸去除粘蛋白的碳水化合物而获得核芯肽。对粘蛋白核芯肽进行了氨基酸组份分析,并以免疫印迹及ELISA法进行免疫原分析,结果表明所提取的核芯肽至少含有Muc-1,Muc-2,及Muc-3三种不同氨基酸序列的多肽,免疫印迹表明此核芯肽含有从28至大于90KD的多条肽。在此基础上,制备了抗此核芯肽的单克隆抗体,5株单克隆抗体与多种癌细胞起反应,但多不与正常组织起反应,仅一株单克隆抗体MY-5与部分正常组织反应。这为进一步观察癌相关核芯肽病理生理功能打下了基础。     

MUC1和CK7在乳腺癌外周血微转移检测中的应用

目的：以MUC1和CK7为基因标志物检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞，探讨肿瘤基因标志物在乳腺癌微转移诊断中的意义。方法：采用RT—PCR法检测乳腺癌患者外周血中有核细胞的MUC1和CK7mRNA表达。结果：1）检测15例正常人外周血MUC1、CK7mRNA表达，结果无假阳性；将乳腺癌细胞系MCF-7分别以1：10^5、1：10^6与正常外周血有核细胞混合，检测MUC1、CK7表达，结果无假阴性。2）检测35例乳腺癌患者外周血，以MUC1为标志物，外周血中肿瘤细胞检出率为30_3％（11／35）；以CK7为标志物，外周血中肿瘤细胞检出率为35．0％（12／35）。3）35例患者中有4例MUC1、CK7均表达阳性，7例仅MUC1表达阳性，8例仅CK7表达阳性，两种肿瘤标志物表达患者有交叉但不重叠。结论：以MUC1、CK7为基因标志物，采用RT—PCR方法检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可能在乳腺癌微转移诊断及乳腺癌预后中具有意义，多种肿瘤基因标志物联合检测结果优于单一标志物检测。     

胎盘免疫调节多肽遗传毒性和抗突变作用的研究

本语文应用体外培养人淋巴细胞并进行微核、染以体畸变的检测以及小鼬有髓微核实验的研究，评价胎盘免疫调节肽遗传毒性和抗突变效应，实验结果表明，胎盘免疫肽可显著抑制培养人淋巴细胞的自发和γ射线诱发的微核形成以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱发的染色体畸变，并能明显抑制环磷酰胺诱发的小鼠骨髓多染性红细胞微核的增加，揭示了胎盘免疫调节肽具有抗突变作用。     

重组人MUC1-MBP融合蛋白的抗肿瘤作用

目的： 研究重组人MUC1MBP的抗肿瘤作用。方法：用重组人MUC1MBP皮下注射途径免疫健康鼠，采用MTT法测定小鼠抗MUC1特异的CTL活性；通过免疫鼠成瘤及荷瘤鼠治疗实验检测其对肿瘤的预防和治疗作用。结果：MUC1MBP免疫鼠CTL对MCF7及Lewis肺癌细胞的杀伤率分别为(47.7±4.3) %和(67.5±6.5) %；免疫鼠成瘤结果免疫组小鼠共长5个肿瘤，存活时间明显延长，对照组共长51个，平均生存时间23 d；荷瘤鼠治疗结果显示治疗组小鼠肿瘤平均体积386 mm3，对照组小鼠肿瘤平均体积4 000 mm3。结论：重组人MUC1MBP具有明显的治疗、预防肿瘤和抑制肿瘤转移的作用,有希望发展成人类抗肿瘤疫苗。     

黏蛋白1多肽通过small-MUC1蛋白抑制肿瘤细胞生长

目的：探讨黏蛋白1（mucin 1,MUC1）串联重复序列多肽(简称黏蛋白1多肽,MUC1多肽)对肿瘤细胞生长抑制的作用机制。方法：MUC1多肽与多种肿瘤细胞Jurkat、Raji、U937、MCF7、SMMC7721及活化的T细胞、小鼠巨噬细胞RAW264.7共同培养,观察MUC1多肽对上述细胞生长的影响;建立BABL/c小鼠Jurkat细胞皮下移植瘤动物模型,应用MUC1多肽进行治疗;采用GST免疫沉降实验鉴定与MUC1多肽结合的肿瘤细胞表面蛋白。结果：MUC1多肽对Jurkat、Raji、U937、MCF7和SMMC7721细胞的生长均有抑制作用,对活化的T细胞和小鼠RAW264.7细胞生长无明显抑制作用。MUC1多肽对BABL/c小鼠皮下Jurkat细胞移植瘤的生长均有明显抑制作用（P<0.05）。GST免疫沉降实验显示,Jurkat 和MCF7细胞裂解上清中与MUC1多肽结合的蛋白可与两种抗MUC1串联重复序列抗体（GP1.4和HMPV）及抗胞内段抗体（Ab5）发生反应,相对分子质量大约115 000,提示可能是MUC1新的同种型,命名为small MUC1（sMUC1）。结论：MUC1多肽可通过与肿瘤细胞表面small MUC1蛋白的相互作用向细胞传导生长抑制信号     

粘蛋白核芯肽MUC1的基因结构及其在肿瘤生物治疗中的意义

MUC~1是一系列粘蛋白核芯肽(apomucin)分子的一员,存在于正常的导管上皮细胞及某些肿瘤细胞表面,在维持正常细胞的生理功能及肿瘤发生、发展、转移等病理过程中起重要作用。随着MUC~1的克隆,粘蛋白核芯肽的其它成员的结构及生物学意义相继被阐明,针对它们不同的表位制成不同的疫苗,为肿瘤的主动特异性免疫治疗提供了一个新途径。     

黏蛋白1多肽对T淋巴瘤Jurkat 细胞生长的抑制及其机制

目的:探讨黏蛋白1(mucin 1,MUC1)多肽对人T淋巴瘤Jurkat 细胞生长的抑制作用及其机制。方法：将MUC1多肽与Jurkat细胞共同培养,锥虫蓝染色法观察MUC1多肽对该细胞生长的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞生长周期及其细胞表面MUC1的表达;Annexin V/PI双标记法检测Jurkat细胞的凋亡;应用抗体封闭实验检测MUC1多肽在Jurkat细胞表面作用的位点。结果： 10、20、40 μg/ml MUC1多肽作用使Jurkat细胞生长抑制分别达（32±4）%、（37±2）%、（46±5）%,未见凋亡细胞。流式细胞术检测结果表明MUC1多肽可诱导Jurkat细胞周期阻滞在G0/G1期,在Jurkat细胞表面有MUC1蛋白的表达。采用5 μg/ml和25 μg/ml 抗MUC1抗体封闭Jurkat细胞表面MUC1表位后,MUC1多肽对细胞生长的抑制效应几乎全部消失。结论： MUC1多肽能明显抑制Jurkat细胞生长,其机制与该多肽通过和Jurkat细胞表面MUC1蛋白相互作用导致细胞周期阻滞在G0/G1期有关。     

三种粘蛋白在胃癌组织中表达及其临床意义

目的 研究粘蛋白（MUC1，MUC2，MUC5AC）在胃癌组织中表达及它们与临床病理学行为之间的关系。方法 应用免疫组化S－P法检测94例原发性的胃癌组织标本中MUC1，MUC2，MUC5AC在胃癌组织中的表达。结果 1.MUC1的阳性表达率为82％，不同组织学之间的表达有明显差异（P＜0.05)，在中高分化管状腺癌中表达最强，表达程度与病人年龄、淋巴结有无转移及肿瘤大小密切相关（P＜0.05)；2.MUC2表达的阳性率为84%，不同组织学类型肿瘤组织中的表达有显著性差异（P＜0.05)，在粘液腺癌中表达最强100％（7／7）；3.MUC5的阳性率为40％（38／94）,除性别之间存在差异外，与其它的临床资料无关。4.相关分析发现MUC1的表达与MUC2的表达呈正相关。结论 1、MUC1在不同的组织学类型的胃癌中表达不同，在中高分化腺癌中最高，并与淋巴结转移、肿瘤大小有关；2.MUC2在不同的组织学类型的胃癌中表达不同，粘液腺癌中表达最强，可作为研究粘液腺癌的较好指标；3.MUC5AC在胃癌组织中的表达下降，可作为研究胃癌发生、进展的较好指标。4.MUC1和MUC2之间可能有协同作用。     

结直肠癌组织中黏蛋白MUC2和MUC3的表达及临床意义

目的:探讨散发性结直肠癌组织中MUC2和MUC3的表达与临床病理参数间的关系及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测90例结直肠癌和30例正常结直肠黏膜组织中MUC2和MUC3的表达。结果:30例正常结直肠黏膜组织中黏蛋白MUC2和MUC3的表达阳性率均为100％,而90例结直肠癌组织中MUC2和MUC3的阳性表达率分别为35．5％和52．2％(P< 0．05);MUC2和MUC3的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切相关(P<0．05),黏蛋白MUC3与肿瘤的分化程度呈负相关(P<0．05)。结论:黏蛋白MUC2和MUC3在人结直肠癌组织中表达下调。     

大肠各类型息肉腺腔内脱落细胞及其粘液物质的病理研究

对７３例大肠各类型息肉的腺腔内脱落细胞和粘液物质进行了研究。脱落细胞按形态特征分为增生上皮型，异型上皮型，核固缩型，核凋谢型和微核型五种。结果炎性息肉，幼年性息肉和增生性息肉粘液分泌增多，并以唾液酸粘液和混合粘液为主，腺腔内有数量不等的中性白细胞浸润，少数病例有增生上皮型，异型上皮型和微核型细胞脱落，息肉状腺瘤，绒毛状腺癌和腺癌瘤变的粘液分泌减少，显示硫酸粘液和混合粘液为主，腺腔内有多量异型上皮型，核固缩型，核凋谢型和微核型细胞脱落，并随异型增生程度加重而递增，同管状腺癌相一致。提示观察大肠各类型息肉腺腔内脱落细胞的分型和粘液物质的变化，有助于判断病变的性质和发展趋势。     

MG系列单克隆抗体在卵巢癌早期诊断中的意义

 应用ABC免疫组化方法和MG系列胃肠道单克隆抗体对99例卵巢肿瘤组织进行了免疫组化染色。结果表明:29例粘液性囊腺癌MG抗原阳性率为89.6%，26例卵巢转移癌(16例胃腺癌转移卵巢，8例直肠粘液癌术后转移卵巢，2例子宫内膜癌转移卵巢)MG抗原阳性率为95.1%，20例粘液性腺瘤MG抗原阳性率为15%；24例浆液性腺癌则MG抗原均为阴性；10例正常卵巢对照片MG均为阴性，统计学处理表明，粘液性囊腺癌和转移癌与其余各组比较，MG有显著差别(P<0.01)，因而，以上这些提示:由于卵巢粘液性囊腺癌与胃肠道粘液癌的粘液成份相似，加之MG的阳性染色，更进一步证实了消化道粘液癌与卵巢粘液癌之间肿瘤相关抗原的存在，且我们可用MG单克隆抗体鉴别原发性卵巢粘液性囊腺癌和浆液性囊腺癌。又由于MG在粘液性腺瘤中阳性率是15%，在正常卵巢组织中MG均为阴性，提示我们MG单克隆抗体对卵巢癌的早期诊断有一定的临床意义。     

调味品花椒的诱变性研究

用小鼠骨髓多染性红细胞（PCE）微核形成和精子畸形测试系统对花椒食用成份的遗传毒性作了进一步检测。花椒食用成份按照模拟用作调味品时的实际烹煮方式提取。实验结果表明由此获得的花椒内提取物各剂量组的小鼠骨髓PCE微核诱发率与阴性对照组1％的微核率间无明显差异（P＞0．5）；精子畸形诱变率与阴性对照组的40．2‰畸形率间亦无显著差异（P≥0．5）。故可认为按习惯使用方式用作调味品时，花椒在体内系统中对真核细胞并无重要遗传毒性。     

粘液表皮样肿瘤

粘液表皮样肿瘤(mucoepidermoidtumor)又称粘液表皮样癌(mucoepider-moid carcinoma),是较常见的涎腺恶性肿瘤。自1945年Stewart 等将其从广义的混合瘤中分出,创用粘液表皮样肿瘤一名以来,文献报告的病例数以千计。许多作者从临床及组织学表现、组织化学、超微结构等方面进行了大量研究,从而对其生物学行为有了逐步深入的了解。但在其组织学分型及治疗方面尚存一些分歧。现综合有关文献作一简要介绍。一、发病概况粘液表皮样肿瘤约占所有涎腺肿瘤的3～15%,在大涎腺肿瘤中,约占5～10%,其中90%发生于腮腺,其余发生于颌下腺。在     

MUC1在泌尿系肿瘤的相关研究进展

MUC1是一种高相对分子质量糖蛋白,属于黏蛋白家族成员,正常情况下存在于许多人上皮细胞膜的腺腔面,具有多种功能,其核心肽由胞外段、跨膜段和胞内段组成。短的跨膜段和胞内段在不同种属间的结构是高度保守的,长的胞外段含有20~125个连续重复序列,连续重复序列由20个氨基酸组成,富含丝氨酸、苏氨酸和脯氨酸残基。在多种肿瘤组织中,MUC1异常表达和异常糖基化。虽然,在泌尿系肿瘤,如膀胱癌、肾癌、前列腺癌,其确切功能尚不清楚,但MUC1可作为肿瘤标志物和靶点应用于放免诊断和治疗,MUC1同这些肿瘤的浸润、转移和预后也密切相关。其在泌尿系肿瘤中特征性变化具有一定的临床应用价值。     

MUC1的表达与乳腺癌细胞粘附的关系

背景与目的:近年研究认为,肿瘤的转移与肿瘤细胞膜上粘液型糖蛋白的大量形成有关。本实验研究糖基化抑制剂苯甲基-α-N-乙酰半乳糖胺对粘蛋白-1(mucin1,MUC1)形成的抑制作用及其对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞的粘附、侵袭转移能力的影响。方法:免疫细胞化学法检测MUC1表达,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞对人工基底膜(Matrigel)的粘附能力,明胶酶谱法(zymography)检测MDA-MB-231细胞MMP-2、MMP-9的分泌变化。结果:经苯甲基-α-N-乙酰半乳糖胺去糖基化处理后的肿瘤细胞组与相应对照组比较,MUC1表达降低,对基底膜的粘附力明显降低(P<0.01),同时细胞中MMP-2和MMP-9的分泌量显著下降。结论:MUC1表达水平与肿瘤细胞的粘附能力相关,MUC1的抑制使乳腺癌MDA-MB-231细胞粘附能力,分泌Ⅳ型胶原酶能力明显减弱。     

粘蛋白MUC1在膀胱肿瘤与膀胱良性病变中的表达及其意义

目的:检测粘蛋白MUC1在膀胱肿瘤和膀胱良性病变中的表达,探讨其在膀胱肿瘤诊断和免疫治疗中的意义.方法:采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统,对48例膀胱癌组织、45例腺性膀胱炎组织和10例正常膀胱组织(对照组)粘蛋白MUC1表达进行检测分析.结果:MUC1在膀胱肿瘤组织、腺性膀胱炎组织中的平均灰度均显著低于正常膀胱组织(P＜0.001);膀胱肿瘤组织中平均灰度低于腺性膀胱炎组织,但两者差别没有显著性(P＞0.05).结论:粘蛋白MUC1作为肿瘤相关抗原,在膀胱肿瘤发生、发展中起着重要的作用,为下一步研究膀胱肿瘤免疫治疗提供了实验基础.