双特异性抗体治疗小细胞肺癌的实验研究

目的：探讨双特异性抗体在小细胞肺癌免疫治疗中的应用价值。方法：制备既抗小细胞肺癌表面抗原又抗T细胞表面CD3抗原的双特异抗体（简称双抗，BSAb),分别进行体外实验与运输实验。结果：体外实验显示，加入双抗的较未加入双抗的LAK细胞对小细胞肺癌细胞杀伤活性明显提高（P＜0．05）。显示杀伤活性与效靶比例呈正相关。在肿瘤生长的动物实验中，接种后第7－10天双抗组肿瘤发生率明显低于未用双抗组（P＜0．05）；裸鼠生存动物实验中，双抗组平均存活为58．4天，是对照组的1．5倍。结论：双特异性抗体能提高LAK细胞对小细胞肺癌的治疗效果。     

双特异性抗体在肿瘤免疫治疗中的应用

双特异性抗体能够同时识别肿瘤靶细胞和免疫效应细胞，因此兼有抗体特异性和介导效应细胞的细胞毒作用的双重功能。可以用化学偶联，二次杂交瘤技术和基因工程方法得到双特异性抗体。双特异性抗体能将效应细胞聚集于肿瘤部位并激活效应细胞发挥抗肿瘤作用，其杀伤肿瘤细胞的作用机理包括细胞增殖，细胞因子释放，细胞毒性多肽和酶的调控。     

双特异性抗体与肿瘤生物治疗

双特异性抗体亦称双功能抗体，是指能结合两种特异性抗原的抗体分子。通过ＢｓＡｂ，既能将效应细胞与靶细胞有效地连接起来，启动效应细胞的生物学活性，也能够作为载体将毒素、核素、药物等定位于靶细胞，因此可望成为治疗肿瘤的新方法。     

恶性神经胶质瘤特异性定向治疗的初步试验

局部应用LAK细胞治疗恶性神经胶质瘤的效果一直令人失望。以抗靶细胞单克隆抗体(McAb)与抗CD3McAb结合组成的双特异性杂交抗体前处理外周血T细胞,能大大增强其体外抗靶癌细胞的杀伤活性。体外研究与动物模型实验均表明以该双特异性抗体行特异性定向治疗,不仅能增强效应T细胞的溶解潜力,而且也能诱发效应细胞与靶细胞的交叉连接;经双特异性抗体处理的LAK细胞识别和溶解靶细胞的效能优于未经处理者。作者报告应用双特异性抗体处理的LAK细胞对恶性神经胶质瘤行特异性定向治疗的初步临床结果。     

双特异性抗体与T淋巴细胞抗肿瘤免疫

导向免疫效应细胞的双特异性抗体可以同进结合靶细胞的肿瘤相关抗原和效应细胞２表面的触发分子，能引发正常的细胞防御机制到肿瘤细胞上来，是一种新型高铲的肿瘤免疫制剂。其中根据Ｔ细胞活化的双信号识别理论发展而来的导向Ｔ淋巴细胞的双特异性抗体用于某些肿瘤的免疫治疗临床前研究报告了令人瞩目的抗肿瘤免疫效应。     

双功能抗体在肿瘤导向治疗中的作用

双功能抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｂｓ－ｍＡｂｓ）作为一种新型肿瘤免疫治疗手段已为人们所接受，它能特异性识别肿瘤细胞抗原及效应的细胞表面抗原，并将肿瘤细胞与效应细胞同时有效地连接起来，充分发近效应细胞对肿瘤靶细胞的特异性杀伤力，本文较为系统地介绍了双功能抗体的类型及其抗肿瘤机理。     

抗B-CLL-IgM Id×抗CD3双功能抗体对LAK细胞杀伤活性的影响

抗肿瘤双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)由于具有同时与效应细胞及靶瘤细胞两种不同抗原特异性结合的双重特异性,从而提高了效应细胞对靶瘤细胞的特异性杀伤活性,因此,其在肿瘤靶向生物治疗中的应用日益受到重视.本研究通过体外实验,观察了抗人慢性B淋巴细胞白血病LgM独特型×抗CD3双特异性抗体(抗B-CLL-LgM Id×抗CD3 BsAb)对LAK细胞杀伤靶瘤细胞活性的影响,现报道如下.     

双功能抗体抗CD3/抗CD19介导T细胞对靶细胞的杀伤作用

背景与目的:双功能抗体有2个抗原结合臂,一方面具有肿瘤相关抗原,另一方面具有和免疫效应细胞表面分子标记结合的能力,并能有效地使效应细胞靶向杀火肿瘤细胞的作用.本实验探讨抗CD3/抗CD19双功能抗体介导T细胞杀伤靶细胞的作用.方法:利用非放射性荧光染料Calcein-AM进行抗体介导的体外特异性杀伤活性榆测,Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞作为效应细胞.首先以Raji细胞为靶细胞,按不同效靶比,不同抗体浓度分组,以PBS、抗CD3scFv+、抗CD3scFv抗体及非相关抗体抗CD3/抗PGP为对照,另设CD19-K562细胞为非相关靶细胞组,比较双功能抗体介导特异性体外杀伤活性.取上述杀伤实验效靶比25:1,抗体浓度500 ng/mL各组,ELISA法比较激活的T细胞分泌IL-2的量,Real-time PcR法检测T细胞因子IL-3、IFN-γ、TNF-α激活后的表达变化.结果:体外介导T细胞杀伤靶细胞Raji的效果比对照组明显增强(P＜0.05),激活T细胞分泌IL-2、IL-3、IFN-γ及TNF-α的表达均明显高于对照组.结论:双功能抗体抗CD3/抗CD19在体外介导T细胞对靶细胞具有较强的杀伤作用.     

抗CD3/抗肿瘤抗原双特异性抗体介导T淋巴细胞抗肿瘤效应与机制研究进展

双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb;或称双功能抗体bifunctional antibodies)是指通过化学偶联、细胞工程(双杂交瘤细胞)和基因工程方法制备的一种能在体内外分别与两种特异抗原结合并能产生生物学效应的抗体,BsAb在肿瘤药物导向治疗、免疫学检测和介导细胞毒作用中广泛应用.通过BsAb激活免疫系统抗肿瘤治的疗研究中,发现抗CD3/抗肿瘤抗原BsAb在介导T细胞高效特异的抗肿瘤效应的同时,又可以激发机体自身产生和维持较长时间的免疫保护作用,在卵巢癌等十多种肿瘤研究中显示较好的应用前景.     

双特异性抗体治疗恶性肿瘤的研究进展

双特异性抗体（BsAb)，一方面结合免疫效应细胞上的激活分子或偶联毒素，另一方面利用抗体的特异性与肿瘤相关抗原（TAA）结合。通过双结合，激活效应细胞如细胞毒性T细胞和NK细胞，或通过免疫毒素发挥靶向抗肿瘤效应，是一种很有潜力的恶性肿瘤免疫治疗方式。本文对双特异性抗体的构建方法、作用机制及其相关研究加以概述。     

双特异性抗体治疗恶性肿瘤的研究进展

双特异性抗体(BsAb)，一方面结合免疫效应细胞上的激活分子或偶联毒素，另一方面利用抗体的特异性与肿瘤相关抗原(TAA)结合。通过双结合，激活效应细胞如细胞毒性T细胞和NK细胞，或通过免疫毒素发挥靶向抗肿瘤效应，是一种很有潜力的恶性肿瘤免疫治疗方式。本文对双特异性抗体的构建方法、作用机制及其相关研究加以概述。     

抗EGFR-抗CD3双功能抗体介导CIK细胞、LAK细胞或PBLS细胞对胃癌荷瘤裸鼠治疗效果的比较

 目的　比较抗EGFR-抗CD3双功能抗体在体内条件下介导CIK细胞、LAK细胞及人类PBLS细胞三类不同的免疫效应细胞对胃癌细胞的杀伤能力,为临床应用该抗体治疗胃癌的细胞选择提供实验指导。方法　采用化学耦联法合成的抗EGFR-抗CD3双功能抗体分别与CIK细胞、LAK细胞及人类PBLS细胞联合经尾静脉注入SGC7901胃癌细胞移植瘤小鼠体内,同时以等量0.9 % NaCl溶液尾静脉注射建立对照,治疗后检测在体情况下4组对胃癌细胞的杀伤能力,进行组间比较。结果　抗EGFR-抗CD3双功能抗体介导CIK细胞治疗组小鼠肿瘤抑制率为（64.9±7.7）%,显著高于抗EGFR-抗CD3双功能抗体介导LAK细胞及人类PBLS细胞组的（43.5±8.2）%和（39.7±6.5）%（均P＜0.05）,治疗结束时平均肿瘤质量为（473.9±37.7）mg,显著低于其他两组的（764.6±88.3）mg和（829.1±104.4）mg（均P＜0.05）。结论　初步的裸鼠模型治疗实验显示由抗EGFR-抗CD3双功能抗体介导的CIK细胞在体内条件下对胃癌治疗作用优于其他常用的免疫效应细胞。     

抗CD3抗CEA抗体诱导杀伤细胞对胃癌体内杀伤的作用

目的探讨抗CD3抗CEA双特异性单链抗体诱导杀伤细胞(CIK细胞)在体内杀伤胃癌的作用。方法将BGC823细胞种植裸鼠后,建立裸鼠胃癌模型,分为3组,分别经尾静脉注入生理盐水、CIK细胞和CIK细胞+双特异性单抗,每3天治疗1次,共6次,取出肿瘤组织称重,并计算出各组的抑瘤率。结果在体内,CIK组和CIK+双特异性单抗组均可抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为27.4%和41.7%,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CIK组与CIK+双特异性单抗组的瘤体积、瘤重、抑瘤率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 CIK细胞本身可以抑制肿瘤细胞的生长,在加入抗CD3抗CEA双特异性单链抗体后,抑瘤作用明显增强。     

微型双功能抗体介导人T细胞杀伤耐药实体瘤细胞

目的 探讨抗P-糖蛋白（P-gP）／抗CD3微型双功能抗体介导人T细胞杀伤耐药实体瘤细胞的作用。方法 采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗P-gp／抗CD3微型双功能抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定;采用^51Cr释放实验,测定抗P-gP／抗CD3微型双功能抗体介导的人T细胞体外靶向杀伤活性;采用多药耐药（MDR）细胞系KB／MDR、敏感KB细胞裸鼠移植瘤模型,测定该微型双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果 纯化的抗P-gp／抗CD3微型双功能抗体,在相对分子质量28000和26000处各有1条蛋白带。在抗P-gp／抗CD3微型双功能抗体存在的情况下,激活的T淋巴细胞能够裂解KB／MDR细胞,且随着效靶比的增高而增高。抗P-gp／抗CD3微型双功能抗体联合人T淋巴细胞能有效抑制KB／MDR细胞裸鼠移植瘤的生长,而对敏感KB细胞移植瘤的生长无抑制作用。结论 抗P-gP／抗CD3微型双功能抗体在体内外均能介导人T淋巴细胞杀伤表达P-gP抗原的KB／MDR细胞,是有望用于耐药实体瘤临床治疗的双特异性抗体。     

双特异抗体对肿瘤浸润淋巴细胞细胞毒性增强效应

近年来研究表明,部分肿瘤组织中分离TIL细胞.单用IL-2难以诱导出高的抗癌活性.双特异性抗体中能识别T细胞抗原受体复合物的抗CD3单抗不仅能促进TIL细胞增殖,而且能增强其抗瘤活性;而识别肿瘤细胞表面抗原的抗肿瘤单抗,则引导TIL定向杀伤肿瘤靶细胞.本文选择了抗CD3单克隆抗体和抗肺癌单克隆抗体制成双特异性抗体,探索其对TIL细胞杀伤肺癌细胞增强效应,现报告如下:首先采用SPDP化学偶联法将纯化后抗CD3单抗和抗肺癌单抗ALTO4以二硫键连接成ALTO4-CD3双特异性抗体.再分离得到TIL细胞,并经间接免疫荧光法证实制得TILCD3~ 细胞占65%.采用间接免疫荧光法检测显示AL-TO4-CD3能同时与A549和TIL细胞特异地结合,而且通过其桥梁作用,显著增加TIL和A549细胞结合率;通过MTT比色     

双特异性抗体在肺癌治疗中的研究进展

双特异性抗体是通过细胞融合或重组DNA技术制备的人工抗体,可以同时特异性结合两种抗原或同一种抗原的两个不同抗原表位。双特异性抗体作为一类具有双功能的“单药”,既不同于有关的单特异性抗体,也不同于单特异性抗体的联合用药,具有抗肿瘤效果好、不良反应小和抗体用量少的特点。双特异性抗体已成为肺癌研究的重点关注领域,amivantamab的研发和获批上市为非小细胞肺癌患者的治疗提供了新的选择,tarlatamab在小细胞肺癌患者中表现出良好的抗肿瘤活性。文章对肺癌治疗领域的双特异性抗体药物的研究进展进行综述,以期能为肺癌的临床治疗提供新思路。     

肿瘤基因工程抗体研究进展

综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展，显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。     

抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的-种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用.本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性.方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody 载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达.表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12%SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(PACS)检测生物学活性.结果:基因重组质粒经测序证实序列正确.抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达.12%SDS-PAGE显示28×103和26×103各有-条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符.表达产物经纯化定量可达5 mg/L.FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性.结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础.     

抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体的生物学活性研究

背景与目的目前,常规疗法已难以提高卵巢癌患者的生存率,已有实验数据及临床前试验结果表明,双特异性抗体能有效介导效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究旨在通过检测抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-I)的生物学活性,为其临床前试验及应用提供实验依据。方法观察BHL-I介导的外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)与靶细胞SKOV3结合、MTT法检测外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)增殖及PBL对靶细胞SKOV3杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBL分泌hIFN-γ、hTNF-α变化。结果BHL-I介导的花环形成率(15.7%)显著高于对照组(11.1%)(P<0.01);在抗原存在下,BHL-I显著促进PBMC增殖和PBL对靶细胞的杀伤(P<0.01),且杀伤率与花环形成率呈正相关(r=0.946);杀伤过程中上清液中hIFN-γ、hTNF-α显著增高(P<0.01)。结论BHL-I能介导PBL和SKOV3结合并活化PBL特异杀伤效应,杀伤可能与其hIFN-γ、hTNF-α表达增高有关。     

抗CD3/抗TNP双功能抗体的制备及对胃癌细胞系的杀伤作用

:目的　以化学方法将抗CD3 及抗三硝基苯 (TNP)单克隆抗体交联为双功能抗体 ,研究此双功能抗体与任何TNP化的抗肿瘤单抗结合 ,介导对肿瘤细胞的杀伤作用。方法　分别纯化抗CD3 及抗TNP单克隆抗体 ,经二硫苏糖醇 (DTT)还原、偶联得到抗CD3 /抗TNP双抗。TNP化抗胃癌单抗PD4 、3H11与抗CD3 /抗TNP双抗介导人淋巴细胞对胃癌细胞系MGC80 3的细胞毒作用。结果　双抗与TNP化的单抗结合 ,介导效应细胞对靶细胞的杀伤率高于未TNP化单抗 ,并随着效靶比的提高而升高。结论　抗CD3 /抗TNP双抗能够与不同种类的TNP化单抗结合介导效应细胞杀伤靶细胞 ,有潜在的临床应用价值