HPLC法对西藏麻花秦艽正丁醇部位4种环烯醚萜苷类成分的分析

目的:建立西藏麻花秦艽醇提物正丁醇部位中马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷含量测定的HPLC方法。方法:采用Hypersil GOLDaQ(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长242 nm,柱温30℃。结果:马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷在7.04～35.2μg/mL(r=0.999 9)、1.82～9.100μg/mL(r=0.999 9)、14.44～72.22μg/mL(r=0.999 5)、0.822～4.1μg/mL(r=0.999 1)与峰面积积分值呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.59%、98.95%、98.61%、99.63%、99.31%、99.50%、99.80%、98.50%,RSD分别为0.99%、 3.37%、1.87%、1.93%、1.21%、1.62%、0.54%、1.87%。结论:所建方法简便、准确,重复性好,可用于对麻花秦艽醇提物正丁醇部位的质量控制,有利于对麻花秦艽药效分析及的综合利用开发。     

不同产地野生滇龙胆中主要裂环烯醚萜类成分的含量比较

目的:采用高效液相色谱法测定不同产地野生滇龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷及獐牙菜苷的含量。方法:岛津Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相甲醇-水(30∶70),流速1.0 mL·min-1,龙胆苦苷检测波长270 nm,獐牙菜苦苷及獐牙菜苷检测波长245 nm,柱温25℃。结果:龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的线性范围为0.4～2 mg·L-1;相关系数分别为0.999 7,0.999 6,0.998 7;回收率分别为100.04%(RSD 1.49%),98.48%(RSD 1.67%),98.46%(RSD 1.15%)结论:用本法测定不同产地野生滇龙胆中3种成分含量,方法可行,结果可靠,为野生滇龙胆资源的开发与利用提供资料。     

不同提取方法对秦艽2种苦苷成分含量的影响

目的探讨不同提取方法对秦艽中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量测定的影响。方法采用HPLC法,比较甲醇超声提取法、甲醇索氏提取法、药典法(2005版药典秦艽项下方法)三种提取方法对2种苦苷成分含量测定结果的影响。结果甲醇超声提取法优于其它二种方法。结论甲醇超声提取法操作简便易行,重现性好,准确度高,为科学控制秦艽质量提供一个可靠的方法。     

HPLC法测定不同海拔长柄秦艽中龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷

目的测定西藏产长柄秦艽Gentiana waltonii中指征性成分龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷,分析其与海拔的关系,为开发秦艽替代性资源,发展中藏药产业提供依据。方法 Alltech(C18(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.5%乙酸水溶液(25∶75);体积流量为1.0 mL/min;柱温:25℃;检测波长238 nm(马钱子酸和獐牙菜苦苷)、246 nm(龙胆苦苷和獐牙菜苦苷);进样量:10μL,按外标法计算。结果西藏不同产地长柄秦艽中均能检测到秦艽中的指征性成分,其中龙胆苦苷的量在4种组分中最高,马钱酸次之,獐牙菜苦苷最低。不同地区长柄秦艽中龙胆苦苷的量均高于或接近《中国药典》2005年版标准。4种指征性成分的量与海拔无明显相关性,随海拔升高活性成分呈钟状变化。其中海拔4 000 m左右地区的长柄秦艽品质最优。结论西藏产长柄秦艽含有秦艽所具有的4种指征性成分,可以作为中藏药秦艽的替代性开发资源,其中海拔4 000 m左右区域的品质最优。     

HPLC法测定不同海拔长柄秦艽中龙胆苦苷、马钱酸、樟牙菜苦苷和獐牙菜苷

目的 测定西藏产长柄秦艽Gentiana waltonii中指征性成分龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷,分析其与海拔的关系,为开发秦艽替代性资源,发展中藏药产业提供依据.方法 Alltech C18 (250 mm ×4.6mm,5μm);流动相为甲醇- 0.5%乙酸水溶液(25:75);体积流量为1.0 ML/min;柱温:25℃;检测波长238 nm(马钱子酸和獐牙菜苦苷),246 nm(龙胆苦苷和獐牙菜苦);进样量:10μL,按外标法计算.结果 西藏不同产地长柄秦艽中均能检测到秦艽中的指征性成分,其中龙胆苦苷的量在4种组分中最高,马钱酸次之,獐牙菜苦苷最低.不同地区长柄秦艽中龙胆苦苷的量均高于或接近<中国药典>2005年版标准.4种指征性成分的量与海拔无明显相关性,随海拔升高活性成分呈钟状变化,其中海拔4 00n m左右地区的长柄秦艽品质最优.结论 西藏产长柄秦艽含有秦艽所具有的4种指征性成分,可以作为中藏药秦艽的替代性开发资源,其中海拔4 000 m左右区域的品质最优.     

HPLC法同时测定不同产地龙胆酒炙前后3种环烯醚萜苷

目的建立HPLC法同时测定不同产地龙胆Gentiana scabra Bge.饮片中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐芽菜苷的含有量。方法龙胆饮片甲醇提取物的分析采用Welchrom C_(18)柱(4.6 nm×250 mm,5μm);流动相甲醇(A)-水(B);梯度洗脱(0～25 min,8%～45%A;25～35 min,45%～48%A;35～45 min,48%～65%A;45～50 min,65%～90%A);检测波长240 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃。结果龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐芽菜苷分别在1.25～40μg(r=0.999 5)、0.25～4μg(r=0.999 2)、10～320 ng(r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.26%、99.84%、100.17%,RSD分别为1.32%、1.59%、1.16%。结论该方法稳定可靠,可用于龙胆饮片的质量控制。     

HPLC法同时测定萝卜秦艽中4种环烯醚萜苷的含量

目的:建立HPLC法同时测定萝卜秦艽(Phlomis medicinalisDiels.)中sesamoside(Ⅰ)、山栀苷甲酯(Ⅱ)、dehydropentstemoside(Ⅲ)和8-乙酰基山栀苷甲酯(Ⅳ)等4种环烯醚萜苷含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水,梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;检测波长:235 nm;柱温:25℃。结果:4种环烯醚萜苷的线性范围分别为:Ⅰ:0.102~0.521 mg/ml(r=0.9999);Ⅱ:0.101~0.505 mg/ml(r=1.0000);Ⅲ:0.101~0.506 mg/ml(r=0.9999);Ⅳ:0.021~0.105 mg/ml(r=0.9998)。4种成分的平均回收率均在99.34%~100.23%,RSD≤1.5%。结论:本法简便、快速、准确,可以用来同时测定萝卜秦艽中4种环烯醚萜苷的含量。     

麻花秦艽非环烯醚萜成分的研究

目的对龙胆属麻花秦艽Gentiana straminea的非环烯醚萜成分进行研究。方法利用硅胶、SephadexLH-20、ODS等柱色谱进行分离和纯化,根据化合物的光谱学数据和理化方法鉴定其结构。结果从麻花秦艽70%乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定其结构为(-)-syringaresinol-4,4′-bis-β-O-D-glucopyranoside(1)、gentiaphyllide-D(2)、红白金花内酯(3)、大叶苷D(4)、gentiaphyllide-E(5)、栎瘿酸(6)、乌苏醇(7)、β-谷甾醇(8)、胡萝卜苷(9)、龙胆三糖(10)、β-葡萄糖(11)和α-葡萄糖(12)。结论化合物1~6和10系首次从该植物中分离得到。     

龙胆药材中3种功效成分含量的同时测定

目的建立快速测定龙胆药材中马钱酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量测定方法。方法色谱柱:Kinetex C18(4.6mm×100 mm,2.6μm),Phenomen;流动相:乙腈-0.4%磷酸(5.0:95.0),流速:1.0 ml·min-1;检测波长:240 nm;柱温为40℃。结果马钱酸在0.404 8～3.238 4 mg·ml-1范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.60%,RSD=1.39%(n=6);结论建立的方法可以控制龙胆质量,操作简单,结果准确,方法可行。     

UFLC法同时测定龙胆中3种环烯醚萜苷的含量

目的采用超快速液相色谱(UFLC)法同时测定龙胆中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷和獐芽菜苷的含量。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为240 nm,流速为0.5 m L·min~(-1),柱温为40℃。结果龙胆苦苷、獐芽菜苦苷和獐芽菜苷进样量分别在1.0~20μg(r=0.9998)、1.0~20μg(r=0.9995)、0.12~2.4μg(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.3%、99.3%和98.3%(n=3),RSD均小于1.0%。结论 UFLC法简便、快速、准确、重现性好,可用于龙胆药材中环烯醚萜苷类成分的质量控制研究。     

秦艽总苷中龙胆苦苷在大鼠体内的药动学

目的:建立HPLC快速测定大鼠血浆中龙胆苦苷浓度的方法,研究秦艽总苷(total iridoid glucosides,TIG)中龙胆苦苷的药动学特点,评价秦艽总苷中其他组分对龙胆苦苷药动学的影响。方法:大鼠灌胃给予秦艽总苷,眼眶采血于肝素化试管,离心,取血浆适量用5倍量乙腈沉淀蛋白,取上清液过滤,用HPLC测定龙胆苦苷血药浓度,以C18为固定相,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(20∶80),于272 nm处检测,Kinetica程序软件处理数据。结果:龙胆苦苷血浆质量浓度在33.5～4 020.0μg·L-1线性良好,最低检出质量浓度为6.7μg·L-1,高、中、低浓度样品的提取回收率分别为80.82%,97.38%,89.10%。给大鼠灌胃TIG后药-时曲线符合非房室模型,主要药动学参数t1/2,Tmax,Cmax,MRT,HVD,AUC(0～∞)和CL相对稳定。结论:方法快速简便,准确灵敏,能较好地满足龙胆苦苷在大鼠体内的药动学研究。     

HPLC测定藏药麻花艽地上部位5种有效成分的含量

目的:建立藏药麻花艽地上部位5种有效成分的含量测定方法。方法:采用Hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相以甲醇(A)-0.02%磷酸水溶液(B)梯度洗脱。0～10 min,以20%A洗脱,10～30 min,从20%A线性变化至50%A。流速1 mL.min-1,柱温35℃,检测波长254 nm。结果:5种有效成分均达到基线分离,各成分相关系数及范围分别是落干酸r=0.999 9,0.364～2.18μg;獐牙菜苦苷r=0.999 9,0.275～1.65μg;龙胆苦苷r=0.999 9,0.614～3.68μg;獐牙菜苷r=0.999 9,0.065 6～0.394μg;异荭草素r=0.999 9,0.089 9～0.539μg。5种有效成分中落干酸和龙胆苦苷远较其他3种成分的含量高,达到总含量的60%以上。结论:方法快速、灵敏、准确,可靠,重复性好,可用于藏药麻花艽地上部位药材的质量控制。     

麻花秦艽ISSR-PCR反应体系的建立与优化

目的:建立麻花秦艽的简单重复序列区间-聚合酶链反应(ISSR-PCR)最佳反应体系,为该药材的种质鉴定及遗传多样性等研究提供参考。方法:运用单因素试验和正交试验优选麻花秦艽的ISSR-PCR反应体系中DNA模板用量,Mg2+浓度,dNTPs浓度,TaqDNA聚合酶用量和引物浓度等参数,确定麻花秦艽每条引物的最佳退火温度。结果:ISSR-PCR最佳反应体系(20μL)为模板DNA1μL(36mg·L-1),10×PCR缓冲液(含Mg2+)1.75μL(20mmol·L-1),dNTPs0.8μL(10mmol·L-1),Taq酶0.1μL(0.5%)及引物0.6μL(10mmol·L-1);筛选出12条多态性高、扩增稳定的ISSR引物,UBC-809引物的最佳退火温度55.5℃。扩增出的7条带中多态性带为6条,多态性位点比率85.71%。结论:建立的麻花秦艽ISSR-PCR反应体系稳定可靠,位于500bp处的条带为非多态性条带,可作为该种属的特征性条带。     

西藏麻花艽种质资源的遗传多样性分析

目的 对西藏不同产地17份麻花艽Gentiana straminea样品的遗传多样性进行比较分析。方法 居群采样,以相同产地同属近缘种粗茎秦艽G. crassicaulis为外类群比对,nrDNA ITS区序列分析,构建UPGMA系统树。结果 西藏产麻花艽nrDNA ITS区序列有1个多态性位点;外类群粗茎秦艽6份样品序列完全一致。结论 麻花艽与外类群种间区别明显;17份不同产地麻花艽被划分为2类,遗传多样性较为丰富,为西藏麻花艽药材品质评价及麻花艽核心种质的构建提供基础资料。     

HPLC同时测定龙胆中4种活性成分含量

目的:建立HPLC同时测定龙胆中龙胆苦苷、马钱酸、獐芽菜苦苷和獐芽菜苷含量的方法.方法:Inertsil ODS-SP柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.4％磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0～ 40 min,10％ ～ 30％A),流速为1.0 mL·min-1,柱温25℃,检测波长240 nm.结果:龙胆苦苷、马钱酸、獐芽菜苦苷和獐芽菜苷的线性范围分别为1.0～20 μg (r=0.999 7),1.0～20μg(r=0.999 6),1.0～20 μg(r=0.999 5),0.1～2.0 μg(r=0.999 5);平均加样回收率分别为98.9％,99.7％,99.1％,99.3％.结论:该方法准确、灵敏、可靠、重复性好,可用于龙胆的质量控制研究.     

外源NO对龙胆次生代谢调控及质量形成机制研究

目的 探讨外源一氧化氮（nitric oxide,NO）对龙胆Gentiana scabra次生代谢产物环烯醚萜苷积累及其质量形成机制的影响。方法 分别用水及0.02、0.10、0.50、2.00 mmol/L硝普纳（sodium nitroprusside,SNP）溶液处理龙胆鲜根,研究活性氧、抗氧化酶活性、次生代谢产物相关酶活性及次生代谢产物积累之间的关系。结果 0.50、2.00 mmol/L SNP处理组龙胆超氧阴离子、过氧化氢（H₂O₂）、NO含量在0～2 d显著增加,第2天之后逐渐降低。丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量呈现先升高后降低的趋势,表明SNP可模拟再现生态胁迫的生理状态。SNP处理组超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性在0～6 d均显著升高,0.50 mmol/L SNP处理组过氧化氢酶（catalase,CAT）和过氧化物酶（peroxidases,POD）活性分别在0～2 d和2～4 d显著升高。1,3-二磷酸甘油酸（1,3-disphosphoglycerate,1,3-DPG）含量及磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC）活性在0～4 d显著增加,其中0.50、2.00 mmol/L SNP处理组效果显著（P＜0.01）。0.50 mmol/L SNP处理组羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（hydroxymethylglutaryl-CoA reductase,HMGR）和1-脱氧-D-木酮糖醇-5-磷酸还原异构酶（1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase,DXR）活性在0～6 d显著升高,第6天0.50 mmol/L SNP处理组龙胆中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷和马钱苷酸含量比第0天分别增加了34.5%、35.3%、1.8%和53.7%。结论 SNP能够再现龙胆逆境条件下的生理状态,促进龙胆中环烯醚萜类化合物的生物合成,提高龙胆药材质量。     

RP-HPLC测定青海地区野生藏药线叶龙胆中4种主要活性成分的含量

目的：建立反相高效液相色谱法同时测定青海地区野生线叶龙胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷的含量。方法：Kromasil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,洗脱条件0.00～27.00 min,10%～17%A;27.00～45.00 min,17%～33%A;45.00～45.01 min,33%～100%A;45.01～55.00 min,100%～100%A;体积流量1.0 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温25 ℃。结果：獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷和异荭草苷均达到基线分离,分别在2.12～10.6,2.46～12.3,2.47～12.4,0.309～1.54 g·L^-1线性良好,r分别为0.999 4,0.999 7,0.999 2,0.999 5。结论：该方法快速、准确、重复性好,为该类药材的质量控制提供了理论依据。     

粗茎秦艽种子萌发过程中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量测定

目的:探究粗茎秦艽种子萌发过程中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量变化。方法:建立粗茎秦艽种子中马钱苷酸和龙胆苦苷高效液相色谱(HPLC)含量测定方法:Cat C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm),流动相为乙腈(A)-0.04%乙酸水(B),梯度洗脱,流速0.8 m L·min~(-1),检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量为5μL。测定种子不同萌发时期马钱苷酸和龙胆苦苷的含量。结果:马钱苷酸和龙胆苦苷的线性范围分别为35.5~761.5 mg·L~(-1)(r_1=1.000 0),4.8~103.1 mg·L~(-1)(r_2=0.999 9),线性关系良好,平均加样回收率分别为98.30%(RSD 1.9%),99.85%(RSD 2.6%);粗茎秦艽种子在萌发过程中,马钱苷酸的含量呈不断降低的趋势,龙胆苦苷的含量呈不断上升的趋势。结论:粗茎秦艽种子萌发过程中,龙胆苦苷和马钱苷酸的含量动态变化呈负相关性趋势,且相关性程度与种子的发芽率有关。     

全萼秦艽的生药学研究

目的:对全萼秦艽和秦艽进行生药学的比较研究,为全萼秦艽的进一步开发和利用提供参考。方法:利用生药学鉴定方法,从微形态、形态及理化等方面对全萼秦艽和秦艽进行系统分析和评价。采用HPLC测定獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量,流动相甲醇-水梯度洗脱,检测波长254 nm。结果:全萼秦艽的内、外周皮的木栓细胞只有1层。全萼秦艽及秦艽中龙胆苦苷质量分数分别为6.24%和8.51%,獐牙菜苦苷依次为0.26%和0.36%。结论:全萼秦艽在生药学特征方面与秦艽存在部分差异,为全萼秦艽资源的开发利用提供了实验依据。