声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响

目的:测定特定的声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响程度。方法:以苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量。结果:连续刺激24天后多糖含量明显高于对照组。结论:特定的声波刺激可以明显地促进铁皮石斛多糖的合成,对石斛多糖代谢途径有显著的影响。     

铁皮石斛组培苗规范化生产标准操作规程(SOP)＊

根据《中药材生产质量管理规范》（GAP）的要求，对铁皮石斛组培苗生产的物种选择、种质特征、生态习性、组织培养、瓶内炼苗、移栽炼苗、出圃、装框、运输和档案记录等方面进行规定，明确各个生产过程的最优方法和指标，以规范铁皮石斛组培苗的生产流程，为保障铁皮石斛组培苗的质量提供理论指导和技术支撑。     

铁皮石斛快繁及多糖含量测定

目的测定铁皮石斛组培苗的多糖含量。方法对铁皮石斛进行组织培养,用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛组培苗的多糖含量。结果铁皮石斛组培苗的多糖含量为25.09%。结论铁皮石斛组培苗的多糖含量达到2010版《中华人民共和国药典》的规定标准,具有一定的药用价值。     

铁皮石斛氨基酸组分分析

石斛是一种名贵中药,全株供药用,滋阴、益胃、生津止渴、强壮及退低烧等功效,而“霍山石斛”向来被视为石斛中的珍品,近年的研究已证实铁皮石斛(Dendrobium candidum)是“霍山石斛”的原植物之一。 关于石斛药用有效成分的研究,半个多世纪以来国内外学者在生物碱方面做了大量的工     

铁皮石斛内生真菌对宿主组培苗生长与代谢成分的影响

为揭示初筛所得7株活树附生铁皮石斛内生真菌对宿主生长及代谢成分的影响,该研究观察测量了接菌与未接菌铁皮石斛组培苗形态特征与农艺性状,采用苯酚-硫酸法与热浸法测定组培苗茎总多糖含量与浸出物含量,柱前衍生HPLC分析茎多糖中单糖组成,HPLC分析茎醇溶性成分。研究表明,供试7个菌株可改变铁皮石斛组培苗茎节变紫进程,并影响茎糖类及醇溶性成分组成及含量积累,除DO34外均能促进组培苗生长与提高多糖含量,除DO12外均能促进甘露糖含量积累,DO18,DO19,DO120可促进醇溶性浸出物含量积累,综合生长及代谢成分多项指标筛选出DO14,DO18,DO19与DO120 4个优良菌株,为铁皮石斛内生真菌和宿主相互作用机制研究与微生物工程研究提供了菌种材料与研究基础。     

铁皮石斛研究进展

综述了20余年来国内有关铁皮石斛的组织培养、化学成分、药理作用、菌根真菌等研究工作，并对其产业化开发的有关问题作了初步的探讨。     

稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响

目的研究稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响。方法通过正交试验,以石斛小苗为外植体,培养在附加了3种不同稀土元素组合的1/2MS 20%的香蕉提取物的培养基上进行培养。结果3种稀土元素中的镧(La)对试管苗增质量、叶绿素b、总叶绿素和石斛多糖的量都有显著的影响;3种稀土元素都对试管苗的叶片数、根数、分蘖数以及叶绿素a的量影响不显著。结论为铁皮石斛试管苗的壮苗以及品质的提高提供了科学的依据。     

铁皮石斛组织培养研究进展

铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall.ex lindl）又名黑节草、铁皮兰,为多年生附生型草本植物,属国家2级保护的名贵濒危药材[1],《神农本草经》列为上品[2],在《本草纲目》中也被收录。现代药理研究表明,石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的功效[3]。由于受特殊的生物学及生态学特性限制,其自然繁殖力极低、     

铁皮石斛对小鼠免疫功能的影响

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生草本植物.铁皮石斛为传统中药,应用历史悠久,药理功效显著.现代临床应用和药理研究证实,铁皮石斛具有滋阴润肺、养胃生津等功效[1],对慢性疲劳综合征、糖尿病、肾病有确切疗效和调理康复作用.还有增强机体免疫力、抗氧化、抗衰老的作用.对口干舌燥、年老体弱力衰阴虚等康复有特殊疗效[2].为探讨其在增强免疫力方面的功效,我们按《保健食品检验与评价技术规划》的相关要求,从体重、免疫器官脏器/体重比值、细胞免疫功能、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性等几方面进行研究,为其临床应用提供实验参考.     

铁皮石斛组织培养研究进展

目的：探讨铁皮石斛种子无菌萌发的最佳条件、原球茎诱导试管苗的最佳配方、不同器官诱导芽分化的最佳条件、试管苗生根的最佳配方。方法：收集、整理、归纳近20年来国内外有关铁皮石斛组织培养的文献资料。结果：将文献中铁皮石斛种子无菌萌发的情况、原球茎诱导试管苗的情况、不同器官诱导芽分化的情况及试管苗生根的情况分别列表进行对照比较。结论：各种外植体都可诱导不定芽的分化,以MS培养基使用量为普遍,试管苗生杭率达到96.67%。     

铁皮石斛化学成分及药理活性研究进展

铁皮石斛为我国传统药用植物,在日常保健和临床治疗中应用悠久,受到国内外学者广泛关注。作者在前人的基础上,通过查阅国内外铁皮石斛近10年的文献报道,对化学成分和药理活性相关文献进行整理、分析和归纳,系统的综述了其化学成分和药理活性的研究进展。近年来研究表明,铁皮石斛化学成类别较多,包括多糖、芪类、氨基酸、矿质元素、生物碱、挥发油等,其中以多糖及芪类成分为主;药理活性有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、缓解疲劳、治疗糖尿病等,以抗氧化和抗肿瘤研究为主。本文对国内外铁皮石斛化学成分及药理活性相关研究进行综述,以期为该物种的深入研究开发和新药配伍提供理论参考。     

柱前衍生化RP-HPLC测定铁皮石斛中的氨基酸的含量

目的:测定不同产地的铁皮石斛样品中氨基酸的含量。方法:样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,与铁皮石斛中氨基酸柱前衍生,采用高效液相色谱法测定其含量,采用CAPCELL PAK C18SG300色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相[0.05 mol·L-1乙酸钠缓冲液(以乙酸调p H 6.5)-乙腈(1∶1)](A)-[0.05 mol·L-1乙酸钠缓冲液(以乙酸调p H6.5)](B)梯度洗脱,柱温25℃,流速0.6 m L·min-1,检测波长254 nm。结果:游离氨基酸和总的氨基酸的回收率范围分别为92.48%~97.30%和90.95%~95.63%,RSD都小于3.0%,9个不同产地的样品游离氨基酸的含量范围在0.210 5%~0.571 2%,总的氨基酸含量范围在3.670 8%~6.890 4%,必需氨基酸占总的游离氨基酸的比例为0.094 4%~0.186 0%;必需氨基酸占总的氨基酸的比例范围为0.338 5%~0.374 1%。结论:该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于铁皮石斛中氨基酸的检测,不同产地的铁皮石斛样品其氨基酸的含量存在差异,必需氨基酸的比例也存在差异     

铁皮石斛中总酚的含量测定

目的： 建立铁皮石斛总酚含量的快速测定方法。方法： 以阿魏酸为对照品,采用福林酚比色法测定铁皮石斛中总酚含量。通过单因素试验筛选检测波长、显色时间和温度等显色条件;以总酚含量为指标,通过L₉（3⁴）正交试验考察乙醇体积分数、料液比、提取时间和提取次数对总酚提取工艺的影响,确定含量测定中供试品溶液的制备方法。结果： 显色条件为检测波长760 nm,福林酚试剂用量3.5 mL,10%碳酸钠溶液用量7 mL,显色温度20~30℃,避光反应时间0.5 h。铁皮石斛总酚的提取工艺为加40倍量70%乙醇提取1 h。总酚含量测定的线性范围3.168~9.504 mg·L^-1,平均加样回收率97.9%,RSD 1.53%。结论： 建立的含量测定方法操作简便、快速、准确、稳定、重复性好,可用于铁皮石斛中总酚含量的测定。     

响应面法优选铁皮石斛总多糖脱蛋白工艺

目的:优选铁皮石斛总多糖的胰蛋白酶联合Sevage法脱蛋白工艺,为该有效部位的深度开发和综合利用提供参考。方法:以总多糖保存率和蛋白脱除率为评价指标,通过单因素试验比较Sevage法、木瓜蛋白酶法、胰蛋白酶法和胰蛋白酶联合Sevage法;以蛋白脱除率为指标,酶解时间、酶用量、酶解温度和粗多糖溶液与Sevage试剂体积比为考察因素,利用BoxBehnken响应面法优化条件。结果:胰蛋白酶联合Sevage法具有较高的总多糖保存率及蛋白脱除率;最佳工艺条件为酶解时间1.5 h,酶用量0.21 g·m L-1,酶解温度63.25℃,总多糖溶液-Sevage试剂(4.27∶1);蛋白脱除率(87.15±7.93)%,总多糖保存率(81.32±8.54)%。结论:不同方法对铁皮石斛总多糖的脱蛋白效果有明显差异,胰蛋白酶联用Sevage法的效果最佳。     

铁皮石斛优良亲本杂交F1代苗期选择

目的:揭示铁皮石斛优良种源杂交F_1代苗期多糖与生物碱含量变异规律,早期选择F_1代优良家系。方法:利用4个种源26个优良亲本设计得到26个交配组合,用苯酚-硫酸法与酸性染料比色法分别测定F_1代苗期总多糖与总生物碱含量,结合前期农艺性状研究结果,运用相关性分析和聚类分析方法筛选优良家系。结果:不同交配组合间多糖与生物碱含量差异极显著(P0.01),半同胞家系间多糖含量差异显著(P0.05),生物碱含量差异不显著,全同胞家系内多糖与生物碱变异显著小于半同胞家系;铁皮石斛苗期叶片数量与多糖含量,叶长宽比、根冠比与生物碱含量呈显著正相关关系;26个交配组合划分为5个类群,其中类群Ⅱ植株综合性状表现较好。结论:铁皮石斛F_1代优良家系选择时,应同时重视父母本的选择,在全同胞家系间选择比半同胞家系能获得更好的遗传增益与家系内稳定性;结合前期农艺性状成果,筛选出6个苗期优良家系(66×9,68×2,91×69,66×65,69×91,66×17),表现出苗高,茎粗且分枝少,叶片大而狭长,根系较发达,多糖含量高等特点,为后期选择奠定了基础。     

精甲霜灵和嘧菌酯在铁皮石斛中的残留消解及风险评估

目的 考察精甲霜灵和嘧菌酯在铁皮石斛上的残留行为,为2种农药的合理使用和最大残留限量值的制定提供参考。方法 按照《农药残留试验准则》（NY/T 788—2018）,于2021年在浙江省开展消解动态及最终残留试验,样品经乙腈提取,超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定并进行膳食摄入风险评估。结果 在0.02~0.50 mg·kg^–1添加水平下,精甲霜灵加样回收率为78.1%~87.1%,RSD为1.3%~4.6%,嘧菌酯加样回收率为77.6%~85.5%,RSD为1.3%~5.8%。消解动态试验结果显示,精甲霜灵和嘧菌酯在铁皮石斛上的消解半衰期分别为6.39~7.52、11.25~12.46 d;最终残留试验结果显示,距末次施药后14 d时采样测定,精甲霜灵残留量为（0.028 6±0.004 9） mg·kg^–1（n=3）,嘧菌酯的残留量为（0.329 1±0.021 2） mg·kg^–1（n=3）;风险评估结果显示,两者的膳食风险概率分别为0.029%和0.130%。结论 推荐68%精甲霜?锰锌水分散粒剂和25%嘧菌酯悬浮剂分别按有效成分96、300 g·hm^–2各施药1次,安全采收间隔为14 d,两者对一般人群健康造成的风险在可接受范围内。     

铁皮石斛超微粉碎破壁工艺的优化

目的：优选铁皮石斛的超微粉碎工艺。方法：以微粉粒度、细胞破壁率和总多糖含量为综合评价指标,采用L₁₆（4³×2⁶）正交试验考察入磨量、粉碎时间、入磨粒度、粉碎温度和投料水分对铁皮石斛超微粉碎破壁工艺的影响。结果：最佳超微粉碎工艺为入磨粒径80目,投料水分4%~6%,入磨量250 g,粉碎温度0~10 ℃,粉碎时间25 min;平均得粉率96.1%（RSD 0.24%）,粒径<75 μm的平均得率96.8%（RSD 0.28%）,平均细胞破壁率98.3%（RSD 0.78%）,总多糖平均质量分数42.2%（RSD 2.85%）。结论：该工艺合理可行、稳定性好,为铁皮石斛的临床合理应用提供实验数据。     

铁皮石斛中10种黄酮类成分UPLC-MS/MS测定与多糖组成含量分析

目的:建立超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定铁皮石斛中10个黄酮类成分的方法,比较不同产地铁皮石斛黄酮类成分的含量差异,并结合药典指标进行系统聚类综合分析。方法:黄酮类成分测定采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.6 m L·min~(-1),柱温40℃,采用电喷雾离子源,负离子检测方式,得到相应的提取离子流图,以峰面积进行定量。结果:10种黄酮类成分具有良好的线性关系,r值均0.998 5,方法精密度、重复性和稳定性的RSD均3%,加样回收率在96.6%~104.7%,RSD均3.5%。测定结果显示不同产地铁皮石斛中黄酮类成分在组成和含量上存在较大差异;14批样品多糖、甘露糖含量均符合药典标准。结论:所建立的方法操作简便、准确、重复性好,可用于铁皮石斛药材中黄酮类成分的的定量测定,测定结果结合《中国药典》指标可为该药材质量标准的完善提供依据。     

Box-Behnken响应面法优化铁皮石斛的真空冷冻干燥工艺

目的:采用响应面法优化铁皮石斛的真空冷冻干燥工艺,为其冷冻干燥工业化生产提供理论依据。方法:在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法,以总多糖质量分数为指标,考察升华干燥温度、升华干燥时间、真空度3个因素对铁皮石斛真空冷冻干燥工艺的影响,优化铁皮石斛的冻干工艺条件。采用HPLC建立铁皮石斛氨基酸类成分的指纹图谱,ODS-Hypersil色谱柱(0.46 cm×20 cm,5μm),检测波长338 nm(0~37.5 min)和262 nm(37.5 min之后),柱温35℃。通过比较工艺优化后干燥样品与鲜品铁皮石斛指纹图谱的相似度,验证真空冷冻干燥工艺的可行性。结果:铁皮石斛最佳冷冻干燥工艺条件为升华干燥温度-16.4℃,升华干燥时间11.04 h,真空度85 Pa。在此条件下,干燥的铁皮石斛样品总多糖平均质量分数23.74%,与预测值基本一致,铁皮石斛干燥品与鲜品指纹图谱的相似度0.90。结论:通过Box-Behnken响应面法建立的模型预测性较好,适用于铁皮石斛真空冷冻干燥工艺条件的优化。     

基于ITS序列鉴别石斛类药材

获得高质量的DNA是中药石斛分子鉴别的关键所在。研究比较DNA提取方法(试剂盒提取、CTAB法),从石斛类药材中提取可用于PCR扩增的基因组DNA,基于ITS序列分析进行药材基原鉴别。结果表明,采用改良CTAB法(大量提取),从22批石斛类药材中富集并提取到基因组DNA,通过克隆测序获得ITS序列,同研究积累的石斛属植物ITS序列资料与Genbank序列数据库进行比对分析,根据序列相似性程度从12批黄草药材中鉴定石斛14种,近似种5种;从10批枫斗中鉴定石斛6种,近似种3种。该方法弥补了传统生药学鉴定方法在石斛类药材鉴别上的局限性,具有一定的应用前景。