脱脂棉及尼龙棉柱分离纯化T淋巴细胞的比较研究

目的：建立脱脂棉柱纯化人外周血T淋巴细胞的方法，并与尼龙棉柱分离法进行比较。方法：密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，通过玻璃器皿黏附的方法去除其中的单核巨噬细胞，再分别以脱脂棉柱或尼龙棉柱纯化T淋巴细胞。纯化的T淋巴细胞经流式细胞仪检测T淋巴细胞纯度，台盼蓝排斥实验检测纯化T细胞活力。结果：脱脂棉及尼龙棉柱滤过法对纯化T细胞的活力均无影响。结论：脱脂棉柱滤过分离法可以代替尼龙棉柱法获得高纯度高活性的T淋巴细胞。     

基于TLR4 / NF-κB 信号通路探讨通痹胶囊对胶原诱导型关节炎治疗机制的研究

目的:基于TLR4/NF-κB信号通路研究通痹胶囊对胶原诱导型关节炎(CIA)的治疗机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤组(0. 01 g/kg)和通痹胶囊低(0. 075 g/kg)、中(0. 150 g/kg)、高(0. 300 g/kg)剂量组,每组8只;使用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠CIA模型;采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测滑膜组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常大鼠相比,模型大鼠关节肿胀度均显著升高,通痹胶囊治疗后关节肿胀度显著降低,模型组滑膜组织增生明显,炎症细胞浸润,关节软骨破坏,通痹胶囊治疗明显改善滑膜组织的增生,降低炎症细胞的浸润;模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平显著升高,通痹胶囊处理后显著降低血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达;与通痹胶囊高剂量组相比,TLR4激动剂处理显著提高血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结论:通痹胶囊可以通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低炎性反应,显著改善CIA症状。     

间充质干细胞体外对ITP患者T淋巴细胞分泌功能的影响

目的： 体外观察间充质干细胞（MSCs）对特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者T淋巴细胞分泌细胞因子功能的影响。方法: 采用Ficoll分离和体外贴壁、传代培养,扩增出骨髓MSCs;通过Ficoll分离法和尼龙棉柱法获取ITP患者外周血T淋巴细胞。以经丝裂霉素（MMC）处理后不同数量（2×103、1×104、5×104 cells/well）的MSCs作为基底层细胞,接种体外分离纯化的异体ITP患者T淋巴细胞,分别于2 d、4 d、6 d后各自收集培养上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法动态测定T淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)水平的变化。结果: ITP患者T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ较正常人高(P<0.05),IL-4、IL-10较正常人低(P<0.05)。MSCs可显著抑制ITP患者或正常对照组T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ(P<0.05),且随MSCs数量的增加,抑制增强(P<0.05),共培养4 d、6 d时作用明显强于2 d时(P<0.05);MSCs可促进ITP患者T淋巴细胞分泌IL-4、IL-10 (P<0.05),且随MSCs量的增加,促进作用增强(P<0.05),对IL-10的作用随时间延长而增强(P<0.05),但对IL-4的作用在培养第2 d、4 d、6 d时无显著差异(P>0.05);在正常对照组,当MSCs数量>1×104可以促进T淋巴细胞分泌IL-4 与IL-10 (P<0.05),且随MSCs数量的增加,作用增强(P<0.05),共培养4 d、6 d时作用明显强于2 d时(P<0.05)。结论: MSCs能够在体外调节ITP患者辅助性T细胞1 (Thl)和辅助性T细胞2 (Th2)反应平衡,可使ITP患者Th1极化状态部分改善。     

单核细胞在人类淋巴细胞体外激活中的作用

近年来,单核细胞在免疫反应中的作用越来越受到重视。本文以尼龙棉柱分离技术及短期(9天)体外培养方法获得人外周乏单核细胞的淋巴细胞,并证实它们对致分裂原(PHA)、对可溶性抗原(破伤风类毒素),以及对同种精子、同种B细胞系或淋巴细胞刺激的免疫应答呈无反应状态;在培养中加入自身单核细胞后,上述各反应均获重建。结果说明,不论何种性质刺激原诱导的人外周血淋巴细胞体外免疫反应,单核细胞起着重要的免疫辅助与免疫调节功能。     

丝瓜络对实验性高血脂大鼠的降血脂效应

目的 :探讨中药丝瓜络 (LuffacylindericaRoam)对实验性高血脂大鼠的降血脂效果 ,以及对实验大鼠体重的影响。方法 :雄性SD大鼠 32只 ,随机均分为 4组 :对照组 (A组 )组 ,丝瓜络组 (B组 ) ,高脂模型组 (C组 ) ,高脂 +丝瓜络组 (D组 ) ,A组和B组的大鼠每日饲基础饲料 ,C组和D组给予高胆固醇饲料 ,B和D组的大鼠每日经胃灌服丝瓜络煎剂 6 70g生药·L-1/只 ,A和C组为每日经胃灌服饮用水 2mL/只 ,实验周期为 14d。结果 :(1)实验后C组大鼠的血清胆固醇 (TC)和甘油三脂 (TG)分别为(4 33± 1 10 )和 (1 13± 0 15 )mmol/L ,显著高于对照…     

含生物活性玻璃合成物羟磷灰石或烯钠钙石的制备

把羟磷灰石(Ca_(10)(PO_4)_6(OH)_2)与生物活性玻璃及其它材料的特性结合在一起的关键是增加材料的力学强度。作者按Andersson方法设计,使用4种不同的玻璃合成物为:AOBO、AOB2、A·5B3.3和A2B3·3,混合的粉末为SiO_2、Ma_2CO_3、CaCO_3、CaHPO_4·H_2O、H_3BO_3和Al_2O_3。按一次100g在铂金锅中1350C融化3小时后制成颗粒,过筛,使玻璃粉末颗粒小于45μm。陶瓷粉用羟磷灰石和磷钠钙石     

不同品牌骨水泥中抗生素的释放特性研究

目的探讨不同品牌的骨水泥对不同抗生素释放的影响。方法将骨水泥样品分为4组,每组6个样本:A组,40 g Palacos骨水泥中混入2 g万古霉素; B组,40 g Palacos骨水泥中混入2 g头孢他啶; C组,40 g Copal骨水泥中混入2 g万古霉素;D组,40 g Copal骨水泥中混入2 g头孢他啶。制作成直径(10±1) mm、高(20±1) mm的骨水泥圆柱,每组6个,在体外用磷酸盐缓冲溶液(PBS)浸泡,取4 h、8 h、16 h、24 h、48 h、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、2周、3周、4周、6周的样本,并应用高效液相色谱仪测定药物洗脱浓度。结果在为期6周的洗脱过程中,对于万古霉素的释放,A组Palacos骨水泥前3 d优于C组Copal骨水泥,而5 d到6周时C组Copal骨水泥优于A组Palacos骨水泥;对于头孢他啶的释放,B组Palacos骨水泥在洗脱周期内优于D组Copal骨水泥。结论万古霉素前期释放及头孢他啶释放选择Palacos骨水泥更佳,万古霉素中后期释放选择Copal骨水泥更佳,在临床中需根据已知敏感抗生素添加于适当的骨水泥载体中来发挥其功效。     

血管内皮生长因子_(165)和白细胞介素-8促兔动脉粥样硬化斑块形成作用的探讨

目的 :观察血管内皮生长因子1 6 5(VEGF1 6 5)和白介素 8(IL 8)对兔动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 :15只日本大耳白兔随机分为 3组 :A组为对照组 ,普通饲料喂养 ,B、C组为处理组 ,高胆固醇饲料喂养。至第 3周 ( 2 1天 ) ,A组和B组肌注白蛋白 ( 2ug/kg) ,C组肌注VEGF1 6 5( 2ug/kg) ,之后继续饲养 3周 (共 4 2天 )处死动物 ,测定各组血清IL 8和血脂 ,用计量组织学的方法测定动脉斑块内CD34的阳性细胞数。结果 :① 2 1天及 4 2天时B组和C组分别与A组相比 ,血清IL 8浓度均有显著性升高 (P <0 .0 5)。C组 4 2天与 2 1天相比 ,血清IL 8水平明显增高 (P <0 .0 1)。② 4 2天时 ,各组之间CD34阳性细胞数比较有显著差异 (P <0 .0 5)。③ 4 2天时B组和C组IL 8的水平与CD34的阳性细胞数之间呈正相关 (B组r=0 .6 4,C组r=0 .88)。④各处理组内血脂水平比较 ,2 1天与 0天相比有明显升高 (P <0 .0 1) ,4 2天与 2 1天相比无显著差异。结论 :VEGF1 6 5促进斑块内血管生成的作用可能与其促进炎性细胞分泌有关。     

通心络对脑缺血再灌注大鼠TLR4 和NF-κB 表达的影响

目的:探究通心络对脑缺血再灌注大鼠Toll样受体4(TLR4)和核转录因子(NF-κB)表达的影响。方法:采用线栓法构建脑缺血再灌注(I/R)大鼠模型,将50只SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组(Sham)、模型组(I/R)、通心络低剂量组(0.5 g/kg)、通心络高剂量组(2 g/kg)和尼莫地平组(2 mg/kg),每组10只;观察各组大鼠神经功能症状、脑梗死体积和病理组织学变化;采用TUNEL法检测脑组织中细胞凋亡情况,ELISA法检测血清中IL-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,Western blot法检测脑组织中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、TLR4及NF-κB p65的表达。结果:与Sham组相比,I/R组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织细胞凋亡数、血清IL-6、IL-1β及TNF-α水平、脑组织中Caspase-3、TLR4及NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);给予通心络处理后,大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织细胞凋亡数、血清IL-6、IL-1β及TNF-α水平、脑组织中Caspase-3、TLR4及NF-κB p65的表达显著下降,并呈剂量依赖性(P0.05)。结论:通心络对脑缺血再灌注大鼠能产生保护作用,减少脑组织细胞的凋亡,可能与下调TLR4、NF-κB的表达有关。     

双抗体夹心ELISA检测SEB方法的建立及在不同基质中检测的应用

目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA,并检测在多种基质中SEB的敏感性。方法:制备、纯化抗SEBmAbB4和D6。D6mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体,B4mAb作为包被抗体。结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法,检测抗体稀释液和小牛血清中SEB,检测灵感度0.2μg/L,定量线性范围0.78～12.5μg/L,r2=0.992,批间变异系数(CV)<10%,回收率80%～110%。检测50g/L脱脂牛奶、尿液和自来水中的SEB,灵敏度0.39μg/L,定量线性范围0.78～25μg/L,r2=0.997。与SEA和SECl无交叉反应。结论:本方法测量准确,灵敏度高,特异性好,在食品工业和临床标本检测中有广阔的应用前景。     

有机膦半抗原诱导的抗神经性毒剂单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备新化合物 1 羟基 1 对胺基苯基甲磷酸单频哪基醇酯 (P4 )的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以P4为半抗原 ,与血蓝蛋白 (LPH)化学偶联制备人工抗原 (P4 LPH) ,并以其免疫BALB/c小鼠 ,制备抗P4的mAb。用竞争抑制酶免疫分析法 ,测定mAb对梭曼等 7种配体的结合活性 ,结果以mAb与P4 BSA的结合被抑制 5 0 %时的配体浓度 (IC50 ) ,表示mAb的交叉反应性。结果 :建立了 9株对P4 BSA阳性反应的mAb ,它们分属 3种Ig亚类 ;6株 (2B2、3A10、3D5、4F1、6C9和 6H4 )为IgG1,1株 (3B9)为IgG2b ,2株 (1B3和 6H5 )为IgM。 9株mAb中 ,8株具有与半抗原P4的结合的特异性。4株 (1B3、2B2、3D5和 4F1)具有梭曼结合活性 ,其IC50 值分别为 10 -3 、10 -3 、10 -5和 10 -6mol/L ;1株 (4F1)具有与对氧磷结合的特异性 ,其IC50 值为 10 -5mol/L。 4株腹水的mAb鼠滴度高 ,分别达 10 -6(1B3和 2B2 )和 10 -8(3D5和 4F1)。结论 :用新的半抗原P4成功地制得抗梭曼和抗对氧磷的mAb ,可用于梭曼抗体酶、梭曼的免疫抗毒和免疫检测研究     

缺氧和高糖对大鼠肾成纤维细胞ICAM-1mRNA表达的影响

目的:探讨缺氧和高糖对肾成纤维细胞(NRK)细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA表达的影响。方法:将大鼠NRK分6组进行体外培养:(1)正常浓度葡萄糖组(常糖组):5.6mmol/L葡萄糖;(2)常糖+缺氧组:5.6mmol/L的葡萄糖+100μmol/L的CoCl2;(3)高糖A组:15mmol/L葡萄糖;(4)高糖+缺氧A组:15mmol/L葡萄糖+100μmol/L的CoCl2;(5)高糖B组:30mmol/L葡萄糖;(6)高糖+缺氧B组:30mmol/L葡萄糖+100μmol/L的CoCl2。分别于24h、48h取各组NRK采用RT-PCR检测ICAM-1mRNA表达水平。结果:与常糖组相比,高糖A组,高糖B组ICAM-1mRNA表达量逐渐升高(P<0.01),常糖+缺氧组、高糖+缺氧A、B组ICAM-1mRNA表达量也升高(P<0.01);高糖+缺氧A、B组ICAM-1mRNA表达量分别比高糖A、B组明显升高(P<0.01);高糖A、B组和常糖+缺氧组、高糖+缺氧A、B组48hICAM-1mRNA表达量均高于24h表达量(P<0.01)。结论:高糖和缺氧均可导致ICAM-1mRNA高表达,缺氧可能进一步增加高糖上调ICAM-1的表达。     

钙离子载体诱导HL-60细胞分化成树突状细胞的实验研究

目的 :探讨一种钙离子载体 (calciumionophore,CI)A2 3187,能否诱导早幼粒白血病细胞株HL 6 0分化成具有活性的树突状细胞 (dendriticcells,DCs)。方法 :将生长状态良好的HL 6 0细胞分别加在普通培养液中 ,或在含不同浓度 (2 5～ 16 0 0 μg/L)的A2 3187及 10 0 μg/L重组人粒 /单集落刺激因子 (rhGM CSF)的普通培养液中培养。 2 4～ 96h后 ,在光镜及电镜下观察细胞的形态 ;用流式细胞仪检测细胞的表面标志 ,MTT比色法检测其刺激同种异体T细胞增殖的作用。结果 :HL 6 0细胞以适量 (2 0 0 μg/L)的A2 3187诱导 2 4h ,DC的特征性表面标志CD83分子的表达最高 ,72h可出现典型的树突状突起 ,96h细胞表面CD80 (B7.1)、CD86 (B7.2 )、MHC II分子及细胞间黏附分子CD5 4的表达最高 ,且能明显激活同种异体T细胞。结论 :钙离子载体A2 3187可将HL 6 0细胞诱导成具有活性的DC样细胞。     

中国人C4重复基因座位初探

从78个家系266人次中研究了中国人C4基因的重复情况。在78个家系中有7个家系成员表现C4基因重复,占9.0%;依人头计,在266人中有17人C4基因表现重复,占6.4%。这17人均为C4B 基因重复,重复的类型及人数分别为,①C4B(1,2):2人,②B(1,12):6人;③B(1,1):5人;④B(1,96,96):2人;⑤B(2,2):2人。     

树鼩血栓性脑缺血时单胺氧化酶活性的变化及银杏内酯B作用机制探讨

目的 :揭示血栓性脑缺血时缺血区和血清单胺氧化酶 (MAO)活性变化及对血小板活化因子 (PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)作用机理的探讨。方法 :建立光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血模型 ,用酶比色法测量缺血后4、2 4及 72h中心区、半暗区、对侧区及血清的MAO活性 ,并用双缩脲法测定上述各区的蛋白含量。结果 :脑缺血后不同时间缺血中心区MAO活性显著低于假手术组 [(15 4 1± 1 6 3)× 10 3 U/g蛋白 ]或对侧区 [(15 4 7± 1 6 8)× 10 3 U/g蛋白 ],以 72h最为明显 [(2 19± 1 96 )× 10 3 U/g蛋白 ,P <0 0 1];此时缺血半暗区和血清MAO活性 [分别为 (2 5 30± 2 0 1)× 10 3 U/g蛋白和 (2 10 0 4± 2 6 6 7)× 10 3 U/L]明显高于假手术组 (P <0 0 1)。光化学反应后 6h舌下静脉一次注射PAF受体拮抗剂GB(5mg·kg-1)后 2 4h时 ,半暗区MAO活性明显低于缺血组 ,而中心区则高于缺血组 (P <0 0 1)。MAO活性变化与相应区域蛋白含量改变一致 (r=0 81,P <0 0 5 )。结论 :脑缺血后中心区、半暗区MAO活性改变是相应区域单胺类递质消长变化的主要原因 ,MAO活性变化与神经元蛋白质合成能力的改变有关 ;GB的脑保护作用与其拮抗PAF受体和调节MAO活性而促进递质平衡有关。     

我国HIV-1主要流行株外膜蛋白(env)基因V3～V4区变异及其与生物学特性的关系

目的　研究我国HIV 1主要流行毒株亚型的envV3～V4区变异与生物学特性的关系。方法　应用nested PCR对 1 57份获自我国 1 2个省份的HIV 1毒株env区序列进行扩增 ,并使用ABI 377型测序仪测序 ,然后应用BLAST、GCG和MEGA等生物学软件或程序对env基因V3～V4区序列进行分析。结果　B′亚型毒株V3顶端四肽存在着 4种类型 :GPGR ( 54% )、GPGQ ( 2 8% )、GPGK( 1 6 % )和GPGA( 2 % ) ,B′/C重组毒株全部为GPGQ( 1 0 0 % ) ,CRF0 1 AE重组毒株呈现GPGQ( 95% )和GPGR( 5% )两种类型 ;B′/C和CRF0 1 AE重组毒株V3～V4区及其临近区域N 糖基化位点比B′亚型毒株N 糖基化位点保守。而B′亚型毒株V3环的净电荷分别显著高于B′/C和CRF0 1 AE毒株 (P <0 .0 1 ) ;根据V3环关键氨基酸推测辅助受体使用情况的结果显示 :B′亚型毒株有 9.2 6 %可能使用CCR5,7.4 1 %可能使用CXCR4 ,其余 83.33%不能对辅助受体的使用作出预测。所有B′/C重组毒株被预测可能使用CCR5。CRF0 1 AE重组毒株有 90 .4 8%被预测可能使用CCR5,没有被预测为使用CXCR4的序列 ,9.52 %不能作出预测。结论　B′亚型毒株大部分可能为NSI型 ,少部分可能为SI型 ,而B′/C和CRF0 1 AE重组毒株绝大部分为NSI型。我国主要流行株的V3～V4区尤其是V3环的氨基酸     

人外周血淋巴细胞对绵羊红细胞的破坏作用

人外周血淋巴细胞,在含Ca~(2 )、Mg~(2 )的Hanks液中与绵羊红细胞(SRBC)共育,能将SRBC破坏释出血红蛋白(Hb),半数溶血值为0.1921±0.06,经胰蛋白酶抑制后淋巴细胞破坏SRBC的能力明显减弱,半数溶血值为0.0348±0.03。经尼龙棉柱法及E-玫瑰花法把淋巴细胞分离为T、B和NK等各个亚群。引起溶血作用最强的是NK细胞。对同一血源标本,同时用~(125)IUdR释放法测定NK活性和溶血分光光度法测定溶血活性,其结果呈明显正相关。本文认为人外周血淋巴细胞有破坏绵羊红细胞的能力,有这种能力的淋巴细胞是NK细胞。可望用本实验的溶血分光光度法测定NK细胞的活性。     

早期急性肾功能衰竭的肾性剂量多巴胺治疗

目的　探讨肾性剂量多巴胺在早期急性肾功能衰竭治疗中肾功能保护作用 .方法　 130例早期急性肾功能衰竭病人 ,比较用或不用肾性剂量多巴胺 ( 2 μg/kg/min) ,病人尿量和血肌酐的改变及是否需要肾脏替代治疗 .结果　多巴胺组 (A组 )和非多巴胺组 (B组 )平均血肌酐增高值分别为 6 0 .0± 95 .1μmol/L和 6 2 .0± 98.9μmol/L(p >0 .0 5 ) ,血肌酐超过 30 0 μmol/L者分别为 2 1和 2 4例 (p >0 .0 5 ) ,需行肾脏替代治疗者分别为 13和 17例 (p >0 .0 5 ) .结论　早期急性肾功能衰竭病人使用肾性剂量多巴胺并无肾功能保护作用 .     

PI3K信号通路对哮喘小鼠调节性T细胞与Th17失衡的调控作用

目的: 探讨PI3K信号通路对哮喘小鼠T细胞中辅助性T细胞17(Th17)与CD4⁺CD 25⁺调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法: 尼龙毛柱法分选对照组和哮喘组BALB/c小鼠脾脏T细胞,进而在细胞水平分组:对照组(A组)分为2个亚组:空白对照组(A1),PI3K抑制剂LY294002对照组(A2);哮喘组(B组)继续分为4个亚组:哮喘组(B1),5 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B2),10 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B3),20 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B4),共培养72 h,采用流式细胞仪检测CD4⁺CD 25⁺Treg的数量,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清中白细胞介素(IL)-10和IL-17水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转录因子Foxp3和RORγt的mRNA水平。结果: (1)分选后获得的T细胞纯度为(74.12±3.08)%,细胞存活率为(92.82±3.21)%;(2)Treg的数量B1组较A1组显著降低(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.05);B3和B4组较B1组显著增高(均P<0.01);(3)IL-17水平和RORγt mRNA表达B1组较A1组显著增高(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01,P<0.05);B2、B3、B4组均显著低于B1组(均P<0.01),呈剂量依赖性降低;而IL-10水平和Foxp3 mRNA表达B1组显著低于A1组(P<0.01); A2组显著高于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组均显著高于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性增高;(4)RORγt/Foxp3 mRNA的比值B1组显著高于A1组(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组显著低于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性降低;RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-17水平呈正相关(r=0.89,P<0.01);RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-10呈负相关(r=-0.86,P<0.01)。结论: 哮喘小鼠存在Th17/Treg失衡,PI3K信号通过调控Treg/Th17失衡而参与哮喘发病过程。     

小分子干扰RNA沉默CTGF对肾小管上皮细胞的作用及对氧化应激的影响

目的研究小分子干扰RNA沉默结缔组织生长因子(CTGF)基因对高糖诱导肾小管上皮细胞的作用及对氧化应激的影响。方法肾小管上皮细胞(HK-2)分组:①正常对照组(A组),培养基含D-葡萄糖1 g/L;②高糖组(B组),培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;③高糖+阴性对照组(C组):细胞转染含无关序列的重组质粒后于D-葡萄糖4.5 g/L的高糖培养基中培养;④高糖+干扰组(D组):细胞转染针对CTG F的siRNA表达质粒后于D-葡萄糖4.5 g/L的高糖培养基中培养。Q-PCR和western blot检测CTGF的表达。ELISA检测氧化应激指标F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平。结果与A组相比,B和C组CTGF mRNA和蛋白表达水平上调(P0.05);B组和C组CTGF mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P0.05);与C组相比,D组CTGF mRNA和蛋白表达水平下调(P0.05)。与A组相比,B和C组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平上调(P0.05);B组和C组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平无明显变化(P0.05);与C组相比,D组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平下调(P0.05)。结论沉默CTGF基因可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激。