汉防已甲素辅助直流电场治疗急性脊髓损伤的实验研究

目的: 探讨汉防已甲素辅助直流电场治疗完全性急性脊髓损伤的疗效。方法:33只家犬随机分成 3组, 用AllenWD法致脊髓完全损伤。A组为对照组; B组汉防已甲素治疗组; C组脊髓损伤 2h静滴汉防已甲素, 脊髓损伤 6h再置入电刺激器组。观察各组伤后 1、2、3个月神经功能、皮层体感诱发电位、神经元数量、神经元截面积和尼氏体密度恢复情况。结果: B、C组上述各项指标均优于同时期A组 (P≤0. 01)。此外, C组优于B组, 差异有显著性意义。结论: 汉防已甲素能减轻组织继发性损伤, 对实验性脊髓损伤有保护作用。直流电场与汉防已甲素联合应用能更有效地协同治疗脊髓损伤, 特别是促进神经功能早期、更好地恢复, 疗效明显优于单独使用汉防已甲素。     

甲基强的松龙辅助直流电场治疗脊髓损伤的实验研究

目的 为弥补脊髓完全损伤后6h置入电刺激器的疗效比伤后立即置入电刺激器的疗效为差这一缺陷，伤后2h应用大剂量甲基强的松龙一次，以减轻或阻止脊髓水肿，提高直流电场的疗效。方法 24只中国家犬随机分成2组，用Allen WD法致脊髓完全损伤。A组为脊髓损伤6h置入电刺激器组；B组脊髓损伤2h静滴大剂量甲基强的松龙，脊髓损伤6h再置入电刺激器组。观察各组伤后1、2、3个月神经功能、皮层体感诱发电位、神经元数量、神经元截面积和尼氏体密度恢复情况。结果 B组上述各项指标均优于同时期A组，差异有显性意义。结论 直流电场的确能有效地促进脊髓再生，辅助使用大剂量甲基强的松龙能更有效地治疗脊髓损伤，特别是促进神经功能早期、更好的恢复。     

直流电场与甲基强的松龙联合应用治疗急性脊髓损伤的实验研究

目的:探讨直流电场与大剂量甲基强的松龙联合应用治疗完全性急性脊髓损伤的疗效。方法:33只中国家犬随机分成3组,用AllenWD法致脊髓损伤。A组为对照组;B组为脊髓损伤后6h置入电刺激器组;C组为脊髓损伤后2h静滴大剂量甲基强的松龙,脊髓损伤后6h再置入电刺激器组。观察各组伤后1、2、3个月神经功能、皮层体感诱发电位、神经元数量、神经元截面积和尼氏体密度。结果:B、C组各项指标均优于同时期A组(P<0.05或P<0.01),C组优于B组,差异有显著性意义。结论:直流电场与大剂量甲基强的松龙联合应用能协同治疗急性脊髓损伤,更好地促进神经功能早期恢复。     

胚胎脊髓不同移植方法对成年大鼠损伤脊髓神经元的影响

目的：探讨胚胎脊髓不同移植方法防止成年鼠脊髓轴突损伤后引起的神经元萎缩的作用。方法：采用Wistar成年大鼠腰脊髓半切洞损伤模型。将实验动物分为五组：A组为正常对照组,B组为损伤组;C组为损伤＋移植组;D组为损伤＋移植＋椎旁肌组;E组为损伤＋移植＋大网膜组,手术后应用行为学和电生理检查观察大鼠神经功能恢复情况,应用尼氏染色方法观察神经元的大小,采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 胚胎脊髓不同移植方法均可以防止老年鼠脊髓轴突损伤引起的神经元萎缩,图像分析发现其作用为E组＞D组＞C组＞B组＞A组,尤以E组效果最好,可以完全恢复损伤神经元的形态,大鼠神经功能的恢复也出现了相同的变化趋势。结论 鼠胚胎脊髓不同移植方法能维持神经元的细胞形态,对成年大鼠损伤脊髓功能恢复有促进作用。     

神经节苷脂对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2表达的影响及意义

[目的]通过观察单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialotetrahexosyl gangliosides,GM-1)对于大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)表达及运动功能恢复是否能够产生影响来探讨CM-1对大鼠脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制.[方法]Wistar雌性大鼠66只(体重260～300 g),随机取6只作为正常对照组,余60只采用改良Allen's打击法于T9-11节段椎管制作大鼠急性SCI模型,并随机分为GM-1组(A组)和生理盐水对照组(B组)两组,每组各30只.分别于术后1、7、14、28、56 d采用Rivilin斜扳试验、改良Tarlov评分评价大鼠后肢运动功能恢复程度后处死取材,每组各时相点6只.以组织学和免疫荧光染色观察大鼠脊髓损伤的修复情况.[结果]术后7d起,Rivilin斜扳试验和Tarlov评分在A、B组间比较有显著性差异(P<0.0105),即A组功能恢复明显优于B组.术后56 d:HE染色示A组大鼠脊髓损伤处无明显空洞和瘢痕组织,有各种形态细胞形成,部分细胞有明显分化特征;B组脊髓断端被瘢痕组织填塞,可见大量炎性细胞和成纤维细胞浸润,并有较大脊髓空洞形成.免疫荧光染色发现,A组各时相点MAP-2表达呈阳性细胞数较B组高,差异有统计学意义(P <0.0105).[结论]SCI后,动物神经功能的恢复与MAP-2的表达呈一定的相关性;GM-1可通过增强脊髓损伤后MAP-2的表达来保护大鼠受损后脊髓的神经元.     

缺血预处理对鼠后肢缺血再灌注下脊髓腰骶膨大运动神经元的保护作用

[目的]对大鼠一侧后肢的缺血再灌注损伤行不同条件缺血预处理,观察脊髓腰骶膨大处运动神经元超微结构的变化,探讨其保护作用.[方法]通过血管夹暂时阻断大鼠左侧髂总、髂内和髂外动脉,建立大鼠后肢缺血模型.以缺血6h再灌注2h和12 h分为A、B两组,预处理方式为缺血10 min血液复流10 min,按无预处理、预处理1次、无时间间隔预处理2、3次,分成A0、A1、A2、A3;B0、B1、B2、B3组.取材腰骶膨大处脊髓灰质前角,光镜及透射电镜下观察不同条件预处理对缺血再灌注损伤中脊髓前角超微结构变化.[结果]组织形态观察结果显示A0组缺血再灌注损伤后神经元细胞减少,核溶解消失,损伤明显,预处理后神经元细胞增多,可见部分细胞核存在;B0组缺血再灌注损伤后神经元细胞大部分坏死溶解,预处理后坏死溶解现象减轻.超微结构观察显示A0和B0组脊髓前角神经兀细胞不同程度核周器扩张损伤,出现内质网扩张、大量线粒体空泡以及核膜溶解消失.预处理后损伤程度有所减轻,叠加预处理后损伤进一步减轻.[结论]缺血预处理能减轻大鼠肢体缺血再灌注下脊髓腰骶膨大运动神经元的损伤,对脊髓具有保护作用.反复3次预处理产生的保护作用优于2次预处理及1次预处理.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤动物模型.随机分成对照组(A组),脊髓损伤9 d后脊髓内微量注射生理盐水溶液5μl;骨髓间充质干细胞移植组(B组),脊髓损伤9 d后脊髓内注射骨髓间充质干细胞悬液5μl.移植后7、14、28 d采用斜板实验、脊髓运动功能BBB评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位的检测观察神经功能恢复,苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组织化学法观察移植的骨髓间充质干细胞的存活及分化情况,损伤部位神经纤维的再生情况.结果 移植后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义[A组(44.96±5.70)度,B组(53.19±6.51)度,P＜0.05];两组BBB评分差异有统计学意义[A组(6.8±1.2),B组(10.1±3.5),P＜0.05].同时,两组MEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.69±0.47)ms,B组(3.97±0.83)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.60±0.92)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(39.0±4.6)条/mm2,P＜0.05].实验组可见明显星形胶质细胞和神经纤维再生,脊髓损伤处的空洞面积明显减小.结论 骨髓间充质干细胞可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.     

活性巨噬细胞移植促进脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的 探讨活性巨噬细胞移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制成大鼠脊髓损伤模型.随机分成对照组(A组),脊髓内微量注射生理盐水20μl;活性巨噬细胞移植组(B组),脊髓内注射活性巨噬细胞悬液20μl.移植后7、14、28 d采用斜板试验、脊髓运动功能BBB(Basse,Beattie and Bresnahan)评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位检测观察神经功能恢复,HE染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组化法观察移植的活性巨噬细胞的存活情况及损伤部位神经纤维的再生情况.结果 术后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义(A组44.96°±5.70°,B组52.72°±6.51°,P＜0.05);两组BBB评分差异有统计学意义(A组6.8±1.2,B组11.8±2.2,P＜0.05).同时,两组MEP潜伏期差异也有统计学意义[A组(4.69±0.47)mg,B组(3.62±1.29)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.01±0.55)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(40.8±9.0)条//mm2 P＜0.05].实验组可见损伤区巨噬细胞存在,脊髓损伤处空洞面积减小,有明显神经纤维再生.结论 活性巨噬细胞可在脊髓损伤处存活并减轻脊髓损伤,减小脊髓损伤处空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.     

多西环素对兔急性脊髓损伤后MMP-2、12表达及神经功能的影响

目的 探讨兔急性脊髓损伤后应用多西环素(Doxycycline)对基质金属蛋白酶-2、12(MMP-2、12)表达及神经功能的影响.方法 家兔脊髓损伤后随机分为应用生理盐水对照组(A组)和应用多西环素的治疗组(B组),损伤后不同时间点取材,用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化;免疫组化染色检测MMP-2及Real-TimePCR检测MMP-12的表达变化;采用Tarlov评分评价神经功能.结果 苏木精-伊红染色镜检发现脊髓组织病理学改变B组明显轻于A组.两组均发现MMP-2、12的表达,MMP-2、12表达A组>B组(P<0.05).B组神经功能改善优于A组.结论 多西环素能抑制家兔脊髓损伤后MMP-2、12表达,促进神经功能恢复.     

嗅鞘细胞对正常及损伤脊髓神经元的保护作用

目的 研究嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)培养液对正常及损伤脊髓神经元的影响,进一步探讨OECs促进及保护脊髓神经元的作用机制.方法 取成年SD大鼠OECs制备OECs培养液(OEC culturemedium,OECCM),倒置相差显微镜观察细胞形态,行兔抗大鼠低亲和力神经生长因子受体p75抗体(nerve growth factorreceptor p75,NGFR p75)细胞免疫组织化学染色观察及纯度计算.取孕15～17 d SD大鼠制备脊髓神经元,并以H2O2制备损伤模型.观察OECCM对正常胚胎SD大鼠脊髓神经元生长发育的影响实验分为对照组(A组)和实验组(B组),OECCM对H2O2致脊髓神经元损伤模型的影响实验也分为对照组(C组)和实验组(D组).A、C组每孔加200 μL完全培养基,B、D组每孔加100 μL OECCM和100 μL完全培养基.4组细胞均作活性MTT比色分析.结果 OECs培养6～9 d后,细胞多呈双极形或梭形:脊髓神经元胞体较大,多呈圆形,培养5～7 d后,突起明显生长,多为双突起.NGFRp75细胞免疫组织化学染色观察示OECs细胞膜棕色深染,胞体清晰,呈梭性或三角形;OECs纯度>90%.培养6～9 d后,与A组相比,B组细胞生长旺盛,密度较高,胞体明显增大.A组胞体平均直径、单个神经元突起数目及细胞突起长度分别为(33.38±6.80)D/μm、(1.67±0.80)个和(91.19±62.64)L/μm,B组分别为(37.39±7.28)D/μm、(1.76±0.82)个和(121.33±81.13)L/μm,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).A组MTT比色法所测吸光度(A)值为0.402 0±0.586 9,B组为0.466 0±0.479 0,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).损伤后2 h,C、D组细胞数量明显减少,存活的神经元胞体皱缩、胞膜不清楚,细胞突起明显回缩或断裂.C组MTT比色法所测A值为0.1490±0.0300,D组为0.1840±0.052 0,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 OECCM可促进正常脊髓神经元生长,对损伤脊髓神经元有一定保护作用,OECs分泌的促神经生长因子是OECs发挥脊髓神经元保护作用的机制之一.     

大鼠脊髓慢性压迫及减压后神经细胞凋亡及其相关基因的表达

目的：观察慢性压迫性脊髓损伤后及减压后神经细胞凋亡和Bcl-2mRNA，P53mRNA,CASPASE-3神经功能恢复的影响。方法：将55只同龄Wistar大鼠，置入后路渐进式压迫装置，制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为假手术对照组（A组5只），慢性脊髓压迫组（B组25只），减压组（C组25只）。应用原原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记（TUNEL）技术及原位杂交检测方法，观察各组细胞凋亡率及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA、CASPASE－3在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达，分别于损伤后及减压后1、3、7、14、28d对慢性脊髓损伤区进行细胞凋亡及原位杂交检测。结果：A、B、C三组均发现神经细胞凋亡及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA，CASPASE－3的表达，A、B、C三组细胞凋亡率及阳性细胞灰度值比较，差异有显著性意义（P＜0．05）。阳性细胞表达程度与细胞凋亡的减少及神经功能的恢复相一致。结论：慢性压迫性脊髓损伤可导致大量的神经细胞凋亡，同时激活内源性保护机制，使脊髓发生适应性改变，减压可能通过激活此机制而减轻神经细胞凋亡，起到保护作用。     

大剂量维生素C联合小剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后脊髓病理生理变化的影响

[目的]探讨脊髓受压及减压后,大剂量维生素C(vitaminC)联合小剂量甲基强的松龙(MP)对脊髓灰质血流量,体感诱发电位(SEP),组织学变化,运动功能的影响.[方法]36只犬随机分为3组,每组12只.A组于SEP消失后5min静脉注射MP 30 mg/kg,以5.4 mg (kg·h)输液泵静脉注射;B组于SEP消失后5min以同样方式注射vitaminC 200 mg/kg+ MP 10 mg/kg,减压后12 h,24h各注射vitaminC 200 mg/kg;C组于SEP消失后5min静脉注射0.9％氯化钠,同样以5.4 mg(kg·h)输液泵静脉注射.均持续90 min后减压,期间检测SEP及脊髓灰质血流量,减压后3h重复检测,并进行改良Tarlov评分.减压后28 d通过病理组织学分析确定损伤的范围.[结果]在持续压迫期间A组4只犬出现了SEP,B组5只犬出现了SEP,C组无一出现.减压后A组有2只犬出现SEP,B组有2只犬出现SEP,C组有1只犬出现SEP.三组犬中出现SEP的脊髓灰质血流量明显高于没有出现SEP的犬(P＜0.05).A、B组脊髓灰质血流量明显高于C组(P＜0.05).A、B组动物后肢的运动功能可以较快恢复,C组不能恢复.A、B组脊髓损伤范围与C组具有显著性差异,病理改变与SEP及脊髓血流量具有相关性,与运动功能的恢复具有相关性.[结论]大剂量维生素C与小剂量甲基强的松龙联合应用在神经功能保护及恢复方面提供了显著持续的作用,可能增加了脊髓局部的血流量.维生素C可以部分替代甲基强的松龙对于脊髓损伤的作用.     

大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法:将60只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成中度慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为大剂量甲基强的松龙治疗组(A组,30只)和单纯慢性压迫性脊髓损伤组(B组,30只)。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术,分别于慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d对脊髓损伤区进行细胞凋亡检测。结果:A、B两组均发现细胞凋亡,两组细胞凋亡率比较,差异有显著性(P<0.01和0.05)。治疗组细胞凋亡的减少与神经功能的恢复相一致。结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致细胞凋亡,大剂量甲基强的松龙对神经细胞凋亡可起到抑制作用。     

他克莫司对犬急性脊髓损伤神经保护作用的实验研究

目的探讨他克莫司（FK506）对犬急性脊髓损伤的神经保护作用。方法采用Allen＇s法制成犬急性脊髓损伤实验模型。动物随机分为：A组（n=8）,经动脉插管注入生理盐水;B组（n=8）,FK5060.18mg／kg;C组（n=8）．FK5060.3mg／kg。B组、C组均在致伤后2h经动脉插管单次给药。致伤后行脊髓MRI影像学检查、脊髓功能评分、脊髓组织病理观察、神经丝蛋白（NF200）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫组织化学分析。结果脊髓功能评分C组优于A组（P〈0.05）;B组优于A组,但无统计学差异;MRI显示：脊髓损伤后C组病变范围小,恢复快,B组次之．A组最差。C组NF和GFAP表达高于A组（P〈0.05）,B组与A组无统计学差异。结论局部应用FK506（0.3mg／kg）对急性脊髓损伤具有神经保护作用,可减轻继发损伤,加快脊髓功能的恢复;局部应用FK506对急性脊髓损伤治疗有一定的剂量-效应依赖关系。     

脊髓损伤后并发肺损伤的实验研究

目的探讨脊髓损伤后并发肺损伤的机理、病理及治疗方法。方法家兔40只,通过改良Allen法制成脊髓损伤模型,截瘫按Talove分级为1～2级,分为治疗组(B)和对照组(A),治疗组于伤后3h开始自静脉给予常规剂量(0.35mg/kg)的地塞米松治疗,分别于不同的时相点处死家兔,观察动物肺脏的病理改变。结果家兔脊髓损伤后均发生了不同程度的肺脏损伤,肺出血(100%)。脊髓损伤所致的肺出血,治疗组明显轻于对照组(P<0.01)。结论脊髓损伤均并发不同程度的肺损伤。肺损伤的发生机理主要是神经-体液应急反应。应用常规剂量的地塞米松即可以有效地预防和治疗脊髓损伤并发的肺损伤。     

川芎嗪对预防犬急性脊髓损伤神经保护作用的实验研究

目的研究川芎嗪对犬急性脊髓损伤模型的神经保护作用。方法Allen’s法打击犬胸13节段脊髓制成急性脊髓损伤模型，所有动物均行介入下选择性动脉插管至伤椎水平肋下动脉，留置导管作为局部给药途径。实验动物随机分为正常对照组、脊髓损伤组、川芎嗪治疗组。术后采用胥少汀脊髓功能评分标准对脊髓神经功能进行评分、MRI检查、血清和脑脊液中髓鞘碱性蛋白(MBP)和S-100B蛋白的测定来衡量脊髓损伤程度和药物治疗效果。结果川芎嗪治疗组在各时间点的神经功能评分高于脊髓损伤组并且在1W有统计学意义。核磁共振检查发现川芎嗪治疗组的相对信号值低于脊髓损伤组，在72h、1W有统计学意义。川芎嗪治疗组血清和脑脊液中MBP低于脊髓损伤组，并且MBP在72h时差异有显著性。结论川芎嗪对于急性脊髓损伤具有神经保护作用。     

红花注射液对大鼠脊髓损伤后继发性损伤的影响

目的探讨脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后红花注射液对脊髓的保护效果。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组（A组）,脊髓打击损伤组（B组）、红花溶液组（C组）,每组6只。观察3组大鼠SCI后1 h、24 h、48 h的脊髓组织病理学变化,检测这3个时间点乳酸（lactic acid,LD）含量、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果术后C组LD含量、LDH活性比B组低,差异有统计学意义（P〈0.05）,特别是在术后48 h（P〈0.01）;与B组相比较,C组术后24 hMDA含量明显较低,SOD活性明显升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论红花注射液能减轻脊髓继发性损伤,对SCI后的脊髓神经功能具有一定的保护作用。     

汉防己甲素治疗急性脊髓损伤的实验研究

目的 探讨汉防己甲素(Tetrandrine，Tet)对急性脊髓损伤(Acute spinal cord injuries，ASCI)的保护作用。方法 74只Wistar大鼠随机分为4组，用改良Allen’s打击法制备大鼠截瘫模型，造模前各组分别投给相应的药物，伤后1h、4h取损伤区脊髓组织进行形态学观察和生化指标测定。结果 汉防己甲素能明显降低组织钙总量和MDA含量，防止镁总量和SOD含量的下降，稳定6-Keto-PGFla／TXB2的比值，减轻组织病损。结论 Tet对ASCI有保护作用，其作用机制为①扩张微血管，改善微循环，逆转ASCI后早期缺血倾向；②抗氧自由基，减轻组织过氧化损伤，稳定生物膜性结构；③减少ASCI后钙内流，从而阻断继发性损伤的链式反应。