去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞迁移、侵袭影响及机制研究

目的探讨去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞迁移、侵袭能力及机制研究。方法取对数生长期的人未分化甲状腺癌FRO细胞,加入不同浓度的去甲斑蝥素(2.5,5,10,20,40,80μg/mL)处理12 h、24 h和48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况。取对数生长期的人未分化甲状腺癌FRO细胞,分为空白组、10μg/mL去甲斑蝥素组、20μg/mL去甲斑蝥素组、40μg/mL去甲斑蝥素组,各组培养24 h后,采用划痕实验和Transwell实验检测FRO细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测转移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平。结果 2.5,5,10,20,40,80μg/mL的去甲斑蝥素对FRO细胞均有明显的增殖抑制作用,呈剂量时间依赖性。10μg/mL去甲斑蝥素组、20μg/mL去甲斑蝥素组、40μg/mL去甲斑蝥素组FRO细胞的迁移和侵袭能力均逐渐减弱,G2/M期细胞逐渐增多,细胞凋亡率逐渐增高,E-cadherin表达量逐渐增高,MMP-9表达量逐渐降低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论去甲斑蝥素能够抑制人未分化甲状腺癌FRO细胞的增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,其机制可能与上调E-cadherin和下调MMP-9蛋白表达有关。     

黄芩素体外抗骨肉瘤作用的实验研究

目的探讨黄芩素对骨肉瘤细胞系U2OS的生长抑制和诱导凋亡作用,及其作用的机制。方法应用MTT比色法,测定黄芩素对U2OS细胞株活性的影响,检测其抑制骨肉瘤细胞的时间效应和剂量效应;应用形态学观察、FCM,测定黄芩素对U2OS细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析。结果黄芩素对U2OS细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用,且呈时间依赖和剂量依赖性。表现为细胞G0/G1期阻滞、出现明显的凋亡峰;有核碎裂、染色体凝集,对U2OS细胞的IC50值为(39.5±9.2)μmol.L-1(P<0.05)结论黄芩素对骨肉瘤U2OS细胞株的增殖有凋亡抑制作用。     

去甲斑蝥素诱导活性氧的产生介导SKOV3细胞凋亡和G_2/M期周期阻滞

目的:研究去甲斑蝥素对人卵巢癌SKOV3细胞的细胞毒作用及作用机制。方法:MTT法检测去甲斑蝥素对细胞增殖的影响,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,蛋白印迹法检测相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素能够时间和剂量依赖性地抑制SKOV3细胞生长。52μmol/L的去甲斑蝥素作用12～48 h后可使细胞核皱缩、染色质凝聚,形成明显的凋亡小体;还可时间依赖性地诱导细胞凋亡、G_2/M期周期阻滞以及活性氧的产生。活性氧清除剂NAC可以显著降低去甲斑蝥素诱导的活性氧的产生,抑制细胞凋亡和G_2/M期周期阻滞(P0.05)。5 mmol/L NAC抑制去甲斑蝥素引起的Bax和p21表达上调,增加去甲斑蝥素引起的procaspase-3和Bcl-2的表达降低。结论:去甲斑蝥素通过升高活性氧的水平介导SKOV3细胞凋亡和G_2/M期周期阻滞。     

青蒿琥酯对骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡及对Survivin、Caspase-3、Caspase-7的影响

目的探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖、凋亡及对凋亡相关基因survivin及caspase-3、caspase-7表达的影响。方法采用MTT法检测青蒿琥酯对RPMI8226细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测survivin和caspase-3、caspase-7mRNA表达水平变化,Western blotting检验Survivin蛋白表达变化,应用Caspase-3/7试剂盒检测Caspase-3、Caspase-7蛋白活性。结果青蒿琥酯质量浓度从2.5μg/mL增加至50μg/mL时,青蒿琥酯体外对RPMI8226细胞的抑制率由33.55%增加到74.71%。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,50μg/mL青蒿琥酯诱导RPMI8226细胞最大凋亡率达(68.1±5.9)%。不同质量浓度青蒿琥酯干预48h后Survivin mRNA及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、Caspase-7mRNA及蛋白活性明显升高(P0.01)。结论青蒿琥酯对RPMI8226细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与增强Caspase-3、Caspase-7活性,抑制抗凋亡分子survivin表达有关。     

蟾毒灵诱导骨肉瘤细胞株凋亡的蛋白质组学研究

目的：探索蟾毒灵诱导骨肉瘤细胞株凋亡的作用及相关分子机制。方法：利用MTT法检测蟾毒灵处理骨肉瘤细胞株U2OS,U2OS/MTX300（甲氨蝶呤耐药细胞株）,SAOS2,IOR/OS9后24,48,72 h的生长抑制作用,通过流式细胞仪检测蟾毒灵处理48 h后上述细胞凋亡率,双向凝胶电泳联合MALDI-TOF/TOF质谱技术筛选蟾毒灵处理U2OS细胞48 h后差异表达的蛋白,Western blot法验证相关蛋白表达。结果：蟾毒灵对四株骨肉瘤细胞株生长抑制作用呈时间及剂量依赖性,蟾毒灵对甲氨蝶呤敏感细胞株U2OS及耐甲氨蝶呤细胞株U2OS/MTX300的72 h IC₅₀分别为（37.43±4.1）,（32.24±5.3） nmol·L^-1。流式细胞仪检测结果证实蟾毒灵可显著诱导四株骨肉瘤细胞凋亡。蛋白质组学筛选、鉴定出蟾毒灵处理U2OS 48 h后24种差异表达蛋白,进一步Western blot验证发现凋亡相关蛋白中热休克蛋白27表达变化最为显著,并且过表达热休克蛋白27可部分逆转蟾毒灵诱导U2OS及U2OS/MTX300细胞凋亡的作用。结论：蟾毒灵具有显著诱导骨肉瘤凋亡作用,其中热休克蛋白27蛋白水平下调在蟾毒灵诱导的骨肉瘤细胞凋亡中具有重要作用。     

蜂毒素诱导骨肉瘤细胞凋亡作用的定性定量研究

目的：从定性定量角度探讨蜂毒素诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的作用。方法：采用MTT法检测蜂毒素对骨肉瘤U20S细胞的增殖抑制作用，通过激光共聚焦显微镜、Annexin V／PI双标记法及原位缺口末端标记（TUNEL）等检测方法对细胞凋亡作定性定量分析。结果：蜂毒素能显著抑制U2OS细胞的增殖；激光共聚焦显微镜下可见到明显的凋亡细胞；蜂毒素浓度为2μg／ml、4μg／ml、8μg／ml时，应用流式细胞仪检测到U2OS细胞凋亡率分别为5.0211±0．3135、8．1111±1．0208和10．8933±1．7411，与对照组（1．7489±0．9281）相比，差异具有统计学意义（P〈0．01），TUNEL结果显示蜂毒素处理组的细胞凋亡指数较对照组显著升高（P〈0．01）。结论：蜂毒素能够抑制U2OS细胞增殖并能诱导其凋亡。     

五味子多糖对人脑胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨五味子多糖对人脑胶质瘤U251细胞体外生长的抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法实验分为4组,对照组常规培养(不加任何药物)人脑胶质瘤U251细胞,五味子多糖250μg/mL、500μg/mL、800μg/mL组分别加入相应浓度的五味子多糖培养人脑胶质瘤U251细胞。采用MTT法检测各组细胞培养12,24,48 h后生长抑制率;Transwell细胞体外侵袭实验法使细胞穿过小室透膜数量,检测各组细胞迁移能力;流式细胞实验结合AnnexinV-FITC/PI双染色法检测各组细胞培养12,24,48 h后早期凋亡百分比。RT-PCR技术检测500μg/mL五味子多糖作用U251细胞12,24,48 h后bcl-2、bax、caspase-3基因表达水平。结果与对照组比较,不同浓度五味子多糖对U251细胞有显著增殖抑制作用(P均0.05),且抑制作用呈现剂量与时间效应关系;与对照组比较,五味子多糖各组细胞迁移抑制率、细胞早期凋亡率、细胞晚期凋亡率均明显增高(P均0.05),且细胞迁移抑制率和细胞凋亡率随五味子多糖浓度增高而增高(P均0.05)。500μg/mL五味子多糖作用U251细胞12,24,48 h后,Bax、Caspase-3基因表达水平及Bax/Bcl-2比值逐渐增高,Bcl-2基因表达水平逐渐降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论五味子多糖能显著抑制人脑胶质瘤U251细胞生长,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,其促进凋亡作用机制可能与上调Bax、Caspase-3基因表达水平,下调Bcl-2基因表达水平相关。     

17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人脑胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响.方法:将U251细胞分为空白对照组,5-氟尿嘧啶组( 80μmol·L-1),HJB组(6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μmol· L-).用不同浓度的药物作用24h及药物半数抑制浓度(IC50)浓度作用不同时间(12,24,48,72 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的相对活性.结果:与空白对照组相比,HJB对U251细胞的增殖有显著抑制作用,并呈浓度依赖及时间依赖性(P＜0.05),作用24 h后IC50为62.236 11μmol·L-1.HJB可诱导U251细胞凋亡,浓度30,60,120μmol· L-1分别处理细胞24 h后,早期凋亡率明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase-9的相对活性均升高(P＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论:HJB明显抑制体外U251细胞生长并诱导其凋亡,线粒体途径可能是诱导其凋亡的机制之一.     

广西虎纹捕鸟蛛毒诱导U251胶质瘤细胞凋亡 及Caspase-3的激活

目的:探讨虎纹捕鸟蛛毒抑制体外脑胶质瘤细胞系U251生长并诱导其凋亡,激活半胱天冬酶-3(Caspase-3)的作用。方法:将U251细胞分为3组:空白组、顺铂组、加药组(虎纹捕鸟蛛毒素浓度为37.5,50,75,100,150 mg·L-1),毒素作用24,48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性并与顺铂组、空白组做对比;流式细胞仪AnnexinV-FITC检测细胞凋亡率;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3的相对活性。结果:虎纹捕鸟蛛毒素剂量为37.5,50,75,100,150 mg·L-1时,对U251细胞的增殖有显著性抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC50为53.48 mg·L-1。虎纹捕鸟蛛毒素可诱导U251胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。在剂量为150 mg·L-1诱导48 h,细胞早期凋亡率84.1%,晚期凋亡率4.48%。用不同浓度分别处理细胞,Caspase-3活性于48 h,150 mg·L-1时达高峰,对细胞中的执行分子Caspase-3的激活速度快,活化程度为9.23,并存在剂量依赖关系和浓度依赖性的升高。结论:虎纹捕鸟蛛毒素明显抑制U251细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有Caspase-3的激活。     

毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的探讨毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(CG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。方法体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同质量浓度的CG分别处理24、48 h,采用MTT法测定CG对HeLa细胞增殖的影响:Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blotting法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、Bcl-2/Bax蛋白表达情况。结果 CG(2.5~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;质量浓度为20、40、80μg/mL的CG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为10.40%、25.50%、39.40%,明显高于对照组(1.80%);实验组HeLa细胞Caspase-3的活性形式cleaved Caspase表达量显著增加;促凋亡蛋白Bax表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,呈剂量依赖性。结论 CG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Caspase-3活性、下调Bcl-2蛋白的表达及上调Bax蛋白有关。     

大萼香茶菜甲素对多发性骨髓瘤细胞株U266体外作用的研究

目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖、凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:以不同质量浓度的(2、4、8μg/mL)MA体外作用于U266细胞,运用细胞计数、PI染色、MTT比色法体外观察MA对U266细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Annexin V/PI双染色和DNA亚二倍体检测方法研究MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western免疫印迹法检测β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i、NF-κB、IκB-α蛋白表达。结果:MA抑制细胞增殖;MA可促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体;AnnexinV+/P I-表达升高;亚G1峰显著增加;在Western免疫印迹中β2、β1i、β5i、NF-κB随着药物作用浓度的增高表达逐渐降低,而IκB为增高趋势,β1、β2、β2i无明显变化。结论:MA在体外对U266细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞调亡。     

藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响

目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化。结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P<0.01)。结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关。     

芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.方法 制备芪参清肝汤,体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为药物干预组及对照组,药物干预组分别加入0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/ml芪参清肝汤处理12h、24 h、48 h,对照组不加药.采用四甲基偶氮唑兰（MTT）比色法检测2组细胞抑制率,采用流式细胞术检测2组细胞凋亡率.结果 0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/m1芪参清肝汤对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用12h的OD值分别为0.89±0.05、0.85±0.05、0.80±0.06、0.78±0.02、0.69±0.07; 24 h的OD值分别为0.77±0.07、0.74±0.07、0.59±0.07、0.50±0.09、0.39±0.08; 48 h的OD值分别为0.78±0.05、0.61±0.08、0.44±0.10、0.39±0.08、0.34±0.07,并呈剂量、时间依赖性,与对照组（1.14±0.06、1.24±0.03、1.31±0.06）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）; 0.27、0.54 g/ml芪参清肝汤能明显诱导SMMC-7721细胞凋亡（11.19±2.23、15.69±2.51）,与对照组（1.41±0.22）比较有统计学意义（P＜0.05）,1.08 g/ml芪参清肝汤诱导肝癌细胞凋亡（41.83±7.11）,与对照组（1.41±0.22）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 芪参清肝汤能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,可能通过诱导肝癌细胞凋亡发挥其作用.     

糙叶败酱提取物的体外抗肿瘤活性比较

目的：比较糙叶败酱提取物糙叶败酱粗多糖、糙叶败酱总木脂素、糙叶败酱总皂苷的体外抗肿瘤活性,初步筛选糙叶败酱抗癌作用有效成分。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色法（monotetrazolium test,MTT）测定不同浓度糙叶败酱粗多糖、糙叶败酱总木脂素、糙叶败酱总皂苷分别对人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2、和人慢性髓系白血病细胞K562生长的影响。结果：糙叶败酱总木脂素、总皂苷对体外培养的肿瘤细胞SPCA-1、HepG2、K562均有抑制作用,且抑制作用与药物浓度及作用时间有相关性;糙叶败酱总木脂素对K562细胞生长的抑制作用尤为显著,400μg/ml,作用96h,IC50为21.16μg/ml;糙叶败酱粗多糖对SPCA-1细胞的增殖有抑制作用。结论：糙叶败酱不同成分有不同的抗肿瘤作用,糙叶败酱总木脂素对人慢性髓系白血病细胞生长有明显的抑制作用。     

小檗碱对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗碱对胃癌细胞系SGC7901的抑制作用及相关机制。方法:采用MTT的方法观察不同浓度小檗碱对SGC7901细胞的24h和48h抑制率,并计算24h和48h的50%抑制浓度(IC50)值;采用流式细胞技术检测不同浓度小檗碱作用48h后胃癌细胞系SGC7901凋亡的发生率和细胞周期的变化。结果:小檗碱对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用呈现出时间和剂量依赖性。24h和48h IC50分别为74.16、36.84μmol/L。1μmol/L至120μmol/L浓度梯度的小檗碱干预48h后,SGC7901凋亡率发生率逐渐增加。其中5、10、25、50、75、120μmol/L与对照组比较有统计学差异(P0.05),120μmol/L时凋亡发生率达到35.43%;5、25、75μmol/L浓度的小檗碱作用后,SGC7901胃癌细胞G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P0.05),而S期细胞比例则随浓度增加呈现出下降趋势,其中25、75μmol/L浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),对G2/M期细胞,各组比例变化无明显差别。结论:小檗碱对胃癌细胞系SGC7901具有时间和浓度依赖性的抑制作用,抑制作用与阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制DNA合成和诱导凋亡有关。     

槲皮素对人骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究槲皮素(quercetin,Qu)对骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300增殖和凋亡的作用及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖活性;Annexin V/PI染色检测凋亡;线粒体膜电位及细胞色素C的Western blot检测线粒体凋亡途径;持续活化Akt瞬时转染、Western blot检测Akt通路相关蛋白表达水平变化。结果:槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300生长,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI可明显检测到细胞凋亡;进一步发现其作用机制是通过下调线粒体膜电位,促进细胞色素C向胞浆释放及抑制Akt磷酸化来实现。结论:槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与线粒体凋亡途径及抑制Akt活性有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对Hela细胞的诱导凋亡作用及靶点蛋白质研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对Hela细胞的诱导凋亡作用,寻找其可能的靶点蛋白质。方法:用50、1002、00、400μg/mL梯度浓度的EGCG孵育Hela细胞24h和48h,荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡形态,用MTT检测其生长抑制率,用Annexin V-FITC/PI染色观察其凋亡率,鬼笔环肽染色观察其肌动蛋白聚合体(F-actin)降解程度。然后利用偶联EGCG的微球与Hela细胞裂解液孵育,结合靶点蛋白,靶点蛋白经考马斯蓝染色后,切下目标条带进行质谱鉴定。结果:EGCG能诱导Hela细胞凋亡和F-actin的破坏,并呈时间和剂量依赖性。EGCG结合的靶带蛋白为actin类蛋白。结论:直接结合于actin类蛋白并破坏细胞骨架可能是EGCG诱导Hela凋亡的途径之一。     

重楼皂苷I对高转移人卵巢癌细胞体外生长抑制功能的研究

目的:研究重楼提取的活性成分重楼皂苷I对高转移人卵巢癌细胞的体外生长抑制及促凋亡功能,并初步探讨其可能的作用机制。方法:用CCK8法检测不同浓度重楼皂苷I在不同时间点对高转移人卵巢癌细胞(HO-8910PM)体外增殖的影响;光镜下观察细胞形态的变化;用流式细胞术(FCM)检测经不同浓度重楼皂苷I处理后高转移人卵巢癌细胞的细胞周期变化;用AnnexinV/PI双染法、Hoechst33258检测不同浓度重楼皂苷I诱导细胞凋亡的发生。结果:重楼皂苷I在0.5～5μg/mL浓度范围对HO-8910PM细胞的增殖均有明显抑制作用,并呈现明显的剂量-时间依赖性。其半数抑制浓度在24h到120h范围内基本集中在1～3.5μg/mL之间;重楼皂苷I主要影响HO-8910PM细胞的DNA合成前期(G0/G1);重楼皂苷I浓度控制在2μg/mL以内,早期即3h开始就能诱导HO-8910PM细胞的凋亡,作用时间越长,凋亡发生率越高。结论:重楼皂苷I能抑制卵巢癌细胞的增殖并诱导其凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。