基于内质网应激探讨毛蕊异黄酮对慢性肾衰竭大鼠的影响

目的:探讨毛蕊异黄酮治疗慢性肾衰竭(CRF)大鼠的作用及其机制.方法:SPF级健康SD大鼠共48只,随机抽取8只为假手术组,其余40只为造模组,造模大鼠采用5/6肾切除建立大鼠CRF模型,造模成功后将造模大鼠随机分为模型组、开同组、毛蕊异黄酮低、中、高剂量组,开同组按1 g/kg灌胃,毛蕊异黄酮低、中、高剂量组分别按6...     

氢气对PC12细胞缺氧复氧时内质网应激的影响

目的 探讨氧气对PC1 2细胞缺氧复氧时内质网应激的影响.方法 PC12细胞采用随机数字表法,将其随机分为4组,正常对照组:细胞常规培养25 h;阳性对照组:细胞正常培养1h后,用氧气饱和的RPM1-1640培养基继续培养24 h;缺氧复氧组:细胞缺氧1h后复氧24 h;氢气组:细胞缺氧1 h后,州氧气饱和的RPM1,1640培氧基复氧24 h.PC12细胞加入含Na2S2O4终浓度为5.0mmol/L的RPMI-1640培养液,5％ CO2培养箱37 ℃孵育1h;更换正常RPMI-1640培养液,继续培养24h,制备PC12细胞缺氧复氧模型.采用WST-1法测定细胞相对增殖率,采用硫代巴比妥酸法测定MDA浓度,采用免疫组化法检测caspase-3表达,采用RT-PCR法检测活化转录因子4(ATF4)mRNA和C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA的表达.结果 与正常对照组和阳性对照组比较,缺氧复氧组细胞相对增殖率降低,MDA浓度升高,caspase-3、ATF4 mRNA和CHOP mRNA的表达七调,氧气组ATF4 mRNA和CHOP mRNA的表达上调(P＜0.05);正常对照组和阳性对照组间细胞相对增殖率、MDA浓度、caspase-3 、ATF4nRNA和CHOP mRNA的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05);与缺氧复氧组比较,氢气组细胞相对增殖率升高,MDA浓度降低,caspase-3、ATF4 mRNA和CHOP mRNA的表达下调(P＜0.05).结论 氧气可能通过抑制内质网应激,降低细胞凋亡,减轻PC12细胞缺氧复氧损伤.     

丙泊酚对胃癌细胞凋亡时GRP78-ATF4-CHOP信号通路的影响

目的:评价丙泊酚对胃癌细胞凋亡时葡萄糖调节蛋白78(GRP78)-活化转录因子4(ATF4)-C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法:传代培养至对数期的MGC-803细胞,采用随机数字表法分为2组( n＝15)：对照组(C组)和丙泊酚组(P组)。C组细胞在37 ℃、5%CO 2条件下...     

内质网应激与肾脏疾病

随着经济的发展和生活方式的改变，慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）成为威胁健康的主要疾病之一，其机制的研究越来越受到广泛关注。研究发现内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）与肾脏疾病关系密切，本文就内质网应激与肾脏疾病的研究进展作一综述。     

内质网应激与肾脏疾病

随着经济的发展和生活方式的改变,慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)成为威胁健康的主要疾病之一,其机制的研究越来越受到广泛关注.研究发现内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与肾脏疾病关系密切,本文就内质网应激与肾脏疾病的研究进展作一综述.     

大鼠急性脊髓损伤后内质网应激相关蛋白CHOP的表达及其意义

目的:探讨内质网应激相关蛋白CHOP在急性脊髓损伤中的表达及其意义.方法:48只健康SD大鼠随机分为实验组与对照组(每组24只),实验组采用Allen法制作急性脊髓损伤模型,对照组只切开椎板不损伤脊髓.分别十伤后3h、1d、3d、7d时(每个时间点6只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;然后处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学变化和CHOP在脊髓组织中的分布特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况.其量的评定借助于IPP(Image-Pro Plus 6.0)软件,结果分别用累积光密度(integrated optical density,IOD)及平均光密度(mean density)表示.结果:对照组大鼠均末见明显瘫痪,实验组出现不同程度的下肢功能障碍,对照组各时间点的Tadov评分均高于实验组(P<0.01).对照组各时间点未见明显坏死细胞和细胞凋亡,实验组出现不同程度的细胞坏死和凋亡.实验组CHOP表达各时间点均明显高于对照组(P<0.01),实验组内CHOP表达1d增加,3d达到高峰,7d减少.实验组内细胞凋亡1d时增加,3d达到高峰,7d减少,且3h<1d<3d>7d(P<0.01).CHOP表达与细胞凋亡在时间上具有一致性,相关系数为0.644.结论:急性脊髓损伤能够诱导CHOP表达,CHOP表达的增高可能与内质网应激诱导的神经细胞凋亡有关.     

内质网应激与肾脏疾病

随着经济的发展和生活方式的改变,慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)成为威胁健康的主要疾病之一,其机制的研究越来越受到广泛关注.研究发现内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与肾脏疾病关系密切,本文就内质网应激与肾脏疾病的研究进展作一综述.     

鸡尾酒神经保护剂降低急性脊髓损伤大鼠的内质网应激水平并促进运动功能恢复

[目的]观察鸡尾酒神经保护剂N6对SD大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达量的影响以及运动功能恢复情况,探讨鸡尾酒制剂对损伤脊髓的保护作用机制。[方法]60只雌性SD大鼠被随机分为5组(n=12),假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、甲强龙30 mg/kg腹腔给药组(MP-a组)、甲强龙20μl蛛网膜下腔给药组(MP-b)和鸡尾酒神经保护剂20μl蛛网膜下腔给药组(Cocktail组)。采用NYU打击器建立大鼠急性脊髓损伤模型,给药组造模成功后10 min即给予相应药物治疗。各组大鼠于治疗后72 h,提取损伤段脊髓蛋白,用Western-blot方法检测GRP78和CHOP相对表达量,灌注后取损伤段脊髓做CHOP免疫荧光染色。各组剩余大鼠每7d进行后肢运动功能BBB评分,28 d时取损伤段脊髓,Luxol Fast Blue染色后观察髓鞘再生情况。[结果]与SCI组、MP-a和MP-b组相比,Cocktail组GRP78表达水平明显升高(P0.05)、CHOP表达水平明显降低(P0.05),BBB评分在第14、21、28 d有明显升高(P0.05),髓鞘存留面积较大。[结论]采用鸡尾酒神经保护剂N6蛛网膜下腔给药的方法治疗大鼠急性损伤,可有效降低脊髓组织CHOP表达量,抑制内质网应激水平,促进髓鞘再生和运动功能恢复。     

内质网应激介导的细胞凋亡与急性肺损伤的研究进展

内质网应激(ERS)介导的细胞凋亡是继死亡受体活化、线粒体损伤途径后新发现的一条重要的细胞凋亡途径,参与多种疾病的发病机制.越来越多的研究表明内质网应激介导的细胞凋亡参与急性肺损伤的发病过程.     

姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响

目的 探讨姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响.方法 雄性SD大鼠144只,体重200～250 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=36):假手术组(S组)仅分离双侧颈总动脉;缺血再灌注组(I/R组)采用四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型;姜黄素组(Cur组)于缺血前1 h腹腔注射姜黄素200 mg/kg;溶媒对照组(VC组)给予等容量姜黄素溶媒--0.5%羧甲基纤维素钠.于再灌注12 h、1、3.7 d时取9只大鼠,取脑,分离海马,采用TUNEL法标记凋亡神经元,计算凋亡指数;采用Western blot法检测海马神经元葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停止和DNA损伤诱导基因153(GADDl53)和半胱氨酸天冬氨酸酶-12(caspase-12)的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和VC组凋亡指数升高,GRP78和caspase-12表达上调(P<0.05);与I/R组比较,Cur组凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P<0.05).I/R组、VC组和Cur组间GADD153表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素预先给药可通过抑制内质网应激途径介导的细胞凋亡减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与海马GRP78表达上调和caspase-12表达下调有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of curcumin pretreatment on endoplasmic reticulum stress induced by global cerebral ischemia-reperfusion (I/R) in rats. Methods One hundred forty-four male SD rats weighing 200-250 g were randomly divided into 4 groups (n = 36 each): sham operation group (group S) ; I/Rgroup; curcumin group (group Cur) and vehicle control group (group VC). Global cerebral I/R was produced by four-vessel occlusion technique in S, I/R, Cur, VC groups. Bilateral vertebral arteries were cauterized. Bilateral common carotid arteries were occluded by clipping for 15 min. Curcumin 200 mg/kg was injected intraperitoneally (IP) at 1 h before cerebral ischemia. Global cerebral ischemia was confirmed by unconsciousness and disappearance of papillary and righting reflex. Animals were sacrificed at 12 h, 1,3 and 7 d of reperfusion. Neuronal apoptosis in hippocampal CA1 region was detected by TUNEL assay. Apoptosis index (AI) was calculated. The expression of glucose regulated protein 78 (GRP78) ,growth arrest and DNA damage inducible gene 153 (GADD153) and caspase-12 protein in hippocampal region was assessed by Western blot analysis. Results Cerebral I/R significantly increased AI and GRP78 and caspase-12 protein expression in hippocampus as compared with group S( P <0.05) . Curcumin pretreatment significantly decreased AI, increased GRP78 protein expression and decreased caspase-12 protein expression as compared with group I/R ( P < 0.05) . There was no significant difference in the GADD153 protein expression among Cur, VC and I/R groups ( P > 0.05) . Conclusion Curcumin pretreatment can significantly reduce global cerebral I/R-induced neuronal apoptosis in hippocampus by increasing GRP78 expression and decreasing easpase-12 expression in hippocampus.     

内质网应激反应在严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导的凋亡是真核细胞重要凋亡途径之一,通过观察严重烧伤大鼠心肌ERS不同通路蛋白表达变化,探讨其在心肌细胞凋亡中的可能作用。方法雄性7周龄Wistar大鼠64只,体重200～220 g;随机分为两组,每组32只。实验组大鼠背部制备30%体表面积Ⅲ度烫伤;对照组制备假伤模型。伤后1、4、7、14 d两组各处死8只大鼠取心肌组织,透射电镜观察心肌超微结构变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测ERS相关蛋白,如葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP 78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase 12)剪切体表达变化。结果大鼠均存活至实验结束。透射电镜观察示实验组大鼠心肌细胞呈凋亡改变。伤后各时间点实验组心肌细胞凋亡指数均明显高于对照组(P<0.05),伤后1、4、7 d凋亡指数逐渐升高,14 d时下降,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组心肌细胞GRP78、CHOP及Caspase 12剪切体蛋白表达持续升高,其中各时间点GRP 78及Caspase 12剪切体表达均较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);除伤后1 d外,其余各时间点实验组CHOP蛋白表达均较对照组升高(P<0.05)。结论严重烧伤后大鼠心肌发生ERS,其中CHOP、Caspase 12介导的凋亡通路活化,ERS可能是心肌细胞凋亡的途径之一。     

CBX7在肾脏缺血再灌注损伤中对内质网应激的作用

目的:探讨CBX7抑制剂(UNC3866)对肾脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及其机制。方法:使用随机数字列表法将成年雄性小鼠分为六组：假手术组、缺血组(IR组)、缺血+二甲基亚砜(DMSO)组、缺血+2.5 mg/kg UNC3866组、缺血+5 mg/kg UNC386组、缺血+10 mg/kg UNC3866组...     

异丙酚预先给药对大鼠脑缺血再灌注时内质网应激性细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时内质网应激性细胞凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠80只,体重240～280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=20):假手术组(S组);局灶性脑缺血再灌注组(FCIR组)采用阻塞大脑中动脉4h恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;异丙酚预先给药组(P组)于缺血前30 min股静脉泵注异丙酚12mg·kg-1·h-1至缺血15min;脂肪乳预先给药组(Ⅰ组)给予脂肪乳1.2 ml·kg-1·h-1.于再灌注6h时各组随机取10只大鼠采用Longa评分法行神经功能缺陷评分(NDS),处死取左侧大脑,用干湿重法测定脑含水量,余10只大鼠处死后取左侧海马,采用Western blot法检测C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、Bcl-2和活化型caspase-3蛋白的表达水平.结果 与S组比较,FCIR组再灌注6h时NDS评分和脑含水量升高,CHOP和活化型caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,P组NDS评分升高(P＜0.05);与FCIR组比较,P组再灌注6h时NDS评分和脑含水量降低,CHOP和活化型caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P＜0.05),Ⅰ组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可通过抑制内质网应激介导的细胞凋亡减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

Endoplasmic reticulum stress in the kidney

Endoplasmic reticulum (ER) stress is involved in a wide range of pathological circumstances including neurodegenerative disorders, diabetes mellitus, ischemic injury, cancers, atherosclerosis, inflammation, infection, toxicity of chemicals and metals, and psychotic diseases. ER stress is also involved in some physiological events including development of particular cell types. A number of pathophysiological triggers cause accumulation of unfolded proteins in the ER, i.e., ER stress. In response to accumulation of unfolded/misfolded proteins, cells adapt themselves to the stress conditions via a coordinated adaptive program, the unfolded protein response (UPR). UPR is a double-edged sword. It induces both prosurvival and proapoptotic signaling. It also triggers both proinflammatory and anti-inflammatory signals. In this review, I summarize current knowledge on putative, pathophysiological roles of ER stress in the kidney.     

内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用

目的研究内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用。方法在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养小鼠神经瘤母细胞N2a,按照接种密度每毫升105个将细胞接种于培养板中。采用随机数字分组法将细胞分为四组:正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧-复氧组(NH组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧-复氧组(HH组)。待细胞贴壁后,将DMEM/F12培养基更换为高糖培养基,孵育48h,造高糖孵育模型。在缺氧小室中缺氧3h后,再转入正常氧孵育箱中复氧2h,造缺氧-复氧损伤模型。NC组未作处理;NH组行缺氧-复氧处理;HC组行高糖孵育处理;HH组先行高糖孵育48h后,再作缺氧-复氧处理。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞GRP78、CHOP蛋白含量。结果与NC组和HC组比较,NH组和HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P0.01);与NH组比较,HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P0.05)。结论高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤,可能与内质网应激标志性蛋白GRP78蛋白含量增多和促凋亡转录因子CHOP介导的细胞凋亡相关。     

衣霉素诱导内质网应激对树突状细胞成熟分化的影响

目的:内质网应激(ERS)是真核细胞中普遍存在的适应性应激反应,本研究应用ERS特异性诱导剂衣霉素(TM)体外刺激小鼠脾脏树突状细胞(DC),观察DC功能状态的改变情况.方法:分离正常BALB/c小鼠脾脏DC进行体外培养,给予ERS特异性诱导剂TM刺激,观察不同剂量、不同作用时间TM刺激与DC表面共刺激分子表达及分泌功...     

内质网应激在高糖诱导人肾脏系膜细胞表型转化中的作用

目的 探讨内质网应激在高糖诱导人肾脏系膜细胞表型转化的作用。 方法 将体外培养的人肾脏系膜细胞分为对照组、高糖组（HG组）、高糖+4-苯基丁酸（4-PBA）干预组（4-PBA组）。MTT法测定细胞增殖率,流式细胞术观察细胞周期变化,免疫组织化学染色激光共聚焦显微镜观察细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA)表达情况,实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测mRNA和蛋白表达。 结果（1）高糖组系膜细胞增殖率和进入S期比例显著高于对照组（P < 0.05）,同时,高糖能刺激α-SMA表达增加（P < 0.05）;4-PBA干预可明显抑制高糖刺激的系膜细胞增殖和进入S期及α-SMA表达。（2）相对于对照组,高糖能刺激系膜细胞葡萄糖调节蛋白78（Grp78） mRNA和蛋白表达增加（P < 0.05）;4-PBA干预可显著下调这种效应（P < 0.05）。（3）高糖可诱导系膜细胞转化生长因子（TGF-β1）、纤连蛋白（FN） mRNA和蛋白表达（P < 0.05）;4-PBA干预则明显下调其表达（P < 0.05）。 结论 内质网应激在高糖诱导人肾脏系膜细胞表型转化效应中发挥了重要作用。