芳香化酶抑制剂在妇科内分泌治疗中的应用

绝经前妇女的雌激素主要由卵巢分泌。芳香化酶是含有细胞色素P450的酶复合物家族成员之一，作用于雌激素生成的限速步骤，即催化雄烯二酮或睾酮向雌激素的转化。这一过程受垂体分泌的卵泡刺激素（FSH）和黄体生成激素（LH）的控制。人类许多组织能够表达芳香化酶，如卵巢颗粒细胞、胎盘合体滋养细胞、乳腺、肌肉、脂肪组织、皮肤成纤维细胞和脑。颗粒细胞和其他组织的芳香化酶采用不同的转录启动子。芳香化酶作用于雌激素生物合成过程的终末步骤，是选择性抑制雌激素生成的良好靶点。由于作用环节的特殊性，芳香化酶抑制剂（aromatase inhibitor，AI）在一些雌激素依赖性疾病中具有潜在的应用价值。目前，AI主要用于激素受体阳性的绝经后乳腺癌患者的治疗。     

补肾促排卵汤对PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶的影响

目的 通过观察补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶的影响,探讨其对PCOS卵巢局部的影响及作用机制。方法 应用补肾促排卵汤作用于以脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,采用RT-PCR法及免疫组化,检测PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶mRNA及蛋白的表达。结果 补肾促排卵汤能显著提高PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶mRNA及蛋白表达（P<0.05）。结论 补肾促排卵汤能提高PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶的表达,可能是补肾促排卵汤促进卵泡发育及排出的作用机制之一。      

核受体激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶的调节作用

目的：探讨各种核受体包括过氧化酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和α(PPARα)、维甲酸受体(RAR)、维甲类X受体(RXR)、维生素D受体(VDR)、甲状腺素受体(TR)和糖皮质激素受体(GR)的激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性的调节作用。方法：测定人卵巢颗粒细胞和MCF—7细胞在上述各种核受体激动剂处理前后芳香化酶活性的变化和细胞色素P450芳香化酶(P450arom)mRNA的表达水平。结果：(1)PPARγ和RXR激动剂均能显著抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性，两者结合使用抑制作用更进一步增强，并且伴有P450arom mRNA水平下降；(2)RAR和RXR激动剂合用能显著刺激乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性，并使P450arom mRNA表达水平升高。结论：人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性受不同的核受体激动剂调节。     

类固醇激素在卵泡生长发育过程中的作用

激素和卵巢内局部因子控制卵泡发育。在生殖器官生长、分化以及维持生育能力的过程中,性激素发挥着重要作用。胆固醇、孕激素、雄激素、雌激素在卵巢中进行有序合成。卵泡膜细胞和颗粒细胞的共同作用对于雌激素的产生至关重要。卵泡膜细胞在黄体生成激素（LH）作用下将胆固醇转变成孕烯醇酮，并通过一系列代谢作用产生雄激素，并转运到颗粒细胞中，通过芳香化酶作用生成雌激素。     

CYP19基因与子宫内膜癌关系的研究进展

细胞色素P450(CYP)是微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族,在生物体内分布广泛。CYP19基因编码芳香化酶(P450 arom),后者是雌激素合成的最后一步限速酶,分布于人体的多种组织中,如胎盘、卵巢颗粒细胞、黄体细胞、脂肪组织、睾丸和肾上腺组织中。芳香化酶在雌激素依赖性疾病子宫内膜癌(EC)、乳腺癌、子宫内膜异位症(EMs)和子宫平滑     

细胞色素P450芳香化酶与多囊卵巢综合征

目的:探讨细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,P450 arom)与多囊卵巢综合征(PCOS)相关性的研究新进展.方法:阅读国内外有关文献并进行综述.结果与结论:细胞色素P450芳香化酶是体内催化雄激素转化为雌激素的限速酶,与PCOS高雄激素血症有关.     

双酚A干扰人卵巢颗粒细胞雌二醇生成的机制

目的:研究双酚A(BPA)对人卵巢颗粒细胞细胞色素P450芳香化酶(P450arom)和雌二醇(E2)表达的影响机制。方法:提取人卵巢颗粒细胞进行体外培养,细胞鉴定采用免疫细胞化学法,CCK-8增殖实验分析细胞体外增殖活力。予以不同浓度BPA(0,0.1,1,10,100mg/L)或BPA+PPAR-γ抑制剂GW9662 1μmol/L处理处理人卵巢颗粒细胞,ELISA法测定各组E2浓度,获取细胞沉淀,RT-PCR法测定P450arom mRNA表达。结果:人卵巢颗粒细胞体外培养第3-5天达增殖分裂高峰,FSHR免疫细胞化学鉴定显示阳性染色定位于细胞膜和细胞质,细胞纯度达95%以上,ELISA及RT-PCR结果显示当BPA浓度为0.1mg/L时,P450arom mRNA及E2生成较空白对照组增加(P<0.05),当BPA浓度为1,10,100mg/L时,P450arom mRNA及E2生成逐渐减少(P<0.05),加入GW9662后,P450arom mRNA及E2表达量较单独BPA处理组增高(P<0.05)。结论:BPA干扰人卵巢颗粒细胞E2的生成,该干扰可能通过PPAR-γ核受体途径进行。     

体外受精-胚胎移植67例不孕症患者卵巢颗粒细胞凋亡率与妊娠结局的关系

目的：探讨卵巢颗粒细胞凋亡率与妊娠结局的关系。方法：选择67例适合进行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）手术的不孕症患者，收集卵泡液中的颗粒细胞，通过流式细胞仪检测卵泡液中卵巢颗粒细胞凋亡率，分析其与妊娠结局的关系。结果：IVF—ET患者临床妊娠组颗粒细胞凋亡率明显低于非临床妊娠组（P〈0．01）。结论：卵巢颗粒细胞凋亡率可能可以预测IVF—ET妊娠结局。     

子宫内膜异位症患者内膜中芳香化酶P450的表达及组织和血清中雌激素的测定

目的 检测子宫内膜异位症患者血清和内膜雌激素与细胞色素芳香化酶P450的表达。探讨它们在发病中的作用,为临床诊断治疗提供新思路。方法分别用免疫组化和发光免疫分析法,测定内异症患者外周血和内膜中雌激素的含量和内膜细胞色素芳香化酶P450的表达。结果芳香化酶P450在内异症患者在位、异位内膜组织中强表达,而正常内膜无表达,两者差异有显著性（P〈0．001）;内异症患者的在位、异位的内膜组织中雌激素含量均高于正常内膜,两者差异有显著性（P〈0．05）。内异症患者内膜组织中雌激素含量与内膜组织中芳香化酶P450的表达有相关性（r=0．582）,而与血清中雌激素含量无相关性（r=0．19）。结论内异症患者在位、异住内膜组织中芳香化酶P450异常表达,使局部组织中的雌激素浓度增高,促使内异症的发生发展。通过抑制芳香化酶P450的活性及局部组织中雌激素效应有可能会成为内异症治疗的方向。     

AMH对体外培养人卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响

目的探讨苗勒氏管抑制因子（AMH）对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响。方法体外受精-胚胎移植（IVF—ET）患者经阴道超声引导下采卵,加入基因重组人苗勒氏管抑制因子（rhAMH）作用于颗粒细胞,测定培养液雌二醇（E2）、孕酮（P）水平。结果在无促卵泡生成激素（FSH）作用下,rhAMH对颗粒细胞分泌E2、P无明显影响（P〉0．05）,加入FSH后rhAMH明显抑制颗粒细胞E2分泌（P〈0．01）。FSH对颗粒细胞分泌AMH无明显影响（P〉0．05）。结论卵巢颗粒细胞自身分泌AMH且不受FSH的影响,AMH抑制FSH促进卵巢颗粒细胞分泌雌激素的作用,减少卵巢始基卵泡的耗竭,进而增加卵巢的储备能力。     

PCOS大鼠卵巢中 kisspeptin／kiss1r 系统的表达变化及对卵泡发育的影响

目的：对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠卵巢中kisspeptin／kiss1r系统的表达变化及对卵泡发育的影响进行研究。方法采用腹腔注射来曲唑构建PCOS大鼠模型,酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清中性激素水平,苏木精‐伊红（H‐E）染色检测卵巢的形态学改变,免疫组化检测卵巢中kisspeptin／kiss1r、卵泡刺激素受体（FSHR）的蛋白水平变化。结果从灌胃后第10天开始,PCOS组大鼠体重明显增加,血清中睾酮（T）、黄体生成素（LH）的水平明显升高,卵泡刺激素（FSH）水平无明显改变;大鼠卵巢皮质中含有较多的小卵泡及闭锁卵泡,多数卵泡成囊性扩张,颗粒细胞层数明显减少;卵巢中kisspeptin／kiss1r、FSHR均在细胞质表达,kisspeptin／kiss1r主要在颗粒细胞、膜细胞和黄体中表达,而FSHR仅表达在颗粒细胞。PCOS组卵巢中kisspeptin／kiss1r、FSHR表达明显减少。结论在PCOS卵泡发育中,卵巢表达的kisspeptin／kiss1r系统发挥重要的作用,为PCOS的临床治疗和基础研究提供新思路。     

巨噬细胞集落刺激因子在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及意义

目的建立非甾体类芳香化酶抑制剂（来曲唑）诱导雌性大鼠多囊卵巢综合征（PCOS）动物模型．观察巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）在PCOS大鼠卵巢中的表达,探讨其在PCOS发病机制中的作用。方法①选择6周龄SD清洁级雌性大鼠60只,随机分为实验组、实验对照组、空白对照组,每组各20只。应用来曲唑灌胃制备PCOS大鼠模型,观察三组大鼠动情周期的变化及双侧卵巢大体解剖及组织学改变。②放射免疫法测定血促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、睾酮（T）水平。③免疫组化法观察卵巢组织中M—CSF的表达。结果①PCOS组大鼠失去规律性动情周期变化,提示无排卵。②血清T、LH浓度高于对照组（P〈0．05）,血清P、E2浓度低于对照组（P〈0．05）。@实验组M—CSF在卵巢颗粒细胞和间质细胞的表达低于对照组（P〈0．05）。结论①来曲唑诱导的大鼠模型是理想的PCOS动物模型。②M—CSF参与了PCOS的发病机制。     

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450表达的影响

目的观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响。方法运用补肾化瘀方对PCOS模型大鼠进行干预后,采用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达。结果模型组与正常组比较,卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达在表达面积及表达强度上均低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);补肾化瘀方中、高、低剂量组及妈富隆组用药后,卵巢颗粒细胞的CYP450的蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);其中补肾化瘀方中剂量对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达效果最佳。结论补肾化瘀方能增强PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达,调节卵巢内分泌失调,改善PCOS高雄血症,逆转卵泡的发育异常,使排卵成功。     

P450arom蛋白在切口子宫内膜异位症的表达及意义

目的探讨细胞色素芳香化酶（cytochrome P450aromatase,P450arom）蛋白在不同组织中的表达与切口子宫内膜异位症发生的关系。方法采用免疫组化链酶素抗生物蛋白-过氧化物酶连接（streptavi-din-perosidase,SP）法检测并比较P450arom在切口子宫内膜异位病灶及其周围脂肪组织、剖宫产腹壁切口皮下脂肪组织及顺产会阴切口皮下脂肪组织的表达。结果 P450arom在切口子宫内膜异位病灶周围脂肪组织的表达明显高于剖宫产腹壁及会阴侧切皮下脂肪组织的表达（P〈0.05）,而剖宫产腹壁切口皮下脂肪组织高于会阴侧切（P〈0.05）,切口子宫内膜异位症P450arom的表达无明显卵巢周期性的差异（P〉0.05）。结论高P450arom表达与内膜异位病灶发生及生长有关,妊娠期腹壁脂肪层P450arom的表达高于会阴部组织,可能与剖宫产手术切口子宫内膜异位症的发生率高于会阴切口有关。     

不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响

目的 比较人卵巢颗粒细胞不同分离方法.方法 取体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化并原代培养人卵巢颗粒细胞.比较不同的分离方法获得的卵巢颗粒细胞数量、形态及其对早期培养的影响.结果 裂解法得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法多(P＜0.005,P＜0.001);比较3种分离方法获得的卵巢颗粒细胞的活性和孕激素分泌量差异无统计学意义;接种24h后,酶解法得到的卵巢颗粒细胞存活量最多(P＜0.05),裂解法得到的存活细胞最少(P＜0.05);裂解法获得的卵巢颗粒细胞继续培养48、72及96h均较培养24h有明显细胞增殖(P＜0.05),且与其他组存活的细胞量差异无统计学意义.结论 裂解法得到的颗粒细胞数量多,细胞生长较好,操作简单,是较理想的分离人卵巢颗粒细胞的方法.     

瘦素对多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞雌激素分泌的影响

目的 探讨不同浓度瘦素在促卵泡激素（FSH）的参与下对多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇（E2）的影响.方法 20例行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的不孕症患者,分成PCOS组和对照组各10例.采用卵泡刺激长方案促排卵,体外培养得黄素化颗粒细胞,然后在不同浓度瘦素（0 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml）、卵泡刺激素（FSH）（5 mIU/ml）及雄烯二酮（1 μmol/ml）联合作用下继续进行培养24 h,收集培养液,用放射免疫法测定颗粒细胞产生E2的浓度.结果 加入不同浓度瘦素（10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml）后PCOS组和对照组卵巢颗粒细胞E2的分泌均受到明显抑制;随瘦素浓度的增加E2水平逐渐降低（P＜0.05）.结论 瘦素能抑制PCOS卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌,其抑制作用随瘦素浓度的增加而增强.     

实验性糖尿病大鼠卵巢局部调节因子的改变

[摘要] 目的 探讨实验性大鼠卵巢组织局部调节因子血管紧张素Ⅱ及其受体、胰岛素样生长因子-1受体的分布与含量是否会发生改变,继而是否会影响实验性糖尿病大鼠的卵巢功能。方法 Wistar雌性大鼠30只,随机分成2组（正常对照组、实验性糖尿病组）。实验组大鼠经腹腔注射1%链尿佐菌素诱导形成糖尿病实验性动物模型,正常组腹腔注射等体积的柠檬酸钠缓冲液。实验组注射1%STZ溶液24小时后,内眦静脉取血,用血糖试剂盒（葡萄糖氧化酶法）测非空腹血糖;用尿糖试纸测尿糖,非空腹血糖＞16.65mmol/L和尿糖＞+++确定为糖尿病模型,实验期满后,取双侧卵巢检测相关指标。结果 免疫组化法显示,实验组大鼠卵巢黄体颗粒细胞AngⅡ及其受体、大卵泡颗粒细胞AngⅡ受体的分布均显著低于正常组（P﹤0.05）,实验组大鼠卵巢黄体颗粒细胞、大卵泡颗粒细胞IGF-1R分布均显著低于正常组（P﹤0.05）,实验组大鼠卵巢大卵泡颗粒细胞AngⅡ的分布与对照组差异无显著性（P﹥0.05）。结论 本研究结果表明糖尿病可以引起卵巢内局部调节因子AngⅡ、AT2、IGF-1R的分布和含量下降,可能会导致它们对卵巢功能的调节作用降低,从而影响卵泡的发育、成熟、排卵和受精等过程,上述因素可能是引起女性糖尿病患者不孕的众多原因之一。     

多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞中DR5、DcR2的表达变化

目的观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制。方法大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT-q PCR分析观察并比较DR5、DcR2在PCOS组和对照组大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果免疫组织化学结果显示,在PCOS组大鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞中,DR5的表达较对照组均显著增强(P0.05),在PCOS组大鼠卵巢窦前卵泡和窦状卵泡颗粒细胞中,DcR2的表达较对照组同级别卵泡显著增强(P0.05),在始基卵泡颗粒细胞的表达差异无显著性(P0.05)。RT-q PCR分析显示,DR5 mRNA和DcR2 mRNA在两组中都有表达,且二者在PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞中的表达较正常对照组均明显增强(P0.05)。结论DR5和DcR2在颗粒细胞中的异常表达可能对PCOS大鼠卵泡的异常发育起到了一定作用,它们可能是通过参与颗粒细胞凋亡过程而对卵泡的发育造成了一定影响。     

第三代芳香化酶抑制剂的促排卵作用的研究进展

第三代芳香化酶抑制剂具有高效性和高度特异的芳香化酶抑制作用。可显著降低雌激素浓度,从而使促性腺激素的分泌增加而促进卵泡的发育;在卵巢内部则可增强卵泡刺激素受体的表达。它可单独用于诱导排卵或与促性腺激素联合应用于控制性促超排卵。芳香化酶抑制剂服用方便,耐受性好,不良反应少,能有效促进卵泡的生长发育,在不孕症的治疗中具有较大的潜力。     

miR-204-5p对卵巢早衰大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的调控机制

【摘要】目的 探讨微小RNA（miR）-204-5p对卵巢早衰（POF）大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及调控机制。方法 体外分离大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,将含有miR-204-5p基因反义寡核苷酸序列的重组慢病毒载体转入BMSCs,获得稳定转染LV-rno-ASO-miR-204-5p的BMSCs细胞。选取动情周期正常的75只SPF级雌性Wistar大鼠,随机分为对照组、POF组、BMSCs组、shRNA组、shRNA-BMSCs组,每组各15只。除对照组外,均采用腹腔注射顺铂法制备POF模型。shRNA组、BMSCs组及shRNA-BMSCs组分别双侧卵巢注射慢病毒载体、BMSCs细胞及稳定转染慢病毒载体的BMSCs细胞,对照组和POF组注射生理盐水。观察各组动情周期恢复情况,比较各组干预前、干预28 d后血清促卵泡生成素（FSH）、雌二醇（E2）水平,观察卵巢组织形态、卵泡颗粒细胞凋亡率,检测卵巢组织miR-204-5p mRNA及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA和蛋白表达。结果 干预后,POF组大鼠动情周期未恢复;BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组动情周期均有所恢复,其中shRNA-BMSCs组动情周期恢复率均高于BMSCs组及shRNA组（P＜0.05）。病理染色显示,BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量均多于POF组,但仍少于对照组（P＜0.05）;shRNA-BMSCs组上述各级卵泡数量多于BMSCs组和shRNA组（P＜0.05）。BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组血清FSH水平、卵巢颗粒细胞凋亡率、卵巢组织中miR-204-5p mRNA及MAPK、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量均低于POF组,且shRNA-BMSCs组低于BMSCs组和shRNA组,但仍高于对照组（P＜0.05）;BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组血清E2水平及卵巢组织Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均高于POF组,且shRNA-BMSCs组高于BMSCs组和shRNA组,但仍低于对照组（P＜0.05）。shRNA组与BMSCs组比较,卵巢组织miR-204-5p mRNA相对表达量较低（P＜0.05）,各级卵泡数量、血清FSH、E2水平、卵巢颗粒细胞凋亡率及卵巢组织MAPK、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 下调miR-204-5p表达可增强BMSCs对POF大鼠卵巢结构和功能的改善作用,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,可能与下调MAPK、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因和蛋白表达有关。