二十二碳六烯酸联合顺铂对人食管癌耐药细胞周期及凋亡的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)与顺铂(DDP)联用对食管癌细胞Eca109/DDP增殖、周期和凋亡的影响。方法采用递增药物质量浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109/DDP。DHA联合DDP作用于Eca109/DDP细胞,MTT法检测Eca109/DDP细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果递增药物质量浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中正常生长,其对DDP的耐药指数为15.886,所得细胞命名为耐DDP的食管癌细胞Eca109/DDP。单用DHA浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109/DDP细胞无明显抑制作用(P0.05),但与DDP 1μg/ml合用能显著促进DDP抑制Eca109/DDP细胞的增殖(P0.05),并促进DDP诱导Eca109/DDP细胞周期改变、细胞凋亡增加。细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P0.05),S期细胞、G2期细胞明显减少(P0.05);细胞的凋亡率明显增加(P0.05)。结论 DHA促进DDP抑制Eca109/DDP细胞增殖可能与改变Eca109/DDP细胞周期、增加细胞凋亡有关。     

尼古丁对L-929细胞毒性作用

目的评价尼古丁对L-929细胞毒性及作用机制。方法采用(MTT)法检测尼古丁对L-929细胞增殖的影响,采用流式细胞术观察尼古丁对L-929细胞周期的影响。结果不同浓度尼古丁作用于L-929细胞24,48和72 h后,均能抑制L-929细胞生长。0.01,0.1μg/mL尼古丁作用24,48 h细胞毒性为1级,作用72 h细胞毒性则为2级。10 000μg/mL尼古丁作用24 h细胞毒性为3级,作用48,72 h细胞毒性则为4级。随着尼古丁浓度增加,G0G1期细胞比例逐渐增高,而S期和G2期细胞比例则呈下降趋势。结论尼古丁对体外培养L-929细胞具有明显细胞毒性,且阻遏细胞周期。     

脂多糖对人正常皮肤成纤维细胞增殖周期及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

目的观察大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激后,皮肤成纤维细胞增殖周期和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达变化规律。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度（0．005～1．0μg／m1）的大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5）,于LPS加入后第7天细胞处于对数生长期时,采用流式细胞术观察细胞增殖周期;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达。结果LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时,S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高,且呈浓度依赖性;当LPS浓度为0．5μg／ml时,上述作用开始降低,但仍高于空白对照;当浓度达到1．0μg／ml时,s期细胞比例均低于空白对照;LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时,促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,抑制胶原酶mRNA表达,且呈一定的剂量依赖性;当LPS刺激浓度为0．5μg／ml,上述作用下降;而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,促进胶原酶mRNA表达。结论在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,而过高浓度LPS则呈现抑制效应。     

原卟啉钠抑制丙型肝炎病毒的体外实验研究

目的：体外观察NAPP的细胞毒性作用及其对HCV亚基因复制子细胞模型RNA的抑制效果.方法：用MTT法筛选NAPP无细胞毒性浓度区间,分别取终浓度为5μg/ml、25μg/ml、125μg/ml、625μg/ml、3 125μg/ml的NAPP与含HCV复制子培养液中共同孵育,同时设空白对照组和IFN-α2b阳性对照组,8 d后用荧光定量PCR检测HCV复制子中RNA的含量.结果：无细胞毒药物浓度区间为（0～3 125）μg/ml,在125μg/ml～3 125μg/ml区间内对HCV复制子RNA有明显抑制作用（P＜0.05～P＜0.01）.结论：NAPP对靶细胞无细胞毒作用,且可有效抑制HCV复制子RNA.     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

碘对成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的研究不同浓度碘对成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法使用碘离子(终浓度为0～10000μg/L)染毒1×104个/ml的成纤维细胞悬液。于4、12、24、48h后测定细胞增殖活性;于24、48h后测定细胞周期及凋亡,计算细胞增殖指数和细胞凋亡率。结果染毒24h,碘离子浓度≤7000μg/L时具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度7000μg/L时可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。染毒48h,碘离子浓度≤3000μg/L具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度≥7000μg/L可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。结论碘对成纤维细胞的细胞增殖和凋亡具有双向效应。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

丹参酮ⅡA对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的探索丹参酮ⅡA对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,按照丹参酮ⅡA浓度的不同将实验分为5组,A组为空白对照组(0μg/m L),B组为溶剂对照组(0.25%DMSO),C组为低浓度组(1μg/mL),D组为中浓度组(5μg/mL),E组为高浓度组(25μg/mL)。通过处理不同时间(24 h、48 h、72 h)后,观察各组细胞的生长状态及形态学变化;采用CCK 8法检测各组细胞的体外增殖情况;采用Flow Cytometry法检测细胞的凋亡率和周期分布情况。结果随着丹参酮药物浓度和作用时间的增加,细胞数量逐渐减少、贴壁性变差、细胞碎片及漂浮细胞增多。Ishikawa细胞的增殖率逐渐下降,Ishikawa细胞的凋亡率和G 2/M期细胞百分比增加,呈时间浓度依赖性增加。结论丹参酮ⅡA可以抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,促进其凋亡,并可诱导其发生G 2/M期阻滞。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

黄芪多糖对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制作用的研究

[目的]研究黄芪多糖(APS)对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响。[方法]设不同浓度APS(12.5,25.0,50.0,100.0μg/ml)、二甲基亚砜2‰为空白对照组,顺铂2μg/ml为顺铂组。应用MTT法检测APS对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖抑制作用。[结果]与空白对照组比较,不同浓度的APS组在12、24、48、72h作用时吸光度均表现为上升的趋势,在48h时达到最大值,随后下降。不同浓度的APS组经不同的作用时间后,其吸光度与空白对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)。与顺铂组比较,12.5、25.0μg/mlAPS作用鼻咽癌CNE-2细胞12h时细胞的增殖没有明显的抑制作用(P﹥0.05),但作用24、48、72h时对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖有明显的抑制作用(P﹤0.05);50.0、100.0μg/mlAPS在不同的作用时间对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖均有明显的抑制作用(P﹤0.05)。[结论]APS可以明显地抑制鼻咽癌CEN-2细胞的生长,且存在剂量-时间的关系。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

壳聚糖对围绝经期大鼠卵巢SOD、MDA的影响

目的:探讨壳聚糖对围绝经期大鼠卵巢SOD、MDA的影响。方法:将30只11～12月龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照、补佳乐对照、壳聚糖组各10只,称重后灌胃,分别给予生理盐水3 ml/只、补佳乐1.2 mg/kg、壳聚糖1 500 mg/kg,每天1次,连续灌胃30天后处死大鼠,取卵巢组织。应用黄嘌呤氧化酶法测卵巢组织中SOD活力,硫代巴比妥酸法测卵巢组织中MDA的含量。结果:壳聚糖、补佳乐组SOD活力比空白对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),壳聚糖组与补佳乐组比较差异有统计学意义(P<0.05);壳聚糖、补佳乐组MDA含量比空白对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:壳聚糖能增加绝经期大鼠卵巢中SOD的活力、降低MDA的含量,从而发挥抗氧化、清除自由基的作用,可以用于改善和调节卵巢功能,延缓卵巢的衰老进程。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞增殖及p38表达的影响

目的:探讨不同浓度的17β-雌二醇(E2)对雌激素受体(ER)阴性的JEC细胞和ER阳性的Ishikawa子宫内膜腺癌细胞系细胞的增殖及细胞内p38蛋白表达的影响。方法:选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa进行体外培养,加入含不同浓度E2培养液,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)的方法,观察子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa细胞的增殖活性及P-p38的表达。结果:①MTT法观察细胞增殖:10-7、10-8和10-9 mol/L E2作用JEC细胞4、5天后OD值与对照组比较有差异(P<0.05),其中10-7 mol/L E2组在第5天OD值与对照组比较差异较显著(P<0.01);而不同浓度E2作用Ishikawa细胞均能促进增殖(P<0.05)。②共聚焦显微镜测定细胞内P-p38蛋白的表达:10-7 mol/L的E2作用JEC 4、5天后可使细胞内P-p38表达增加,平均荧光强度值与对照组相比有统计学意义(P<0.05);10-7 mol/L的E2作用Ishikawa 3、4天后P-p38表达增加,与不加E2对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞和Ishikawa细胞均可受到雌激素的调控,一定浓度的雌激素能促进ER阴性JEC细胞和ER阳性的Ishikawa细胞增殖,且均能使细胞内P-p38表达增加。     

壳聚糖对围绝经期大鼠E_2、P及子宫ERα的影响

目的:观察壳聚糖对围绝经期大鼠血清E2、P及ERα的影响。方法:将30只11～12月龄健康雌性Wista大鼠随机分为壳聚糖组、空白对照组和雌激素对照组各10只。壳聚糖组灌胃壳聚糖1 500 mg/kg,雌激素组灌胃补佳乐1.2 mg/kg,对照组灌胃3 ml双蒸水,每天灌胃一次,连续30天后处死大鼠。用酶联免疫吸附试验法测血清中E2和P的含量;免疫组织化学SABC法检测子宫ERα的表达情况。结果:壳聚糖组大鼠血清E2、P的含量及ERα的平均光密度分别为(59.83±17.24)ng/L、(89.72±15.20)ng/L及(0.064±0.004),高于空白对照组的(44.52±7.28)ng/L、(51.23±7.30)ng/L及(0.052±0.005),E2、ERα的平均光密度低于雌激素对照组的(74.00±6.85)ng/L、(0.079±0.004),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:壳聚糖可以提高围绝经期大鼠血清E2和P的含量,增加ERα的表达。     

白细胞介素-1β,-1Rα对胚胎-内膜共培养体系分泌基质金属蛋白酶-9/细胞间黏附分子-1的影响

目的 探讨白细胞介素(IL)-1β,-1Rα在胚胎-内膜共培养体系中的作用.方法 选取昆明种雌性小白鼠30只(6～8周龄),雄性15只(12～16周龄)进行实验.30只雌鼠成功妊娠后,收集雌鼠8细胞期胚胎并进行子宫内膜腺上皮细胞原代培养.共培养成功7份原代子宫内膜细胞,每份细胞分别接种35孔(n=35×7).5孔细胞培养液中不做任何处理(对照组,n=5×7),其余30孔根据上皮细胞培养液中所含IL-1β浓度不同以及IL-1β+IL-1Rα比例不同共分为6组,分别为1 ng/mL IL1β组,10 ng/mL IL-1β组和100 ng/mL IL 1β组,以及1 ng/mL IL-1β+10 μg/mL IL-1Rα组,10 ng/mL IL 1β+10 μg/mL IL-1Rα组,100 ng/mL IL-1β+10 μg/mL IL-1Rα组(每组样本量:n=5×7).将发育正常的8细胞胚胎随机置人含以上不同培养液的细胞孔内,每孔6枚胚胎,培养48 h后收集培养上清液,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养液中分泌蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-9/细胞间黏附分子(ICAM)-1的表达水平.结果 1 ng/mL IL-1β组与10 ng/mL IL-1β组,可显著促进共培养体系MMP-9/ICAM-1的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而1 ng/mL IL-1β组与10 ng/mL IL-1β组,以及100 ng/mL IL-1β组分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).10 ng/mL IL-1β+ 10 μg/mL IL 1Rα组MMP-9/ICAM-1水平显著低于对照组(P＜0.05);而1 ng/mL IL-1β+ 10 μg/mL IL-1Rα组,100 ng/mLIL-1β+10 μg/mL IL 1Rα组分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);1 ng/mL IL-1β+ 10 μg/mLIL-1Rα组与100 ng/mL IL-1β+10 μg/mL 1L-1Rα组比较,差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-1β/IL-1Rα的适当比例,可以调控胚胎着床.     

二甲双胍对子宫内膜异位症在位内膜细胞增殖与凋亡的影响

目的研究二甲双胍（metformin）对体外培养子宫内膜异位症（EMS）在位内膜细胞增殖与凋亡的影响。方法选择2012年1月至7月于河北医科大学附属邢台市人民医院妇科就诊的50例EMS患者的在位子宫内膜为研究对象,并纳入研究组（均经腹腔镜或开腹手术确诊）。选择同期在本院因宫颈病变、子宫纵隔、卵巢畸胎瘤、单纯卵巢囊肿行手术治疗的88例患者的子宫内膜为对照组（均排除EMS）。两组患者的年龄等一般临床资料比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。建立细胞模型,以不同浓度（1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1 000μmol/L）二甲双胍干预24h、48h、72h,通过3-（4,5二甲基噻唑-2）-2,5二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测不同浓度二甲双胍对EMS在位内膜细胞增殖的影响,并应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变及细胞凋亡情况,应用酶联免疫吸附（ELISA）法测定检测其对Bcl-2、Bax表达水平的影响。本研究遵循的程序符合河北医科大学附属邢台市人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与受试对象签署临床研究知情同意书。结果不同浓度二甲双胍对对照组患者的正常在位内膜细胞增殖无明显抑制作用。二甲双胍干预48h、72h后,EMS患者的在位内膜细胞增殖明显受到抑制（P〈0.05）,以二甲双胍浓度为1 000μmol/L时最为明显（P〈0.01）,并呈时间-剂量依赖性。二甲双胍干预后EMS患者在位内膜细胞G1期比例明显高于对照组（P〈0.05）。二甲双胍浓度为10μmol/L、100μmol/L、1 000μmol/L时,EMS在位内膜细胞的Bcl-2表达水平较对照组降低,Bax表达水平较对照组升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论二甲双胍可显著抑制EMS在位内膜细胞增殖,促进其凋亡,阻滞细胞周期进程。     

tTG蛋白与子宫内膜癌细胞凋亡和紫杉醇化疗敏感性

目的:探讨组织转谷氨酰胺酶抑制剂(monodansylcadaverine,MDC)对体外培养的人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的诱导作用和对紫杉醇(TS)的化疗增敏性。方法:用MTT法检测逐渐递增的MDC药物浓度和不同作用时间对细胞增殖的影响。用流式细胞技术检测MDC对细胞凋亡和紫杉醇的化疗敏感性的影响。结果:Ishikawa细胞中,MDC处理组和对照组凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);MDC+TS组的细胞凋亡率亦高于TS组(P<0.05);同时,MDC对细胞凋亡的诱导作用呈一定的剂量时间依赖关系。结论:组织转谷氨酰胺酶对维持子宫内膜癌细胞生长有一定作用,抑制酶的活性可以促进细胞凋亡并增加细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

醋酸铅染毒对TK6细胞氧化损伤作用及亚硒酸钠的保护效应

目的 研究亚硒酸钠对醋酸铅致TK6细胞氧化应激损伤的保护效应。方法 培养TK6细胞,调整细胞密度为1×106/ml,试验分3组,正常对照组、醋酸铅染毒组和亚硒酸钠干预组,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测细胞内丙二醛（MDA）含量和高度水溶性四唑盐（WST-1）法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 在醋酸铅染毒和0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,3组细胞内ROS含量、MDA含量和SOD含量的比较,差异均有统计学意义(F 分别为36.706,0.050,23.051,均P＜0. 01),其中醋酸铅染毒后,TK6细胞内ROS含量和MDA含量增高,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,细胞内ROS含量和MDA含量下降,与醋酸铅染毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;醋酸铅染毒后,TK6细胞内SOD含量降低,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,SOD含量上升,与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而与醋酸铅染毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 醋酸铅染毒对TK6细胞有氧化损伤作用, 0.01 μg/ml亚硒酸钠对醋酸铅氧化损伤毒性具有拮抗作用。