酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞性白血病K562细胞周期的作用及机制

目的:研究酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞周期的作用及机制.方法:以逆转录-聚合酶链反应和Western blot方法分别检测ST1571处理K562细胞12、24、48 h后p38、ERK、cyclin D2、cyclin E、p27 mRNA和蛋白的表达,并以流式细胞仪检测其不同时间点细胞周期的变化.结果:ST1571处理后K562细胞p38、ERK、cyclin D2、cyclin E mRNA和蛋白表达降低,p27 mRNA和蛋白表达增高.G<0/G1期细胞增多,s期细胞减少,与用药前比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论:STI571可能通过丝裂原活化蛋白激酶途径影响细胞周期调控蛋白,最终抑制K562细胞的增殖.     

BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂STI571选择性诱导K562细胞凋亡

目的 探讨STI571抑制慢性髓性白血病（CML）细胞株增殖的机理及特异性。方法 选用非特异性的凋亡诱导剂阿霉素和BCR－ABL阴性的白血病细胞株MO7E作为对照，观察两种抑制剂作用下两种细胞形态学的改变和胞浆DNA电泳图的改变。结果 STI571可诱导K562细胞凋亡，而对MO7E细胞无致凋亡作用；阿霉素可诱导MO7E细胞凋亡，而对K562细胞无诱导凋亡作用。结论 STI571通过阻断BCR－ABL酪氨酸激酶活力，促进K562细胞凋亡达到抑制细胞增殖的目的，而对不表达BCR－ABL的细胞株无诱导凋亡的作用，提示STI571的作用具有一定的特异性。     

慢性髓系白血病STI571耐药与蛋白酪氨酸磷酸酶活性关系

目的探索蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族部分成员参与慢性髓系白血病(CML)STI571的耐药机制。方法利用cDNA表达谱芯片技术初步筛选耐药细胞K562/G01与K562/W差异表达基因,应用半定量RT-PCR技术验证芯片结果;进一步检测耐药细胞系K562/G01及STI571耐药的CML患者单个核细胞胞浆蛋白PTP活性,了解PTP与耐药的相关性。结果耐药细胞K562/G01基因表达谱芯片分析发现:其中1个PTP成员出现表达下调[PTPRF(PPFIA4)基因,Ratio0.413,GenbankID:NM-015053],1个PTK成员表达升高(PTK9基因Ratio2.004,GenebankID:NM-198974)。胞浆蛋白PTP活性检测:K562/G01细胞胞浆蛋白PTP活性(126.45pmol/min·μg)较K562/W活性(137.32pmol/min·μg)降低;CML耐药组患者骨髓单个核细胞胞浆蛋白PTP活性为(124.83±12.14)pmol/min·μg较非耐药组患者(138.75±13.29)pmol/min·μg也降低(P=0.04)。结论PTP家族部分成员参与了STI571的耐药机制,PTP活性降低提示患者临床出现STI571耐药倾向。     

抗肿瘤新药酪氨酸激酶抑制剂STI571研究进展

STI571是一种靶向治疗慢性髓细胞性白血病(CML)的酪氨酸激酶抑制剂,抑制Bcr-abl激酶呈高度特异性.本文介绍其体内外药理作用、临床应用及耐药性等最新进展.     

BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂STI571的研究进展

蛋白酪氨酸激酶 (ＰｒｏｔｅｉｎＴｙｒｏｓｉｎｅＫｉｎａｓｅ ,ＰＴＫ)是细胞信号传递途径中的一个重要组成部分 ,对调节细胞生长、分化中起着重要的作用。ＰＴＫ活力增高在一些恶性血液病发病中起着决定性的作用[1] ,其中最具代表性的是ＢＣＲ ＡＢＬ ＰＴＫ与慢性髓性白血病 (ＣＭＬ)的关系。研究结果强烈提示 ,特异性的ＰＴＫ抑制剂可作为一种新型的治疗手段 ,特殊设计的针对ＰＴＫ作用部位的药物可影响底物蛋白上ＰＴＫ的磷酸化 ,从而阻断肿瘤蛋白的信号传输 ,诱导肿瘤细胞凋亡。ＢＣＲ ＡＢＬ酪氨酸激酶抑制剂ＳＴＩ5 71,临床前期研…     

异甘草酸镁对慢性髓细胞性白血病K562细胞系增殖的抑制作用

目的：观察异甘草酸镁对慢性髓细胞白血病K562细胞系增殖的抑制作用。方法：将异甘草酸镁以1640培养液倍比稀释成10,1,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6g·L-1共8个浓度组,分别处理增殖期K562细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度（IC50）。结果：在给药第3天,浓度大于10-3g·L-1的异甘草酸镁对K562细胞增殖具有抑制作用（P〈0.05）,细胞倍增时间为48h,并且具有时间和浓度依赖性。其中,10g·L-1和1g·L-1异甘草酸镁的抑制作用最强（P〈0.01）,IC50约为1.6g·L-1。结论：异甘草酸镁对K562细胞的增殖具有抑制作用,为临床应用异甘草酸镁预防和治疗白血病化疗相关肝损伤提供实验依据。     

Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂联合用药治疗慢性粒细胞白血病研究进展

以伊马替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂对慢性粒细胞白血病(CML)的治疗产生了重要影响,但其耐药性已成为CML治疗领域的关键问题。伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼以及普纳替尼等Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂与其他药物联合使用,可以协同抑制Bcr-Abl及其磷酸化蛋白的表达,显著降低STAT5、CRKL、ERK5等信号通路的磷酸化水平,改善肿瘤微环境,降低肿瘤细胞多药耐药性,已在基础研究和临床Ⅰ期研究中取得阶段性成果,为治疗CML提供新策略。     

酪氨酸激酶抑制剂在慢性髓细胞白血病治疗中的应用

慢性髓细胞白血病（CML）是一种造血干细胞疾病，其特征是带有9号和22号染色体易位的造血干细胞克隆性扩增，这种染色体易位称为费城染色体（Ph）。t（9；22）导致BCR—ABL融合基因的产生，     

Artesunate对K562细胞增殖作用及细胞周期的影响

目的:观察Artesunate对人白血病细胞株K562细胞增殖及细胞周期的影响.方法:用Artesunate处理K562细胞,细胞计数法绘制生长曲线;MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;倒置光显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析.结果:Artesunate的浓度为1×10-4、1×10-5、1×10-6mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;对K562细胞的半数抑制浓度为3.75×10-5mol/L;倒置光显微镜观察细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,内可见空泡,培养基中可见较多分泌颗粒;流式细胞仪检测G2期细胞比例增高.结论:Artesunate对K562细胞生长及增殖有抑制作用,其作用机制可能是通过抑制DNA合成,使细胞增殖停留在G2/M期来实现的.     

去铁胺抗K562细胞的增殖作用及对细胞周期的影响

目的研究去铁胺对K562细胞的抗增殖活性及细胞周期的作用。方法用K562细胞作为人类红白血病细胞株,用MTT法观察DFO的抗增殖作用;流式细胞术分析细胞周期的变化。结果小剂量DFO(12.5μM)处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,但是中剂量和大剂量DFO(25μM,50μM)干预后,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO抗细胞增殖活性为剂量依赖性。用DFO(25μM,50μM)处理K562细胞48h和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异(P<0.001)。结论去铁胺通过阻止细胞由G0/G1期进入S期发挥抗K562细胞的增殖作用。     

microRNA-21抑制剂联合伊马替尼对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响研究

目的:研究microRNA-21抑制剂(miRZip-21)联合伊马替尼对慢性髓系白血病细胞K562的细胞生长及周期的影响。方法:用慢病毒空载体pmiRZip或表达载体pmiRZip-21转染293TN细胞收获慢病毒颗粒miRZip或miRZip-21,分别感染K562细胞,采用Northern杂交检测microRNA-21的表达;然后对K562细胞进行以下不同处理:miRZip感染、miRZip-21感染、伊马替尼处理和miRZip-21感染与伊马替尼处理联合使用,采用MTT法检测后3种处理后细胞生长情况,流式细胞仪检测4种处理后细胞周期运行情况。结果:与miRZip感染比较,miRZip-21感染导致K562细胞中microRNA-21表达降低,细胞周期运行受到阻滞;而与miRZip-21感染或伊马替尼处理比较,miRZip-21感染与伊马替尼处理联合使用导致K562细胞生长速度明显减慢,细胞存活率显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞周期运行也受到严重的阻滞。结论:miRZip-21联合伊马替尼能够协同抑制K562细胞生长及细胞周期运行。     

新生霉素对STI571耐药K562/G01细胞的作用

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂新生霉素(novobiocin,NB)对STI571耐药K562/G01细胞生长的抑制作用,并研究NB和STI571联合应用对STI571敏感和耐药细胞的作用,并进一步探讨该作用与Bcr-Abl蛋白水平和Bcr-Abl激酶水平的关系。方法用MTT法检测NB对K562和K562/G01细胞生长的抑制作用,用金氏公式评价药物合用体外是否有协同作用,用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl蛋白水平和p-Tyrosine水平。结果NB能抑制K562和K562/G01细胞增殖,IC50分别是0.4353mmol.L-1和0.3490mmol.L-1;NB和STI571联合应用对STI571敏感和耐药细胞均有协同作用;NB能使K562和K562/G01细胞内Bcr-Abl和p-Tyrosine蛋白含量减少。结论NB通过减少Bcr-Abl和p-Tyrosine蛋白含量,抑制STI571耐药细胞K562/G01的增殖,NB和STI571有协同效应。     

沙利度胺对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的影响研究

目的:研究沙利度胺对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的影响。方法:将K562细胞分为对照(未加药)组和沙利度胺低、中、高剂量(0·5、1·0、2·0mmol·L-1)组,加入相应药物分别作用24、48、72、96h后,MTT法检测各组细胞生长抑制率,Wright-Giemsa染色观察各组细胞形态变化,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:K562细胞的生长抑制率和凋亡率与沙利度胺浓度和作用时间均呈正相关;与对照组比较,沙利度胺3个剂量组作用72、96h后细胞的生长抑制率明显升高(P<0·05),4个时间点的细胞凋亡率均明显升高(P<0·01)。沙利度胺3个剂量组作用72h后,K562细胞出现细胞体积缩小等凋亡形态。结论:沙利度胺能够抑制K562细胞的增殖,呈一定的浓度和时间依赖性,并能够诱导K562细胞的凋亡。     

K562白血病细胞系HLA-II等位基因型

目的:测定K562白血病细胞系HLA -II等位基因型。方法:采用聚合酶链反应 -限制性片断长度多态性技术对K562白血病细胞系HLA -II类抗原基因进行DNA分型。结果:K562细胞系的HLA -II基因型均为纯合子型 ,等位基因分别是 :DRB1*0301/*0301,DQB1*0201/*0201,DPB1*0402/*0402。结论:提高对K562白血病细胞系HLA -II基因型的认识,可为髓系白血病分子免疫遗传学基因型研究提供初步的检测资料     

K562 白血病细胞系HLA-Ⅱ等位基因型

目的：测定K562白血病细胞系HLA—Ⅱ等位基因型。方法：采用聚合酶链反应—限制性片断长度多态性技术对K562白血病细胞系HLA—Ⅱ类抗原基因进行DNA分型。结果：K562细胞系的HLA—Ⅱ基因型均为纯合子型，等位基因分别是：DRB1^*0301／^*0301，DQB1^*0201／^*0201，DPB1^*0402／*0402。结论：提高对K562白血病细胞系HLA—Ⅱ基因型的认识，可为髓系白血病分子免疫遗传学基因型研究提供初步的检测资料。     

纳米蜂胶对肿瘤细胞K562,L929,MNK28的杀伤效应及机理研究

目的:了解纳米蜂胶对常见肿瘤细胞的体外杀伤效应,并探讨其机理.方法:乳酸脱氢酶法测定纳米蜂胶体外对小鼠成纤维瘤细胞、人胃癌细胞、人红白血病细胞和非肿瘤源性的脐静脉内皮细胞的杀伤作用.流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率.结果:纳米蜂胶在浓度16～400μg·ml-1范围内对3种肿瘤细胞都有一定的杀伤作用,且随着浓度的升高杀伤率增加,其对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于普通蜂胶,但低于氟尿嘧啶.纳米蜂胶对K562,L929,MNK28半数致死浓度(IC50)分别为(357.8±8.3)μg·ml-1,(472.3±27.5)μg·ml-1,(461.7±18.7)μg·ml-1.而普通蜂胶对K562,L929和MNK28的IC50分别为(737.6+74.3)μg·ml-1,(753.6±82.1)μg·ml-1,(939.3±75.5)μg·ml-1.而两种蜂胶对人脐静脉内皮细胞的毒性均较低.细胞凋亡率与杀伤率有一定的线形关系,纳米蜂胶作用后处于G0/G1期的肿瘤细胞的比例明显增高.结论:纳米蜂胶体外对小鼠成纤维瘤细胞、人胃癌细胞、人红白血病细胞具有明显的杀伤作用,诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一.