结核分支杆菌利福平耐药基因突变的研究

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）分析５０株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｏＢ基因。结果３株结核分支杆菌药物敏感株和２株非ＲＦＰ耐药株中，仅１株ｒｐｏＢＳＳＣＰ图谱异常的药物敏感株出现５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ突变。４５株ＲＦＰ耐药株中，１０株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析均未见ｒｐｏＢ突变，３５株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析异常，其中１４株为５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ或ＴＧＧ或ＴＡＣ突变，１４株为５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ或ＧＡＣ或ＣＣＣ或ＣＴＣ或ＧＴＣ突变，２株为５１６位ＧＡＣ→ＧＴＣ或ＴＡＣ突变，２株为５１６位和５２６位及５１５位和５１６位密码子双点突变，３株ｒｐｏＢ序列与结核分支杆菌不同。结论大多数结核分支杆菌耐ＲＦＰ是由于其ｒｐｏＢ基因突变所致，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＤＳ方法可快速测定结核分支杆菌ＲＦＰ耐药基因型     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疠分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份监床标本，Ｐ     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疬分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。认为三种方法在使用中各自有其优点，不可偏废。     

采用16S rRNA序列分析法鉴定非结核分支杆菌

对第四次全国结核病流行病学抽样调查获得的经生化鉴定为非结核分支杆菌的 49株菌株进行了 16ＳｒＲＮＡ序列分析法鉴定 ,并与生化法进行了比较。材料与方法　菌株 :牛分支杆菌 (ＡＴＣＣ 192 10 ) ,偶然分支杆菌 (ＡＴＣＣ6841) ,标准菌株胞内分支杆菌 (ＡＴＣＣ 3 5 772 ) ,不产色分支杆菌 (ＤＳＭ 44 164 ) ,瘰疬分支杆菌 (ＤＳＭ 43 992 )均由国家结核病参比实验室提供。获取方法 :参照《第四次全国结核病流行病学抽样调查工作手册 (修订本 )》。聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增 16ＳｒＲＮＡ的片段 :取罗氏培养基培养的非结核分支杆菌 ,灭活…     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

PCR—SSCP方法用于痰标本中结核分支杆菌rpoB基因突变检测

本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法直接检测痰标本中结核分支杆菌ｒｐｏ基在变，评价此方法用于结核分支杆菌利福平耐性试验的意义，以期建立一种直接检测分支杆菌耐利福平的快速方法。本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了３０例结核病人和２０例非结核性肺部疾病病人痰标本。３０份肺结核病人的痰用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测痰中结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变：２１份痰ＰＣＲ扩增阳性，其中１３份ＳＳＣＰ图谱与参考株Ｈ３７ＲｖＳＳＣＰ图谱有     

HBV反义全基因真核细胞表达载体的构建及在肝癌细胞内的表达

１．材料与方法：乳哺动物细胞表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ,长约４．５ｋｂ,带有Ｔ_７公用序列。ｐＣＰ１０是ｐＢＲ３２２ＥｃｏＲＩ位点中插入双拷贝头尾相接的ＨＢＶａｙｗ亚型全基因ＨＢＶＤＮＡ重组质粒。ＰＣＲ引物ＸＩ１：１４２８－１４４８ｎｔ５'ＣＧＴ　ＣＣＣＧＴＣ　ＧＧＣＧＣＴＧＡＡＴＣＣ３',ＸＩ_２：１６７２－１６５３ｎｔ５'ＡＧＴＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＴＣＴＴＡＡＧ３'。人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１,出上海细胞所提供。将ＥｃｏＲＩ酶切后回收的全基因ＨＢＶ片段。在Ｔ_４ＤＮＡ连接酶作用下,与ＥｃｏＲＩ酶切…     

结核分支杆菌重组ESAT6蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

结核菌素纯蛋白衍生物 (ＰＰＤ)含多种蛋白成分 ,与多种分支杆菌存在交叉 ,尤其在鉴别结核分支杆菌感染和卡介苗接种阳转者上有一定的困难。所以ＰＰＤ作为结核病诊断试剂有其局限性。现已发现结核分支杆菌Ａｇ85、ＭＰＴ6 4、380 0 0、ＭＰＴ6 3、ＥＳＡＴ6等抗原 ,均能诱发豚鼠发生迟发性超敏反应 (ＤＴＨ)。具有高特异性的新的诊断试剂或许就存在它们或它们的组合中。ＥＳＡＴ6蛋白是结核分支杆菌生长中的一种小相对分子质量分泌蛋白 ,它能诱发结核分支杆菌感染的豚鼠发生很强的ＤＴＨ反应 ,大部分ＢＣＧ在减毒过程中丢失了编码该蛋白的…     

应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结 …

目的 提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性、以检测和鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌ＤＮＡ。方法 应用三对具有特异性的寡核苷酸引物，进行多重ＰＣＲ扩增。这三对引物分别对应于分支杆菌６５０００表面抗原、结核分支杆菌插入序列ＩＳ６１１０及人类β－珠蛋白基因的部分序列，其扩增产物分别为３８３ｂｐ、１２３ｂｐ和２６８ｂｐ。结果 此多重ＰＣＲ电泳检测的灵敏度为０．６ｐｇ。经多重ＰＣＲ     

耐多药结核病耐药分子机制的研究

目的 研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因的分子药敏试验方法。方法 通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结构分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果 ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１－０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ基因引物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的的特异性。２０株耐多药分离株中，９０％有２种以上耐药遗传标志改变，     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

结核分支杆菌利用福平药物敏感性的直接快速检测

探讨利用分子生物 学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段）,运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法,检测４５株结核分支杆菌临床分离株,对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析,运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患痰标本进行直接快速检测,并与药敏试验结果做对照分     

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系，这有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究     

1998年美国ISI检索系列收录的中国期刊名称

１　ＡＣＴＡＢＩＯＣＨＩＭＩＣＡＥＴＢＩＯＰＨＹＳＩＣＡＳＩＮＩＣＡ　ＳＣＩＥ,ＢＢＣＩ２　ＡＣＴＡＢＯＴＡＮＩＣＡＳＩＮＩＣＡ　ＣＣ３　ＡＣＴＡＣＨＩＭＩＣＡＳＩＮＩＣＡ　ＳＣＩ,ＣＣＩ,ＣＣ／ＰＣ＆ＥＳ４　ＡＣＴＡＭＡＴＨＥＭＡＴＩＣＡＳＩＮＩＣＡＮＥＷＳＥＲＩＥＳＣＣ５　ＡＣＴＡＭＥＣＨＡＮＩＣＡＳＩＮＩＣＡＳＣＩＥ,ＣＣ／ＥＣ＆Ｔ６　ＡＣＴＡＭＥＣＨＡＮＩＣＡＳＯＬＩＤＡＳＩＮＩＣＡＳＣＩＥ,ＭＳＣＩ７　ＡＣＴＡＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＳＩＮＩＣＡＳＣＩ,ＳＣＩＥ,ＣＣ／ＬＳ８　Ａ…     

PCR指印技术对新疆结核病病原Bacter460液体培养标本进行 …

以结核分枝杆菌特异插入序列ＩＳ６１１０两端序列为模板,设计一对外向ＰＣＲ引物进行ＰＣＲ扩增,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术,该试验的基础是利用ＩＳ６１１０在结核分支杆菌染色体ＤＮＡ中反复重复且ＩＳ６１１０序列之间相距较近,经ＰＣＲ扩增呈现多条带型构成ＤＮＡ指印。在对新疆结核病人的３１份液体培养标本的ＰＣＲ检测呈现６种指印。该ＰＣＲ分型技术对结核分枝杆菌的分型所需时间短,不需细菌再     

恶性疟原虫Fcc—1／HN株MSP1 19基因的体外扩增及鉴定

本文根据恶性疟原虫ＭＳＰ１ １９已知序列，自行设计一对用于特异扩增ＭＳＰ１Ｃ 端１９肽基因的引物Ｐ１，Ｐ２在Ｐ１引物中引入Ｓａｌ Ｉ酶切位点及ＡＴＧ起始密码子，在Ｐ２引物中引入Ｘｂａ Ｉ酶切位点及终止密码子，经ＰＣＲ扩增获得３６３ｂｐ大小片段，与预期大小相符，采用“压碎与浸泡法”纯化回收ＰＣＲ产物，ＰＣＲ产物经套式ＰＣＲ及酶切鉴定证实与预期大小相符。采用“压碎与浸泡法”纯化回收ＰＣＲ产物，ＰＣＲ产     

结核分支杆菌耐吡嗪酰胺分离株pncA基因突变的研究

目的 了解我国结核分支杆菌耐吡嗪酰胺（ＰＺＡ）分离株ｐｎｃＡ基因突变情况,研究其与耐ＰＺＡ之间的关系。方法 通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－循环测序法（ＡＳ）分析７４株结核分支杆菌临床分离株的ｐｎｃＡ基因。以结核分支杆菌Ｈ３７ＲＶ标准株为对照。结果３２株药物敏感株ｐｎｃＡ基因ＳＳＣＰ分析未发现异常。２０株耐非ＰＺＡ药物的分离株中,１６株ｐｎｃＡ基因ＳＳＣＰ泳动正常;     

AmpliSensor—聚合酶链反应定量检测肺结核患者外周血结 …

目的 探讨ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应定量检测外周血中结核分支杆菌ＤＮＡ在肺结核的应用价值。方法 采用ＱｌＡａｍｐ和ＡｃｕＰｕｒｅ法提取，制备全血中模板ＴＢ－ＤＮＡ，应用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ定量检测，并与ＩＳ６１１０－单管巢式聚合酶链反应（ＳＮ－ＰＣＲ）作比较。结果２００例肺结核患者的血液标本中，两种方法测得结核分支杆菌ＤＮＡ的阳性率分别为６０．５％、６３．５％。８５例非结核肺病     

5种方法联合检测力阴肺结核诊断价值的研究

目的 探讨痰聚合酶链反应（ＰＣＲ）ＴＢ－ＤＮＡ检测、血清结核分支杆菌糖脂免疫球蛋白Ｇ（ＬＡＭＩｇＧ）、卡介菌免疫球蛋白Ｇ（ＰＰＤＩｇＧ）、结核特异性循环免疫复合物（ＳＣＩＣ）与结核菌素（ＰＰＤ）０．１Ｕ皮试联合检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法 以上述５种检测方法用于力阳肺结核３１例、健康对照５３例、非结核肺疾病３０例、初治菌阴肺结核５４例同步检测。血清免疫学检测用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。对     

HBV基因型(A～F)多引物对PCR分型法的初步建立

建立一种简便易行的乙型肝炎病毒基因型分型方法 (只需ＰＣＲ)。对ＧｅｎＢａｎｋ中查获的 114例ＨＢＶ全序列进行比较分析 ,找出每种基因型相对于其他 5种基因型的独特序列 ,并根据这些独特序列设计出 6对分别针对Ａ～Ｆ基因型的特异引物。用这 6对引物分别对标本进行ＰＣＲ ,根据阳性结果判断出标本的基因型。进一步简化该方法 ,用多引物对ＰＣＲ法 (ＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ) :将Ｂ、Ｃ、Ｄ 3种基因型的特异引物混合进行ＰＣＲ ,并根据扩增片断的大小判断基因型。用此方法对已鉴定的Ｂ、Ｃ、Ｄ型标本进行比较与验证。结果表明 ,单引物对…