肺癌患者外周血白细胞线粒体DNA突变研究

目的分析mtDNA tRNAThr、tRNAPRO基因及非编码HVRⅠ区序列在肺癌患者及健康成人外周血中的突变情况并探讨其意义.方法一步法制备外周血白细胞mtDNA,结合PCR产物直接测序,对比分析mtDNA tRNAThr、tRNAPRO基因及非编码HVRⅠ区序列在17例肺癌患者和14例健康成人外周血白细胞中的突变情况.结果肺癌组和健康成人组中,仅1例健康成人mtDNA编码区tRNAThr基因中出现了1个碱基变异,碱基平均变异率为0.023 7%,而非编码HVRⅠ区共发现136个变异,碱基平均变异率为1.282 8%.肺癌组和健康成人组碱基平均变异率分别为1.238 4%和1.336 7%.肺癌组中腺癌、鳞癌、小细胞癌的碱基平均变异率分别为0.994 2%、1.202 1%和1.7544%.结论肺癌患者外周血白细胞mtDNA编码区序列趋于高度保守,主要碱基变异发生在非编码HVRⅠ区,与健康成人相应区域变异率总体上趋于一致,但肺癌组人均碱基变异随年龄增长有增高趋势,且小细胞肺癌外周血白细胞mtDNA非编码HVRⅠ区碱基平均变异率有增高趋势.     

肺鳞癌mtDNA D-环序列微卫星不稳的研究

目的 分析肺鳞癌患者癌组织线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)非编码D-环区序列的微卫星不稳(mitochondrial microsatellite instability, mtMSI)现象并探讨其意义.方法 应用改良一步法制备15例肺鳞癌患者癌组织mtDNA, PCR产物直接测序,对比分析D-环区序列mtMSI情况.结果 15例肺鳞癌患者癌组织mtDNA D-环区中,全部出现了mtMSI(100%),在3个不同位点上共发现30个mtMSI.结论 肺鳞癌患者mtMSI发生率高, D环区碱基序列的mtMSI可能与肿瘤的发生发展有关.     

肺腺癌患者血浆线粒体DNA D-LOOP高变区基因突变的研究

目的探讨检测线粒体DNA D-LOOP高变区基因突变对于肺腺癌诊断的参考价值。方法选取肺腺癌患者31例,分别提取血浆和癌组织DNA,用聚合酶链反应扩增血浆和癌组织线粒体DNA的D环HVR1,然后用变性高效液相色谱法进行突变筛选。直接测序法测定D环HVR1序列,确定肺腺癌患者组织和血浆中的D环HVR1区的基因突变。结果与对照组相比,肺腺癌患者的血浆和癌组织DNA的扩增率有显著差异(P<0.05),D-LOOP高变区HVR1存在点突变。结论线粒体基因D环高变区HVR1在肺腺癌肿的突变在肺腺癌的诊断中可能有一定作用。     

淋巴瘤组织中线粒体DNA突变的研究

目的 通过检测恶性淋巴瘤组织中线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的突变,以探讨mtDNA突变在恶性淋巴瘤发生中的作用.方法 提取38例恶性淋巴瘤组织及其对应患者外周血白细胞的DNA,经PCR扩增部分mtDNA片段,PCR产物直接测序法测定mtDNA序列.以外周血淋巴细胞测序结果作为对照,确定肿瘤组织mtDNA的突变.结果 18例(47.4%)恶性淋巴瘤组织中发现25个突变,25个突变发生在15个核苷酸位点,其中21个突变位于mtDNA的D-Loop区,4个突变位于mtDNA的编码区,D-Loop发生变异的频率是编码区的4.26倍.13个(13/25,52%)突变位于mtDNA多态性位点.结论 恶性淋巴瘤组织中存在mtDNA的突变,mtDNA突变可能与淋巴瘤的发生、进展有一定关系.     

非小细胞肺癌线粒体基因组大片段缺失突变研究

目的 明确mtDNA 4 977 bp大片段缺失在肺癌组织、癌旁正常组织及非癌患者肺组织中的分布频率,探讨mtDNA 4 977 bp大片段缺失与肿瘤的关系.方法 采用长距离PCR方法对37例肺癌组织和相应的癌旁正常组织、20例非癌患者正常肺组织mtDNA 4 977 bp缺失进行了检测.结果 肺癌组织、癌旁正常肺组织及非癌患者正常肺组织中均检测出存在有线粒体DNA 4 977 bp片段缺失.37例肺癌组织标本中有20例(54.1%)检测到4 977 bp缺失,37例相应的癌旁肺组织22例(59.5%)有缺失, 其中8例在肺癌组织中未显示而却在癌旁正常组织检测到缺失,20例非癌患者正常肺组织中也有6例出现 4 977 bp片段缺失.线粒体DNA 4 977 bp缺失与年龄、吸烟因素有关.结论 线粒体DNA 4 977 bp缺失并非肺癌特异性突变,在癌变过程中不太可能起重要的作用,而可能仅仅是肿瘤发生发展过程中环境和遗传因素作用的反映.     

肝细胞性肝癌线粒体DNA D-loop区基因突变的研究

目的 研究肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区基因的突变情况.方法 选择40例肝细胞性肝癌组织和其相应癌旁组织,取对应患者外周静脉血,提取线粒体DNA后进行PCR扩增和测序.结果 40例肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区中,发生突变16例(40.0%),共发现突变位点34个,其中16个位点为点突变,5个位点发生插入,13个位点发生缺失;另外新发现2个多态性位点.结论 线粒体DNA D-loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在肝细胞性肝癌组织中突变率较高.     

胃癌线粒体DNA D-loop区碱基突变的检测分析

目的 研究胃癌患者的癌组织线粒体DNA （mtDNA）D-loop区碱基突变情况,以探讨mtDNA D-loop区碱基突变与胃癌发生发展的相关性.方法 采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对75例胃癌患者癌组织线粒体D-loop 区进行扩增并测序分析.结果 在75例胃癌组织中共有130个位点发生了变化,其中属于基因多态性有101个,基因突变有29个.75例胃癌组织中39例mtDNA D-loop区存在突变,突变率为52%.结论 mtDNA D-loop 区碱基突变可能在胃癌发生发展中发挥重要作用.     

肺鳞癌患者癌组织和血液中微卫星DNA变异的检测

目的：检测肺鳞癌患者癌组织和外周血中微卫星DNA的变异。方法：选择30例原发性肺鳞癌患者的癌组织、外周血液标本及30例肺部良性疾病患者的外周血液标本,用PCR—银染法,对其中的20个微卫星位点进行检测。结果：癌组织微卫星DNA变异的检出率较高(26％),肺鳞癌患者外周血20个位点微卫星DNA变异的检出率(20．2％)与癌组织相比差异均无统计学意义,检测出的敏感位点有D3S1067、D3S1447、D3S1611、D3S1284、D3S1110、D3S1007、D5S346、D9S1748。30例肺部良性疾病患者外周血在全部20个微卫星DNA位点上没有检测到变异。结论：肺鳞癌患者存在微卫星DNA的变异,进行外周血中敏感位点微卫星DNA变异的检测对肺鳞癌的早期诊断有重大意义。     

乳腺癌线粒体细胞色素氧化酶-Ⅱ基因突变检测

目的研究乳腺癌患者线粒体DNA（mtDNA）细胞色素氧化酶-Ⅱ区基因突变情况。方法采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对20例乳腺癌患者癌组织和和癌旁组织线粒体DNA的细胞色素氧化酶-Ⅱ区扩增并测序,检测突变情况。结果 20例乳腺癌患者癌组织中共有4例mtDNA细胞色素氧化酶-Ⅱ区存在突变,癌旁组织中共有2例mtDNA细胞色素氧化酶-Ⅱ区存在突变。在20例乳腺癌组织中共有4个位点发生了突变,其中引起编码氨基酸改变的突变有1个。结论 mtDNA细胞色素氧化酶-Ⅱ区突变与乳腺癌发生、发展有相关性。     

宣威地区非小细胞肺癌患者线粒体DNA突变与多态性研究

【目的】寻找宣威地区肺癌患者肺组织中线粒体DNA突变和多态性情况,为进一步研究宣威地区女性肺癌高发机制提供参考。【方法】征集28例宣威籍肺癌患者,收集癌组织和相应癌旁正常肺组织,提取线粒体DNA ,实时荧光定量PCR和直接测序方法检测线粒体DNA突变和多态性改变。【结果】28例肺癌组织样本同对应癌旁组织比较,有21例（75．0％）发生mtDNA突变,15例有多种突变,突变发生在DLOOP 区,以及呼吸链编码区等区域。突变与患者年龄、性别,及组织学类型无明显联系。28例肺癌组织、相应癌旁组织同M t-DNA剑桥序列比较,有3例有mtDNA多态性改变。【结论】宣威肺癌患者线粒体DNA存在特异性的突变位点,以及多态性位点,可能和当地特殊的燃煤污染暴露及遗传易感性有关。     

肝细胞性肝癌线粒体DNA D-100p区基因突变的研究

目的研究肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D—loop区基因的突变情况。方法选择40例肝细胞性肝癌组织和其相应癌旁组织,取对应患者外周静脉血,提取线粒体DNA后进行PCR扩增和测序。结果40例肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区中,发生突变16例（40．0％）,共发现突变住点34个,其中16个位点为点突变,5个位点发生插入,13个位点发生缺失;另外新发现2个多态性位点。结论线粒体DNA D-loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在肝细胞性肝癌组织中突变率较高。     

亨廷顿舞蹈病患者mtDNA D环突变及编码区大片段缺失分析

目的:探讨人类mtDNA D环突变及编码区大片段缺失与亨廷顿舞蹈病的关系。方法:采用PCR-DNA测序技术对2个亨廷顿舞蹈病家系的8名患者、20名家系内正常人及20名无关健康个体的mtDNA D环高变区突变及编码区大片段缺失进行检测。结果:患者D环高变区未发现片段缺失/插入突变,高变区Ⅰ的rs16061~rs16171是核苷酸歧变的集中区域。3名患者和16名家系内正常人存在mtDNA编码区大片段缺失。结论:mtDNA D环调控序列的大片段缺失/插入突变及编码区大片段缺失可能不是亨廷顿舞蹈病发病机制中的主要因素。     

人骨肉瘤组织线粒体DNA控制区PCR-RFLP分析

目的比较分析人骨肉瘤组织mtDNA控制区的序列和正常人的差异.方法用ApaⅠ,AvaⅡ,BamHⅠ,EcoRⅤ,HaeⅢ和KpnⅠ共6种限制性内切酶,对20例骨肉瘤组织进行了PCR产物限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析.结果 20例骨肉瘤组织DNA均扩增出长1 451 bp的线粒体控制区特异性目的片段,没有发现长度多态性.8例骨肉瘤组织在mtDNA 16 519位核苷酸处发生了T→C的突变,占40%(8/20),其中骨母细胞型4例,占40%(4/10),软骨母细胞型2例,占40%(2/5),纤维母细胞型2例,占40%(2/5),各亚型之间没有显著性差异(P＞0.05);7例组织第16 132位核苷酸处的A缺失,占35%(7/20),其中骨母细胞型3例,占30%(3/10),软骨母细胞型2例,占40%(2/5),纤维母细胞型2例,占40%(2/5),各亚型之间没有显著性差异(P＞0.05);4例组织既有16 519位核苷酸处T→C的突变,又有16 132位A的缺失,占20%(4/20).这两种突变在20例骨肉瘤病例以及各亚型中占的比例均显著高于正常人群相应位点的多态性变异.结论这两种突变在骨肉瘤细胞mtDNA中发生率较高,可能在骨肉瘤的发生发展中发挥重要的作用.     

散发型甲状腺髓样癌及正常甲状腺组织RET基因第13外显子碱基序列分析

目的 研究散发型甲状腺髓样癌酪氨酸激酶受体基因(RET)第13外显子的突变情况.方法 提取17例散发型甲状腺髓样癌和4例正常甲状腺组织基因组的DNA,PCR扩增该基因第13外显子全部序列,纯化目的 基因DNA后直接序列测定.结果 与Genebank比较全部散发型甲状腺髓样癌和正常甲状腺组织在RET基因第18973和18974位点之间均有一个鸟嘌呤插入,插入点位于该基因的第13外显子和第13内含子之间.结论 该位点处鸟嘌呤插入不是基因突变,可能为不同人种间基因组差异或Genebank存在错误.     

乳腺癌中线粒体基因组D环区基因突变的研究

目的 通过检测乳腺癌基因组D环区体细胞突变和种系性变异,探讨其与乳腺癌发生的关系.方法 提取24例乳腺癌患者癌、癌旁组织及外周血细胞总DNA,PCR扩增各组织线粒体DNA(mitoohondrial DNA,mtDNA)基因组D环(D-loop),基因测序后与线粒体文库中的剑桥序列比对,分析突变类型.结果 在24例乳腺癌组织中,共发现91个种系性变异,11例(45.8%)肿瘤发现体细胞突变共19例次,36.8%位于第一高变区,52.6%位于第二高变区.结论 乳腺癌mtDNA D环区具有高度多态性和高度突变率,该区的碱基改变在乳腺癌的形成中可能起重要作用.     

线粒体脑肌病中线粒体DNA的部分缺失

在2例Kearns－Sayre综合征（KSS）和2例慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）患者的骨骼肌线粒体DNA（mtDNA）中发现存在单一的大片段缺失突变。缺失的长度2．5～5．5kb，突变只发生在部分线粒体DNA中，突变型mtDNA占全部mtDNA的60．5％～84．6％。在10例其它的线粒体脑肌病患者骨骼肌标本和外周血标本及数例正常骨骼肌和胎肝标本的mtDNA中均未发现缺失突变。上述发现支持mtDNA的缺失突变为KSS和CPEO主要病因的观点。     

潮汕食管癌线粒体DNA体细胞突变研究

目的：研究可能与食管癌发生有关的线粒体DNA（mtDNA）体细胞突变,尤其是与D单倍群患者相关联的体细胞突变。方法：收集24例配对的潮汕食管癌患者癌组织和癌旁正常组织,对mtDNA的D环区和决定D单倍群的多态性位点5178邻近区域直接测序。结果：食管癌癌组织的mtDNA体细胞突变主要为D环区的np303~309单个胞嘧啶核苷酸（C）重复序列处的插入或缺失C。癌旁正常组织np303~309的C数目为9的患者,其配对癌组织发生np303~309体细胞突变率明显高于C数目≤8个的患者。D单倍群癌旁正常组织np303~309的C数目为9的频率高于非D单倍群,D单倍群在该位点的体细胞突变率也高于非D单倍群。结论：食管癌癌组织np303~309的体细胞突变率与癌旁正常组织np303~309的C数目有关。np303~309体细胞突变可能是评价潮汕食管癌高危个体尤其是D单倍群个体发生食管癌潜在可能性的有意义分子标记。     

ras基因突变与膀胱癌组织分化关系的研究

目的:探讨ras基困突变与膀胱癌组织分化之间的关系.方法:采用聚合酶链反应-单链DNA构象多态性分析法,对30例患者膀胱癌组织Ha-ras基因ExonⅠ点突变情况进行了检测.结果:膀胱癌组织分化Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级,其c-Ha-ras ExonⅠ点突变阳性率分别为25.0%、30.8%、88.9%,随癌组织级别升高,ras癌基因Exon Ⅰ点突变率明显增加,经X~2检验有显著性差异(P<0.01)结论:c-Ha-ras ExonⅠ点突变可以作为判断膀胱癌恶性程度的监测指标.     

老年黄斑变性患者线粒体DNA突变及氧化磷酸化功能检测与分析

目的 :探讨老年黄斑变性 (age relatedmacularde generation ,AMD)与线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtD NA)突变及氧化磷酸化功能的相关性 .方法 :选择湿性AMD患者 2 6例 ,干性AMD患者 10例及正常对照者 2 0例 .采集外周血细胞 ,抽提DNA ,检测mtDNA缺失和mtDNA 32 4 3点突变 ,测定电子传递链酶复合物Ⅰ和复合物Ⅳ活性 .结果 :湿性AMD组 2 6例中 ,有 4例检出大小分别为 3.6 7,5 .0 0和 5 .2 0kb的mtDNA多重缺失 ;3例检出 5 .0kb和 5 .2kb的双重缺失 ;2例检出 3.6 7kb的单一缺失 .各组均未检出mtDNA32 4 3点突变 .复合物Ⅰ活性均值湿性AMD组、干性AMD组与对照组分别为 (16 .5 3± 7.2 8) ,(17.2 8± 8.0 6 )和 (18.38±5 .5 3)nmol·min-1·mg-1(P >0 .0 5 ) ;复合物Ⅳ活性均值分别为 (70 .2 5± 2 6 .33)、(92 .13± 30 .6 9)和 (99.13± 32 .11)nmol·min-1·mg-1,湿性AMD组活性较其他两组显著降低 (P <0 .0 5 ) .结论 :①湿性AMD患者体内可能存在较高频率的mtDNA多重缺失 ;②AMD发病可能与母系遗传而来的mtD NA 32 4 3点突变无关 ;③湿性AMD组电子传递链酶复合物Ⅳ活性降低 ,可影响组织氧化磷酸化功能     

胃癌细胞系和胃癌组织中线粒体DNA4 977 bp缺失及其生物学意义

目的 明确线粒体DNA 4977bp大片段缺失在胃癌细胞系、胃癌组织及胃癌患者血清中的频率,为胃癌的早期临床诊断寻找简便准确的分子标记。方法 运用Primer-shift PCR和直接测序的方法对13个胃癌细胞系、52对胃癌组织及对应的癌旁正常组织（年龄从28-78岁）、40例胃癌患者血清及40名正常人血清进行筛查。取10例胃癌组织的石蜡切片,采用显微切割技术在同一患者的切片上同时分离3种组织（包括胃粘膜正常腺体、肠化上皮及胃癌组织）对mtDNA 4977bp缺失进行了分析比较。结果 在13个胃癌细胞系中12个有mtDNA4977bp缺失（缺失率为92.3%),52例胃癌组织中38例有缺失（缺失率为73.1%),52例癌旁正常组织中27例有缺失（缺失率为52%）,40名胃癌患者血清中17例有缺失（缺失率为42.5%),40名正常人血清中8例有缺失（缺失率为20%）。胃癌组织和癌旁正常组织mtDNA 4977bp缺失差异有显著意义,癌组织mtDNA 4977bp缺失率与胃癌的分型和患者的性别没有关联。胃癌患者血清与正常人血清mtDNA4977bp缺失差异也有显著意义。10例显微切割组织中2例肠化上皮及胃癌组织中有缺失,而胃粘膜正常腺体未见缺失。结论 线粒体DNA 4977bp大片段缺失可能在胃癌发生和胃粘膜病变演化及细胞癌变的过程中起重要作用,血清中可以检测到线粒体DNA 4977bp大片段缺失,而且在胃癌患者血清中检出率远高于正常人血清。检测胃癌患者血清中mtDNA 4977bp大片段缺失有望成为一种简便易行的胃癌生物学行为的分子标记物。