缺血-再灌注对心肌细胞钠快通道电流的影响

目的探讨在心肌缺血-再灌注后钠快通道电流的变化及其在室性心律失常发生中的作用.方法以常规方法制备大鼠心肌缺血-再灌注模型,以酶解法分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察缺血10和30min后再灌注组(10min和30min组)的心室肌细胞钠快通道电流(INa)的变化,以正常心肌INa为对照,同时设假手术对照组.结果缺血10 min再灌注组INa受到抑制,电流密度-电压关系曲线上移,而缺血30 min再灌注组增大,电流密度-电压关系曲线下移,峰值钠电流密度对照组为(-13.55±4.32)pA/pF(n=10个细胞),缺血10min和30min再灌注组分别为(-6.51±2.45)pA/pF(n=10个细胞)和(-41.27±9.68)pA/pF(n=10个细胞),与对照组相比,差异均有极显著性意义(P＜0.001);缺血10min再灌注失活曲线左移,而缺血30min再灌注组又右移,半数最大失活电位对照组为(-105±12)mV(n=10个细胞),缺血10min和30 min再灌注组分别为(-112±16)mV(n=10个细胞)和(-101±12)mV(n=10个细细胞),与对照组比较,缺血10 min再灌注组显著减小(P＜0.001),而缺血30min再灌注组变化不明显(P＞0.05).结论缺血10min再灌注组心室肌细胞钠快通道受抑制,而缺血30min再灌注组心室肌细胞钠快通道反而激活,可能为缺血-再灌注性心律失常发生的机制之一.     

ClC-3基因敲除不影响心肌细胞肿胀激活性氯通道的PKC敏感性

目的:探讨小鼠心室肌细胞肿胀激活性氯(VSOR Cl-)通道的蛋白激酶C (PKC)敏感性是否受ClC-3的影响.方法:采用基因打靶、RT-PCR、膜片钳全细胞记录技术分别获得ClC-3基因敲除小鼠(Clcn3-/-)、验证心肌ClC-3 mRNA表达、及记录VSOR Cl-电流.结果:①低渗条件下1μmol/L佛波酯(PMA)明显增大VSOR Cl-电流;②等渗条件下PMA-预处理不影响基础电流,随后低渗刺激性VSOR Cl-电流激活时程明显缩短;③PMA对VSOR Cl-电流的增强作用在野生型和Clcn3-/-小鼠无明显区别;④10 μmol/L白屈菜红硷(CHE)-预处理明显抑制低渗激活性VSOR Cl-电流,并消除PMA-后处理对VSOR Cl-通道的上调作用.结论:小鼠心室肌细胞VSOR Cl-通道激活主要依赖于内源性PKC活性,VSOR Cl-通道的PKC依赖性不受ClC-3的影响.     

动脉平滑肌细胞膜片制作及其大电导钙激活钾通道的特性

目的: 探讨人体小动脉平滑肌细胞膜片制作方法,观察其上大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activatedpotassium channels,BK_Ca)的特性。方法: 将新鲜分离出的人肠系膜动脉,分离出平滑肌层,经酶解得单个平滑肌细胞。取平滑肌细胞置于含对称性高钾(K+140 mmol/L)浴液中,用膜片钳技术记录其单通道电流,输入计算机进行数据采集与分析。观察动脉平滑肌细胞三种膜片的制作过程和BK_Ca的特性。结果: 在肠系膜动脉平滑肌细胞膜上分别形成了细胞贴附式、内面向外式、全细胞记录三种膜片。用膜片钳技术观察到急性酶分离的人体肠系膜动脉平滑肌细胞上BK_Ca通道具有钙敏感性:表现为胞内游离钙离子浓度增加,通道开放事件数目增加;电压依赖性:表现为随着膜电位的增加,通道开放事件数逐渐增加;电导值大:本实验的电导值为198.6±38.09 pS;应用TEA+为50 mmol/L时通道活动完全阻断。结论: 人体肠系膜动脉平滑肌细胞上BK_Ca通道具有钙敏感性、电压依赖性、大电导、TEA+敏感特性。     

大鼠胃粘膜壁细胞基底膜的氯离子通道

目的：研究大鼠胃粘膜壁细胞基底氯通道电流的电生理特性，调节因素及其在壁细胞生理活动中的作用。方法：全细胞膜片钳记录法；结果：壁细胞的基底膜上记录到一种非电压，非时间依赖性氯通道电流，当细胞外液氯离子浓度由１４２ｍｍｏｌ／Ｌ降为２０ｍｍｏｌ／Ｌ时，电流的反转电位发生相应偏移（由－１．２ｍＶ右移至３０ｍＶ），其阴离子选择性为Ｉ〉Ｂｒ〉Ｃｌ〉Ｆ，细胞外液ｐＨ值由７．４降至４．０时此电流幅度减小，抑制率在     

氯离子通道研究进展

氯离子是体内最重要最丰富的阴离子, 它进出细胞的过程, 除了与氯离子 相关的一些转运体主动转运外, 经过阴离子通道进行转运是重要方式之一。氯离子通道组织分布广泛,参与了众多的生理过程：包括细胞体积的调节、膜电位的稳定性调节、信号转导以及跨上皮运输等。文章重点综述了钙激活氯通道和容积调节氯通道的生理功能及分子基础,简单介绍了电压门控氯通道、囊性纤维跨膜电导转运体及配体门控氯通道。     

氯离子通道和药物靶标

氯离子通道的生物功能非常广泛,如参与上皮细胞内液体分泌、细胞容积调控等。氯离子通道突变可引起多种疾病,如囊性纤维化、黄斑部退化、肌强直等。氯离子通道调节剂的应用也非常广泛,其中γ氨基丁酸A（GABA_A）受体氯离子通道调节剂已在临床上使用,其他小分子调节剂正在临床前研究或临床试验阶段。本文主要讨论靶向氯离子通道药物的应用前景。     

钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展

作为钙离子激活的氯离子通道(CaCCs)分子基础的跨膜蛋白16A(TMEM16A)分布于人体多种组织器官中,对许多生理和病理过程具有重要意义.近年来,对TMEM16A在女性生殖系统中分布和作用的研究逐渐增多,比如参与子宫平滑肌的收缩、影响卵巢颗粒细胞雌激素的合成以及调节卵母细胞的形态等,这些都提示了TMEM16A在女性生殖系统中的生理重要性.现本文将就TMEM16A在女性生殖系统各方面的最新研究进展进行综述.     

兔冠状动脉结扎1h缺血区心肌细胞快钠通道电流的变化

目的探讨在急性心肌缺血时快钠通道电流的变化及其在室性心律失常发生中的作用。方法以开胸冠状动脉结扎法制备兔急性心肌缺血模型 ,1h后处死动物分离心室肌细胞 ,采用全细胞膜片钳记录技术观察缺血区心外膜心室肌细胞快钠通道电流 (sodiumcurrent,INa)的变化 ,以正常心肌INa为对照 ,同时设假手术对照组。结果急性冠状动脉结扎 1h兔缺血区心室肌细胞快钠电流受到抑制 ,电流密度 电压关系曲线上移 ,其峰值电流密度由对照组的 (- 4 5 .5 0± 5 .33) pA/ pF(n=1 2cells)下降为冠状动脉结扎后 1h组的 (- 2 0 .0 3± 4 .4 3) pA/ pF(n=1 0cells) ,峰值电流密度较对照组下降了 5 5 .98% (P <0 .0 0 1 ) ;其失活曲线左移 ,半数最大失活电位对照组为(- 76 .2± 5 .3)mV(n =1 0cells) ,冠状动脉结扎后 1h组为 (- 1 0 0 .0± 5 .6 )mV(n =6cells) ,与对照组比较显著减小 (P <0 .0 0 1 ) ,失活速度加快 ;冠状动脉结扎后 1h组INa恢复速度明显减慢 ,恢复时程延长 ,和对照组比较P <0 .0 0 1。结论冠状动脉结扎后 1h缺血区心室肌细胞快钠通道受抑制 ,细胞兴奋性及传导速度下降 ,可能为急性心肌梗死后室性心律失常发生的机制之一     

钙激活性氯离子通道抑制剂对肺动脉平滑肌作用的研究进展?

1 肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的钙激活性氯离子通道(CaCCs)与跨膜蛋白16A(TMEM16A)
　　肺血管张力维持需要 CaCCs 参与。人们对不同组织(包括肺动脉)中平滑肌细胞上 CaCCs 进行了广泛研究,发现其通道活性在维持肺血管张力中起着重要作用[1-2]。     

角膜氯离子通道的研究进展

氯离子参与生物体多种功能,如细胞免疫应答、细胞迁移、增生、分化和凋亡.这种功能的多样性是因为体内存在不同基因编码、不同种类的氯离子通道之故.有研究表明,氯通道的功能改变或缺失与多种角膜疾病有关,因此,角膜氯通道的研究也越来越受到重视.该文综述了近年来有关角膜氯通道在角膜各层细胞功能中的作用、特点等方面的研究进展,以期进一步探讨角膜疾病与离子通道功能异常之间的关系.     

大鼠心肌细胞急性分离方法

目的 探讨酶法分离大鼠心肌细胞过程中的各种影响因素，提高细胞成活率和膜片钳实验成功率。方法 采用Langendorff灌流，先用无钙液灌流7-8min，再用含胶原酶P0.1-0.3g/L的酶液灌流8-10min，剪下心室肌组织，KB液中用吸管吹打分散，过150μm筛网，放置6-7h后进行膜片钳实验。结果 在分离细胞过程中，注意控制水、酶、温度、pH、O2等各种影响因素，可得到横纹清晰、膜良好、长杆状的心肌细胞。结论 仔细调整和控制细胞分离过程中的影响因素可以保证心肌细胞成活的数量和质量，有利于膜片钳实验的顺利进行。     

Functional Characteristics and Molecular Identification of Swelling-activated Chloride Conductance in Adult Rabbit Heart Ventricles

Outwardly rectifying swelling-activated chloride conductance （ICl, Swell） in rabbit heart plays a critical role in cardioprotection following ischemic preconditioning （IP）. But the functional characterization and molecular basis of this chloride conductance in rabbit heart ventricular myocytes is not clear. Candidate chloride channel clones （e.g. ClC-2, ClC-3, ClC-4 and ClC-5） were determined using RT-PCR and Western blot analysis.Whole cell ICl,Swell was recorded from isolated rabbit ventricular myocytes using patch clamp techniques during hypo-osmotic stress. The inhibitory effects of 4,4＇ isothiocyanato-2,2-disulfonic acid （DIDS）, 5-nitro-2（3-phenylroylamino） benzoic acid （NPPB） and indanyloxyacetic acid 94 （LAA-94） on ICl,Swell were examined. The expected size of PCR products for ClC-2, ClC-3 and ClC-4 but not for ClC-5 was obtained. ClC-2 and ClC-3 expression was confirmed by automated fluorescent DNA sequencing. RT-PCR and Western blot showed that ClC-4 was expressed in abundance and ClC-2 was expressed at somewhat lower levels. The biological and pharmacological properties of ICl,Swell, including outward rectification, activation due to cell volume change, sensitivity to DIDS, LAA-94 and NPPB were identical to those known properties of ICl,Swell in exogenously expressed systems and other mammals hearts. It was concluded that ClC-3 or ClC-4 might be responsible for the outwardly rectifying part of ICl,Wwell and may be the molecular targets of cardioprotection associated with ischemic preconditioning or hypo-osmotic shock.     

氯通道阻断药对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响

目的 :观察氯通道阻断药 5 硝基 2 (3 苯丙胺 ) 苯甲酸 (NPPB)和他莫昔芬对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响。　方法 :采用急性分离的小鼠心室肌细胞 ,低渗溶液激活容积敏感性氯通道电流 ,膜片钳全细胞记录法记录电流。　结果 :低渗溶液激活一个明显具有外向整流特征的容积敏感性氯通道电流。NPPB能可逆性抑制该电流且对内外向电流的抑制率几乎相等〔外向抑制 (79.1± 2 .5 ) % ,内向抑制 (77.1± 2 .2 ) %〕。而他莫昔芬对该电流的抑制以外向电流占优势〔外向抑制 (75 .1± 1 .2 ) % ,内向抑制 (4 1 .2± 3.2 ) %〕。　结论 :小鼠心室肌细胞容积敏感性氯通道电流对NPPB和他莫昔芬十分敏感 ,且他莫昔芬的抑制作用具有电压依赖性     

Effect of temperature on the activation of myocardial KATP channel in guinea pig ventricular myocytes: a pilot study by whole cell patch clamp recording

Background The myocardial ATP sensitive potassium channel (K(ATP) channel) has been known for more than two decades, the properties of this channel have been intensively investigated, especially the myocardial protection effect by opening this channel. Numerous studies, including hypothermic, using K(ATP) agonists to achieve a hyperpolarizing cardioplegic arrest, have shown a better myocardial protection than potassium arrest. However, there is no evidence showing that K(ATP) channel could be opened by its agonists under profound hypothermia. We investigated the effect of temperature on activation of myocardial K(ATP) channel by nicorandil.Methods Isolated ventricular myocytes were obtained by collagenase digestion of the hearts of guinea pigs and stored in KB solution at 4&#730;C. With a steady ground current, the myocytes were perfused with 1 mmol/L nicorandil until a steady IK(ATP) occurred. Then the cells were perfused with 1 mmol/L nicorandil plus 1 &micro;mol/L glybenclamide. Currents signals were recorded on whole cells using patch clamp technique at several temperatures. The temperature of the bath solution around myocytes was monitored and was controlled at 4&#730;C, 10&#730;C, 20&#730;C, 25&#730;C and 35&#730;C respectively. About 10 cells were tested at each temperature, the cells were considered useful only when the outward current could be induced by nicorandil and blocked by glybenclamide. All data were analyzed using Graphpad PRISM 3.0 (Graphpad, San Diego, CA, USA). Nonlinear curve fitting was done in Clampfit (Axon) or Sigmaplot (SPSS). Results At 4&#730;C, 10&#730;C, 20&#730;C, 25&#730;C and 35&#730;C, the time needed to open the myocardial K(ATP) channel was (81.0±0) minutes, (50.5±11.7) minutes, (28.8±2.3) minutes, (9.4±10.2) minutes and (2.3±1.0) minutes respectively (P=0.003). The linear relationship between temperature and time needed to open the channel was y (min) = (4348.790－124.277x)/60, where y (min) is time needed to open K(ATP) channel, x is temperature, correlation coefficient r =－0.942 (P=0.00), regression coefficient b =－124.277 (P=0.00). The current densities among different temperatures were statistically different (P=0.022), the current density was greater after the activation of K(ATP) channel at higher temperatures. The lower the temperature, the fewer cells in which K(ATP) channels could be opened. At 4&#730;C, only one cell in which the K(ATP) channel could be opened, took a quite long time (81 minutes) and the I-V curve was quite untypical.Conclusions K(ATP) channel activated by nicorandil is temperature dependent and the temperature linearly related to time needed to open K(ATP) channel; the lower the temperature, the longer the time needed to open channel and the smaller the current density. At profound hypothermia, it is difficult to activate K(ATP) channels.     

厄贝沙坦电生理作用的实验研究

目的:研究厄贝沙坦(Irbesartan)对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响.方法:应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位.结果:①厄贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L,10,100和1000 nmol/L的厄贝沙坦分别使ICa-L密度 (pA/pF)从 (-9.8±1.1)减少到(-6.7±0.9),(-4.2±0.8)和(-2.1±0.4)(n=5,P<0.05或P<0.01).②厄贝沙坦可使ICa-L I-V曲线上移,但不改变其激活的电压依赖性和反转电位.③厄贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L.④厄贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响,但可使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性失活,对照组V1/2和κ值分别为(-30±5)mV,(8.2±0.7),厄贝沙坦组为(-39±7) mV,(11.6±1.3)(n=5,P均<0.05).⑤厄贝沙坦100 nmol/L使ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)从对照组(62.5±2.3) ms延长至(126.4±2.6) ms(P<0.01).⑥厄贝沙坦对IK1和INa无明显影响.⑦厄贝沙坦(100 nmol/L)可使单个心室肌细胞动作电位时程(APD30,APD50,APD90)从(106±10),(125±16),(178±23)ms缩短至(82±16),(99±6),(122±18) ms(n=5,P<0.05),对静息电位、动作电位幅度无影响. 结论:厄贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L.     

pIRES2-EGFP-hVEGF165真核表达载体的构建及在心肌细胞内的表达

目的：构建plRES2-EGFP-hVEGF165真核表达质粒并在心肌细胞内表达．方法：应用限制性内切酶将目的片段VEGFl65克隆入含有增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒plRES2-EGFP中．转染心肌细胞后，应用荧光显微镜检测EGFP的表达，以免疫组化法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在体及离体表达．结果：构建了真核共表达载体plRES2-EGFP-hVEGF165．转染心肌细胞后，荧光显微镜观察可见EGFP的表达，免疫组化染色证实细胞内有VEGF的表达．结论：外源性hVEGF165基因可在心肌细胞内稳定表达．     

人心房肌Kv1.5钾通道稳定表达细胞系的建立

目的:建立稳定表达人心房肌细胞Kv1.5钾通道的细胞系. 方法:将编码人心房Kv1.5钾通道的hKv1.5基因转染HEK 293细胞,用1 g/L G418筛选2 wk后采用膜片钳方法筛选具有抗G418抗性的细胞克隆,电流记录模式为全细胞记录. 结果:hKv1.5通道基因被成功转入HEK 293细胞并稳定表达;稳定表达的hKv1.5电流是具有明显电压依赖性和超快激活特点的外向电流,其电流大小为(3.20±0.60)nA,其激活电压在-30 mV左右. 结论:成功构建稳定表达人心房Kv1.5钾通道蛋白的HEK 293细胞系,其电流特性与人心房肌IKur相似,可以作为体外研究人心房IKur的细胞模型.     

bcl-xL纳米微粒的制备及其对大鼠心肌细胞的高效转染

目的:制备包载含人类抗凋亡基因bcl-xL的纳米微粒,评价其转染大鼠心肌细胞的能力. 方法:用超声双乳化蒸发法制备包载bcl-xL的纳米微粒,扫描电镜观察纳米的形态和大小,DNase I消化酶试验检测其抗核酸酶能力;转染体外培养的大鼠心肌细胞后RT-PCR和Western-blot法检测基因表达. 结果:制备的纳米微粒直径约200～260 nm,包封完好,性能稳定并对基因有缓释作用;转染1 wk后bcl-xL表达高于对照组(P<0.05). 结论:成功制备包载真核表达质粒的纳米微粒,并能够高效转染大鼠心肌细胞. 纳米微粒是心肌细胞转染较理想的基因载体之一.     

Electrical remodeling of membrane ionic channels of hypertrophied ventricular myocytes from spontaneously hypertensive rats

Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｅｍｂｒａｎｅｉｏｎｉｃｃｈａｎｎｅｌｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｉｎｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｄｉｓｐｅｒｓｅｄｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ (ＳＨＲｓ)ｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｍｙｏｃｙｔｅｓｕｓｉｎｇｔｈｅｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｏｆｐａｔｃｈ ｃｌａｍｐｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ,ｗｉｔｈｎｏｒｍａｌＷｉｓｔａｒｒａｔｓｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｍｙｏｃｙｔｅｓａｓｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｗｅｏｂｓｅｒｖｅｄｄｅｐｏｌａｒｉｚｉｎｇｃｕｒｒ…     

Effect of Radiofrequency Catheter Ablation on Calcium Channel of Ventricular Myocytes

（王扬淦）（陆再英）（赵华月）（唐明）（刘庆华）ＥｆｆｅｃｔｏｆＲａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙＣａｔｈｅｔｅｒＡｂｌａｔｉｏｎｏｎＣａｌｃｉｕｍＣｈａｎｎｅｌｏｆＶｅｎｔｒｉｃｕｌａｒＭｙｏｃｙｔｅｓ￥ＷＡＮＧＹａｎｇ－ｇａｎ；ＬＵＺａｉ－ｙｉｎｇ；Ｚ...