siRNA抑制肝炎病毒研究进展

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种新的基因沉默技术，由于这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默（PTGS）。这种机制广泛存在于从酵母到哺乳动物的细胞中。由于其具有高度特异性和高效性，已经广泛应用于植物、直菌、蠕虫和低等脊椎动物以及哺乳动物的基因功能研究，并且在人类基因组功能研究、基因药物研制及基因治疗等方面有很好的应用前景。本文就RNAi在抑制肝炎病毒方面的研究进展进行综述。[第一段]     

RNA干扰现象阻止丙型肝炎病毒基因表达和复制

1995年,康奈尔大学的Su Guo博士在用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都能阻断基因的表达.1998年,Andrew的研究证明:在正义RNA阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA.这些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi,也译作RNA干预或者干涉).它是体内抵御外在感染的一种重要保护机制.这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的.随后的研究中发现,RNAi现象广泛存在于植物、原生动物、昆虫、线虫和哺乳动物中[1].RNAi的最主要作用是可以特异性地使特定的基因沉默,从而起到控制细胞的各种高级生命活动.这为各种疾病如病毒病和肿瘤等的防治打开了一条全新的途径.由于RNAi的重要意义和近年来不断取得研究进展,<科学>杂志在2001年将其列为十大科学成就之一,2002年又将其列为当年十大科学成就之首.同时<自然>杂志也将小干扰RNA(small interfering RNAs,siRNA),评为2002年重大科技成果之一.     

RNA干扰技术在哺乳动物中的应用

RNA干扰(RNA interfe rence RNAi)是由小干涉RNAs介导的转录后基因沉默,能引起序列特异性的mRNA降解,广泛存在于生物体中。本文介绍了RNAi的作用机制,小干涉RNA(small interference RNA siRNA)的制备以及RNAi技术在哺乳动物中的应用,在基因功能研究、基因治疗方面显示出巨大的前景。但作为一种新型的基因阻断方法,由于我们对RNAi的机制尚不完全明了,RNAi 技术的应用在方法学等方面尚有许多亟待改进之处。     

RNAi技术及其基因治疗

RNA干扰(RNAinterference ,RNAi)是Fire和Mello创建的新名词[1] ,是指将双链RNA(dsRNA)导入细胞,其序列与靶基因同源,它在细胞内可与靶基因mRNA结合,并迅速将其降解,从而抑制该基因的表达的过程,在真核生物中,RNAi在进化过程中是保守的。RNAi被认为能介导外源RNA的降解和隐蔽重     

靶向STAT3基因的RNAi慢病毒载体的构建及在胰腺癌细胞中的表达

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指生物体内由双链RNA介导同源序列mRNA的特异性降解,从而导致基因沉默的现象[1].通过合适的载体将RNA干扰片段转入目的细胞,可以有效地抑制功能基因的表达.     

RNA干扰在肝病治疗研究中的进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是见于生物体内的一种在与靶基因序列同源的双链RNA(dsRNA)介导下发生序列特异性靶基因沉默的细胞过程。其本质就是dsRNA先被裂解成2Int的小分子干扰RNA(short interfering RNA,siRNA),再由siRNA与特定的mRNA结合,使靶RNA降解,从而阻止mRNA的表达。RNAi最早是在1998年由Fire等首     

RNA干扰抗肝炎病毒治疗的希望与发展方向

RNA干扰(RNAi)是由小双链RNA有效地作用于同源RNA序列，经细胞内核酸酶作用使同源序列降解的过程。虽然最初的研究是观察其对细胞基因的下调作用，近来的一些研究表明RNAi在抗肝炎病毒等人类和动物病毒中也同样有效，所以RNAi有可能发展成为一个新的抗肝炎病毒治疗的方法。     

RNA干扰在疾病治疗中的研究及应用进展

RNA干扰(RNAi)是指由双链RNA(dsRNA)所诱发的转录后水平上的基因沉默.RNAi通过小干扰RNA(siRNA)、重复相关siRNA(rasiRNA)和微小RNA(miRNA)而产生.由于RNAi对靶基因沉默作用的高度特异性和高效性,因此近年来RNAi用于肿瘤性疾病、感染性疾病、神经系统疾病等疾病的治疗研究是一个热点.虽然目前已有部分RNAi药物进入临床试验阶段,但是绝大部分的研究尚处于实验阶段,RNAi在临床上的实际应用尚需时日.     

小干扰RNA表达质粒载体的构建及其抗乙型肝炎病毒效应

近年研究表明,一些小的双链RNA可以高效特异地阻断体内基因表达,促进RNA降解,在细胞内发挥基因敲除作用,这种现象被称为RNA干扰(RNAi)[1]。RNAi技术已被广泛应用于治疗病毒、癌症等疾病的研究。本研究旨在探讨RNAi技术抗HBV的可行性,从而为RNAi治疗乙型肝炎提供实验基础。一、材料与方法1.细胞株和质粒:含H1启动子的转录载体pSilencer31H1hygro质粒购于Ambion公司,HepG2215细胞由本室引进并保存。2.主要试剂:T4DNA连接酶、T4磷酸激酶、SalⅠ(大连宝生物公司产品);脂质体转染试剂Metafectene(德国Biontex公司产品);HBsA…     

RNA干扰技术及其在血液疾病研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是一种双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)触发的,在进化上高度保守的序列特异性转录后基因沉默机制(Post-Transcrip-tional Gene Silencing,PTGS)。自1998年Fire等[1]发现并明确提出“dsRNA介导的RNA干扰”概念后,由此衍生而来的RNA干扰技     

c-met siRNA转染对食管鳞癌细胞生物学特性的影响

[目的]讨论c-Met在食管鳞癌中的表达;构建针对人c-met基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,观察其对高侵袭性食管鳞癌细胞c-met基因的沉默效应以及对细胞生物学行为的影响。[方法]培养食管鳞癌CE81T-4细胞株,构建c-met基因的RNAi慢病毒载体,用荧光定量RT-PCR与Western blotting检测其对c-met的干扰效率,用裸鼠移植瘤模型评估RNA干扰后细胞成瘤能力的影响,用裸鼠皮下食管肿瘤生长曲线、肿瘤组织的苏木精-伊红染色及Western blotting验证c-met表达情况。[结果]成功构建c-met基因的RNAi慢病毒载体,qRT-PCR与Western blotting实验显示其对食管鳞癌CE81T-4细胞c-met mRNA及蛋白的表达的抑制均较明显,裸鼠移植瘤实验显示RNA干扰后细胞的成瘤能力降低,裸鼠皮下食管肿瘤生长曲线、肿瘤组织的苏木精-伊红染色、Western blotting实验显示裸鼠移植瘤体内c-met的表达抑制较明显。[结论]c-metRNAi慢病毒载体能够抑制食管鳞癌CE81T-4细胞的侵袭及成瘤能力。     

RNAi在心血管疾病中的应用研究

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默.随着RNAi机制的深入研究与广泛应用,目前该技术应用于心血管疾病研究,在阐明心室或血管重塑、高血压病、心衰等发病机制的同时,也为心血管疾病的基因治疗提供了新策略.     

基因组学研究的革命性工具--小分子RNA研究进展(一)

RNA是生物体内最重要的物质基础之一.最近的一系列研究表明,小分子RNA(microRNA,miRNA)实际上操纵着许多细胞的功能,它可以通过互补序列的结合反作用于DNA,从而关闭或调节基因的表达,甚至可以通过指导基因的开关来调控细胞的发育时钟[1].miRNA的作用与应用研究于2000年以后连续四年被美国Science杂志评选为年度10大科技成就,2003年更是名列前茅.其核心技术RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能、基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因治疗开辟了新的途径.这些发现颠覆了以往人们对于RNA只是DNA"转录信使"的认识,促使生物学家重新思考他们对细胞及进化的理解和认识.     

RNA干扰与高血压

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默.本文简述了RNAi在高血压中的应用.     

RPS12基因表达下调对胃癌细胞生物学特性影响的研究

[目的]初步探讨RPS12基因对于胃癌细胞生长、增殖,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等影响。[方法]RPS12基因特异的RNA抗体(RNAi)载体通过脂质体介导法转染RPS12基因高表达MKN45细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT-PCR法及Western-blot法证实。而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验法等方法分析稳定转染株相关生物学特性的变化,每种检测实验均设立RNAi载体转染细胞实验组、点突变对照组、MKN45细胞空白对照组。[结果]稳定转染的RPS12基因RNAi细胞系经过免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western-blot法证实,表达抑制率可达68%左右。与对照组细胞相比,实验组细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P0.05);各对照组之间无显著差异,流式细胞仪检测细胞周期显示实验组G2-M期比例显著低于对照组,S期比例显著高于对照组(P0.05),实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05)。平板克隆形成实验结果显示RPS12RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组(P0.05);细胞迁徙实验结果提示实验组穿膜率与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。[结论]RPS12基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,降低RPS12基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。     

应用RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制和表达

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)引发的序列特异性基因沉默机制。在这一转录后基因沉默(PTGS)过程中,与双链RNA有同源序列的单链RNA(如mRNA)被降解,从而阻断基因表达。RNAi过程的关键是由双链RNA     

RNA干扰技术在寄生虫作用机制及抗药性研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是普遍存在于植物、真菌以及动物等真核生物中的一种自身防御反应,可以在线虫和植物体内传播[1]。自从1998年Fire和Mello[2]描述了秀丽隐杆线虫的RNAi现象至今,RNAi技术已经得到了突飞猛进的发展,为我们提供了应用反向遗传学来探索基因功能的方法[3]。人类生存环境中的医学原虫、医学蠕虫等寄生虫对人和动物的生命与健康产生了极大的威胁。由于缺乏相应的疫苗,抗寄生虫药便成为了     

表皮生长因子受体靶向的RNA干扰在肺癌治疗中的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发现的一种由于mRNA被降解或者翻译沉默而引起的基因沉默的现象,并成为一种常用的研究基因功能、寻找医学顽症如肿瘤治疗方法的实验室技术.表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在很多人类恶性肿瘤中过度表达,且EGFR信号通路启动后可促进细胞增殖、转移、血管生成以及阻断细胞凋亡,因此被作为开发肿瘤治疗方法的新靶点.本文就RNAi的研究现状及EGFR靶向的RNAi在肺癌治疗中的研究进展作一综述.     

siRNA在实验性急性肝衰竭中的治疗作用研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指导入特异性针对目标基因的同源双链RNA,引起目标基因的不表达或减效表达.小干扰RNA(small interfering RNA或shortinterfering RNA,siRNA)是RNAi发挥作用的重要中间效应分子[1].siRNA具有潜在的临床治疗应用前景,目前至少有5种siRNA药物已进入临床试验[2].