地塞米松对兔髓核细胞增殖及聚集蛋白聚糖表达的影响

目的 观察地塞米松对兔椎间盘髓核细胞增殖的影响,以及对髓核细胞分泌聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的影响.方法 无菌条件下取兔椎间盘,常规分离消化髓核细胞进行培养;传代培养第2代髓核细胞7 d,随机分为两组,实验组给于1～10000 nmol/L地塞米松进行培养,对照组不给于地塞米松,分别培养不同的时间段.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测地塞米松对兔髓核细胞增殖的影响;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测地塞米松对兔髓核细胞内Aggrecan mRNA表达的影响.结果 MTT检测结果表明地塞米松对兔髓核细胞增殖有促进作用,最佳作用浓度为100nmol/L,最佳作用时间为48 h;RT-PCR检测结果表明经地塞米松处理的髓核细胞其Aggrecan表达明显较对照组高,是对照组的2.04倍(0.92/0.45),差异有统计学意义(P<0.05).结论 地塞米松可促进兔椎间盘髓核细胞的增殖,并可使兔髓核细胞内Aggrecan表达增高.     

羧甲基壳聚糖对体外培养大鼠椎间盘髓核细胞增殖、细胞周期及细胞外基质分泌的影响

目的 观察羧甲基壳聚糖(CMCS)对体外培养大鼠椎间盘髓核细胞细胞周期进程、细胞周期蛋白表达及分泌细胞外基质的影响.方法 使用酶消化法提取大鼠椎间盘髓核细胞并进行体外培养,Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞.将髓核细胞分为:对照组、不同浓度CMCS处理组(100、200、500 mg/L),作用24 h后通过碘化丙锭(PI)染色流式细胞技术检测细胞周期进程.通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对髓核细胞内增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白(Cyclin)D表达的影响,并通过FQ-PCR法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对髓核细胞分泌细胞外基质Ⅱ型胶原的影响.结果 培养的细胞经Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定显示其表达阳性,表明为髓核细胞;通过FQ-PCR及Western blot检测增殖相关蛋白PCNA可见通过100、200、500 mg/L CMCS作用后髓核细胞表达PCNA与对照组比较分别增加12.3％、18.2％、54.2％与25.1％、52.7％、66.9％ (P ＜0.05);经流式细胞仪检测发现经100、200、500 mg/L CMCS处理的髓核细胞处于S期细胞比例是对照组的1.58、2.34与2.61倍(P＜0.05);Cyclin D表达分别是对照组的1.26、2.15、2.64倍与1.53、1.69、1.83倍(P ＜0.05);FQ-PCR及Western blot检测结果表明100、200、500 mg/L CMCS分别促进髓核细胞分泌Ⅱ型胶原表达是对照组的1.67、2.24、2.79倍与1.48、1.65、1.77倍(P＜0.05).结论 CMCS对体外培养髓核细胞增殖相关蛋白PCNA表达具有促进作用,可促进细胞周期进程及细胞周期蛋白表达,对髓核细胞分泌细胞外基质具有促进作用.     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及c-fos、c-jun、CREB和PCNA表达的影响

目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对许旺细胞(Sc)的增殖作用,并探讨其对Sc c-fos、c-jun、CREB及PCNA表达的影响.方法 体外原代培养、纯化及鉴定Sc;行无血清培养细胞周期同步化,应用不同浓度PQQ(0、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L)作用sc 72 h;流式细胞仪检测细胞周期比例;RT-PCR检测c-fos、c-jun、CREB的mRNA含量;Western blot技术检测PCNA蛋白表达.结果 PQQ处理组表现为G0/G1期细胞比例减少,S期和G2/M期细胞所占比例增加;100 nmol/L PQQ可使c-fos、c-jun、CREB mRNA含量分别增加0.33、0.42和0.52倍(P＜0.05);PQQ浓度为1 000 nmol/L时,上述因子mRNA含量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);PQQ浓度为10 000 nmol/L时,上述因子mRNA的含量均降低(P＜0.05);PQQ浓度在1～100 nmol/L时,PCNA蛋白表达上调,且当PQQ浓度为100 nmol/L时PCNA蛋白上调效果最为明显,与对照组比较增加了1.17倍(P＜0.05);当PQQ浓度为1000 nmol/L时PCNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);当PQQ浓度为10 000 nmol/L时PCNA表达降低(P＜0.05).结论 10～100 nmol/L PQQ可促进Sc增殖,且c-fos、c-jun、CREB、PCNA在PQQ促Sc增殖过程中表达上调.

Abstract：

Objective To investigate the effects of pyrroloquinoline quinine ( PQQ ) on proliferation and expression of c-fos, c-jun, CREB and PCNA in cultured Schwann cells. Methods Schwann cells were cultured and purified in vitro. The purity of Schwann cells was identified by immunofluorescence of S-100. After synchronization of cell cycle by serum-free medium, different concentration of PQQ(0,1,10,100,1 000,10 000 nmol/L ) were added into culture medium for 72 h. Flow cytometry was used to determine cell cycle. The content of c-fos, c-jun, and CREB mRNA were detected by RT-PCR, and the expression of PCNA protein was detected by Western blot. Results After PQQ treatment, the percentage of cells in G0/G1 phase decreased and the percentage of cells in S and G2/M phase increased. After treated by PQQ at concentration of 1-10 000nmol/L, content of c-fos,c-jun, CREB mRNA was increased by 0. 33 , 0. 42 and 0. 52 fold (P＜0. 05 ) . However, at concentration of 1 000 nmo1/L, there was no difference in mRNAs content when compare to control(P ＞0. 05). And it showed a decline at concentration of 10 000 nmol/L(P＜0. 05). PCNA protein expression was up-regulated at PQQ concentration of 1-100 nmol/L. At 100 nmol/L, the expression increased by 1.17 fold (P＜ 0. 05 ) ; However, at 1 000 nmol/L, there was no difference in PCNA expression when compared to control. And 10 000 nmol/L of PQQ inhibited the expression of PCNA (P＜0. 05). Conclusions When treated with PQQ at concentration of 10-100 nmol/L, the proliferation of Schwann cells increased and the expression of c-fos,c-jun,CREB and PCNA was up-regulated.     

TGF-β3修饰退变髓核细胞移植修复兔退变椎间盘的效果观察

目的探讨TGF-β3基因修饰后退变髓核细胞生物学效应以及植入兔退变椎间盘后对退变椎间盘的影响。方法将重组腺病毒载体Ad-TGF-β3与第2代退变髓核细胞按10∶1比例混合培养转染(Ad-TGF-β3组),待细胞融合后传代,MTT检测转染细胞增殖活性,Western blot检测TGF-β3蛋白含量,免疫细胞化学染色观察对数生长期转染细胞Ⅱ型胶原染色阳性率;采用病毒空载体转染髓核细胞(Adv组)和未经转染髓核细胞(空白组)作为对照。取30只新西兰兔,体重3.2～3.5 kg,雌雄不限,通过针刺L3、4、L4、5和L5、6椎间盘制备椎间盘退变模型。将实验动物按照随机数字法分为3组,转染细胞组(A组,n=12)、退变细胞组(B组,n=12)和空白对照组(C组,n=6)。A、B组将100μL浓度为1×105个/mL对应细胞悬液注射入退变椎间盘,C组同法注入等量PBS。注射后6、10、14周取A、B组各4只、C组2只实验动物处死,取L3、4、L4、5和L5、6椎间盘行组织学观察,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达。结果 Ad-TGF-β3转染后髓核细胞活性明显改善;转染后3、7、14 d,TGF-β3在髓核细胞内表达逐渐升高;Ad-TGF-β3组髓核细胞细胞质内见棕黄色Ⅱ型胶原阳性染色,阳性率显著高于Adv组及空白组(P<0.05)。组织学观察示,A组椎间盘退变程度较B、C组明显减轻。6、10、14周A组Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达显著高于B、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β3基因修饰退变髓核细胞后可明显改善细胞生物活性,转染后髓核细胞植入兔体内可明显增加退变椎间盘的基质分泌。     

SOX9基因真核表达载体转染诱导BMSCs分化为类髓核细胞

目的椎间盘退行性变的生物学治疗方法是骨科学研究热点,寻找一种有效诱导BMSCs向椎间盘细胞分化的方法成为应用细胞移植治疗椎间盘退变的必要前提。探讨重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9 Flag体外转染诱导兔BMSCs向类髓核细胞分化的影响。方法构建真核表达载体pcDNA3.1IE-SOX9 Flag。取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨细胞分化并鉴定;流式细胞仪检测细胞表面标记。将第3代BMSCs随机分为转染组、阴性对照组和空白对照组。转染组转染pcDNA3.1IE-SOX9Flag重组质粒,阴性对照组转染质粒pcDNA3.1,空白对照组不转染任何质粒。将构建好的重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag转染第3代BMSCs,72h后加入浓度为500mg/L的G418筛选7d后,改为浓度200mg/L的G418维持筛选压力并培养转染细胞。取各组BMSCs采用RT-PCR检测SOX9和Ⅱ型胶原基因(Col2al)的mRNA表达,Western blot检测SOX9蛋白的表达,免疫组织化学染色观察Ⅱ型胶原的表达。结果 BMSCs成骨诱导7d后ALP染色呈阳性;CD44表达阳性,CD34和CD45表达阴性。成功构建了真核表达载体pcDNA3.1IE-SOX9Flag。将重组质粒转染兔BMSCs,72h后转染效率为34.32%±1.75%;转染2周后BMSCs形态改变,呈多角形或椭圆形,细胞体积增大,增殖速度减缓,与椎间盘髓核细胞生长特点十分接近。RT-PCR鉴定发现转染组细胞SOX9 mRNA和Col2al mRNA表达阳性,对照组均为阴性。Westernblot检测发现转染组SOX9基因蛋白表达阳性,对照组未见表达。转染组BMSCs的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性。结论 SOX9基因真核表达载体成功转染兔BMSCs,被转染的干细胞向类髓核细胞分化,为进一步研究应用BMSCs移植治疗椎间盘退行性变奠定了理论基础。     

高浓度抗生素溶液对椎间盘细胞影响的研究

[目的]检测高浓度的头孢唑林钠及克林霉素对兔腰椎间盘髓核细胞活力及增殖能力的影响.[方法]通过在体外分离、培养新西兰兔髓核细胞,体外扩增培养至第1代,采用CCK-8及RT-PCR等方法,检测4个浓度(0 mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1 mg/ml)的头孢唑啉钠及克林霉素对于兔腰椎间盘髓核细胞活力及增殖能力的影响.[结果]当头孢唑啉钠浓度超过0.5mg/ml、克林霉素浓度超过0.25 mg/ml时,髓核细胞Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达下降,浓度在1.0 mg/ml时达到最低.头孢唑啉钠浓度超过0.5 mg/ml、克林霉素浓度超过0.25 mg/ml时,明显影响细胞活力,小于以上浓度时细胞活性无明显影响.[结论]高浓度的头孢唑林钠及克林霉素抗生素对于体外培养的兔髓核细胞的活力、增殖能力具有抑制作用.     

吡咯喹啉醌对雪旺细胞增殖及NF-κB表达的影响

[目的]观察吡咯喹啉醌对雪旺细胞的增殖作用及其对体外培养雪旺细胞NF-κB表达的影响.[方法]新生鼠雪旺细胞体外原代培养及纯化,S-100免疫荧光标记鉴定雪旺细胞,设实验组与对照组,实验组吡咯喹啉醌的浓度为100 nmol/L;加药72 h后提取总mRNA及总蛋白进行RT-PCR和Western blot分析.[结果]采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB的表达,结果均表明实验组表达较对照组高(P<0.05).[结论]吡咯喹啉醌可促进雪旺细胞增殖,NF-κB上调在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中起作用.     

辛伐他汀对兔髓核细胞的影响

目的 观察辛伐他汀对兔髓核细胞Ⅱ型胶原(ColⅡ)及聚集蛋白聚糖(Agg)表达的影响.方法 取兔髓核细胞进行原代培养,传至第3代行ColⅡ免疫组织化学鉴定后随机分为5组,以不同浓度辛伐他汀处理:A组:空白对照组;B、C、D、E组分别为0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L辛伐他汀组.运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ColⅡ、Agg含量的变化,并行细胞活力检测.结果 辛伐他汀浓度超过0.2 μmol/L时ColⅡ及Agg的表达增加,0.4 μmoL/L时达到高峰(P＜0.05),0.8 μmol/L时ColⅡ及Agg表达下降.0.8 μmol/L处理组影响细胞活力,0.1～0.4 μmol/L范围时细胞活性无明显影响(P＜0.05).结论 辛伐他汀可促进兔髓核细胞ColⅡ及Agg的表达,改善椎间盘退变进程;在＜0.4 μmol/L的较低浓度内对细胞活力无明显影响.     

重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7转染犬髓核细胞及其对髓核细胞表型的影响

目的:观察重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7(recombinant adeno-associated virus-2expressinghuman bone morphogenetic protein-7,rAAV2-hBMP7)转染犬髓核细胞情况及其对细胞表型的影响。方法:用1岁龄Beagle犬L4/5椎间盘髓核进行髓核细胞体外培养,取第2代髓核细胞进行实验,实验组以rAAV2-hBMP7(1×105v.g/细胞)转染髓核细胞,对照组以重组2型腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinantadeno-associated virus-2expressing enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染髓核细胞。在转染后4d、7d和14d以PCR检测髓核细胞中hBMP7的mRNA表达,在转染后7d和14d以Western blot法检测髓核细胞中hBMP7蛋白表达。在转染后4d、7d和14d采用RT-PCR法检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的mRNA含量,采用二甲基蓝及ELISA法分别检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白含量。结果:实验组髓核细胞表达hBMP7 mRNA及蛋白,并于转染后7d时表达量最高,而对照组无表达。实验组髓核细胞蛋白多糖mRNA及蛋白含量在转染后7d和14d时较4d时明显增高,14d时较7d时亦明显升高(P0.05),对照组各时间点无统计学差异(P0.05);4d时实验组与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P0.05)。同组各时间点Ⅰ型胶原mRNA及蛋白含量均无统计学差异,两组各时间点间比较无统计学差异(P0.05)。实验组髓核细胞Ⅱ型胶原mRNA及蛋白含量在转染后7d和14d时较4d时明显增高,14d时较7d亦明显升高(P0.05),对照组各时间点无统计学差异(P0.05);实验组4d时与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P0.05)。结论:rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞后能表达hBMP7蛋白,并能提高其蛋白多糖及Ⅱ型胶原含量。     

兔不同节段椎间盘髓核细胞培养特性的比较

目的:探讨兔颈段、胸段及腰段椎间盘髓核细胞的培养特性.方法:3～4月龄兔10只,麻醉后,在无菌条件下手术分离整段脊柱,分别取颈段(C1/2～C7/T1)、胸段(T1/2～T1/L1)、腰段(L1/2～L7/S1)髓核细胞进行培养,于培养后的24h计算贴壁率.并于贴壁后的第3、7、14及21天计算细胞死亡/成活比,判断细胞活力并检测蛋白多糖的含量.结果:颈段、胸段、腰段细胞贴壁率差异具有显著性,腰段细胞贴壁牢最高(P<.01).不同节段之间,在多个时间点观察髓核细胞死亡/存活比差异具有显著性,腰段椎间盘髓核细胞的死亡/成活比最低(P<0.01).不同节段之间,不同时间点观察的蛋白多糖含量差异具有显著性,且腰段椎间盘髓核细胞的蛋白多糖含量最高(P<.01).结论:腰段椎间盘髓核细胞较颈段及胸段的髓核细胞生长状态好,兔腰椎髓核细胞更适宜作为细胞培养的种子细胞.     

INI1基因对胃癌细胞增殖活性的影响及其机制

目的 通过改变INI1基因表达水平探讨INI1对胃癌细胞增殖活性影响的分子机制.方法 荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测15例胃癌及癌旁组织INI1 基因mRNA和蛋白质的表达水平;将INI1-GFP真核表达质粒及INI1特异性小干扰RNA(INI1-siRNA)分别转染人胃癌SGC7901细胞株,Western blot方法检测过表达及下调表达INI1的效率;噻唑蓝(MTT)比色法检测过表达及下调表达INI1后SGC7901细胞的增殖活性的改变,荧光定量RT-PCR及Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达改变.结果 临床胃癌组织中INI1蛋白及mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.01);INI1-GFP转染S1GC7901细胞可明显增加INI1表达水平,同时降低细胞增殖活性(P值均＜0.01);而INI1-siRNA转染可明显降低INI1表达水平,同时增加SGC7901细胞增殖活性(P值均＜0.01);上调INI1表达可抑制PCNA表达水平,而下调INI1表达则增加PCNA的表达(P值均＜0.01).结论 INI1具有抑制胃癌细胞增殖的作用,此作用与其负向调节PCNA表达有关.     

吡咯喹啉醌对体外培养雪旺细胞增殖及Cyclin E基因表达的影响

目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对体外培养的大鼠坐骨神经雪旺细胞(Sc)增殖的影响,寻找PQQ促进Sc体外高效扩增的最佳效应浓度,并探讨其促进Sc增殖的作用机制.方法 取SD鼠婴坐骨神经体外培养Sc,应用免疫荧光技术鉴定Sc的纯度,采用噻唑蓝(MTT)比色分析法选择PQQ促进Sc增殖的最佳效应浓度,设6个浓度梯度(1、10、102、103、104、105nmol/L),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PQQ对雪旺细胞Cyclin E基因表达的影响.结果 PQQ浓度为1、10、1×102、1×103nmol/L时能促进雪旺细胞的增殖,以浓度为1×102nmol/L时促进作用最明显,PQQ浓度为1×104nmol/L时与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而PQQ浓度为1×105nmol/L对SC具有一定的抑制作用;RT-PCR法显示与对照组比较PQQ浓度为1×102nmol/L时能促进雪旺细胞Cyclin E基因的表达.结论 适宜浓度的PQQ能促进Sc的增殖,其机制可能与其促进Sc中Cyclin E基因的表达有关.     

内皮素-1对高糖溶液培养下肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨内皮素-1对高糖溶液培养肾小管上皮细胞转分化的影响和可能的机制.方法 采用甲基噻唑法检测0.1～1 000 nmol/L内皮素-1对肾小管上皮细胞增殖的影响.采用无小牛血清的低糖DMEM培养基（一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基）同步化肾小管上皮细胞24 h,分为4组,分别采用低糖DMEM、高糖DMEM、高糖DMEM加100 nmol/L内皮素-1、高糖DMEM加100 nmol/L内皮素-1和转化生长因子-β1中和抗体培养肾小管上皮细胞.分别检测肾小管上皮细胞内转化生长因子-β1、α-平滑肌肌动蛋白和E-钙黏蛋白mRNA和蛋白的表达.结果 0.1～1 000nmol/L内皮素-1对肾小管上皮细胞增殖无明显影响,内皮素-1明显上调大鼠近端肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA和蛋白表达,下调E-钙黏蛋白mRNA和蛋白的表达;内皮素-1明显升高大鼠近端肾小管上皮细胞转化生长因子-β1 mRNA和蛋白的表达;转化生长因子-β1中和抗体干预后,大鼠近端肾小管上皮细胞表达的E-钙黏蛋白和mRNA明显高于内皮素-1组,而α-平滑肌肌动蛋白和mRNA明显低于内皮素-1组.结论 糖尿病肾脏病中,内皮素-1可促进肾小管上皮向肌成纤维细胞及间质细胞转分化,可能通过转化生长因子-β1发挥作用.     

5,7,4′-三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期的影响

目的 观察5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞周期的影响,探讨5,7,4′-三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的机制.方法 分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入25、50、100 μmol/L浓度的5,7,4′-三羟基异黄酮共培养48 h,免疫细胞化学法观察成纤维细胞PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 各组5,7,4′-三羟基异黄酮作用后细胞PCNA的表达均降低(P＜0.05),50 μmol/L及100 μmol/L浓度组的抑制作用最为显著(P＜0.01);随药物浓度的增加,G0～G1期细胞比例逐渐下降,G2～M期细胞比例增加,表明细胞分裂受到抑制;100 μmol/L组的S期细胞数量比例也有增加,并于G1期前出现亚二倍体凋亡峰.结论 5,7,4′-三羟基异黄酮可通过影响细胞分裂与DNA合成抑制瘢痕增生.     

曲古菌素A对肾癌细胞增殖及对去乙酰化酶1、金属蛋白酶9表达的影响

目的 观察曲古菌素A(TSA)对肾癌细胞7860增殖抑制作用及对组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度(100、200、400、800nmol/L)、不同时间(12、24、36、48 h)TSA作用后7860细胞的抑制率.吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重染色检测细胞凋亡.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测HDAC1、MMP9的表达.结果 不同浓度TSA作用24h后,细胞生长抑制率分别为32%、45%、58%、62%.TSA作用后部分细胞发生凋亡形态改变.HDAC1、MMP9基因在TSA作用后mRNA表达降低(P<0.01).与空白组、阴性组比较,HDAC1蛋白在TSA作用后表达分别下调18.6%～87.5%(P<0.01)、21.3%～91.4%(P<0.01),MMP9蛋白表达分别下调24.6%～95.7%(P<0.01)、20.8%～89.2%(P<0.01).结论 TSA可抑制肾癌细胞增殖,并可能通过下调HDAC1、MMP9的表达抑制细胞的增殖.     

细胞凋亡、细胞增殖在人颈椎间盘退变过程中的作用

目的 探讨细胞凋亡、细胞增殖在人颈椎间盘退变过程中的作用以及人颈椎间盘细胞凋亡可能涉及的信号转导途径.方法 收集手术切除的33份突出颈椎间盘组织,以22份正常人颈椎间盘组织作为对照,组织形态学和TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、bax及Caspase-3的表达.结果 实验组的细胞密度低于对照组(髓核内:6.30±1.54比8.96±1.14;软骨终板内:17.27±1.82比25.41±1.89);实验组的TUNEL阳性细胞率高于对照组(髓核内:11.73±1.36比7.02±1.26;软骨终板内:13.04±1.75PC6.86±1.42);实验组髓核内PCNA阳性细胞率高于对照组(8.38±1.98比4.55±1.54);实验组髓核内bax阳性细胞率和Caspase-3阳性细胞率分别高于对照组(bax:19.32±1.95比10.94±1.72;Caspase-3:15.05±1.74比8.92±1.48);TUNEL阳性细胞率与细胞密度之间呈负相关(P＜0.01);实验组髓核内PCNA阳性细胞率与细胞密度之间呈正相关(P＜0.01);两组髓核内bax阳性细胞率、Caspase-3阳性细胞率均与TUNEL阳性细胞率之间呈正相关(P＜0.01).结论 细胞凋亡与细胞增殖间的不平衡可能是人退变颈椎间盘内细胞密度下降的原因,人颈椎间盘髓核细胞的过度凋亡可能与bax和Caspase-3的表达上调有关.