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1.
目的:探讨Gq蛋白介导血管活性多肽对VSMCDNA合成及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响。方法:用硫代的Gαq/11亚基反义寡聚脱氧核苷酸,以6μmol/L的浓度加入含10^-7mol/L刺激无血清DMEM培养基中体外培养VSMC。用^5H-TdR掺入法测定VSMCDNA合成,免疫细胞化学技术检测VSMCPCNA蛋白表达。结果:Gαq/11AS-ODNs可明显抑制VSMCDNAR的合成,在 相似文献
2.
嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸对动脉平滑肌细胞迁移的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:血管平滑肌细胞(SMC)迁移在血管成形术后再狭窄的发生中起着关键作用。c-myc是对多种刺激SMC迁移的生长因子作出迅速早期反应的基因。推测采用与c-mycmRNA互补的寡脱氧核苷酸(ODN)的反义战略可达到抑制SMC迁移的目的。方法:将嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-mycODN通过lipofectin导入SMC后,采用改良的Boydenchamber方法检测SMC的迁移率。结果:反义c-mycODN作用的SMC对10%FBS的化学趋化活性明显减弱,反义c-mycODN显著抑制了SMC迁移。而正义c-mycODN和错配c-mycODN处理的SMC,与对照组相比,迁移率无差别。结论:(1)反义c-mycODN对体外SMC迁移的抑制具有序列特异性;(2)c-myc基因表达在SMC迁移的信号通路中起关键作用;(3)本研究为采用c-mycODN的战略抑制SMC迁移进而防止血管成形术后再狭窄的发生奠定了基础 相似文献
3.
目的:研究内皮素反义寡核苷酸能否抑制猪肺动脉内皮细胞生成内皮素。方法:设计并合成三段针对内皮素-1前体基因的反义寡核苷酸片段,检测其对培养的内皮细胞生成内皮素的影响。结果:两个反义寡核酸片段能明显抑制体外内皮细胞生成内皮素,而相应正义和非特异硫代寡核苷酸则无此抑制作用,说明其作用具特异性。结论:内皮素-1反义寡核苷酸有可能用于内皮素相关的疾病的治疗。 相似文献
4.
目的:探讨从血小板源生长因子-B链(PDGF-B)的基因水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:给肺动脉平滑肌细胞(VSMC)分别施加不同剂量的c-sis癌基因反义寡核苷酸(ASON), 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线;采用流式细胞术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果:中、大浓度ASON对细胞增殖有明显抑制作用。在中浓度的ASON作用下, 加入PDGF-BB能促进VSMC的增殖。ASON干预前后, VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化, 以G0+G1期细胞增多、S+G2+M期细胞减少为特征。各组的G0+G1期细胞均显著多于对照组(P<0.05)。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G0+G1期细胞有显著差异(P<0.05)。结论:中、大剂量ASON能明显抑制肺VSMC的增殖, 可使G0+G1期细胞数明显增多, 且与ASON有剂量依赖关系。 相似文献
5.
目的:探讨c-myc基因表达在血管平滑肌细胞增殖信号传导通路中的作用和采用反义c-myc寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞(SMC)增殖的作用。方法:采用针对大鼠c-mycmRNA包括AUG在内的翻译起始区的前5个密码子的嵌合性硫代修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸(AS-ODN),以lipofectin导入SMC后,通过细胞计数和3H-TdR掺入观察其对SMC增殖的抑制作用。结果:c-mycAS-ODN不仅对从静止状态刺激的SMC增殖有抑制作用,而且对处于增殖状态的SMC的增殖也有显著抑制作用,这种抑制作用可因加入正义c-mycODN而减弱甚至消除,而且随着剂量的增加,抑制作用越来越明显。一次性应用c-mycAS-ODN可达到较持久的作用。而正义ODN和错配ODN对SMC增殖无影响。结论:c-mycAS-ODN以剂量依赖和序列特异方式抑制SMC增殖。c-myc基因表达在SMC增殖的信号传导通路中起重要作用。为采用c-mycAS-ODN抑制SMC增殖的反义战略防治再狭窄研究奠定了基础。 相似文献
6.
目的:研究粘着斑激酶磷酸化在细胞外基质成份诱导平滑肌细胞粘附和迁移中的作用。方法:通过纤粘连蛋白(FN)诱导培养的平滑肌细胞粘附迁移,以免疫沉淀和Western blolt方法检测粘着斑激酶(FAK)及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸(ODNs)经脂质体转染细胞,观察对FAK磷酸化、细胞粘附铺展和迁移的影响。结果:FN在显著诱导平滑肌细胞粘附和迁移时,FAK也呈明显表达,20 mg/L FN可使其磷酸化处于较高表达量。脂质体可有效地介导ODNs转染,转染效率为(86.7±4.5)%,FAK磷酸化表达量明显减少,5-60 mg/L不同浓度FN组,细胞铺展率减少17.89%-27.67%,10、20、40和60 mg/L FN组迁移细胞数也分别显著少23.26%、21.63%、19.31%、17.88%(P<0.05)。结论:活化的FAK是细胞外基质诱导SMCs粘附和迁移的重要信号分子,由其介导的信号转导促进了这一过程,反义FAK ODNs可有效地对此进行抑制。 相似文献
7.
目的:复制高血糖症大鼠模型,研究高糖对大鼠血和平滑肌细胞表型转变的影响及其机制。方法:采用组织培养及放射免疫分析方法测定各指标。结果:(1)设备在糖组血浆NO2含量、血管壁NOS活性及CGMP含量明显低于对照组;(2)高血糖组血清胰钫 含量1、血管平滑肌细胞的「^3H」-TdR掺入率明显高于对照组。结论:长期高血压糖症可引起血管平滑肌细表型发生转变,从而促进了血管平滑肌细胞的增殖。 相似文献
8.
目的:研究caveolin-1反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:脂质体介导caveolin-1反义寡核苷酸瞬时转染SMMC7721细胞,Western blotting检测转染效果;MTT法和ELISA法分别检测转染前后SMMC7721细胞增殖和分泌VEGF的变化。结果:转染48 h后,反义寡核苷酸组caveo-lin-1蛋白表达水平明显低于对照组;MTT检测结果显示,转染后的SMMC7721细胞显著增殖,增殖率为90.9%;ELISA检测结果显示,转染后的SMMC7721细胞分泌的VEGF显著升高(P0.01)。结论:Caveolin-1反义寡核苷酸抑制caveolin-1的表达,而caveolin-1具有抑制SMMC7721细胞的增殖和其分泌VEGF的作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点。 相似文献
9.
bcl—2基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:探讨bcl-2基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响。方法:应用细胞培养,免疫标记及流式细胞仪技术,检测了bc1-2基因反义寡脱氧核糖核苷酸(ASODN)和阿糖胞苷(Ara-C)对白血病K562和HL-60细胞作用和bcl-2基因表达。结果:Ara-C(10μmol/L)与bcl-2ASODN同时作用比单独用Ara-C或Ara-C与正义寡脱氧核糖核苷酸(SODN)细胞存活率显著减少(P<0001),并且流式细胞仪检测显示bcl-2ASODN使bcl-2蛋白阳性率降低。结论:bcl-2基因反义寡核苷酸能抑制该基因表达,提高白血病细胞对Ara-C的敏感性 相似文献
10.
半边莲生物碱抑制内皮素-1诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨半边莲生物碱(LCLA)对内皮素-1(ET-1)诱导人脐动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制效应及其作用机制。 方法: 采用细胞计数、[3H]-TdR掺入、流式细胞术、免疫细胞化学染色及Fura-3/AM 荧光探针标记方法检测VSMC增殖;并用台盼蓝拒染、乳酸脱氢酶(LDH)检测方法观察LCLA对VSMC的毒性反应。 结果: LCLA(100、200和400 mg/L)、BQ-123(10-6mol/L)、ST(10-7mol/L)均抑制ET-1所诱导的VSMC增殖(均P<0.05):明显降低VSMC的细胞数目、[3H]-TdR掺入量、S期和G2/M期的数目百分比,增加G0/G1期的数目百分比;减弱细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达强度和Ca2+荧光强度;LCLA的抑制作用存在明显的剂量依赖关系,但对VSMC存活率和LDH释放量均没有影响。 结论: LCLA浓度依赖性地抑制ET-1所诱导的人脐动脉VSMC增殖,其机制与降低VSMC内Ca2+含量有关。 相似文献
11.
目的:研究端粒酶活性抑制后鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平的变化。方法:脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化法检测端粒酶逆转录酶(hTRT)和p53蛋白表达水平。结果:端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量依赖性,流式细胞仪检测出现凋亡峰,反义寡核苷酸组hTRT和p53蛋白表达水平显著低于其它处理组及空白对照组(P<0.01)。结论:端粒酶RNA反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性后可降低p53蛋白表达水平。 相似文献
12.
目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮素-1(ET-1)促进血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的协同作用,并进一步研究可能的机制。方法:5-溴-2’-脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法和细胞计数法观察对VSMC增殖的影响,Western免疫印迹法观察ET-1对VSMCbFGF和成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR-1)蛋白表达的影响。结果:bFGF和ET-1能协同促进VSMCBrdU掺入和细胞增多,并且在一定剂量和时间范围内呈量效、时效关系。同时ET-1剂量依赖性上调bFGF和FGFR-1蛋白,表达高峰分别为24和48h,二丁酸佛波脂(PDBU)预耗竭细胞内蛋白激酶C(PKC)后该上调作用显著下降。结论:bFGF和ET-1对VSMC增殖具有协同作用,与ET-1上调bFGF和FGFR-1蛋白有关,上调作用呈PKC依赖性。 相似文献
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目的:研究 bcr-abl融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸(Aspo)对 K562细胞生长特性的影响,探讨其在慢性粒细胞白血病(CML)基因治疗中的意义。方法:倒置显微镜下细胞活体观察;Aspo与细胞共同培养24h、48h、72h、96h及 120h,用0.4%台盼蓝染色计各处理组死活细胞数,甲基纤维素半固体培养法观察其克隆形成率的变化,流式细胞仪测定各处理组细胞P210蛋白表达变化。结果:Aspo处理后细胞仍呈克隆状生长,当 Aspo浓度达5μmol/L时,即可产生增殖抑制作用,呈一定的量效关系,其最大抑制效应时间为作用120h,当Aspo达10μmol/L时,在一定细胞浓度范围内(1×104/mL- 5× 105/mL),均有显著抑制作用,当Aspo浓度达5μmol/L以上时,K562细胞 P210蛋白表达明显下降甚至不表达。 b2a2型 Aspo对表达 b3a2型 mRNA的 K562细胞也表现出交叉抑制作用。结论:bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞具有特异性增殖抑制作用,在慢性粒细胞白血病基因治疗中值得深人研究。 相似文献
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缺氧内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞表型的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
用细胞培养和形态定量分析方法观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞表型的影响。结果显示,缺氧性内皮细胞条件培养液组肺动脉平滑肌细胞的二倍体细胞和α-sm-actin含量均少于常氧性内皮细胞条件培养液组(P<0.05),尤以肌丝成份减少最明显;粗面内质网和线粒体却显著增多。而直接缺氧组与常氧组无明显差异。提示:缺氧可促使内皮细胞产生和释放某种促平滑肌细胞表型转化的物质或因子,从而改变了肺动脉管壁细胞之间的正常调控关系,导致平滑肌细胞肥大,合成细胞外基质增多。 相似文献
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目的: 研究bcr-abl融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸(Aspo)对K562细胞生长特性的影响,探讨其在慢性粒细胞白血病(CML)基因治疗中的意义。方法:倒置显微镜下细胞活体观察;Aspo与细胞共同培养24 h、48 h、72 h、96 h及120 h,用0.4%台盼蓝染色计各处理组死活细胞数,甲基纤维素半固体培养法观察其克隆形成率的变化,流式细胞仪测定各处理组细胞P210蛋白表达变化。结果:Aspo处理后细胞仍呈克隆状生长,当Aspo浓度达5μmol/L时,即可产生增殖抑制作用,呈一定的量效关系,其最大抑制效应时间为作用120 h,当Aspo达10μmol/L时,在一定细胞浓度范围内(1×104 /mL~5×105/mL),均有显著抑制作用,当Aspo浓度达5μmol/L以上时,K562细胞P210蛋白表达明显下降甚至不表达。b2a2型Aspo对表达b3a2型mRNA的K562细胞也表现出交叉抑制作用。结论:bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞具有特异性增殖抑制作用,在慢性粒细胞白血病基因治疗中值得深入研究。 相似文献
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反义寡核苷酸抑制缺氧/再给氧时内皮细胞细胞间粘附分子-1的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨反义寡核苷酸(AS-ODN)对缺氧/再给氧(H/R)时内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:流式细胞仪测定肾小球血管内皮细胞在缺氧、再给氧及加入AS-ODN后ICAM-1表达的阳性百分率。结果:缺氧10h,肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达与对照组无显著性差异,再给氧6hICAM-1的表达明显高于正常,加入AS-ODN后,ICAM-1阳性细胞的百分率下降40.6%。结论:AS-ODN可以降低H/R时内皮细胞ICAM-1的表达。 相似文献
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The intermediate phenotype of vascular smooth muscle cell in adult is the dedifferentiation state returned from the high differentiation state , appeared on the damaged blood vessels. It is regulated by many factors. Its distribution, the characteristics of morphology and structure, the regulated transform factors and the molecular biological mechanism are introduced, and its functional significance and the role in vascular diseases are also discussed in this article. 相似文献
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缺氧对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞5-羟色胺转载体基因表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨无氧(O%O2+95%N2+5%CO2)和低氧(25~3%O2+92%N2+5%CO2)对新生小牛肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动肺平滑肌细胞(PASM)5-羟色胺转载体基因表达的影响。方法:应用细胞培养,核酸分子杂交技术。结果:无氧组和低氧组(15h、3h、6h)PAEC5-羟色胺转载体mRNA表达显著高于常氧组(P<005),而无氧和低氧12h至48h对PAEC5-羟色胺转载体mRNA表达无明显影响。无氧和低氧(3h、6h、12h、24h)组PASM5-羟色胺mRNA表达均显著高于常氧组(P<001),结论:推测缺氧早期通过促进PAEC5-羟色胺转载体基因表达,加强PAEC对5-羟色胺的摄取和降解,随缺氧时间的延长,PAEC的此功能受损。缺氧PASM5-羟色胺转载体基因表达的持续增加,则可能参与缺氧肺动脉高压的形成。 相似文献
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目的研究血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对神经母细胞瘤LA-N-5细胞VEGF mRNA表达的影响以及对肿瘤细胞增殖、分化的影响。方法用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸(MSODN)转染LA-N-5细胞,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF165和VEGF121 mRNA转染前后不同时间表达的变化;MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率。结果半定量RT-PCR检测结果显示,在转染后72 h VEGF165和VEGF121 mRNA的表达:ASODN组为0.346±0.029和0.227±0.036,ASODN+LipofectamineTM2000组为0.275±0.035和0.165±0.017。ASODN组和ASODN+LipofectamineTM2000组均显著抑制VEGF mRNA的表达,ASODN+LipofectamineTM2000组抑制作用较ASODN组更强(P<0.05);转染后ASODN组和ASODN+LipofectamineTM2000组细胞增殖显著受抑,在48 h时抑制率最高,分别为(39.92±2.7... 相似文献
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虎杖甙对正常人血管平滑肌细胞内钙和膜电位的调节作用 总被引:6,自引:0,他引:6
目的和方法:观察虎杖甙(PD)对人脐带动脉平滑肌细胞(VSMC)内游离钙、细胞膜电位的变化,以探讨PD对血管平滑肌的调节机制。用Fluo-3-AM、DiBAC4(3)标记培养的VSMC,在激光共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙和膜电位变化。结果:给PD(05mmol/L)10min后,VSMC内游离钙浓度升高56%±56%。当PD加入前用维拉帕米和EGTA预处理后,则游离钙不再升高;EGTA和肝素预处理也抑制PD的升钙作用,而EGTA和普鲁卡因预处理则使细胞内钙显著升高。PD还可使VSMC膜电位去极化,加入钠通道阻断剂河豚毒素(25μmol/L)可完全阻断PD的去极化作用:加甲氰咪胍、维拉帕米、优降糖和利及丁预处理不能阻断PD去极化作用。结论::PD可通过细胞外钙内流来增加细胞内游离钙浓度,并促进细胞外钠离子内流而导致细胞去极化 相似文献