磁性纳米四氧化三铁协同顺铂作用于肺癌A549细胞的初步研究

目的: 检测磁性纳米四氧化三铁(Nano-Fe3O4)联合顺铂(DDP)作用于人源肺腺癌细胞A549后相关凋亡抑制基因、耐药蛋白的表达,研究其增强化疗敏感度的机制.方法: 用MTT法检测Nano-Fe3O4聚合DDP对A549细胞增殖凋亡的影响;流式细胞术分析凋亡细胞比例;RT-PCR检测抗凋亡基因bcl-2、survivin、ERCC1表达水平变化;蛋白印迹法分析耐药蛋白MRP及其表达率.结果: 25 μg·ml-1 Nano-Fe3O4能有效增强DDP的细胞毒作用,提高A549的凋亡率;与单独用药组相比,Nano-Fe3O4联合DDP组的抗凋亡基因bcl-2、ERCC1和耐药蛋白MRP表达下调,差异具有统计学意义(P＜0.05);survivin基因表达未见明显改变.结论: Nano-Fe3O4联合DDP可通过下调抗凋亡基因bcl-2、ERCC1及耐药蛋白MRP的表达,增强化疗药物敏感度.     

亚砷酸对白血病K562/A02细胞的作用及机制

目的研究亚砷酸对白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用及对多药耐药基因1（mdr1）、P糖蛋白（P-gp）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨亚砷酸逆转白血病多药耐药（MDR）的作用机制。方法将K562/A02细胞与不同浓度的亚砷酸（0、0.5、2.0、5.0μmol/L）共同孵育,分别在24、48、72h时,用Wrights染色法观察K562/A02细胞形态,流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR法检测mdr1mRNA的表达,免疫组织化学法观察P-gp表达,并用ELISA法检测VEGF的浓度。结果随着亚砷酸作用浓度和时间的增加,K562/A02细胞的数目减少,并出现凋亡形态学改变,FCM显示随着作用浓度和时间的增加,细胞凋亡率逐渐上升;从作用48h组开始,mdr1mRNA及P-gp的表达出现显著降低（P〈0.05）,mdr1mRNA条带颜色较空白对照组明显变浅,mdrl/GAPDH灰度比值下降,此时,P-gp的灰度值上升,且随亚砷酸作用浓度和时间的增加,mdr1mRNA条带颜色进一步变浅,表达水平进一步下降;ELISA法检测表明从0.5μmol/L作用24h组开始,VEGF浓度即下降至405.02pg/mL（P〈0.05）,相同作用时间下以5.0μmol/L组较其它浓度组下调VEGF的作用最为显著。结论亚砷酸呈药物浓度-时间依赖性抑制K562/A02细胞增殖,诱导其凋亡,下调VEGF表达,有效抑制了mdrlmRNA的产生和P-gp的合成。     

青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性机理的研究

目的:研究青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性及其作用机制。方法:以对阿霉素敏感的K562细胞作为对照,用MTT法观察在有或无阿霉素存在条件下青蒿琥酯对培养的K562/A02细胞干预48 h后的生长抑制情况,流式细胞仪检测100μg.m l-1青蒿琥酯作用48 h前后K562/A02细胞P糖蛋白(P-gp)平均荧光强度(MFI)的强弱,生化方法检测100μg.m l-1青蒿琥酯作用48 h前后K562/A02细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果:(1)在不含阿霉素情况下,青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞的IC50分别为13.80μg.m l-1和13.62μg.m l-1(P>0.05),在阿霉素存在情况下,青蒿琥酯对K562/A02细胞抑制作用明显增加(P<0.01);(2)与K562细胞P-gp的表达相比,K562/A02细胞P-gp高表达,青蒿琥酯处理前后K562/A02细胞的MFI无差别(P>0.05);(3)青蒿琥酯处理后K562/A02细胞内GSH含量较处理前明显下降(P<0.05)。结论:青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞具有细胞毒作用,且可逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药,其机制可能是通过干扰细胞内GSH-GSH-s-转移酶系统功能的发挥,而非对P-gp表达的影响。     

白血病K562/A02细胞SurVivin基因表达及解毒化瘀药干预作用的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞Survivin基因(生成素)表达的影响.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞Survivin基因的表达,并与干扰素作对照.结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02细胞Survivin基因的表...     

三氧化二砷协同柔红霉素对K562／A02细胞株的作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)及柔红霉素(DNR)联合应用后对人白血病耐药细胞株K562/A02的作用,探讨其应用于临床的可能性。方法:采用MTT比色法测定单用DNR及DNR与不同浓度As2O3合用时的生长抑制效果,用流式细胞术检测胞内DNR浓度及凋亡。结果:DNR对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50)为15.4 mg/L,加用0.25,0.5,1.0μmol/L As2O3时的IC50分别为1.73,0.78,1.42 mg/L。1 mg/L DNR作用于K562/A02 48 h后的凋亡率为(17.4±2.19)%,0.5μmol/L As2O3作用于K562/A02 48 h后的凋亡率为(53.8±5.6)%,而两药合用后凋亡率为(65.5±6.2)%,但合用后胞内DNR浓度并未增加。结论:低浓度的As2O3与DNR联合应用对K562/A02细胞的抑制为协同作用,其效应与增加药物的诱导凋亡作用有关,而非通过增加胞内DNR浓度。     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562/A02 细胞的多药耐药

目的:探讨环孢菌素A(CsA)、汉防己甲素(Tet)及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用MTT法测定柔红霉素(DNR)对细胞的半数抑制量(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果:DNR对K562细胞和K562/A02细胞IC50分别为0.27和21.22 mg.L-1;CsA(1 mg.L-1)及Tet(0.1 mg.L-1)单独和联合处理K562/A02后,DNR的IC50分别为7.83、5.32和2.32 mg.L-1;CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响;K562/A02细胞48 h凋亡率为2.19%,DNR(1 mg.L-1)作用K562/A02细胞凋亡率为2.70%,CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10.27%、17.64%和52.79%;两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论:CsA及Tet均可逆转耐药,且联合作用逆转效果更强。     

洛美利嗪逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 :研究洛美利嗪对肿瘤多药耐药的逆转作用 ,探讨洛美利嗪逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 :以人红白血病细胞系K5 6 2及其耐药细胞系K5 6 2 /A0 2 (耐阿霉素 )为研究对象 ,采用MTT法检测细胞毒作用 ;免疫组化测定法检测P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)表达水平 ;RT PCR法检测mdr1mRNA水平 ;以流式细胞术测定两种细胞系内罗丹明 12 3(Rh12 3)的潴留来反映P gp的外排功能。结果 :与K5 6 2细胞系相比 ,K5 6 2 /A0 2耐药细胞系mdr1mRNA及P gp高表达 ,Rh12 3潴留减少。洛美利嗪 (10 μmol/L)对K5 6 2 /A0 2细胞的mdr1mRNA及P gp表达水平无明显影响 (P >0 .0 5 )。洛美利嗪对K5 6 2 /A0 2细胞的阿霉素 (ADM)、长春新碱 (VCR)细胞毒性有剂量相关性增敏作用。洛美利嗪能增加K5 6 2 /A0 2耐药细胞系的Rh12 3潴留。结论 :洛美利嗪对K5 6 2 /A0 2细胞的ADM、VCR细胞毒性有剂量相关性增敏作用 ,其机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

拮新康逆转K562/A02细胞多药耐药的机理研究

目的利用血清药理学方法探讨中药拮新康复方逆转K5 62 /A0 2细胞多药耐药的机理 ,为临床应用提供理论和实验依据。方法分别采用MTT法、RT—PCR、Western印迹法观察含拮新康大鼠血清处理后K5 62 /A0 2细胞的增殖及mdr—1 /P—gp表达的改变。结果含 1 0 %拮新康血清 +ADM组对K5 62 /A0 2细胞的抑制率比 1 0 %正常大鼠血清 +ADM组明显增加 (P <0 .0 5 ) ;含 1 0 %拮新康血清 +ADM组K5 62 /A0 2细胞的mdr—1及P—gp的表达比ADM组及 1 0 %正常大鼠血清 +ADM组均降低 (P <0 .0 1 )。结论拮新康能抑制K5 62 /A0 2细胞的增殖 ,通过降低mdr—1 /P—gp的表达逆转K5 62 /A0 2细胞的多药耐药。     

中药拮新康对K562/A02细胞内阿霉素积聚浓度的影响

目的探讨中药拮新康对K562／A02细胞内阿霉素积聚浓度的影响。方法采用高效液相色谱法测定细胞内阿霉素（ADM）浓度。结果10％拮新康血清加ADM组较10％正常血清加ADM组细胞内ADM浓度明显升高（P〈0．05）。结论拮新康能增加ADM在K562／A02细胞内的积聚浓度，逆转K562／A02细胞耐药。     

Chk1在K562/A02细胞耐药中的作用机制

目的 研究检测点激酶1(Chk1)对K562/A02细胞周期及凋亡的影响,探讨Chk1在肿瘤细胞耐药中的作用机制.方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞株K562/A02为研究对象,与阿霉素共同孵育后,RT-PCR检测Chk1 mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白质的表达及磷酸化水平,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡.结果 Chk1 mRNA及蛋白表达水平在两种细胞间无显著差异(均P>0.05);Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为 (0.79±0.56),K562细胞为(0.27±1.47),其差异有显著性意义(P<0.05).阿霉素作用6 h后,致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞的(36.99±1.28)%(P<0.05),K562/A02细胞凋亡率为(6.25±0.81)%,显著低于K562细胞的(66.47±1.26)% (P<0.05).阿霉素对K562/A02和K562细胞的IC50值分别为(109.65±0.26)mg/L、(1.08±0.74)mg/L, 耐药倍数为102倍.结论 由于G2/M期阻滞是导致白血病细胞耐药的机制之一, Chk1磷酸化水平与G2/M期阻滞和细胞凋亡密切相关,提示Chk1的活化状态可能参与K562/A02细胞的耐药机制.     

核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异

目的探讨核糖体蛋白L6（ribosomal proteinL6，RPL6）在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562／A02和敏感细胞系K562中的差异表达。方法分别从K562／A02和K562细胞中提取总RNA，以内参对照RT—PCR检测fuPL6基因表达。结果RPL6在飚62／A02细胞中的表达较K562高（P〈0．001）。结论在耐药细胞系K562／A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关。     

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的：探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562／A02耐药性的逆转作用。方法：以柔红霉素（DNR）和高三尖杉酯碱（HHT）联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562／A02及敏感细胞系K562／S，以四唑盐比色法（MTT）检测两种化疗药物的半数抑制浓度（IC50），以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果：冬凌草甲素可明显减小K562／A02细胞对DNR，HHT的IC50，降低耐药倍数，下调P170蛋白的表达，增高细胞内DNR的浓度，而对K562／S细胞无显著影响。结论：冬凌草甲素可逆转药细胞系K562／A02的耐药性，是一种很有希望的抗白血病中药。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI 571敏感性中的作用

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI 571敏感性中的作用，并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI 571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用；RT-PCR法检测mdr1 mRNA转录水平及Western Blot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI 571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI 571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L，加Nef后,IC50为0.689μmol/L，逆转倍数为4.38倍(P＜0.05）。STI 571与Nef联合应用使mdr1 mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P＜0.01)，使P-gp的表达下调40.58%(P＜0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI 571的敏感性，下调其mdr1 mRNA的转录和阻断P-gp的表达，从而逆转白血病的多药耐药性。     

p16基因在K562/A02细胞株表达情况的研究

目的:研究p16基因在K562/A02细胞株的表达情况及其与耐药的关系。方法:用PCR法对慢性髓系白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02进行p16基因缺失检测。结果:K562及K562/A02细胞株经PCR扩增后,均未扩出相应条带。结论:K562/A02细胞株与K562细胞株一样,均表现为p16基因缺失。     

Effect of polo-like kinase 1 gene silence on cell cycle and drug resistance in K562/A02 cell

Polo-like kinase 1（PLK1） plays an important role in many cell-cycle-related events. At G2/Mtransition, PLK1 contributes to the activation of cyclinB/Cdc by phosphorylation of Cdc25C, centrosome functional maturation, bipolar spindle formation. In later stage of mitosis, PLK1 is involved in regulating components of the anaphase-promoting complex （APC） for mitotic exit and in the execution of cytokinesis. Moreover, recent reports have shown that PLK1 is involved in both G2 and mitotic DNA damage checkpoints. When G2/M DNA damage occurs, PLK1 activity is suppressed and cell cycle arrests to repair the damaged DNA. So far, the deregulated expression of PLK1 has been detected in many types of human tumors and PLK1 is considered as a novel prognostic marker for several tumors.