补肾益肺消癥方对TGF-β_1诱导的A549细胞凋亡及Caspase12信号通路关键蛋白表达的影响

目的:观察补肾益肺消癥方对TGF-β_1诱导A549细胞凋亡的影响及其对半胱天冬氨酸蛋白12 (cysteme aspartate specific protease 12,Caspase12)信号通路中关键蛋白表达的影响。方法:通过CCK-8筛选两种浓度的中药冻干粉干预TGF-β_1诱导的A549细胞,以TGF-β_1抑制剂为阳性对照,流式细胞仪检测细胞凋亡,western-blot检测Caspase12信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:模型组细胞凋亡率较正常组显著增高(P<0.01),对照组及中药组细胞凋亡率较模型组显著降低(P<0.01);模型组细胞中Caspase12通路相关蛋白表达较正常组显著增高(P<0.05或P<0.01);对照组及中药组Caspase12通路相关蛋白表达较模型组均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾益肺消癥方可通过缓解Ⅱ型肺泡上皮细胞中持续的内质网应激及其诱导的Caspase12凋亡信号通路中关键蛋白的表达,减少Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡,延缓肺纤维化的病理进程。     

补肾益肺消癥方对特发性肺纤维化大鼠Caspase-12信号通路关键分子基因和蛋白表达的影响

目的探讨补肾益肺消癥方干预特发性肺纤维化大鼠含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-12信号通路关键分子基因和蛋白表达的作用机制。方法以博莱霉素造大鼠肺纤维化模型。吡非尼酮作为阳性对照药物,补肾益肺消癥方分别于造模中(预防组)、造模后(治疗组)及实验全程(防治组)进行干预。Masson染色观察大鼠病变肺组织纤维化改变的程度,Western blot、Real-time PCR检测病变肺组织中Caspase-12信号通路相关分子基因与蛋白表达的改变。结果阳性对照组和中药各组肺泡结构轻度改变,有少量胶原纤维沉积,纤维化程度较模型组明显改善。模型组大鼠肺组织中Caspase-12通路基因及蛋白表达比正常组明显升高(P0.05),阳性组及中药各组Caspase-12通路基因及蛋白表达较模型组明显降低(P0.05或P0.01),其中中药防治组效果更优。结论补肾益肺消癥方可以通过干预Caspase-12通路关键分子的表达,调控肺泡上皮细胞内质网应激反应,延缓和抑制特发性肺纤维化病理改变进程。     

补肾益肺消癥方对肺纤维化大鼠T淋巴细胞亚群分化的影响

目的探讨补肾益肺消癥方对肺纤维化(IPF)大鼠外周血中T淋巴细胞亚群分化的影响及作用机制。方法通过博莱霉素致IPF模型,观察补肾益肺消癥方对IPF大鼠症状和体征的改变,通过流式细胞术检测CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞以及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值的变化。结果补肾益肺消癥方可以明显改善IPF大鼠的症状和体征,治疗组与模型组对比体重明显增加,差异有极显著性(P<0.01)。阳性对照组T淋巴细胞总数显著下降,出现明显的免疫抑制作用;中药各剂量组可以明显地降低IPF大鼠的外周血中CD8+T淋巴细胞的含量,小剂量和大剂量组与模型组相比有极显著性差异(P<0.01);中剂量和大剂量组CD4+/CD8+T淋巴细胞比值相比模型组和空白组显著升高,差异有极显著性(P<0.01)。结论补肾益肺消癥方通过干预IPF患者T淋巴细胞亚群的分化,调控病变肺组织的免疫应答反应,进而延缓肺组织纤维化损伤的进程,达到治疗效果。     

补肾益肺消癥方干预特发性肺纤维化Ⅱ型肺泡上皮细胞间充质转化调控内质网应激的作用机制

目的 探讨补肾益肺消癥方抑制特发性肺纤维化病理进程的作用机制.方法 以转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的A549细胞为模型,以TGF-β1抑制剂为阳性对照,筛选补肾益肺消癥方两种浓度冻干粉干预细胞模型,免疫荧光染色激光共聚焦显微镜下观察SP-C、α平滑肌肌...     

补肾益肺消癥方治疗老年COPD合并PIF的疗效及对患者血清VEGF、PAI-1、VCAM-1和肺功能的影响

目的 观察补肾益肺消癥方治疗老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺间质纤维化(PIF)的疗效,并探讨其对患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)、纤溶酶原激活物抑制物1 (PAI-1)、血管细胞黏附因子(VCAM-1)和肺功能的影响。方法 收集2019年4月至2022年4月就诊于宝鸡市人民医院的102例老年COPD合并PIF患者为研究对象,采用随机数表法将患者分为观察组和对照组各51例,对照组患者以西药方式进行对症治疗,观察组患者在对照组基础上加用补肾益肺消癥方,疗程为2个月。比较两组患者的临床治疗效果,治疗前后的中医症状积分、血清VEGF、PAI-1、VCAM-1水平及肺功能指标[用力肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/FVC]变化。结果 观察组患者的治疗总有效率为90.20%,明显高于对照组的72.55%,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗前,两组患者的中医症状积分比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,观察组患者的喘促、咳嗽、胸闷积分分别为(1.77±0.51)分、(1.88±0.59)分、(1.57±0.45)分,明显低于对照组的(2...     

人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导细胞凋亡的影响及其机制.方法 利用中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)采用MTY方法筛选人参皂苷Rgl抗Aβ细胞毒性的有效浓度.通过转染突变型(M146L)PS1基因的CHO细胞(PS1M146L),利用免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹方法,探讨人参皂苷Rg1对PS1M146L细胞中Aβ42和凋亡效应基因半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-3)活性蛋白表达的影响,通过脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测,观察人参皂苷Rg1对Aβ促细胞凋亡的影响.结果 加用25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1的CHO细胞活性明显高于未加用组(均P＜0.05).在转染突变型PS1M146L的CHO细胞中,加用人参皂苷Rg1作用24 h后早期细胞凋亡数(10.11.11±0.76)较未加用组(15.01±1.46)少,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Aβ42和caspase-3活性片段的蛋白质表达量较未加用组细胞亦不同程度降低(均P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1可能通过降低Aβ42生成和降低caspase-3蛋白质表达抑制Aβ诱导的细胞凋亡.     

补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用及其机制研究

目的 探讨补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用,对肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌、Survivin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3 mRNA表达的影响。方法 将补肾疏肝方制成低剂量（1.25 g/ml）、中剂量（2.50 g/ml）和高剂量（3.75 g/ml）药液。以随机数字表法将大鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、顺铂（DDP）组、联合组（中剂量药液联合DDP）,每组10只。对照组于第1～5天给予0.9%氯化钠溶液4 ml/d灌胃;低剂量组、中剂量组、高剂量组于第1～5天给予相应剂量药液4 ml/d灌胃;DDP组分别于第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20%）;联合组于第1～5天给予中剂量灌胃药液灌胃4 ml/d及第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20%）。末次给药2 h后采血,分离血清。A549细胞分别加入各组血清,培养72 h,倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。A549细胞分别加入各组血清,培养24、48、72 h后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α水平。A549细胞与各组血清共培养72 h后,采用荧光定量PCR检测Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA的相对表达量。结果 各组血清作用于A549细胞72 h后,凋亡细胞核固缩,且随药液浓度增加凋亡细胞增多。各组血清作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中,低剂量组、中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F=13.238,P＜0.05）。其中,高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。各组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F=10.814,P＜0.05）。其中,中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 补肾疏肝方可促进肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin基因表达、促进TNF-α分泌和Caspase-3基因表达有关。     

棕榈酸对转化生长因子β1刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及Caspase-12蛋白表达的影响

目的研究棕榈酸对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激的肝星状细胞（HSC）增殖、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）蛋白表达的影响。方法将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃、5% CO2孵箱中进行复苏传代培养,同步化后将细胞分为5 组：空白组、TGF-β1（5 ng/ml）组、TGF-β1+ 低、中、高剂量棕榈酸组,即5 ng/ml TGF-β1刺激24 h,再分别加入50、100及200μmol/L不同剂量棕榈酸作用24 h 后,用MTT比色法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡率、免疫细胞化学法测定Caspase-12 蛋白表达。结果不同浓度棕榈酸均能抑制细胞增殖（P <0.05）,且随着剂量的增加,细胞相对增殖率（RGR）降低,低、中、高剂量组分别为76.56%、60.93%和34.37%,组间比较差异有统计学意义（P <0.05）。透视电镜发现,不同剂量棕榈酸组出现细胞核变小,细胞出现大量线粒体空泡,染色质边集等典型凋亡表现。空白组、TGF-β1组、TGF-β1+低、中、高剂量棕榈酸组凋亡率分别为（3.32±0.29）%、（1.70±0.14）%、（7.26±0.46）%、（11.24±0.52）%及（15.55±0.31）%,组间两两比较差异有统计学意义（P <0.05）;随着棕榈酸剂量的增加,细胞Caspase-12 蛋白表达增加（P <0.05）。结论棕榈酸能抑制细胞增殖,增加Caspase-12 蛋白表达,促进HSC 凋亡。     

蒺藜皂苷对A549细胞增殖及侵袭能力影响的研究

目的：蒺藜皂苷是我国的一种传统中药,本实验拟探讨蒺藜皂苷对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：将A549细胞分为正常对照组和实验组（蒺藜皂苷250μg/mL组,蒺藜皂苷200μg/mL组,蒺藜皂苷150μg/mL组,蒺藜皂苷100μg/mL组,蒺藜皂苷50μg/mL组）,采用CCK8法检测各组细胞的增殖活力,Transwell小室模型检测肿瘤细胞的侵袭能力,RT-PCR检测各组细胞中MMP9、caspase-3的mRNA表达差异。利用细胞免疫荧光染色观察各组细胞caspase-3荧光强度。结果：与正常对照组相比,蒺藜皂苷明显抑制A549细胞的增殖活性及侵袭能力,差异具有统计学意义（P<0.01）。在侵袭实验中,RT-PCR实验结果表明与对照组相比,蒺藜皂苷组MMP9表达明显降低,caspase-3表达明显增加,且都呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P<0.01）。通过细胞免疫荧光染色实验发现,相比正常对照组,实验组caspase-3的荧光表达增强,其中高浓度皂苷组明显高于低浓度组。结论：蒺藜皂苷可以通过下调MMP9的表达以抑制A549细胞的侵袭能力,通过上调c...     

Aβ诱导内质网应激性凋亡通路的启动及二苯乙烯苷的影响

目的:探讨在阿尔茨海默病(AD)脑损伤中β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性对大鼠行为学、内质网应激特异性凋亡因子Caspase12的影响及何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)的干预作用.方法:将大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、TSG组,除对照组外,其余各组采用立体定向仪于海马部位注射微量Aβ1-42诱发大鼠行为学障碍,造A...     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

川芎嗪对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外培养A875细胞,采用不同浓度(0 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL)川芎嗪分别作用A875细胞48 h、72 h,采用四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞存活率。采用不同浓度川芎嗪(0 mg/mL、2 mg/mL)分别作用A875细胞0 h、48 h、72 h,采用蛋白免疫印迹法检测环氧化酶-2(COX-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)蛋白相对表达水平,并分析经2 mg/mL川芎嗪干预48 h、72 h后两者表达水平的相关性。结果经川芎嗪干预48 h、72 h后,A875细胞的细胞存活率随着川芎嗪浓度的升高而降低(均P<0.05);当川芎嗪浓度为1或2 mg/mL时,A875细胞的细胞存活率随着药物作用时间延长而下降(均P<0.05)。2 mg/mL川芎嗪干预0 h、48 h、72 h,A875细胞中COX-2蛋白表达水平依次降低,Caspase3蛋白表达水平依次升高;与0 mg/mL川芎嗪干预比较,应用2 mg/mL川芎嗪干预48 h和72 ...     

毒胡萝卜素对小鼠肺成纤维细胞内钙离子水平及caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨钙泵抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)对体外小鼠肺成纤维细胞内钙离子（Ca2+）水平及凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）表达的影响。方法 小鼠肺成纤维细胞(L929)分为3组:空白对照组(不做处理)、转化生长因子β₁（TGF-β₁）组、TG组,后两组均用5 ng/mL TGF-β₁诱导24 h,TG组在诱导后再用4 μmol/L TG作用24 h。细胞处理48 h后,分别收集各组细胞,采用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化,激光共聚焦显微镜观察各组细胞内Ca2+水平,免疫细胞化学方法检测caspase-3蛋白表达。结果 透射电子显微镜示,空白对照组细胞凋亡较少,TGF-β₁组无明显凋亡细胞,TG组有大量成纤维细胞凋亡。TGF-β₁组Ca2+水平和caspase-3蛋白水平均低于空白对照组（P<0.05）,TG组细胞内Ca2+水平和caspase-3蛋白水平均较TGF-β₁组、空白对照组升高（P<0.05）。结论 TG可使小鼠肺成纤维细胞细胞内钙稳态失衡,增加caspase-3蛋白表达,促进细胞凋亡。     

补肾方含药血清对人肝癌SK-HEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清;培养并建立VEGF诱导的SK-HEP-1细胞模型,分别予药物血清干预。以MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达。结果:与空白血清组和VEGF组比较,补肾组含药血清可明显抑制SK-HEP-1细胞增殖(P0.01),提高SK-HEP-1细胞G1期的细胞比率(P0.05)以及细胞的早期凋亡率(P0.05)和总凋亡率(P0.05),上调bax mRNA基因表达(P0.05)和下调bcl-2 mRNA基因表达(P0.01),且补肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;其作用机制可能与阻滞细胞由G1期进入S期和G2期,以及上调bax和下调bcl-2基因表达,促进SK-HEP-1细胞的凋亡有关。     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞Caspase蛋白表达的影响

目的 观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞凋亡时Caspase蛋白表达的影响.方法 采用MTT法检测蛴螬提取物对A549细胞增殖的抑制率,透射电子显微下观察凋亡细胞的超微结构改变,运用S-P免疫细胞化学试剂盒检测Caspase3、Caspase8和 Caspase9的表达情况.结果 蛴螬提取物对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,并出现典型的凋亡形态变化;加药组细胞Caspase3、Caspase8和Caspase9表达均增强.结论 蛴螬提取物诱导A549细胞凋亡过程中,激活了Caspase家族.     

内质网应激及蛋白激酶R样内质网激酶/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12信号通路介导的细胞凋亡在糖尿病肾病发病机制中的作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症,主要表现为血糖升高、蛋白尿、肾功能下降,也是患者后期肾功能衰竭的主要原因。临床上主要通过控制血压和血糖水平来抑制DN的进展,但效果不佳。现有研究发现,内质网应激及其介导的细胞凋亡是引起DN的重要原因,蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)信号通路在其中发挥关键性作用,其中PERK是内质网应激启动的标志,CHOP是内质网应激由抗凋亡作用开始转为促凋亡作用的重要分子,caspase-12是内质网应激介导细胞凋亡的最终执行分子。本文就内质网应激及相关信号通路介导的细胞凋亡在DN发病机制中的作用进行综述。     

Aβ25-35对PC12细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的：：观察Aβ25-35对PC12细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法：采用10μmol/L Aβ25-35与PC12细胞共孵育48h建立阿尔茨海默病细胞模型,对照组细胞不加Aβ25-35。采用Hoechst 33258核染色法检测PC12细胞的凋亡情况,免疫细胞化学染色法检测PC12细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果：与对照组相比,实验组细胞Bcl-2的表达明显降低,细胞凋亡率、Bax蛋白的表达和Bax/Bcl-2比值明显升高(P＜0.05）。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

姜黄素通过内质网应激信号通路诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及对细胞活性影响分析

目的 分析姜黄素通过内质网应激信号通路诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及对细胞活性影响。方法 选取2017年4月～2018年3月期间为研究时间段,以此期间购置的肝癌SMMC-7721细胞为试验样本,利用不同浓度姜黄素处理试验样本,先经流式细胞仪检测细胞凋亡情况,后经CCK8法分别在试验开始后24 h检测其细胞活力,再经流式细胞仪检测肝癌细胞ROS含量。结果 姜黄素浓度越高,肝癌细胞存活率呈逐步下降趋势,同空白对照样本比较,有显著性差异(P0.05);姜黄素浓度越高,MFI值呈逐步升高趋势,同空白对照样本比较,有显著性差异(P0.05);不同浓度姜黄素处理的试验样本细胞凋亡率,呈逐渐上升趋势,与空白对照样本比较,有显著性差异(P0.05)。结论 利用姜黄素可有效地抑制肝癌细胞活性,诱导肝癌细胞凋亡。     

异氟醚对β淀粉样蛋白诱导的大鼠PC12细胞凋亡和内质网应激的影响及其机制

目的：探讨异氟醚对β淀粉样蛋白（Aβ）25-35诱导的大鼠PC12细胞凋亡和内质网应激（ERS）的影响,并阐明其作用机制。方法：将PC12细胞随机分为正常对照组、10 μmol•L-1Aβ25-35组（Aβ组）、2%异氟醚组（Iso组）和2%异氟醚联合10 μmol•L^-1 Aβ25-35组（Iso+Aβ组）。MTT法检测各组PC12细胞存活率;Hoechst 33342核染色法检测各组PC12细胞凋亡形态;Western blotting法检测各组PC12细胞内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ERS相关凋亡信号蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)和caspase-12表达量。结果：与正常对照组比较,Aβ组和Iso组PC12细胞存活率明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,GRP78表达量明显上调（P<0.05）,ERS相关凋亡信号蛋白CHOP、p-JNK和caspase-12表达量均明显增加（P<0.05）;与Aβ组比较,Iso + Aβ组PC12细胞存活率明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,GRP78、CHOP、p-JNK和caspase-12表达量均明显增加（P<0.05）。结论：异氟醚能够促进Aβ25-35诱导的大鼠PC12细胞凋亡,其机制与激活ERS及其相关的凋亡信号通路有关联。