大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子-β1基因在小鼠异位移植气管中的表达

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子-β1(TGF-β1)在小鼠异位移植气管中的表达与意义.方法 雄性BALB/C小鼠及C57BL/6小鼠各30只,建立气管异位移植模型,分别于术后4、7、10 d、2、3、4周收获移植气管.组织形态学观察移植气管发生纤维化过程,应用免疫组织化学方法检测α-SMA和TGF-β1的表达.结果 术后3周以后移植气管管腔和黏膜下层出现大量纤维增生组织,造成管腔完全闭塞.α-SMA表达于术后第7天明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),1周以后阳性表达继续增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).TGF-β1的表达于术后第10天明显增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),到术后2周表达水平进一步增高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),两者表达的趋势相似.结论 小鼠气管异位移植后气道上皮细胞有部分向表达α-SMA的肌纤维母细胞转化,进而参与了闭塞性细支气管炎(OB)的气道重塑和气道高反应性的发生发展.     

α-辅肌动蛋白4在糖尿病肾病大鼠蛋白尿产生中的作用

糖尿病肾病蛋白尿的形成有多种因素，足细胞病变在其中起着重要的作用。α-辅肌动蛋白（actinin）．4是足细胞上一种辅肌动蛋白，对于维持足细胞的正常结构及功能起关键作用。本研究利用糖尿病肾病大鼠模型在蛋白尿的发生、发展过程中动态观察α-actinin．4表达的变化，并初步探讨导致其变化的可能机制。     

海藻糖对低温保存皮肤组织中β-肌动蛋白的作用研究

目的 研究非渗透性低温保护剂海藻糖联合应用二甲基亚砜对低温保存皮肤组织中β-肌动蛋白的影响.方法 将新鲜成人皮肤分为5组,分别将海藻糖/二甲基亚砜、二甲基亚砜/丙二醇、二甲基亚砜/无血清角质细胞培养基、DMEM作为冷冻保护剂,液氮冻存14d后复温,采用免疫组织化学染色、Western-blot、RT-PCR等方法,比较各组皮肤组织中β-肌动蛋白的蛋白和基因表达变化.结果 0.5M 海藻糖/二甲基亚砜作为保护剂所冷冻的皮肤,复温后其β-肌动蛋白的蛋白和基因表达明显高于其他组.结论 海藻糖与二甲基亚砜联合应用能较好的保护皮肤组织中的β-肌动蛋白,整形外科在常规应用保护剂时可以在渗透性保护剂中加入海藻糖.     

大鼠曲细精管生殖细胞体外共培养和精子发生过程的观察

目的建立体外长期共培养体系和观察方法,为精子发生过程的研究提供细胞模型。方法采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法,对睾丸生精细胞作显微镜观察。结果共培养的支持细胞和生精细胞在体外存活超过6个月。在共培养期间,观察到精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞。结论在不添加任何细胞因子和生长因子的情况下,大鼠曲细精管生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞。这一结果暗示组织块和共生的支持细胞可为生殖细胞的增生和分化提供必需的细胞因子。该方法为体外研究精子发生过程提供了实验依据。     

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。     

细胞核内β-连环素表达水平在胃癌中的临床研究

目的:探讨细胞核内β-连环素表达水平与胃癌临床病理因素的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测77例胃癌组织及30例癌旁组织细胞核中β-连环素表达水平,分析其与肿瘤组织浸润深度、淋巴结转移、组织分化程度、临床分期的关系。以无病生存时间(DFS)和总生存时间(OS)为评价指标,探讨β-连环素与胃癌患者预后的关系;ROC曲线衡量β-连环素在评估胃癌患者预后中的价值。结果:胃癌肿瘤组织细胞核内β-连环素的表达水平与年龄、性别无关(P0.05),与肿瘤的浸润深度、淋巴结的转移、TNM分期以及肿瘤的分化程度有关。Kaplan-Meier生存曲线显示:肿瘤组织细胞核内β-连环素阴性表达者DFS(26月)和OS(38月)优于阳性表达者DFS(18月)和OS(24月)(P0.05);COX多因素分析:细胞核内β-连环素的表达可以作为胃癌患者OS独立预后因素(HR=0.87,95%CI:0.54~2.34,P=0.03);ROC曲线显示,β-连环素在评估胃癌患者预后中具有中等价值(曲线下面积为0.82)。结论:胃癌组织细胞核内β-连环素表达水平与胃癌的TNM分期、淋巴结转移、浸润深度呈正相关性,与肿瘤的分化程度呈负相关性,可能是胃癌患者预后较差的标志物。     

β_1-整合素在急性肾小管损伤大鼠中表达变化的实验研究

目的 :通过观察 β1-整合素在大鼠急性肾小管损伤中表达的变化 ,探讨β1-整合素在急性肾小管损伤中的作用。方法 :用庆大霉素建立大鼠急性肾小管损伤模型。将大鼠随机分为庆大组、庆大 +整合素抗体组及对照组 ,测定各组血肌酐 (Scr)、血尿素氮 (BUN)的变化 ,并用反转录 -多聚酶链式反应 (RT -PCR)方法测定肾组织 β1-整合素mRNA表达的变化。结果 :庆大组在各个时间点的血肌酐、血尿素氮值分别显著高于庆大 +整合素抗体组及对照组 ;β1-整合素mRNA的表达变化在各组也有相同的结果。结论 :β1-整合素在肾小管损伤中起着十分重要的作用 ,整合素抗体可改善肾小管损伤引起的肾功能异常     

MYL2基因在大鼠睾丸组织发育过程中的表达

目的:研究肌球蛋白调节性轻链(MYL2)基因在大鼠睾丸组织发育过程中的表达。方法:采用RT-PCR、免疫组化分别检测大鼠睾丸组织中MYL2基因的mRNA转录水平和蛋白的表达。结果:MYL2 mRNA表达在出生后第2天达到最高值,随后迅速下降至第8天,第10、12天缓慢升高,第14天下降,第15天稍有上升,第20、25天出现一个小高峰之后到第65天持续缓慢下降,呈现明显的日龄依赖性。免疫组化结果显示MYL2蛋白主要表达于睾丸组织精子细胞。结论:MYL2基因可能参与大鼠精原干细胞的增殖,同时可能参与精子细胞形成成熟精子过程。     

Ccdc70基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:探讨Ccdc70(Coiled-coil domain containing 70)基因在小鼠睾丸中的表达特征并分析其在生精过程中的潜在功能。方法:经表达谱芯片筛选出小鼠睾丸特异性基因Ccdc70,通过RT-PCR、real-time PCR、Western印迹及免疫组化检测Ccdc70基因在成年小鼠睾丸中表达特征,并对该蛋白做相关的生物信息学分析。结果:RT-PCR、real-time PCR和Western印迹结果表明Ccdc70基因在小鼠睾丸中高表达,在附睾中低表达;免疫组化结果表明Ccdc70蛋白在睾丸中主要表达于小鼠精母细胞和圆形精子胞质,在附睾中主要表达在附睾管上皮细胞。生物信息学分析显示该蛋白存在一个CCDC结构域,并在哺乳动物进化过程中高度保守。结论:Ccdc70为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于精母细胞、圆形精子及附睾管上皮细胞,提示其可能参与调控小鼠精子发生过程及附睾精子的进一步成熟。     

树突状细胞β-中心体肌动蛋白表达与肝癌侵袭转移能力相关

目的研究β-中心体肌动蛋白（β-centractin）与肝细胞癌病人侵袭、转移能力之间的关系。方法分离26例肝细胞癌病人外周血单个核细胞，体外培养加入细胞因子诱导生成树突状细胞（DC）。收集同一病人肝癌切除标本，制备肿瘤细胞裂解物负载自体DC。Western Blot检测DC中β-centractin的表达，分析其与肝癌临床病理特性之间的关系。结果负载自体肿瘤细胞裂解物DC β-centractin表达水平，在肿瘤包膜完整和无癌栓组分别高于包膜不完整和有癌栓组，与有无子灶、AFP水平及肿瘤大小无关。结论负载自体肿瘤细胞裂解物DC β-centractin表达水平与肿瘤侵袭转移能力呈负相关。     

糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4表达变化及作用机制

目的：动态观察肾小球足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白-4（α-actinin-4）在糖尿病大鼠模型肾组织中表达的变化,探讨α-actinin-4与蛋白尿发生的关系及导致其出现变化的可能机制。方法：将SD大鼠随机分为两组：对照组及糖尿病组,腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型,分别于2、4、6、8周末检测每组大鼠24h尿蛋白定量并处死大鼠留取肾标本。电镜观察足细胞超微结构的变化;应用酶免法检测肾组织糖基化终产物（AGEs）的含量;应用免疫组化及Western-blot检测α-actinin-4蛋白的表达;RT-PCR检测α-actinin-4mRNA表达量的变化。结果：6周糖尿病组大鼠24h尿蛋白明显高于对照组（P〈0.01）,增高持续到8周（P〈0.01）;透射电镜显示8周糖尿病组大鼠足突出现节段性融合;从4周时糖尿病组大鼠肾组织AGEs含量明显升高（P〈0.05）,并持续到8周（P〈0.01）;与对照组相比,从4周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达明显降低（P〈0.05）,并持续到8周（P〈0.05）;与对照组相比,从2周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4mRNA表达明显降低（P〈0.05）,并持续到8周（P〈0.01）。结论：α-actinin-4表达降低参与了糖尿病大鼠蛋白尿的发生,而AGEs可能是导致α-actinin-4表达下调的原因之一。     

α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞在半月板表达及功能

近年来有实验研究表明半月板也可能具有自我修复能力,其中含有α-平滑肌肌动蛋白的半月板细胞在损伤半月板愈合过程中可能起到了重要作用。本文简要综述了α-平滑肌肌动蛋白在半月板中的表达及功能,并对未来研究方向作一展望。     

转化生长因子-β1在慢性同种移植肾病大鼠早期中的表达

慢性同种移植肾病(chronic allograft nephropathy,CAN)是肾移植一年后晚期移植物丢失的主要原因,但其精确的发病机制并不清楚.近年来有研究发现转化生长因子-β1(TG F-β1)直接参与CAN的发病过程[1～3].但关于TGF-β1在CAN发病早期的表达情况报道甚少.我们利用国际标准CAN大鼠模型观察TGF-β1在CAN发病早期中的表达情况.     

细胞周期蛋白在精子发生过程中的作用

精子发生是一个复杂而又精确的生殖细胞分化的过程,它经历了精原细胞有丝分裂、精母细胞减数分裂和精子形成3个阶段。这一过程受许多因素的调控,其中细胞周期蛋白的调节起着决定性作用。细胞周期蛋白通过与相应的细胞周期蛋白依赖激酶结合形成具有蛋白激酶活性的异源二聚体复合物,磷酸化多种蛋白,推动细胞周期各时相的有序进行。近年来研究发现,细胞周期蛋白A、B、D、E在精子发生的调控中扮演着重要角色,本文综述了这4种细胞周期蛋白在调控精子发生中的作用。     

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。     

Daxx基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究死亡结构域相关蛋白(Daxx)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q PCR)、Western印迹及免疫荧光等方法检测Daxx在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年睾丸支持细胞雄激素受体特异性敲除(SCARKO)和雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果:q PCR、Western印迹和免疫荧光结果表明,Daxx基因在出生4周后小鼠睾丸中高表达,且主要定位于细胞核;与野生型小鼠相比,SCARKO小鼠睾丸中DAXX的表达差异不显著(0.853±0.058 vs1.000±0.015),但在生精细胞细胞核中呈极性分布;DAXX在ARKO小鼠睾丸表达显著降低(0.299±0.026 vs1.000±0.015,P0.01)。结论 :Daxx基因在小鼠睾丸发育中期时表达最高。ARKO小鼠中DAXX的表达与野生型相比显著降低,睾丸支持细胞中AR基因特异性敲除影响DAXX定位。DAXX可能参与调控小鼠的精子发生过程。     

α—平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的诱导作用。方法 以5例增生性瘢痕为实验组,3例正常瘢痕为对照组,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察在不同TGF-β1浓度作用下,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α-SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞,三维培养体系中α-SMA含量明显低于二维培养体系,不同浓度TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ng/ml的TGF-β1作用最有效;与对照组的成纤维细胞相比,实验组的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感。结论 在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异,对TGF-β1敏感性不同;细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少。     

转化生长因子β1在胆管愈合过程中的表达及意义

目的 观察转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）在胆管愈合过程中的表达和分布，探讨其在良性胆管狭窄形成过程中的作用及意义。方法 通过昨犬胆管损伤修复模型，术后采用免疫组化ＳＰ法对ＴＧＦ－β１在胆管愈合过程不同时期组织中的表达和分布进行研究。结果ＴＧＦ－β１主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞。ＴＧＦ－β１术后各期表达均较强，且持续较长时间。结论 ＴＧＦ－β１高表达是造成胆管愈合过程成     

α-平滑肌肌动蛋白在肝癌组织中的表达及其与肝癌侵袭转移的关系

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝癌中的表达及与肝癌侵袭转移的关系.方法 收集非肝癌的肝脏组织15例,肝癌并伴门静脉转移的癌组织30例,按病理分化程度分为3组:低分化组、中分化组和高分化组.采取逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌组织中α-SMAmRNA的表达和免疫组织化学的方法检测α-SMA在癌组织及门静脉癌栓组织的表达.结果 RT-PCR结果显示α-SMA在所有肝癌组织中均呈阳性表达;免疫组织化学显示α-SMA在对照肝脏、肝癌组织和门脉癌栓组织的表达值分别为125.69±29.17、187.43±17.66、218.70±13.52,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P＜0.01),门脉癌栓组表达最高;按照肝脏病理分为3组:低分化组、中分化组和高分化组,表达值分别为237.14±25.83、190.57±19.90、165.67±22.64,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P＜0.01),在低分化组表达最高.结论 α-SMA在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组及低分化组,与肝癌的侵袭、转移有关.