促红素新型环性衍生肽 对顺铂诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨促红素新型环性衍生肽（cyclic helix B peptide,CHBP）对顺铂诱导肾小管上皮细胞（NRK-52E）损伤的保护作用及可能机制。方法：体外培养NRK-52E细胞,分为（1）对照组：NRK-52E细胞（4×105个）单独培养;（2）顺铂组：10 μmol/L顺铂处理NRK-52E细胞;（3）CHBP干预组：顺铂处理NRK-52E细胞加入不同浓度CHBP干预,低浓度亚组为16 nmol/L CHBP,中浓度亚组为32 nmol/L CHBP,高浓度亚组为64 nmol/L CHBP。每个亚组分别干预12 h、24 h。采用流式细胞术及Annexin V-FITC-PI法检测NRK-52E细胞凋亡率。结果：顺铂组处理24 h凋亡率较12 h增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;在处理12 h和24 h两个时间点,顺铂组凋亡率高于对照组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;在处理12 h后,低浓度亚组凋亡率与顺铂组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,中、高浓度亚组的凋亡率低于顺铂组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;在处理24 h时间点,各干预组凋亡率低于顺铂组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：CHBP对顺铂诱导NRK-52E细胞损伤具有保护作用。     

体外缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肾小管上皮细胞间质转变的影响

目的 探讨缺血后处理对肾小管上皮间质转变的影响.方法 应用NRK-52E建立有效的体外模型,实验分为对照组（COS）：应用对照缓冲液培养,3h后换完全培养基培养;缺血再灌注损伤组（IRI）：应用缺血缓冲液,3h后同样更换完全培养基培养;缺血后处理组（IPO）：应用缺血缓冲液培养3h,立即行体外缺血后处理,然后更换完全培养基.以上各组于处理3、6、12、24 h后收集细胞,Hoechst用于检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达水平.结果 在经历缺血3h后再灌注24 h,IRI组和IPO组有明显细胞凋亡,但IPO组凋亡明显较IRI组减轻（P＜0.05）.IRI组α-SMA随时间延长表达逐渐增强,在24 h时表达最强（P＜0.05）;而IPO组随时间延长表达逐渐减弱,在24 h时达到最低值（P＜ 0.05）.IRI组TGF-β1在缺血再灌注3、6h时表达较强,之后减弱;且IPO组表达与IRI组相似,但3、6h时表达水平明显受到抑制.IRI组CTGF在缺血再灌注3、6h时表达较强,之后减弱;而IPO组表达各时间点较COS组没有明显变化.结论 体外缺血再灌注损伤可以诱导肾小管上皮细胞α-SMA的表达,诱导上皮细胞间质转化;而原因可能与激活TGF-β1,进而也抑制基质蛋白的降解,促进基质蛋白CTGF的表达等有关;同时IPO能有效抑制α-SMA、TGF-β1、CTGF的表达,说明其能抑制间质转化的发生.     

促红细胞生成素后处理减轻大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡中的作用及机制

目的探讨促红细胞生成素后处理在减轻肺缺血/再灌注损伤（LIRI）大鼠肺细胞凋亡中的作用及其机制。方法健康雄性成年SD大鼠40只,按随机数字表法分成5组,每组8只,即假手术对照组（C组）、缺血/再灌注(IR)组、促红细胞生成素（EPO）组、EPO+溶剂对照组（PPCES溶液）（P组）和EPO+SP600125（SP组）,通过阻断左肺门制作动物模型并予相应处理。原位末端标记法（TUNEL）检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）;RT-PCR法、免疫组化法测定肺组织Bcl-2、Bax基因和蛋白的表达;光镜下观察肺组织的病理变化及测定肺泡损伤数（IQA）。结果与C组比较,IR组肺组织IQA显著升高,AI显著升高,Bcl-2基因和蛋白表达明显下降,Bax基因和蛋白表达明显上调,Bcl-2/Bax的比值降低（均P＜0.05）,肺组织形态学发生异常改变;与IR组比较,EPO组、P组、SP组的IQA显著降低,AI显著降低,Bcl-2基因和蛋白表达上调,Bax基因和蛋白和表达下降,Bcl-2/Bax的比值增高（均P＜0.05）,肺组织形态学结构异常改变有所减轻;与EPO组比较,SP组的IQA降低,AI显著降低,Bcl-2基因和蛋白表达上调,Bax基因和蛋白表达下降,Bcl-2/Bax的比值增高（均P＜0.05）,SP组的肺组织形态学结构损伤较EPO组减轻。结论EPO后处理能减轻LIRI,其机制可能通过抑制JNK信号转导通路的激活,上调凋亡抑制因子Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax的表达,提高Bcl-2/Bax比值,使肺组织细胞凋亡减少,改善其结构。     

Effect of Depression on Cardiac Myocyte Apoptosis and the Expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in Rats with Myocardial Infarction

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响.方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达.结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达的差异有统计学意义(P＜0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P＜0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关.     

Bcl-2和Bax在臀肌挛缩带中的表达及其对挛缩带形成的作用

目的：探索凋亡相关基因Bcl-2和Bax在臀肌挛缩带中的表达情况及其对臀肌挛缩症（GMC）发病的作用.方法：收集臀肌挛缩症患者挛缩带和病变旁肌肉的病理标本,运用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化和West-ern blot技术检测Bcl-2和Bax在mRNA水平和蛋白水平的表达情况.结果：Bcl-2定位于成纤维细胞的胞质中,呈强阳性表达,其在mRNA水平和蛋白水平分别上调了6.1倍和3.9倍（P〈0.05）.Bax也定位于成纤维细胞的胞质中,呈弱阳性表达,其在mRNA水平和蛋白水平的表达未见显著性上升（P〉0.05）.结论：抗凋亡基因Bcl-2与凋亡基因Bax的对抗作用失调可能是引起挛缩带产生的重要机制.     

乳化异氟醚对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及bcl-2、bar表达的影响

目的 观察乳化异氟醚(8%体积分数)对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA与蛋白水平表达的影响.方法 利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分正常培养组、模型组、脂肪乳组、乳化异氟醚(终浓度0.28 mmol/L).各组心肌细胞做相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率,并用透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2 mRNA、box mRNA的表达.Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 乳化异氟醚组和脂肪乳组均可显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),但乳化异氟醚组与脂肪乳组比较降低更明显(P＜0.05).乳化异氟醚可显著上调Bcl-2表达(P＜0.05)、下调Bax表达(P＜0.05);脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响(P>0.05).结论 乳化异氟醚及其其中的成分之一脂肪乳可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡;乳化异氟醚对缺氧复氧损伤的抗凋亡作用与其心肌细胞Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关.     

茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用机制的实验研究

目的探讨茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的作用机制.方法琼脂糖凝胶电泳检测HepG2细胞凋亡,RT-PCR检测HepG2细胞中Bcl-2、BaxmRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果MeJA作用HepG2细胞48h后：DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显典型＂梯＂状条带;细胞Bcl-2mRNA表达水平明显下降（P〈0.05）而BaxmRNA表达水平明显增高（P〈0.05）;Bcl-2蛋白在胞浆中表达水平明显降低（P〈0.01）而Bax蛋白表达水平显著增加（P〈0.01）.结论茉莉酸甲酯通过降低抑凋亡相关基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达,上调促凋亡相关基因BaxmRNA及蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡的发生.     

DEHP体外影响大鼠睾丸间质细胞Bax和Bcl-2基因表达的实验研究

目的 通过对原代培养的大鼠睾丸间质细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞Bax和Bcl-2基因表达及凋亡的影响.方法 体外分离和原代培养未成熟大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)染毒24h.荧光定量PCR法检测间质细胞Bax和Bcl-2基因mRNA表达,Weastern blot检测间质细胞Bax和Bcl-2蛋白表达,流式细胞术检测间质细胞凋亡率.结果 与对照组相比,DEHP各组睾丸间质细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降(P＜0.05),Bax基因mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05),呈浓度依赖关系.结论 DEHP可通过抑制Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡,进而影响间质细胞功能.     

Effects of Environmental Factors on Ischemic Cardiac Myocyte Apoptosis and Expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in Rats

目的:探讨光照、黑暗、行为限制对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、心肌梗死组(B组)、黑暗组(C组)、光照组(D组)及行为限制组(E组),用TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白及基因表达.结果:(1)与A组比较,B、C、D、E组的凋亡指数增加(P＜0.01);与B组比较,D、E组的凋亡指数增加(P＜0.05);与C组比较,D、E组的凋亡指数增加(P＜0.05).(2)与A组比较,B、C、D、E组的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.01);与B组比较,D、E组的Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05);与C组比较,D、E组的Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05).(3)与A组比较,B、C、D、E组的Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01);与B组比较,D、E组的Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01);与C组比较,D、E组的Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01).结论:光照环境、行为限制可增加大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、Caspase-3的表达有关.     

柴芩平胃胶囊对反流性胃炎胃粘膜细胞凋亡及调控基因的影响

[目的]观察柴芩平胃胶囊（CQPC）对反流性胃炎模型大鼠胃粘膜细胞凋亡及调控基因的影响.[方法]Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,CQPC高、中、低剂量组（剂量分别为16.66、8.33、4.17g/kg）,小柴胡冲剂组（10g/kg）;除假手术组外,均采用B-Ⅱ式胃部分切除（胃空肠吻合）术复制大鼠反流性残胃炎模型,各组按设计剂量灌胃给药,连续4周;分别采用ELISA、原位杂交、免疫组化方法观察CQPC对胃粘膜细胞凋亡及调控基因p53 mRNA、Bax和Bcl-2表达的影响.[结果]模型组结果显示胆汁反流可引起模型大鼠胃粘膜细胞凋亡增加,野生型p53 mRNA、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与假手术组比较具有显著性差异（均P＜0.05或P＜0.01）;高、中、低剂量CQPC均可减少胆汁反流引起的细胞凋亡,减少野生型P53 mRNA、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达（均P＜0.05或P＜0.01）.[结论]柴芩平胃胶囊治疗反流性胃炎的作用机制,可能与减少胃粘膜细胞凋亡,调节各种凋亡调控基因的表达有关.     

人脐带间质干细胞来源的外切体对大鼠肾小管上皮细胞缺氧损伤的干预作用

目的:观察体外缺氧损伤的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡情况以及分离纯化人脐带间质干细胞来源的外切体(hucMSCs-exosomes)对其干预作用。方法:将体外培养的NRK-52E细胞随机分为对照组、缺氧损伤模型组和hucMSCs-exosomes(0.5,1.0 mg/ml)预处理组。随后进行细胞计数,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2,bax)的表达变化,流式细胞仪检测细胞周期以及凋亡率的变化。结果:与对照组相比,模型组细胞凋亡相关指标均明显升高,细胞计数下降(P<0.01),Bcl-2/bax表达下调(P<0.01),细胞周期S期阻滞以及凋亡细胞比例明显增多。而hucMSCs-exosomes预处理组可明显改善缺氧损伤时的细胞活力,上调Bcl-2/bax的表达,改善细胞周期和凋亡细胞的比例(P均<0.05)。结论:NRK-52E在缺氧损伤时有明显的细胞凋亡,而hucMSCs-exosomes预处理可能通过抗凋亡途径减轻缺氧时细胞的损伤。本实验可为进一步研究hucMSCs-exosomes在组织损伤修复中的生物学功能和相关机制提供实验基础。     

冬虫夏草提取液对肾小管上皮细胞Klotho表达和凋亡的影响

目的：研究冬虫夏草(cordyceps sinensis, CS)提取液及氯沙坦(losartan, Los) 对血管紧张素II (Ang II) 刺激后的大鼠肾小管上皮细胞 NRK-52E中Klotho（Kl）,P53,P21表达和凋亡的影响,探讨CS对Ang II诱导肾小管上皮细胞凋亡影响的机制。方法：CS（0, 5,10,20,40,80 mg/L）单独或与Ang II (1×10-8 mol/L) 共同培养24 h。确定CS的最佳干预浓度后设立对照组,Ang II (1×10-8 mol/L) 组,Ang II (1×10-8 mol/L) +CS (40 mg/L) 组,Ang II (1×10-8 mol/L) + Los (1×10-5 mol/L) 组和Ang II (1×10-8 mol/L) +CS (40 mg/L) + Los (1×10-5 mol/L) 组,培养24 h后进行实验。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞的增殖;分别用RT-PCR和Western 印迹法检测Kl,P53和P21 mRNA及蛋白的表达;分光光度法检测caspase-3的活性;Annexin V-FITC双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：一定浓度范围的CS单独作用可促进NRK-52E细胞增殖,还能拮抗Ang II对其增殖的抑制(P＜0.01或P＜0.05);Ang II可下调Kl mRNA及蛋白表达,上调P53和P21 mRNA及蛋白表达,增加caspase-3活性和细胞凋亡率 (均P＜0.01);加入CS或/和Los后,Kl mRNA及蛋白表达明显上调,P53和P21 mRNA及蛋白表达下调,caspase-3活性和细胞凋亡率明显降低(均P＜0.05),各药物干预组间的作用差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：CS可逆转Ang II诱导的Kl低表达,并抑制P53及P21的表达,从而抑制Ang II诱导的肾小管上皮细胞凋亡,可能是其对高血压肾损害起保护作用的机制之一。     

茶多酚对低剂量烟草悬凝物诱导人支气管上皮细胞氧化损伤及凋亡的影响

目的:研究茶多酚对低剂量烟草悬凝物诱导人支气管上皮细胞氧化损伤及凋亡的影响.方法:制备烟草悬凝物(cigarette smoke condensate, CSC),采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl thiazoly)2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]法测定人支气管上皮细胞株(HBE135-E6E7)的生长情况;荧光-化学发光仪测定细胞内氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平;DNA ladder 法检测HBE135-E6E7凋亡;反转录-多聚酶链式反应 (RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax mRNA表达.结果:CSC组与CSC+茶多酚组细胞内ROS水平均明显高于对照组(P＜0.01),CSC+茶多酚组细胞内ROS水平则明显低于CSC组.CSC组出现明显的DNA断裂拖尾带,CSC+茶多酚组仅出现少量的断裂拖尾带.RT-PCR结果显示:与对照组相比, CSC组Bcl-2 mRNA表达降低 (P＜0.01), Bax mRNA表达升高 (P＜0.01);与CSC组相比, CSC+茶多酚组Bcl-2 mRNA表达升高 (P＜0.01), Bax mRNA表达降低 (P＜(0.01)),CSC组与(CSC+)茶多酚组 Bcl-2 mRNA/Bax mRNA值明显低于对照组(P＜0.01).结论:茶多酚可拮抗CSC诱导人支气管上皮细胞凋亡,其机制可能是通过有效清除ROS,促进Bcl-2 mRNA表达和抑制Bax mRNA表达实(现的).     

缺血再灌注大鼠脑皮质Bcl-2、Bax和p53的动态表达

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注损伤早期凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53 mRNA和蛋白表达的动态变化,为研究脑缺血再灌注损伤过程中的神经保护机制提供实验依据。方法：选择健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠52只,随机分为假手术对照组（12只)和缺血再灌注2、3、6、8、12 h组(每组8只)。采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型;采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测脑缺血再灌注不同时间点神经细胞凋亡的变化;通过反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫组织化学法观察凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53表达的动态变化。结果：TUNEL染色显示,缺血再灌注组大鼠脑缺血周围区,再灌注2 h后凋亡细胞开始出现,6~12 h明显增多。Bcl-2、Bax和p53 mRNA和蛋白的表达随着缺血再灌注时间的延长呈增高趋势,Bcl-2蛋白高表达的细胞形态相对完整,Bax和p53蛋白高表达的细胞受损严重。Bcl-2 mRNA和蛋白的表达较Bax和p53出现的早。结论：Bcl-2蛋白的表达对神经细胞具有保护作用,早期调控促进Bcl-2的表达并减少Bax和p53的表达,对降低缺血再灌注过程中神经细胞的损伤有重要作用。     

蒲公英甾醇对氧化损伤心肌细胞保护作用研究

目的 在缺血-再灌注所致氧化损伤模型中观察蒲公英甾醇对小鼠心肌细胞(CSC)的保护作用及机制.方法 使用小鼠CSC细胞作为研究对象,分为正常对照组,缺血-再灌注损伤(I/R)组,蒲公英甾醇治疗缺血-再灌注损伤组(治疗浓度分别为5、10、30 μmol/L)及阳性对照组.通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞活力,RT-PCR测定天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bel-2)基因水平,生化法测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MAD)水平,Western blot测定细胞外信号调节的蛋白激酶1/2 (ERK1/2)水平.结果 MTT测定显示30 μmol/L蒲公英甾醇组I/R损伤的CSC细胞活力增加(P＜0.05).RT-PCR研究结果表明:10、30 μmol/L的蒲公英甾醇组Caspase-3 mRNA表达减少,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.05);30μmol/L的蒲公英甾醇组Bcl-2 mRNA表达回升,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.05).生化法测定表明:30 μmol/L的蒲公英甾醇诱导的SOD水平提高,MAD水平降低,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot测定显示,30 μmol/L蒲公英甾醇使损伤的CSC细胞磷酸化ERK1/2与总ERK1/2比值增加(P＜0.05).结论 蒲公英甾醇可能是通过上调ERK1/2表达抑制I/R引起的SCS细胞氧化损伤.     

SYK调控缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元凋亡及其机制

目的 探讨抑制脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制.方法 分离培养10只SD怀孕大鼠(190 ～230 g,胎龄16d)胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定.建立缺氧/缺糖损伤的体外模型,caspase-3荧光检测试剂盒检测caspase-3活性,Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,qRT-PCR检测SYK和凋亡相关的原癌基因Fra-1 mRNA的表达,Western Blot检测SYK、Bcl-2和Fra-1蛋白的表达.Control组:无转染处理的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK siRNA组:转染SYK siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK-Fra-1 siRNA组:同时转染SYK siRNA和Fra-1 siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;non-specific siRNA组:转染non-specific siRNA的氧/缺糖损伤的神经元.结果 MAP2免疫荧光鉴定为神经元细胞.缺氧/缺糖损伤诱导神经元SYK表达(P＜0.01),RNA干扰抑制SYK表达后caspase-3活性(P＜0.05)和细胞凋亡(P＜0.01)均显著降低,但是Fra-1 mRNA (P ＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达量明显上升.用RNA干扰技术同时抑制SYK和Fra-1后,caspase-3活性(P＜0.01)显著上升但Bcl-2蛋白表达(P＜0.01)显著降低.结论 Fra-1介导了SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的神经元凋亡的调节,为脑卒中所致的神经元缺血性损伤的治疗提供了新的靶点.     

马兜铃酸对体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞的损伤作用

目的:观察马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)的损伤作用。方法:体外培养NRK-52E,分别以不同浓度的AA-Na刺激细胞,每组设6个复孔,孵育24 h。透射电镜观察NRK-52E细胞的超微结构,MTT法检测不同浓度AA对NRK-52E细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测AA对NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响;检测不同时间段(12、24、48 h)马兜铃酸对NRK-52E细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)及内皮素-1(ET-1)mRNA和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。结果:①AA浓度低于10μg/ml时对NRK-52E的增殖无明显影响,20~40μg/ml浓度的AA可明显抑制NRK-52E细胞的增殖;②较高浓度的AA(40μg/ml)可明显刺激细胞凋亡;③AA5、10、20、40μg/ml均可刺激NRK-52E表达α-SMA,其中AA10μg/ml对α-SMA表达较强;④AA刺激NRK-52E细胞24 h后TGF-β1mRNA、ET-1 mRNA表达最多,48 h时表达水平下降,而COL-I的表达水平随时间的延长而上调,呈时间依赖性。结论:AA可直接损伤肾小管上皮细胞,促进其表达肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA,即有促转分化作用,且其对NRK-52E细胞的损伤作用呈剂量及时间依赖性。     

小G蛋白Rac1在马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及意义

目的：探讨马兜铃酸（从）致肾小管上皮细胞损伤的机制及小G蛋白Racl在此过程中发挥的作用。方法：以溶剂作为对照组,从以浓度10μg／mL作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24h后,WST-1法检测细胞增殖的抑制率;Hoechst33258染色观察细胞核的形态变化;细胞免疫荧光染色检测Ⅲ型胶原和Racl蛋白的表达;real—time RT—PCR检测TGF—D1mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Racl和TGF—β1含量,并分析两者相关性。结果：从可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并诱导细胞凋亡。从以10μg／mL处理NRK-52E细胞24h后,TGF—β1 mRNA的表达明显升高（p〈0．05）,并且细胞外基质成分Ⅲ型胶原的表达明显增加（P〈0．05）。此外,从也可诱导小G蛋白Racl的表达（P〈0．05）。相关分析显示,AA诱导NRK-52E细胞损伤过程中,Racl的表达量与TGF—β1的分泌水平呈现明显正相关（r=0．967,P〈0．01）。结论：从诱导肾小管上皮细胞出现纤维化样改变,同时伴有Racl蛋白的高表达;Racl及其介导的信号通路可能被TGF-β1的高表达所活化,进而参与从所致的胶原累积过程。     

缺血-再灌注损伤后视网膜形态学改变和Bcl-2/Bax表达

目的观察视网膜缺血-再灌注损伤后的形态学变化;探讨Bcl-2/Bax表达与视网膜神经节细胞数量的关系。方法建立Wistar大鼠视网膜缺血-再灌注模型,计数其再灌注后1、6、12、24、48、72 h的视网膜神经节细胞(RGC);免疫组化SP法检测同时段凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果大鼠缺血-再灌注后RGC计数在6 h时开始大量减少,6~12 h快速减少,24 h后呈慢速减少。再灌注6、12、24、48、72h的Bcl-2、Bax蛋白阳性表达结果与正常组比较,有显著差异(P<0.05)。再灌注后6、12 h Bcl-2/Bax比率上升,24、48、72 h下降。结论视网膜缺血再灌注后RGC凋亡与Bcl-2/Bax表达有关。     

曲美他嗪预处理对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究

目的:探讨曲美他嗪预处理对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能机制。方法: 实验大鼠60只被随机分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I/R)及预处理缺血再灌注组（T+I/R）各20只,除Sham组外各组缺血45 min,再灌注180 min建模,后用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡;免疫组化检测p-CREB蛋白表达,免疫荧光检测Bcl-2与Caspase3蛋白表达;RT-PCR法检测CREB、Bcl-2及Caspase-3基因表达,比较各组结果。结果: (1)I/R组细胞凋亡最多,T+I/R组细胞凋亡明显减少,但仍多于Sham组（P均<0.05);(2) I/R组表达CREB最少、T+I/R组最高、Sham组居中（P均<0.05);(3) Sham组p-CREB少量表达、I/R组增加、T+I/R组显著增加（P均＜0.05）;(4)Sham组Bcl-2高表达、I/R组低表达、而T+I/R组居中（P均＜0.05）;(5)I/R组Caspase-3表达显著上调、T+I/R组显著下调、Sham组最低（P均<0.05）。结论: 曲美他嗪预处理能显著抑制缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与其活化CREB,上调p-CREB及Bcl-2的表达,下调Caspase-3的表达有关。