卡维地洛对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的观察卡维地洛对肝星状细胞增殖与凋亡的影响。方法以不同剂量卡维地洛(CVD)作用于肝星状细胞(HSC-T6)。CCK-8法检测CVD对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测CVD对细胞凋亡的影响。统计学处理采用t检验。结果 CVD作用于HSC-T6后,CCK-8法检测模拟对照组细胞增殖抑制率为2.18±0.60,CVD10μmol/L组细胞增殖抑制率为6.30±1.44,CVD20μmol/L组细胞增殖抑制率为7.75±1.33。提示细胞增殖抑制率随CVD浓度的增高而增高。CVD10μmol/L组及CVD20μmol/L组与模拟对照组相比,差异有统计学意义。流式细胞术检测模拟对照组细胞凋亡率为(2.30±0.08)%,CVD10μmol/L组细胞凋亡率为(3.54±0.50)%,CVD20μmol/L组细胞凋亡率为(4.25±0.13)%,提示细胞凋亡率随药物浓度的增大而增加。CVD10μmol/L组及CVD20μmol/L组与模拟对照组相比,差异有统计学意义。结论 CVD可以抑制HSC-T6的增殖,促进HSC-T6的凋亡。     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的发生中起重要作用，我们应用体外HSC培养技术，初步研究了姜黄素对HSC增殖与凋亡的影响，探讨姜黄素用于肝纤维化治疗的可能性。     

苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养肝星状细胞(HSC)增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化作用机制。方法用0.125、0.25、0.5mgml的苦参碱分别处理HSC细胞系rHSC99和肝细胞株HL770224h后,MTT比色法检测细胞增殖,AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析法检测早期细胞凋亡,TUNEL法原位检测DNA断裂,透射电镜观察形态改变。结果①苦参碱对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量依赖性;苦参碱对肝细胞增殖有促进作用,但促增殖作用不随浓度增加而增强。②AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析:对照组、苦参碱0.125mgml组、0.25mgml组、0.5mgml组凋亡率分别为0.99%±0.45%、5.00%±0.98%、13.6%±2.19%、17.2%±2.17%,差异有显著性(F=63.14,P<0.05)。苦参碱处理组细胞TUNEL检测发现DNA断裂,透射电镜下见核仁消失,染色质浓缩并凝聚成团块状,沿核膜排列。结论苦参碱可抑制HSC增殖、诱导HSC凋亡,可能是其抗肝纤维化机制之一。     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞 (HSC)增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度姜黄素处理HSC株HSC T6 ,MTT法检测细胞增殖 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果　在 2 0～ 10 0 μmol/L浓度范围内 ,姜黄素可剂量依赖性地抑制HSC增殖 (P <0 .0 1)。 2 0、4 0、6 0 μmol/L姜黄素处理HSC 2 4h后 ,细胞周期分析发现S期细胞减少 ,G2 /M期细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 .3± 1.9,2 6 .7± 2 .8,37.6± 4 .4 ,与对照组 (1.9± 0 .6 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;4 0 μmol/L姜黄素作用 12、2 4、36、4 8h ,凋亡指数 (% )分别是 12 .0± 2 .4、2 6 .7± 3.5、33.8± 1.8和 4 9.3± 1.6 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等 ;琼脂糖凝胶电泳可见到明显的DNA梯带形成。结论　姜黄素可显著抑制HSC增殖 ,使细胞周期停滞于G2 /M期 ,并诱导其凋亡 ,其作用具有时间和剂量依赖性     

去甲肾上腺素对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨交感神经递质去甲肾上腺素（NE）对HSC细胞株（CSFC）增殖和凋亡的影响。方法体外培养CFSC,分为以下6组：（1）空白对照组,为单纯CFSC培养;（2）交感兴奋（NE）组;（3）交感抑制（酚妥拉明＋普萘洛尔）组;（4）α肾上腺素受体（AR）阻滞（酚妥拉明）组;（5）β1AR阻滞（CGP20712A）组;（6）β2AR阻滞（ICI118551）组。MTT法测定细胞增殖;TUNEL法观察CFSC凋亡状况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果MTT法显示,NE对CFSC具有明显的促增殖作用,加入α-AR、β1AR、β2AR阻滞剂后细胞增殖均受到明显抑制。NE作用于CFSC 24h,TUNEL法显示CFSC的凋亡率显著低于对照组（6.60%±3.05%与12.60%±4.76%,P〈0.05）;加入AR阻滞剂后CFSC凋亡率升高,其中α-AR和β2AR阻滞剂作用最显著。同时,流式细胞仪显示加入NE后CFSC凋亡率也显著降低（2.29%±0.22%与3.06%±0.57%,P〈0.05）;与TUNEL结果一致。NE对细胞形态没有明显影响。结论交感神经递质NE对体外活化的CFSC具有促增殖作用,并且可以抑制CFSC的凋亡,可能主要通过α受体和β2体起作用。     

肝星状细胞凋亡与肝纤维化

近十年来对肝纤维化形成的机理研究取得了令人鼓舞的进展。越来越多的临床及实验证据表明,肝纤维化是可以逆转的［１］,这一观点逐渐被广泛接受。肝星状细胞（ｈｏｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ）的激活是肝纤维化形成的中心环节［２］,ＨＳＣ在肝纤维化逆转过程中的作用也成为研究热点之一。Ｂｕｒｔ［３］认为,肝纤维化逆转时ＨＳＣ的减少是由于激活状态的ＨＳＣ转化为静止状态。但最新的研究表明,肝纤维化恢复期,激活状态的ＨＳＣ减少主要通过凋亡机制,而不是表型的转化［４］。几位学者分别对ＨＳＣ凋亡的机制进行…     

牛磺酸对离体肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的　观察牛磺酸对肝星状细胞增殖及凋亡的影响 ,并探讨其作用的可能机制。方法　用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡 ,丫啶噔活体染色观察细胞凋亡形态 ,免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测c jun、c fos表达。 结果　在 5～ 5 0mmol/L浓度范围内 ,牛磺酸能剂量依赖性地抑制肝星状细胞增殖 ,可使G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,并能明显抑制c jun、c fos的表达 (P <0 .0 1)。此外 ,牛磺酸尚可抑制血小板源生长因子BB对肝星状细胞的促增殖作用 ,而牛磺酸对肝星状细胞凋亡无诱导作用。结论　牛磺酸可显著抑制肝星状细胞增殖 ,使肝星状细胞阻滞于G0 ～G1期 ;牛磺酸对肝星状细胞增殖的抑制作用与其抑制c jun、c fos的表达有关 ;牛磺酸不能诱导肝星状细胞凋亡。     

化积汤对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

体外培养肝星状细胞株HSC-T6,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。发现化积扬可呈剂量依赖性抑制肝星状细胞增殖;化积汤培养后。细胞周期分析发现S期细胞减少,G2／M期细胞显著增加。提示化积汤可以显著抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡。     

肝星状细胞与凋亡

肝星状细胞 (ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ)在肝纤维化形成过程中起关键作用。近年来研究发现 ,活化的ＨＳＣ主要通过凋亡方式减少 ,且有多种途径影响其凋亡[1 11] 。一、自发凋亡Ｓａｉｌｅ等[7] 报道 ,培养的ＨＳＣ在 2ｄ时不发生凋亡 ;4ｄ时凋亡率为 8%± 5 % ;7ｄ后则为 18%± 8%。而胆道结扎术后 2 1ｄ ,ＨＳＣ的自发凋亡率为 1%～ 3% [2 ] 。体内研究表明 ,肝组织急性损伤阶段 ,ＨＳＣ出现激活、增殖而无凋亡迹象 ;恢复阶段ＨＳＣ的凋亡与组织中ＨＳＣ总量的减少相平行[7,10 ] 。由此显示 ,自发凋亡可能是机体清除…     

肝星状细胞凋亡与肝纤维化

肝纤维化病理过程中HSC的凋亡机制近来年为人们所认识,并进行了相关的研究,笔者就这一方面的文献作一综述.     

白花丹醌对人肝星状细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:研究白花丹醌对瘦素(Leptin)刺激体外培养人肝星状细胞株HSC-LX2凋亡及相关蛋白表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用的机制.方法:体外培养HSC-LX2,将其分为以下几组:空白对照组、Leptin对照组、秋水仙碱组、2、8、16μmol/L白花丹醌组.瘦素刺激24h,药物与细胞共孵育24h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测细胞凋亡,透射电镜观察HSC-LX2凋亡形态学变化,免疫组织化学法检测HSC-LX2凋亡基因p53、Bax、Bcl-2的蛋白表达.结果:细胞流式术结果显示,白花丹醌作用HSC-LX224h,HSC凋亡率明显增加,白花丹醌8、16μmol/L组和秋水仙碱组HSC凋亡率均显著高于空白对照组和Leptin对照组(5.21±0.41,8.10±0.63,10.1±1.08vs1.40±0.13,2.85±0.21,均P<0.01).透射电镜结果,空白对照组细胞形态清晰,细胞膜、核膜完整,胞质内细胞器清晰,染色质均匀,细胞表面微绒毛;药物组可见少量坏死细胞和许多不同程度的凋亡细胞,体积变小,核膜消失,胞质浓缩,胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,可见核碎裂,细胞表面微绒毛...     

Effect of caffeic acid phenethyl ester on proliferation and apoptosis of hepatic stellate cells in vitro

AIM: To investigate the role of nuclear factor-κB (NF-κB)inhibitor caffeic acid phenethy1 ester (CAPE) in the proliferation, collagen synthesis and apoptosis of hepatic stellate cells (HSCs) of rats. METHODS: The HSCs from rats were isolated and cultured in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) and treated with CAPE. The proliferation and collagen synthesis of HSCs were determined by 3H-TdR and 3H-proline incorporation respectively, and the expression of type Ⅰ, Ⅲ procollagen genes was further explored byin situ hybridization. Apoptosis cell indices (AIs) were examined using terminal deoxynucleotidyl transferase- mediated DIG-dUTP nick end labeling (TUNEL). RESULTS: Tn activated HSC in culture, CAPE significantly inhibited 3H-TdR and 3H-proline incorporation by HSCs at concentrations of 5 μmol/L and 10 μmol/L respectively. CAPE also reduced the type I procollagen gene expression (P＜0.05)at higher concentration. Apoptosis of HSC was induced by CAPE and the AIs were time-and dose-dependently increased from 2.82+0.73 % to 7.66±1.25 % at 12 h (P＜0.01) and from 3.15±0.88 % to 10.6L±2.88 % at 24 h (P＜0.01). CONCLUSION: CAPE inhibits proliferation and collagen synthesis of HSC at lower concentration and induces HSC apoptosis at higher concentration.     

血红素氧合酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关基因的影响

目的通过应用血红素氧合酶（HO）的诱导剂氯高血红素和抑制剂锌原卟啉（ZnPP），探讨HO对大鼠肝脏缺血再灌注（IR）细胞凋亡及其相关基因的影响。方法将96只Sprague—Dawley大鼠采用钳夹法制备肝脏IR模型，随机分为假手术组、IR组、氯高血红素组和ZnPP组，检测再灌注0、1．5、4h和8h各个时间点大鼠肝脏功能以及病理学改变，流式细胞法测定肝细胞凋亡率、TUNEL法观察再灌注后4h大鼠肝细胞的凋亡情况，Western blot法检测再灌注后8h Bcl-2和Caspase-3的表达。结果在IR组各时间点均可见ALT和AST增高，病理学检查可见肝细胞肿胀，肝窦变窄，嗜中性粒细胞浸润和片状坏死等变化，肝组织中细胞凋亡率明显升高，Bcl-2的表达减少，而Caspase-3的表达增加。在氯高血红素组再灌注后1．5、4h和8h ALT和AST值明显降低，肝脏病理学改善，凋亡细胞减少及细胞凋亡率降低，肝脏Bcl-2的表达增加，Caspase-3的表达减少。ZnPP组则显示与之相反的结果。结论HO在肝脏IR损伤中具有保护作用，这种保护作用可能与抑制细胞凋亡有关。     

两种木贼提取物对动脉粥样硬化早期模型大鼠平滑肌凋亡及BCl-2、Caspase-3表达的调控

目的研究木贼正丁醇提取物及提取剩余物对动脉粥样硬化(AS)早期大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照、模型、阳性药、提取物及提取剩余物组。复制食饵性AS早期模型,用木贼提取物、提取剩余物分别预防性给药,以吉非罗齐为阳性药对照。9w后,观察主动脉壁病理学变化,流式细胞术定量检测主动脉壁平滑肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3的表达。结果木贼正丁醇提取物及提取剩余物组的凋亡率明显高于模型组(P<0.01);Bcl-2低于模型组(P<0.01);Caspase-3高于模型组(P<0.01)。结论木贼正丁醇提取物及提取剩余物通过控制AS早期主动脉壁平滑肌细胞Bcl-2、Caspase-3表达,促进平滑肌细胞凋亡,阻止AS的进程。     

软脂酸和亚油酸对肝星状细胞增殖的影响

目的 研究软脂酸和亚油酸对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响.方法 采用链酶蛋白酶-胶原酶原位灌注法分离SD大鼠肝星状细胞,体外给予不同浓度亚油酸或软脂酸(100、200、300、400、500、600μM)和不同比例亚油酸/软脂酸混合物刺激培养,使用CCK-8试剂盒检测HSC增殖.结果 400μM、500μM和600 μ M亚油酸刺激细胞的OD值分别为0.577±0.04、0.522±0.04和0.47±0.07,显著低于对照组(0.734±0.04,P＜0.01),并呈剂量依赖性;100μM到600μM浓度软脂酸刺激细胞的OD值分别0.425±0.01、0.433±0.02、0.432±0.04、0.431±0.05、0.472±0.08和0.462±0.06,显著低于对照组(0.644±0.05,P＜0.01),但无剂量依赖性;400μM+400μM、400μM+200μM、200μM+400μM、200μM+200μM、200μM+100μM、100μ M+200μM、100μM+100uM的亚油酸与软脂酸混合物培养细胞的OD值分别为0.957±0.190.983±0.670.959±0.13、1.013±0.07、1.056±0.12、1.065±0.16、1.09±0.12,显著高于对照组(0.622±0.09,P＜0.01).结论 单用亚油酸或软脂酸能抑制HSC增殖,但两者合用时则能促进HSC增殖.     

外源性FHIT基因表达对长春新碱诱导人胃癌MKN-28细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性FHIT基因表达对长春新碱诱导的胃癌细胞凋亡的影响及其分子机制.方法:通过脂质体将重组FHIT基因PRC/CMV质粒和空载体转染到人胃癌细胞MKN-28,Western blot法检测外源性FHIT蛋白的表达;使用不同浓度的长春新碱分别处理各组细胞,MTT法分析细胞增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡:Western blot法检测细胞Bcl-2和Bax的表达.结果:转染FHIT基因后,MKN-28细胞检测到FHIT蛋白的表达;长春新碱处理48 h后,转染FHIT基因组细胞、转染空载体组细胞及未转染组细胞的凋亡率分别是30.967%±2.122%、11.033%±1.724%、10.733%±1.021%,转染FHIT基因组细胞凋亡更明显(F=142.045,P<0.05);转染FHIT基因组细胞经长春新碱处理后Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加.结论:外源性FHIT基因表达可以增强长春新碱诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能与凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达有关.     

细胞凋亡在慢性风湿性心房颤动左房结构重构中的作用

目的探讨细胞调亡在心房颤动(AF)患者心房结构重构中的作用;检测风湿性心脏病患者左房中caspase-3和Bc l-2的蛋白含量及其细胞凋亡的发生率。方法选择风湿性心脏病患者43例,其中窦性心律(SNR)组15例,阵发性AF(PAF)组8例,慢性AF(CAF)组20例。在外科手术前行超声心动图检查,手术中取左房组织,应用免疫印迹法测定患者的caspase-3和Bc l-2的蛋白含量;应用TUNEL法检测心房肌细胞凋亡,计算其凋亡指数(AI)。结果①与SNR组比较,CAF组caspase-3的蛋白含量增加到394%±99.4%(P<0.001);Bcl-2蛋白含量则降低到32.8%±15.9%(P<0.001),而PAF组的各蛋白含量则无明显变化;②CAF组左房心肌细胞AI为24.6%±9.1%,明显高于SNR组和PAF组(P<0.01)。③CAF组caspase-3的蛋白含量及AI分别与左房内径、AF持续时间呈明显正相关;Bc l-2的蛋白含量与左房内径和AF持续时间呈明显负相关(P均<0.05)。④AI与caspase-3、Bc l-2的蛋白含量分别呈正、负相关;P均<0.05。Caspase-3的蛋白含量与BCL-2的呈负相关,P<0.05。结论CAF时,caspase-3蛋白表达增加和Bc l-2蛋白表达降低导致的细胞凋亡可能是AF发病的重要机制之一。     

半乳糖凝集素-3对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)表达与肝星状细胞增殖和凋亡的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测大鼠肝星状细胞中galectin-3 mRNA和蛋白的表达,设计合成galectin-3小干扰片段,筛选有效片段构建质粒,转染大鼠肝星状细胞系rHSC-99,并设立对照组和空质粒转染组,RT-PCR及Western blot检测RNA干扰后galectin-3的表达.活细胞计数法观察干扰后24、48,72 h各组细胞增殖情况;Annexin-V/PI染色,流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞凋亡情况.组间比较用LSD法t检验进行统计学分析.结果 rHSC-99细胞表达galectin-3;成功构建pG Csilencer U6/Neo/GFP/shRNA,并经测序验证正确.转染效率为40%～50%,RT-PCR结果显示:RNA干扰组galectin-3 mRNA表达量较对照组下降了52.4%(F=136.432,P＜0.01),Western blot显示RNA干扰组galectin-3蛋白表达量较对照组下降了69.2%(F=144.842,P＜0.01).干扰后48 h和72 h时,galectin-3 RNA干扰组细胞增殖较对照组分别下降38.1%(F=4.425,P=0.010)和37.5%(F=4.415,P=0.018);干扰72 h时,galectin-3 RNA干扰组细胞凋亡率显著高于对照组:早期凋亡率增加155.2%,与对照组比较,F=27.588,P＜0.01;晚期凋亡率增加56.9%与对照组比较,F=12.798,P＜0.01.结论 rHSC-99细胞表达galecitn-3;RNA干扰rHSC-99细胞galectin-3的表达能抑制rHSC-99的增殖并促进其凋亡.