绿色反应和蓝色反应敏感度的比较—HRP法在周围神经的研究

用辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase简称HRP)追踪神经纤维联系是现代神经学研究的新方法,近年来已被国内外学者广泛应用。可是,还有不少问题有待解决,其中之一是呈色反应的敏感度问题。舒斯云(′78)曾对棕色反应[3,3′—二氨基(四盐酸)联苯胺法,简称DAB法]和蓝色反应[二盐酸联苯胺法,简称BDHC法]的方法作过比较。Mesulam和Rosene(′79),舒斯云(′81)和郑德枢(′81)分别对几种呈色反应方法进行了比较。值得指出的是,过去对HRP各种呈色反应方法的比较绝     

五种辣根过氧化物酶(HRP)棕色反应法的比较

Graham和Karnovsky(1966)首先用3,3′二氨基联苯胺(DAB)的游离碱作为HRP反应的成色剂研究鼠肾小管内HRP的分布。1972年LaVail和LaVail首次将DAB用以显示在中枢神经系内运送的HRP。此后,在相当长的一段时间内,学者们均用DAB作为成色剂以显示组织中的HRP。DAB与HRP和过氧化氢作用形成的棕色反应物性质稳定,我们曾发现棕色反应的切片在100％乙醇中浸泡二周后,仍保持相当数量的标记细胞和终末,而且棕色反应产物     

副神经脊髓核的节段性分布——HRP法研究

本文用成年猫12只,为进一步确定副神经脊髓核的节段性分布,用HRP直接注入猫的副神经干内或浸浴副神经干近侧断端,追踪副神经脊髓核的标记细胞,以确定脊髓核的位置与节段性。实验动物在20％乌拉坦5ml/kg腹腔浸润麻醉下进行手术,切开下颌部的皮肤和肌肉,暴露副神经干。实验分两组进行,第一组8只猫,用30％HRP6微升直接注入副神经干内;第二组4只猫用30％HRP10微升浸浴副神经干近侧断端,动物存活三天,用2％多聚甲醛、1.25％戊二醛溶于0.1M磷酸缓冲液(pH7.4),自心脏灌流,冰冻切片40微米,0.05％3～3二氨基联苯胺(DAB)成色反应。结果在12例中有8例(一组6例,二组2例)自第一颈髓至第八颈髓同侧的副神经脊髓核内的细胞和少数小细胞的胞浆,树突和轴突起始部有棕色颗粒,充盈甚满。在暗视野下被标记细胞颗粒,呈黄红色发亮,在黑暗的背地中呈现得非常清楚。在8例阳性结果的颈髓不同平面切片上标记细胞,均以颈髓第三、四节段的数量最多,含棕色颗粒也较多,而颈1和颈8节段被标记的细胞和棕色颗粒则较少。     

EIESA试剂盒中显色液应用于HRP逆行神经束路追踪实验染色的尝试

ELESA即酶联免疫吸附试验，是免疫学检测的常用方法。其原理为：标记有HRP(辣根过氧化物酶)的抗体或抗抗体与待检样品中的抗原或抗体进行抗原抗体反应，再利用HRP与酶反应底物发生呈色反应，以此来判断样品中待检抗原或抗体的有无及多少。酶反应底物包括H202和DAB或TMB。DAB(二氨基联苯胺)和TMB(四氨基联苯胺)均为呈色反应的供氢体，它们在H2O2存在时与HRP发生反应，前者的反应产物呈棕色，后者的反应产物呈蓝色。但由于DAB     

辣根过氧化物酶(HRP)的棕色、兰色、绿色三种反应比较

自从七十年代应用辣根过氧化物酶(简称为 HRP)法逆行追踪神经系统的传入性联系以来,由于它具有许多过去研究方法所未有的优点,因此现在已被国内外各著名实验室广泛应用,得到了不少出色的成果,把神经形态领域内的研究大大地向前推进一步。近些年来,有好些从事 HRP 法研究的工作者为了提高该法成色的敏感度,采用多种成色剂作显色反应:如用3—3二氨基胺苯胺的 DAB 法、用二盐酸联苯胺的     

ELESA试剂盒中显色液应用于HRP逆行神经束路追踪实验染色的尝试

ELESA即酶联免疫吸附试验,是免疫学检测的常用方法。其原理为:标记有HRP(辣根过氧化物酶)的抗体或抗抗体与待检样品中的抗原或抗体进行抗原抗体反应,再利用HRP与酶反应底物发生呈色反应,以此来判断样品中待检抗原或抗体的有无及多少。酶反应底物包括H2 O2 和DAB或TMB。DAB(二氨基联苯胺)和TMB(四氨基联苯胺)均为呈色反应的供氢体,它们在H2 O2 存在时与HRP发生反应,前者的反应产物呈棕色,后者的反应产物呈蓝色。但由于DAB具有致癌性,所以目前TMB较为常用,有逐步取代DAB的趋势。为了使操作简便,许多厂家生产ELESA试剂盒。E…     

用化学发光法测定辣根过氧化物酶几种体系的研究

作者采用四种体系,确定了用化学发光法测定辣根过氧化物酶(HRP)的最佳测定条件和操作步骤。用鲁米诺-H_2O_2(NaOH)可以方便地测定0.05～4pmol HRP,绝对检测限16fmol。用邻苯二酚-H_2O_2(pH6.5)体系可测定0.1～100pmol HRP,绝对检测限3～17fmol。用鲁米诺-H_2O_2-对碘苯酚(pH8.5)体系,可由1分钟时的光强度测定10～50fmol HRP,绝对检测限10fmol。用对羟基联苯代替对碘苯酚,测1或3分钟时的光强度可测定6～40fmol HRP,绝对检测限6.5或3.3fmol.     

应用两种免疫组化酶法染大鼠室旁核含神经垂体素1的细胞

以辣根过氧化物酶抗辣根过氧化物酶(PAP)和卵白素生物素辣根过氧化物酶复合体(ABC)法染室旁核内含神经垂体素1(NPI)的细胞。自制PAP的比值为1.58。鼠丘脑下部冰冻切片孵育于NPI抗血清后加入PAP或ABC,再经二氨基联苯胺成色、锇酸和硫卡巴联氨加深。镜下细胞的胞体、轴索和树突显示清楚,呈深棕色。二法均灵敏且久不退色。     

介绍一种隐血试验试剂——3,5,3′5′-四甲基联苯胺

我们用3,5,3′5′-四甲基联苯胺(简称TMB)代替联苯胺作常规粪便隐血试验,获得了较好的结果。现介绍如下。一、原理:血红蛋白具有过氧化物酶活性,能催化H_2O_2放出新生态氧,使TMB分子中失去一个电子,生成蓝绿色的复合物。根据蓝绿色的深浅可知隐血的多少。二、试剂及其配制:①TMB溶液:称取1.0 gTMB溶于冰醋酸及无水乙醇各50ml中,置棕色瓶内放冰箱4℃保存,可保存1年。②3％过氧化     

肺巨噬细胞膜ConA受体的电镜观察

本实验先将刀豆素A(ConA),结合在肺巨噬细胞膜上的ConA受体,再用辣根过氧化物酶)HRP)结合ConA,用3-3二氨基联苯胺(DAB)酶底物结合HRP,从而在肺巨噬细胞膜表面可显现ConA受体结合ConA所形成的密集的颗粒状反应物。利用这种电镜组化技术,制备标本,观察肺巨噬细胞膜ConA受体的存在及分布,并对ConA受体与吞噬作用及抗感染免疫的关系进行了讨论。     

应用内源性过氧化物酶——联苯胺细胞化学法显示中枢神经系统内微血管方法的研究

应用血细胞中内源性过氧化物酶将底物过氧化氢分解,产生原子氧,使无色联苯胺及其衍生物呈色,显示中枢神经系统微血管的原理,在辣根过氧化物酶(HRP)呈色技术启示下,确立了4种中枢神经系统微血管显示法,即二氨基联苯胺法(DAB)、二盐酸联苯胺法(BDHC)、邻-联茴香胺法(O-D)以及四甲基联苯胺法(TMB)。实验结果表明,这4种方法均能清晰地呈现中枢神经系统内的徽血管,4种方法的显示结果并无显著性差异(P>0.05)。这4种方法的建立将为中枢神经系统微血管解剖学研究,病理组织血管构筑研究以及中枢神经系统内移植物血管重建研究提供了重要的技术手段。     

应用内源性过氧化物酶——联苯胺细胞化学法显示中枢神经系统内微血管方法的研究

应用血细胞中内源性过氧化物酶将底物过氧化氢分解,产生原子氧,使无色联苯胺及其衍生物呈色,显示中枢神经系统微血管的原理,在辣根过氧化物酶(HRP)呈色技术启示下,确立了4种中枢神经系统微血管显示法,即二氨基联苯胺法(DAB)、二盐酸联苯胺法(BDHC)、邻-联茴香胺法(O-D)以及四甲基联苯胺法(TMB)。实验结果表明,这4种方法均能清晰地呈现中枢神经系统内的徽血管,4种方法的显示结果并无显著性差异(P>0.05)。这4种方法的建立将为中枢神经系统微血管解剖学研究,病理组织血管构筑研究以及中枢神经系统内移植物血管重建研究提供了重要的技术手段。     

利用实验动物研究经络及穴位有突破性进展

近几年来,我国兽医界利用实验动物进行经络及穴位的研究,已有了突破性的进展,在国际上已处于领先的地位。其中以中国人民解放军兽医大学王立石等用家兔做小结肠及关元俞穴区传入神经元的节段性分布——HRP法的研究具有较高水平。王立石等用实验家兔25只,分别以5～30％HRP水溶液注入家兔小结肠的浆膜下层、肌层以及关元俞穴区的组织内,追踪这些部位的传入神经元的胞体位置。在48～72小时分阶段进行深麻醉,并用生理盐水灌流和3％多聚甲醛及0.25％戊二醛的混合液固定、取材、冰冻切片(片厚30～40um),切片用O-D法(E-dwads 1979)作呈色反应后,明视野光镜下观察。所获结果如下。 1.被标记的小结肠传入神经原胞体位于T_6—C_(01)段脊神经节中。 2.多数集中于腰前部(L_1～L_5)与荐后部(S_3～C_(01)     

大鼠丘脑、基底节及内囊的微血管构筑及其定量研究

用墨汁灌注法、组织化学二氨基联苯胺（ＤＡＢ） 血管染色法及二盐酸联苯胺（ＢＤＨＣ） 血管染色法对正常大鼠脑冠状切片进行观察,研究大鼠丘脑、基底节及内囊的微血管构筑,并用Ｌｅｉｃａ 显微分光光度计测量光密度值（ＯＤ 值）来进行定量研究。结果表明,丘脑、基底节及内囊各结构的毛细血管吻合成网,不同神经组织内血管网形态各异,密度差异十分显著。丘脑内毛细血管吻合丰富且复杂。基底节的尾状核及苍白球内血管网形态相似且较密,网孔较小。内囊中血管分布多与内囊脚一致方向排列,管径较粗,网孔较大。各核团的血管密度显著高于神经纤维区的血管密度。     

HRP法对异种神经移植后再生纤维恢复的形态学研究

目的用辣根过氧化酶(HRP)逆行追踪技术探讨异种神经移植后神经纤维的再生.方法将多次冻融处理后的兔胫神经移植于大鼠坐骨神经,术后第2、4、6、8和10周,将HRP注人大鼠坐骨神经吻合部远侧端.结果移植术后第4周起在L4～5脊神经节见到HRP标记细胞,从第6周在腰段脊髓前角内见到标记细胞,其数量随术后存活期延长而增多.术后4周在移植神经内见少量再生神经纤维,6周后再生神经纤维穿过异种移植神经进入大鼠坐骨神经远侧端.结论自移植术后4周起,移植神经内已有再生纤维并部分恢复了轴浆流,证实了用HRP法可反映移植后神经纤维的再生情况.     

用辣根过氧化物酶标记法追踪周围神经的纤维联系

我们在60只猫的胃前壁埋藏或注入5～10mgHRP,用以追踪周围神经的纤维联系。猫存活2～5天后用1—2%多聚甲醛—1.25%戊二醛的0.1M,pH7.4的磷酸缓冲液进行心脏灌流、取材、连续冰冻切片。切片分别按 BDHC(m)法和 DAB(11)法处理。在迷走神经结状神经节、腹腔神经节和 T_5—T_(12)脊神经节中见到酶标记的神经细胞,少量 T_2、L_1和 L_2脊神经节的切片也可见到标记细胞。在脊神经节切片中,大细胞和小细胞均见有标记细胞,以小细胞为多见。标记细胞的出现,经 BDHC(m)法处理的切片多于 DAB(11)法处理的切片,且反应颗粒较为清晰。本文对实验结果进行了讨论。上述研究探索了用 HRP 追踪周围神经纤维联系的一些经验。对内脏感觉传导初步提供了形态学的基础。     

表面修饰对氧化铁纳米粒子类酶活性的影响

目的:研究表面修饰对氧化铁纳米粒子类酶活性的影响。方法:用共沉淀法制备γ-Fe2O3纳米粒子,并用透射电子显微镜(TEM)表征。将γ-Fe2O3纳米粒子分别表面修饰二巯基丁二酸(DMSA)、柠檬酸、酒石酸和3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS),并用Zeta电位仪表征。由于γ-Fe2O3纳米粒子可以催化双氧水氧化底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB),从而发生显色反应,这一特性与辣根过氧化物酶(HRP)相似,通过岛津UV-3600紫外-可见分光光度计和酶标仪检测该显色反应,评估氧化铁纳米粒子的催化性能及表面修饰的影响。结果:(1)TEM和Zeta电位测量表明,γ-Fe2O3纳米粒子直径约为13 nm,表面修饰能够有效调控其表面电荷;(2)氧化铁纳米粒子类过氧化物酶催化活性与纳米粒子的表面电荷相关,表面负电荷有利于增加对带正电荷底物TMB的亲和力,从而增加类酶活性;(3)γ-Fe2O3/DMSA具有最高的表面负电荷,米氏常数测量表明Km(TMB)为0.3 mmo.lL-1,表现出与天然HRP对底物TMB类似的亲和力。结论:通过表面修饰可以调控氧化铁纳米粒子的类酶活性,其作为HRP模拟酶具有潜在的应用价值。     

潜血试验引入DiaSys FE-2粪便沉渣分析系统

目的将DiaSys FE-2粪便沉渣分析仪的工作流程之中引入潜血试验,使潜血阳性标本有效快速筛检.方法将血标本经粪便处理剂处理后,分别以邻甲联苯胺法、氨基比林改良法和胶体金标记免疫法进行检测;用氨基比林改良法检测同样处理的粪便标本.结果对于血标本氨基比林改良法能快速准确地反应;邻甲联苯胺法及胶体金标记免疫夹心法均受粪便处理剂干扰,分别出现假阳性及假阴性结果;经处理的粪便标本用氨基比林改良法检测也不受干扰.结论氨基比林改良法有望成为FE-2粪便分析仪的工作流程中筛检粪便潜血的首选方法.     

大白鼠屏状核传入纤维联系——HRP法研究

用辣根过氧化酶(HRP)法研究大白鼠屏状核的传入投射。在屏状核前1/3处注入HRP,以联大茴香胺法作成色反应,观察逆行标记细胞。结果如下: 1.大量标记细胞出现在丘脑腹侧核腹外侧部,小量标记细胞出现在丘脑腹侧核背内侧部和丘脑腹内侧核。 2.在大脑皮质(8区和8a区)第Ⅲ和第V层出现较多标记的锥体细胞。结果提示:屏状核主要接受来自丘脑感觉核的投射,及来自大脑皮质的投射。     

大鼠终纹床核内血管活性肠肽免疫阳性物质的分布

终纹床核(BST)是一个富含血管活性肠肽(VIP)的脑区。由于BST的细胞构筑复杂,以前文献所描述的BST分区笼统不一。以致虽有学者对VIP在BST的分布作过研究,但在结果描写上笼统粗略,难以使后人比较结果上的异同。根据最近鞠躬等对BST的划分。我们用ABC及PAP研究了VIP免疫阳性物质在大鼠BST的分布,得到了一些新的发现。1 材料和方法 成年雄性大鼠10只。动物经左心室-主动脉进行灌注固定。取出鼠脑冰冻连续冠状切片。1/3切片进行克紫或中性红染色,另 2/3切片进行免疫反应(ABC及 PAP法)。用葡萄糖氧化酶结合硫酸镍铵加强的二氨基联苯胺法(G-D-N)呈色.2结果 BST内VIP免疫阳性终末数量上远较免疫阳