丝胶对STZ改损伤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响

目的:探讨丝胶对STZ致损伤的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响.方法:以链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞损伤,细胞分为正常组、STZ组和丝胶组(300μg/L).普通光学倒置显微镜观察各组细胞的一般状态;MTT法测定细胞活性;ELISA法检测培养上清中胰岛素的含量.结果:与正常组相比,STZ组细胞活性明显下降,培养上清中胰岛素的含量明显降低(P＜0.05).经300μg/L丝胶处理后,INS-1细胞活性、培养上清中胰岛素的含量均明显升高(P＜0.05).结论:丝胶蛋白可提高STZ致损伤大鼠胰岛素瘤INS-1细胞的活性,以及促进胰岛素的分泌.     

丝胶对STZ致损伤的INS-1细胞的保护作用

目的 探讨丝胶对链脲佐菌素（STZ）致损伤大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）的保护作用。方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象,随机分为5组：正常对照组（常规条件培养细胞）、模型组（培养基中含10mmol/L的STZ）、丝胶低、中、高浓度组（培养基中分别含10mmol/L的STZ,及150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL的丝胶）,每组细胞药物作用时间均为24h。蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各组细胞BCL-2与P53蛋白及mRNA的表达情况。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果 与正常对照组相比,在模型组中,INS-1细胞中BCL-2蛋白和mRNA的表达显著减少,P53蛋白和mRNA的表达显著增加,早期凋亡率显著升高（P<0.05）。与模型组相比,丝胶各组INS-1细胞BCL-2蛋白与mRNA的表达均显著增多,P53的蛋白与mRNA的表达均显著下降,早期凋亡率显著下降（P<0.05）;3个丝胶组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制与调控凋亡蛋白,抑制INS-1细胞凋亡有关。     

褪黑素对链脲佐菌素所致胰岛β细胞损伤的保护作用研究

用链脲佐菌素（ＳＴＺ）作用于离体胰岛β细胞２４ｈ，一氧化氮（ＮＯ），脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）生成增多，胰岛细胞膜流动性下降，微粘度增高，同时胰岛素分泌功能降低，细胞存活率下降。预先给高浓度褪黑素（１０μｍｏｌ／Ｌ）处理２４ｈ者，可减少ＮＯ，ＭＤＡ的释放，提高超氧化物歧化酶的水平，使胰岛细胞的氧化损伤减轻，膜微粘度降低，膜流动性增加，细胞存活率显著提高。     

STZ诱导构建1型糖尿病肾病动物模型

目的：本实验拟构建1型糖尿病肾病动物模型,为进一步进行糖尿病肾病实验研究提供基础。方法：采用STZ腹腔注射C57BL/6小鼠,观察一般情况,监测小鼠血糖、体重,检测24h尿蛋白。结果：1型糖尿病肾病动物模型构建成功。结论：采用STZ可成功诱导构建1型糖尿病肾病动物模型。     

不同浓度α-生育酚对STZ诱导胰岛细胞抗氧化能力变化的影响

目的:观察不同浓度α-生育酚(α-tocopherol,α-T)对链脲菌素(Streptozotocin,SIZ)引起的胰岛细胞活力、胰岛素分泌及抗氧化能力变化的影响.方法:用体外单层细胞培养的方法培养1～3d Wistar大鼠的胰岛细胞分为4组,经分组处理后采用MTT、放射免疫等方法检测各组胰岛细胞活力、胰岛素分泌量、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮合酶(NOS)活性、丙二醛(MDA)及NO2-/NO3-含量的变化.结果:STZ可诱导胰岛细胞活力、T-AOC、SOD活性明显减弱;胰岛素分泌量显著降低,从(186.78±6.78)降至(64.59±4.32);MDA及NO2-/NO3-含量升高(P<0.05);而NOS活性无明显改变(P>O.05).α-T能有效抑制STZ引起的上述指标的变化(NOS活性除外),该效应具有一定的剂量依赖性.结论:(α-T能够改善STZ对大鼠胰岛细胞的损伤,该效应可能与增强胰岛细胞清除自由基的能力有关,而与NOS活性的变化关系不大.     

抗氧化剂丙丁酚对STZ导致的糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的影响

目的：观察抗氧化剂丙丁酚对STZ导致的糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的影响.方法：分正常对照组,正常对照治疗组,糖尿病组,糖尿病治疗组.用1%的丙丁酚加入标准的小鼠饲料中,进行预防性干预,小鼠腹腔注射STZ后在不同时间测空腹血糖、血浆胰岛素,做腹腔葡萄糖耐量试验,取胰腺标本作病理切片.结果：丙丁酚干预组0w、1w、2w、3w小鼠空腹血糖均较糖尿病组明显降低,且有显著性差异;3w时丙丁酚干预组腹腔葡萄糖耐量试验显示空腹及葡萄糖注射后0.5h、1h、2h其血糖均较糖尿病组降低,且有显著性差异（P＜0.05或0.01）.3w时糖尿病预防给药组空腹血清胰岛素水平较糖尿病组明显升高（P＜0.01）.结论：抗氧化剂丙丁酚有降低STZ导致的糖尿病小鼠的空腹血糖及改善糖耐量的作用;抗氧化剂丙丁酚通过保护STZ导致的糖尿病小鼠胰岛β细胞功能而降低血糖的作用.     

FK506对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨FK506对早期糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的保护作用。方法将38只正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)8只、糖尿病肾病组(DN组)10只、FK506治疗组(F组)10只、洛汀新治疗组(L组)10只,其中DN组、F组、L组应用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。F组成模4周后给予FK506 1 mg/(kg.d)灌胃,L组成模4周后给予洛汀新10 mg/(kg.d)灌胃,DN组与N组4周后给予等量蒸馏水灌胃,每4周末监测各组大鼠血糖(BS)、体质量(BW)、24 h尿蛋白定量,药物干预8周后测定各组大鼠的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾质量/体质量(KW/BW),在光镜、电镜下观察肾脏病理组织学改变,应用West-ern blot印迹检测足细胞特异标记物Nephrin的蛋白表达。结果①与N组比较,DN组大鼠BS、SCr、BUN、KW/BW、24 h尿蛋白定量均明显上升(P<0.05);与DN组比较,F组和L组上述指标除BS外均明显降低(P<0.05),且F组和L组之间差异无统计学意义(P>0.05);②光镜下,肾组织病理学观察N组无明显异常,DN组可见明显的肾小球体积增大,肾小球系膜细胞增生,系膜区增宽,基底膜增厚;F组、L组较DN组病理改变明显减轻(P<0.05),且F组和L组之间病理改变无显著性差异(P>0.05);③电镜下,DN组肾小球基底膜显著增宽,足突排列紊乱,足突增宽、融合,F组、L组较DN组上述病变有所减轻(P<0.05);④Western blot结果显示,DN组肾组织Nephrin蛋白表达较N组下降60.1%(P<0.05),F组和L组可明显恢复肾组织Nephrin蛋白的表达(P<0.05)。结论 FK506可能部分通过恢复糖尿病大鼠肾组织Nephrin蛋白表达、维护足细胞结构和功能的完整而发挥减少尿蛋白、延缓DN进展的作用。     

当归多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠的降血糖作用及其机制

目的研究当归多糖(angelica polysaccharide,AP)对实验性高血糖大鼠血糖、胰岛素水平、体重、饮水量、饮食量和尿量的影响,旨在研究当归多糖对糖尿病大鼠降糖和改善临床症状的作用效果,探讨发现治疗糖尿病的新途径。方法链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病Wister大鼠50只(体重200±20g)随机分成5组,分别用生理盐水、低剂量(20mg/kg)AP、中剂量(60mg/kg)AP和高剂量(200mg/kg)AP以及盐酸二甲双胍(150mg/kg)灌胃给药,给药周期为28天。同时采用正常的Wister大鼠为健康对照,观察AP对糖尿病大鼠的降糖作用,同时在给药0、7、14、21、28天测定体重和饮水量、饮食量和尿量,考察AP对改善糖尿病临床症状的影响。结果与模型组相比AP有明显的降血糖作用(P<0.05),呈现时间和剂量依赖关系,且给药4周时AP高剂量组的降糖效果与阳性药物对照组相当,没有统计学差异;AP给药2周后糖尿病的“三多一少”症状明显改善,且高剂量组与二甲双胍组相当;然而给药各组的胰岛素水平在实验前后没有统计学变化。结论AP能明显的降低Wister糖尿病大鼠的血糖和改善糖尿病的临床症状,但是其作用机制并不是通过增加胰岛素的浓度。     

链脲佐菌素对大鼠胰岛β细胞结构及超微结构损伤的特点

目的:研究链脲佐菌素(STZ)对大鼠胰岛β细胞结构及超微结构损伤的特点方法:大鼠随机分为两组,正常对照组(NC组),STZ组各10只大鼠.STZ(70mg/kg)一次性腹腔内注射以诱发糖尿病.实验分组时及STZ注射后每3天测大鼠血糖,称体重1次,实验结束时处死动物,取部分胰腺组织进行生化指标检测,部分胰腺组织行HE染色及制备电镜标本.结果:STZ使大鼠血精明显升高,STZ组胰腺组织内MDA水平(1.22±0.14)nmol/mgprot,较NC组MDA水平(0.57±0.04)nmol/mgprot明显升高(P<0.05);同时STZ组胰腺组织内GSH含量(16.54±1.10)mg/gprot,较NC组GSH含量(25.46士0.62)mg/gprot明显降低(P<0.05); GSH-Px活性明显降低(P<0.05).HE染色见STZ组胰岛呈退行性及坏死样改变胰岛萎缩;电镜下观察部分胰岛β细胞坏死,部分胰岛β细胞线粒体肿胀,内质网扩张,脂肪滴沉着,髓鞘样小体形成等.NC组胰岛HE染色及透射电镜下观察结构正常.结论:STZ通过氧化应激损伤胰岛β细胞,导致其结构和超微结构的破坏.     

骨髓间充质干细胞对INS-1细胞凋亡的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对过氧化氢(H2O2)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法以H2O2作用于大鼠胰岛瘤细胞INS-1细胞构建凋亡模型,通过Transwell装置实现INS-1细胞与BMSCs共培养。实验分为4组:单独INS-1细胞培养组(A组);INS-1+H2O2处理组(B组);BMSC+INS-1Transwell共培养组(C组);BMSC+INS-1+H2O2Transwell共培养组(D组)。MTT法检测细胞存活率,Annexin-V/PI染色流式细胞技术检测细胞凋亡水平。结果 H2O2显著降低INS-1细胞存活率,引起INS-1细胞凋亡,且呈剂量依赖性,通过Tran-swell与BMSCs共培养后,由H2O2诱导的INS-1凋亡细胞比例下降,与单独H2O2刺激组相比,细胞凋亡率下降了约26.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs通过Transwell共培养显著抑制H2O2诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSCs旁分泌作用有关,为进一步利用BMSCs防治糖尿病提供了理论依据。     

高糖对INS-1细胞损伤存在记忆效应

目的观察大鼠胰岛细胞对高糖损伤是否存在记忆效应,并对其机制进行初步探讨。方法以INS-1(大鼠胰岛瘤细胞株)细胞作为研究对象,观察INS-1细胞经历48 h持续高糖(33.3 mmol/L)刺激后,纠正高糖状态,以11.1 mmol/L糖浓度继续培养,检测细胞活力,凋亡相关基因(bax,caspase-3)的mRNA水平和活性氧(ROS)水平的变化。INS-1细胞处理组分为:对照组(11.1 mmol/L葡萄糖×7 d);高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d);3 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1mmol/L葡萄糖×3 d);5 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1 mmol/L葡萄糖×5 d)。Real-Time PCR检测bax,cas-pase-3的mRNA水平,Dihydroethidium(DHE探针)检测ROS水平,MTT法测定细胞活力。结果高糖组细胞活力较对照组显著降低(P<0.001)。而ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05)。在3 d记忆组及5 d记忆组,细胞活力较对照组显著降低(P<0.001),ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05)。结论高糖对INS-1细胞的损伤存在记忆效应,主要表现为细胞活力的持续降低,促凋亡基因的持续高表达。ROS水平的持续升高可能与记忆效应产生有密切关系。     

S-雌马酚改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能的研究

目的 研究大豆甙元活性代谢产物S-雌马酚(S-equol,S-Eq)对高糖培养条件下大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞胰岛素分泌功能的影响.方法 采用26.2 mmol/L葡萄糖(高糖组,H)及葡萄糖分别与不同浓度S-Eq(0.1、1、10、100 μmol/L S-Eq+H组)干预INS-1细胞24 h,另设未干预的INS-1细胞为对照组(C).采用CCK-8检测细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,TUNEL法联合Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR和Western blot分别检测前胰岛素原(preproinsulin,PPI)、葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,Glut2)、线粒体阴离子载体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2) mRNA及蛋白表达.结果 S-Eq能显著增加高糖培养条件下INS-1细胞活力(P＜0.05),其中1μmol/L S-Eq效果最为明显.GSIS检测发现,与对照组比较,高糖处理后INS-1细胞胰岛素分泌显著降低,而S-Eq能显著增加高糖处理的INS-1细胞的胰岛素分泌(P＜0.05).同时,0.1、1、10 μmol/L S-Eq均能明显减少高糖培养条件下INS-1细胞凋亡,上调PPI mRNA、Glut2 mRNA和Glut2蛋白表达,而显著抑制UCP2 mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论 S-Eq可有效改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能,可能与抑制细胞凋亡,调节Glut2和UCP2表达有关.     

肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组（对照组）,T0901317干预组（T0901317组）。24h、48h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组。T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高。结论T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡。     

芪莲汤颗粒药物血清抑制链脲佐菌素诱导大鼠胰岛素分泌细胞的凋亡

目的 观察芪莲汤颗粒药物血清对链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导大鼠胰岛素分泌细胞(INS-1)凋亡的保护作用.方法 采用高、低2个剂量的芪莲汤颗粒药物血清处理INS-1细胞6h后,用3mmol/L的STZ诱导INS-1细胞凋亡;Alamar Blue法检测细胞活性;AnnexinV-异硫氰酸荧光素(f...     

BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达

目的观察BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达。方法利用构建好的BTBD10多克隆抗体,采用多重免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察BTBD10在3月龄Fischer344大鼠的胰腺组织和大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞中的表达。结果 BTBD10蛋白定位在大鼠胰腺组织的胰岛β细胞中,与胰岛素的定位重叠,而在胰腺的外分泌腺和胰岛α细胞中无表达,同时显示BTBD10定位在大鼠胰岛β株INS-1细胞的细胞浆中,表达量高。结论 BTBD10特异性表达于大鼠胰岛β细胞中,提示BTBD10可能与胰岛β细胞功能和胰岛素分泌有关。     

大鼠ACE2腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建携带大鼠血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因的重组腺病毒表达载体并确定其对INS-1细胞的感染效率。方法采用RT-PCR方法,从大鼠肾脏组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,将ACE2基因定向克隆到穿梭质粒载体pShuttle-GFP-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdxsi载体同源重组后得到携带大鼠ACE2基因的重组腺病毒(pAdxsi-GFP-CMV-ACE2),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度。体外转染INS-1细胞,绿色荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blotting检测ACE2蛋白的表达。结果克隆得到大鼠ACE2基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染INS-1细胞。结论成功构建了表达ACE2的复制缺陷型重组腺病毒,为深入研究ACE2基因在胰岛细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础。     

siR N A 干扰 A T1 R 基因调控链脲佐菌素诱导NIT －1细胞凋亡的实验研究

目的：用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT－1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体（ AT1R）基因,探讨其对链脲佐菌素（STZ）诱导的胰岛素瘤细胞凋亡的影响。方法针对小鼠AT1R基因,设计并合成3对siRNA序列,脂质体法转染至NIT－1细胞,荧光显微镜观察荧光强度检测转染效率,Real－time PCR检测AT1R mRNA表达量判断不同干扰序列及干扰时间的基因沉默效果;分4组：空白组不予任何干预,STZ组予5 mmoL／L STZ干预30 min,si－AT1R组予40 nmol／L si－AT1R转染24 h,si－AT1R＋STZ组予40 nmoL／L si－AT1R转染24 h后5 mmoL／L STZ干预30 min;Real－time PCR检测Caspase－3 mRNA表达量,Hoechst33342染色荧光显微镜和Annex-in V－FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果40 nmol／L siRNA转染的荧光强度最强,转染后AT1R mRNA表达量明显下降,si－AT1R－2转染24 h的沉默效果最佳（92.20％）;Caspase－3 mRNA表达量：STZ组与空白组比增加了2.37倍（P＜0.05）,si－AT1R＋STZ组与STZ组比减少了11.28％,但差异无统计学意义;细胞凋亡率：STZ组与空白组比增加了3.27倍（P＜0.05）,si－AT1R＋STZ组与STZ组比减少了26.82％（P＜0.05）。结论本研究建立了稳定的胰岛细胞AT1R基因沉默模型;RNA干扰沉默胰岛细胞AT1R基因可通过下调Caspase－3 mRNA表达量降低STZ诱导的细胞凋亡率,提示AT1R介导了STZ诱导的胰岛细胞凋亡过程。     

Obestatin抑制胰岛β细胞株INS-1细胞L型钙通道电流

目的 观察obestatin对胰岛β细胞株INS-1细胞L型钙通道电流的影响.方法 应用穿孔全细胞膜片钳技术研究obestatin对培养的胰岛β细胞株INS-1细胞膜L型电压敏感钙通道电流（L-type calcium ion channel current,ICa.L）的影响.结果胰岛β细胞株INS-1细胞钳制膜电位为-20 mV时,分别给予胰岛β细胞株INS-1细胞0nM（对照组）和1、10、100nM obestatin灌流5min后,ICa,L峰值呈浓度依赖性降低,各组为给药前的（97±8）％、（91±7）％、（60±9）％和（45±6）％.其中,10nM和100nM obestatin灌流5min后ICa,L峰值与对照组相比显著减小（P＜0.0I,n=5）.胰岛β细胞株INS-1细胞钳制膜电位分别为-30、-20、-10和0mY时,给予10nM obestatin之前,其ICa,L峰值分别为（-5.48±0.69）、（-5.70±0.68）、（-5.58±0.61）和（-3.90±0.44） pA/pF,灌流10nM obestatin 5 min后,ICa,L峰值分别下降至（-3.11 ±0.68）、（-3.60±0.99）、（-3.26±1.03）和（-2.28±0.71）pA/pF,均明显低于obestatin给药前（P＜0.01,n=5）.结论 obestatin可抑制胰岛β细胞株INS-1细胞L型钙通道电流.     

Protection of INS-1 Cells from Free Fatty Acid-induced Apoptosis by Inhibiting the Glycogen Synthase Kinase-3

To examine the role of glycogen synthase kinase 3 （GSK-3） in the apoptosis of pancreatic β-cells to better understand the pathogenesis and to find new approach to the treatment of type 2 diabetes, apoptosis was induced by oleic acid （OA） in INS-1 cells and the activity of GSK-3 was inhibited by LiCl. The PI staining and flow cytometry were employed for the evaluation of apoptosis. The phosphorylation level of GSK-3 was detected by Western blotting. The results showed that OA at 0.4 mmol/L could cause conspicuous apoptosis of INS- 1 cells and the activity of GSK-3 was significantly increased. After the treatment with 24 mmolFL of LiCl, a inhibitor of GSK-3, the OA-induced apoptosis of INS-1 cells was lessened and the phosphorylation of GSK-3 was increased remarkably. It is concluded that GSK-3 activation plays an important role in OA-induced apoptosis in pancreatic β-cells and inhibition of the GSK-3 activity can effectively protect INS-1 cells from the OA-induced apoptosis. Our study provides a new experimental basis and target for the clinical treatment of type-2 diabetes.