PCR检测肝癌组织中HBVX基因

本文应用ＰＣＲ法检测２６例肝癌组织中的ＨＢＶＣ及Ｘ基因。结果显示，２６例中Ｃ区基因全部阳性。Ｘ基因２０例阳性；Ｃ区基因呈单一条带，Ｘ基因除５例为单一条带外，另有８例为三条带，７例为二条带，呈多态分布，提示Ｘ基因区有基因缺失、变异或插入状态存在，而两种基因的阳性对照均在预期位置出现单一条带，阴性对照未出现扩增条带，本文还对Ｘ基因致癌机制以及对其反式激活作用与其产物对细胞代谢的影响。对ＨＣＣ的形成、发     

肝硬化,肝癌患者与乙肝病毒感染的关系研究

对585例肝硬化及372例肝癌用固相放免法检测HBsAg、抗HBs和抗HBc;用DNA聚合酶链(PCR法)反应测定HBsAg阴性患者血清中HBV DNA;对HBsAg阳性者测定pre-S_2。结果表明:HBV与肝硬化、肝癌有非常密切的关系,二者HBV感染率分别为93.16%和97.3%;HBsAg阴性者中有24.2%HBV DNA阳性;HBsAg阳性的肝硬化、肝癌患者pre-S_2抗原明显高于其它肝病患者,有显著性差异(p<0.02),它们的检出率分别为84.0%和98.4%。     

乙肝病毒x蛋白与肝细胞癌变

乙肝病毒Ｘ蛋白与肝细胞癌变陶小红，沈鼎明在我国，乙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）是引起肝细胞癌（Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）的主要病因之一，而ＨＢＶ引起ＨＣＣ的机理至今尚不完全清楚。８０年代就开始进行...     

乙肝病毒基因分型及其临床意义

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是嗜肝ＤＮＡ病毒，ＨＢＶ基因组又称 ＨＢＶ ＤＮＡ，由 ３２００碱基对组成。近年来，国内外学者对ＨＢＶ基因分型开展了多方面的研究，本文对近年来的研究进展作一概述，１ ＨＢＶ基因型的建立 ＨＢｓＡｇ共有１０个亚型，主为ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ、ａｙｗ等４个亚型，但血清学并不能真正反映基因型的改变，Ｏｋａｍｏｔｏ等在１９９８年由无症状携带者（ＡＳＣ）的血清中克隆３株ａｄｒ亚型的ＨＢＶ ＤＮＡ序列，与１５株ＨＢＶ ＤＮＡ序列迸行两两比较，根据核苷酸序列异质性≥８％，将此１８株ＨＢＶ ＤＮＡ…     

甲胎蛋白启动子介导反义乙型肝炎病毒X基因在肝癌细胞中的表达及其作用

目的 构建含甲胎蛋白(AFP)启动子和增强子的反义乙型肝炎病毒X基因(HBX)真核表达载体，研究其特异性和有效性，为开发肝癌细胞特异性HBX反义RNA基因治疗乙型肝炎病毒(HBV)奠定基础。方法 聚合酶链反应(PCR)扩增HBX(1370—1872nt)基因，克隆至EB病毒表达载体，双轮PCR筛选、鉴定基因插入方向。脂质体转染肝癌细胞和ECV304细胞，Northernblot检测HBX mRNA的表达，酶联免疫试验(ELISA)检测HBV抗原，荧光定量PCR检测HBV DNA。结果 成功构建正、反义RNA表达载体pEBAF—s—HBX、pEBAF—as—HBX。Northernblot证实反义RNA仅在AFP阳性的肝癌细胞中表达。pEBAF—as—HBX转染3d后，可显著抑制2．2．15细胞HBV复制和抗原表达，其HBsAg、HBeAg抗原表达较正义对照分别下降37．9％和36．8％，HBV DNA降低25％。结论 反义RNA表达载体pEBAF—as—HBX仅在肝癌细胞中特异表达、并可有效抑制HBV，有良好的开发应用前景。     

乙型肝炎病毒X基因促进肝癌组织血管内皮生长因子的表达

乙型肝炎病毒(HBV)感染与肝癌的发生密切相关，而乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)在肝癌的发生和进展中起重要作用。血管内皮生长因子(VEGF)在肝癌细胞中普遍表达，与肝癌的生长和浸润有关。本研究通过建立表达HBx的肝癌动物模型，探讨HBx与肝癌组织VEGF表达的关系。     

乙型肝炎病毒X基因对痉挛性截瘫蛋白21表达的影响

目的 探讨HBV X基因对痉挛性截瘫蛋白(SPG)21表达的影响.方法 采用RT-PCR和Western blot检测HepG2和HepG2.2.15细胞mRNA和蛋白表达的差异,将带有SPG21基因启动子的报告质粒pGL3-SPG21分别与表达HBV基因组的单个基因的质粒共转染HepG2细胞,测定荧光色素酶的活性,以相对光单元(RUL)表达;RT-PCR和Western blot分别检测SPG21 mRNA和蛋白表达的变化.组间比较采用t检验.结果 HepG2.2.15细胞中SPG21 mRNA和蛋白的表达水平明显高于HepG2细胞,相对表达量(与β-肌动蛋白的灰度比值)为0.36±0.06对比0.21±0.05,P＜0.05.转染pCMV-S、pCMV-E、pCMV-C、pCMV-X、pCMV-P和pCMV-ag2B后的HepG2细胞中,荧光素酶的活性分别为每微克蛋白(86±12)RUL、(75±12)RUL、(69±11)RUL、(875±27)RUL、(104±16)RUL和(67±12)RUL;与转染pCMV-tag2B组细胞相比,转染X基因者荧光素酶活性明显升高(P＜0.01).HBV X基因在mRNA和蛋白水平上调SPG21的表达,这种激活作用随着X基因浓度的增加而增强.结论 HBV X基因能特异性地激活SPG21的表达.     

中老年肝细胞癌患者乙型肝炎病毒X基因检测与分析

目的检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染后肝细胞癌(HCC)患者血清HBVX基因,并与慢性乙型肝炎、肝硬化患者HBVX基因检出率对比分析。方法在微孔板上包被HBVX基因片段的捕获探针;PCR扩增被检标本中目的片段,其引物用Bio-Ⅱ-dUTP修饰,在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色。结果该方法检测HBVX基因灵敏,特异;乙型肝炎后HCC患者HBVX基因检出率明显高于慢性乙型肝炎组和肝硬化组。结论检测HBVX基因对HCC具有辅助诊断价值。     

乙型肝炎病毒及其X基因对培养肝细胞端粒酶活性的影响

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｘ基因 (ＨＢｘ)的表达产物反式激活宿主细胞癌基因 ,是ＨＢＶ诱发肝癌的主要机制[1] 。近年 ,人们发现 80 %以上的恶性肿瘤细胞存在高水平的端粒酶活性 ,认为端粒酶的激活与恶性肿瘤的形成和发展密切相关 ,并把端粒酶活性作为肿瘤早期诊断和判断预后的指标[2 4] 。我们构建了体外肝细胞模型 ,对ＨＢｘ与端粒酶有无内在关联进行了初步探讨。材料与方法一、实验材料(一 )工具酶和试剂　限制性内切酶ＮｃｏⅠ、ＢｇｌⅡ购自ＭＢＩ公司 ;ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰ购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司 ;Ｔ4 ＤＮＡ连接酶 ,ＤＮＡ…     

拉米夫定抑制乙型肝炎病毒X基因的转录与表达

目的 乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白在HBV相关性肝癌的发生中有着重要作用,本研究旨在探讨拉米夫定对HBV X基因复制、转录及表达水平的影响。 方法 用聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因复制的影响,用逆转录-聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因mRNA的影响,用生物分子相互作用系统检测拉米夫定对X蛋白表达的影响,探讨了拉米夫定作用的量效和时效关系。 结果 拉米夫定组与对照组HBV X基因复制的目的基因条带吸光度(A)值分别是151.4±3.5和144.0±11.4,差异无统计学意义。4.36×104mol/L拉米夫定持续作用24 h能完全抑制X基因的转录,对照组与治疗组(16 h)目的条带的A值分别为243.9±9.0和133.2±7.8,P<0.01,其抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增强。4.36×104mol/L拉米夫定持续作用16 h,使代表X蛋白表达的最大结合量值从353.3±15.9降至252.3±18.8,P<0.01。结论 拉米夫定不影响HepG2x中转染的X基因复制,但对X基因的转录和蛋白表达有明显抑制作用。     

乙型肝炎病毒X基因突变与肝细胞癌

原发性肝细胞癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,慢性HBV感染是导致肝细胞癌的主要病因。HBV诱发肝细胞癌的确切机制仍不十分清楚。目前在HBV相关肝细胞癌病人血清和肝癌组织中发现了许多HBV X基因突变体,一些与肝细胞癌发生发展密切相关。本文主要就HBV X基因突变与肝细胞癌研究进展进行综述。     

乙型肝炎病毒X蛋白与原发性肝癌

原发性肝癌(HCC)是目前世界上十大恶性肿瘤之一, 而慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致HCC最主要的原因之一. 由HBV X基因编码的X蛋白(HBx)是一种重要的调节蛋白, 在HBV诱发HCC过程中扮演重要角色, 因此一直是研究的热点. 本文就近年有关HBx在HCC发生中的作用及作用机制作一综述.     

乙型和丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌

为探讨乙型和丙型肝炎病毒（ＨＢＶ和ＨＣＶ）感染与肝细胞癌（肝癌）发生的关系，采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）对沈阳地区１１７例肝癌、１０７例肝硬化和４５例血液透析患者血清进行了ＨＢＶ和ＨＣＶ血清标志及ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检测，并采用限制性片段长度多态性对其中７３例ＨＣＶＲＮＡ阳性血清进行了ＨＣＶ基因分型。结果，肝癌组ＨＢＶ感染率（６０７％）显著高于ＨＣＶ感染率（３３３％，Ｐ＜００１），肝硬化组ＨＢＶ感染率（４３９％）明显高于ＨＣＶ感染率（２９０％，Ｐ＜００５）；血液透析组ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染率（２６７％）明显高于肝硬化组（１０３％，Ｐ＜００５）；各组均以ＨＣＶⅡ型为主（６５２％～８００％），ＨＣＶⅢ型次之（２００％～３１４％）。结果提示：沈阳地区肝癌的诱发因素仍以ＨＢＶ为主，血液透析患者ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染的机会更大，ＨＣＶⅡ型感染在本地区ＨＣＶ相关性肝癌和肝硬化的发生中可能起主要作用。     

乙型肝炎病毒X蛋白与肝细胞癌E-钙黏蛋白基因启动子甲基化关系的研究

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